GLUCOSA Liquiform
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Instrucciones de Uso
Finalidad . Sistema enzimtico para la determinacin de la glucosa en
la sangre, liquor y lquidos asctico, pleural y sinovial por mtodo cintico
o de punto final.
[Solamente para uso diagnstico in vitro.]
Principio . La glucosa oxidasa cataliza la oxidacin de la glucosa de
conformidad a la reaccin expuesta a continuacin:
GOD
Glucosa + O2 + H2O cido Glucnico + H2O2
El perxido de hidrgeno formado reacciona com 4-aminoantipirina y
fenol, bajo accin catalizadora de la peroxidasa, a travs de una reaccin
oxidativa de acoplamiento, formando una antipirilquinonimina roja cuya
intensidad de color es proporcional a la concentracin de la glucosa en la
muestra.
POD
2H2O2 + 4-Aminoantipirina + fenol Antipirilquinonimina + 4H2O
Caractersticas del sistema . El reactivo se presenta listo para
uso utilizando metodologa enzimtica de gran especificidad analtica, de
sencilla y fcil aplicacin en el laboratorio clnico.
El Labtest desarroll el sistema GLUCOSA Liquiform optimizando las
concentraciones de enzimas del reactivo al efecto de ofrecer el mejor
desempeo analtico y mayor estabilidad.
Los datos de repetitividad y reproducibilidad obtenidos con el sistema
GLUCOSA Liquiform demuestran que el mtodo es capaz de ofrecer
resultados que sobrepasan las metas de desempeo para las medidas del
glucosa establecidas por la American Diabetes Association (ADA). La
comparacin entre las imprecisiones encontradas en la repetitividad y en
la reproducibilidad demuestra que el sistema de medicin es bastante
robusto en las regiones de concentraciones significativas para uso
clnico, indicando que tiene un desempeo muy estable en el da a da.
El sistema permite que la determinacin se realice en modo cintico de
tiempo fijo, obtenindose resultados en tan solo 90 segundos de reaccin
y tambin en modo de punto final, que ofrece ms agilidad a algunos
analizadores bioqumicos.
El mtodo es utilizado en tcnica manual y es fcilmente aplicable en
analizadores semiautomticos y automticos capaces de medir con
exactitud la absorbancia entre 490 y 520 nm.
01 Espaol - Ref.: 133
Ref.
Metodologa . GOD-Trinder.
Reactivos
1. 1 - Reactivo 1 - Conservar entre 2 - 8 C.
Contiene tampn fosfato 30 mmo/L, pH 7,5; fenol 1 mmol/L;
glucosa oxidasa 12500 U/L; peroxidasa 800 U/L; 4-aminoantipirina
290 mol/L; azida sdica 7,5 mmol/L; y surfactantes.
2. - Estndar - Conservar entre 2 - 30 C.
Contiene glucosa 100 mg/dL y biocida no txico.
Despus del manejo, se sugiere almacenar bien tapado para evitar
evaporacin.
El estabilizador del estndar puede precipitarse a bajas temperaturas, lo
que no interfiere en su desempeo.
Los reactivos no abiertos, conservados en las condiciones
especificadas, son estables hasta la fecha de expiracin impresa en su
rtulo. Durante el manipuleo, los reactivos estn sujetos a
contaminaciones de naturaleza qumica y microbiana que pueden
provocar disminucin de la estabilidad.
Precauciones y cuidados especiales
Se deben aplicar cuidados habituales de seguridad en el manejo del
reactivo.
El reactivo contiene azida sdica, que es txica. Se debe tomar cuidado
para evitar la ingestin y en caso de contacto con los ojos lavar
inmediatamente con gran cantidad de agua y procurar auxilio mdico. La
azida puede formar compuestos altamente explosivos con tuberas de
plomo y cobre. Por ello, ultilizar grandes volmenes de agua para
deshacerse los reactivos.
No utilizar el Reactivo 1 cuando su absorbancia medida contra agua en
505 nm sea igual o mayor que 0,300 o cuando se muestre turbio o con
seales de contaminacin.
Materiales necesarios y no suministrados
1. Bao mara mantenido a temperatura constante ( 37 C ).
2. Fotmetro capaz de medir con exactitud la absorbancia entre 490 y
520 nm.
3. Pipetas para medir muestras y reactivo.
4. Cronmetro.
Influencias preanalticas . Por ser una sustancia con
caracterstica reductora el cido ascrbico previene la formacin del
cromgeno levando a resultados falsamente disminuidos. Los pacientes
que utilizan el cido ascrbico (Cebion , Energil C , Redoxon , entre 2,5 mg/dL, hemoglobina hasta 200 mg/dL no producen interferencias
otros) deben ser aconsejados para dejar de usarlo 24 horas antes del
9
exame .
En las 24 horas que suceden a la ingestin aguda de alcohol, ocurre
significativa reduccin de la glicemia. Las reducciones pueden tambin
ser significativas en los individuos sometidos a ayunas prolongadas o en
3 Para evaluar la concentracin aproximada de la hemoglobina en una
obesos tratados con dietas de bajo valor calrico .
Pacientes diabticos en uso continuado de clorpropamida pueden
desarrollar hipoglicemias importantes que son muy difciles de corregir.
La variacin biolgica intra-individual de la glucosa es 5,7% y la variacin
biolgica intra-grupo es 6,9% .
4 Hemoglobina (mg/dL) Absorbancia405 x 601
Muestra
Se debe crear Procedimento Operacional Estndar (POE) que establezca
procedimientos adecuados para recogida, preparacin y
almacenamiento de la muestra. Subrayamos que los errores debidos a la
muestra pueden ser mucho ms grandes que los errores acaecidos
durante el procedimiento analtico.
La muestra de sangre debe ser obtenida despus de ayunos de como
mnimo 8 horas o en menor tiempo si hay recomendacin mdica.
Usar plasma o suero tomando las precauciones expuestas a
continuacin:
Realizar la recogida de la sangre utilizando un anticoagulante que contiene
un inhibidor de la gluclisis. El uso del anticoagulante Glistab - Labtest
(Ref.: 29) permite la recogida de una sola muestra para las dosificaciones
de creatinina, glucosa y urea.
Las muestras de sangre que no contengan antiglucoltico se deben
centrifugar inmediatamente despus de la recogida y el plasma o suero se
deben separar de las clulas o cogulo.
En otros lquidos biolgicos (liquor y lquidos asctico, pleural y sinovial)
aadir anticoagulante conteniendo antiglucoltico en la misma proporcin
6
usada para la muestra de sangre y centrifugar antes de la dosificacin .
En las muestras de sangre tratadas con antiglucoltico la concentracin
de la glucosa permanece estable hasta 8 horas. En el plasma, suero y
otros lquidos separados de las clulas, la glucosa permanece estable por
6
3 das entre 2 - 8 C, cuando no ocurra contaminacin microbiana .
Como ningn test conocido puede asegurar que muestras de sangre no
transmiten infecciones, todas deben ser consideradas como
potencialmente infectantes. Por lo cual, al manejarlas, se deben seguir las
normativas establecidas para bioseguridad.
Para deshacerse de los reactivos y del material biolgico sugerimos
aplicar las normativas locales, regionales o nacionales de proteccin
ambiental.
02 Espaol - Ref.: 133
Interferencias
Mtodo de punto final . Concentraciones de bilirrubina de hasta
significativas. Concentraciones de bilirrubina mayores que 2,5 mg/dL
producen interferencia negativa.
Concentraciones de triglicridos hasta 1000 mg/dL no producen
interferencia significativa cuando se utiliza blanco de la muestra.
muestra hemolisada se puede proceder como expuesto a continuacin:
diluir 0,05 mL de la muestra en 2,0 mL de NaCl 150 mmol/L (0,85%) y
medir la absorbancia en 405 415 nm, ajustando el cero con agua
desionizada o destilada.
Hemoglobina (mg/dL) Absorbancia415 x 467
Blanco de la muestra . Este procedimiento es aplicable cuando
ocurre accin positiva de interferentes. Mezclar 1,0 mL de NaCl
150 mmol/L (0,85%) con 0,01 mL de la muestra. Medir la absorbancia en
505 nm, ajustando el cero con agua destilada o desionizada. Restar la
absorbancia as obtenida de la absorbancia del test y calcular la
concentracin.
Mtodo cintico . Concentraciones de bilirrubina de hasta
2,5 mg/dL, hemoglobina hasta 200 mg/dL y triglicridos hasta
1000 mg/dL no producen interferencias significativas.
Procedimiento
Mtodo de punto final
Tomar 3 tubos de ensayo y proceder como expuesto a continuacin:
Blanco Test Estndar
Muestra 0,01 mL
Estndar 0,01 mL
Reactivo 1 1,0 mL 1,0 mL 1,0 mL
Mezclar vigorosamente y incubar en bao mara a 37 C durante 10
minutos. El nivel del agua en el bao debe ser superior al nivel de los
reactivos en los tubos de ensayo. Determinar las absorbancias del test y
estndar en 505 nm, ajustando el cero con el blanco. El color es estable
por 30 minutos.
El procedimiento sugerido para la medicin es adecuado para fotmetros
cuyo volumen mnimo de solucin para lectura es igual o menor que
1,0 mL. Se debe hacer una verificacin de la necesidad de ajuste del
volumen para el fotmetro utilizado.
Los volmenes de muestra y reactivo pueden ser modificados
proporcionalmente sin perjuicio para el desempeo del test y el
procedimiento de clculo se mantiene inalterado. En caso de reduccin
de los volmenes, es fundamental que se observe el volumen mnimo
necesario para la lectura fotomtrica.
Volmenes de la muestra menores que 0,01 mL son crticos en Ejemplo
aplicaciones manuales y deben ser usados con cautela porque aumentan
la imprecisin de la medicin. A30 Test = 0,104 A30 Estndar = 0,095
A90 Test = 0,181 A90 Estndar = 0,178
Clculos . Ver linealidad.
0,181 - 0,104
Absorbancia del Test Glucosa (mg/dL) = x 100 = 93
Glucosa (mg/dL) = x 100 0,178 - 0,095
Absorbancia del Estndar
Calibracin . El Estndar es trazable al Standard Reference Material
Ejemplo (SRM) 917 del National Institute of Standards and Technology (NIST).

Absorbancia del Test = 0,362 Calibraciones Manuales

Absorbancia del Estndar = 0,340 Obtener el factor de calibracin al usar nuevo lote de reactivos o cuando el
control interno de calidad indicar.
0,362
Glucosa (mg/dL) = x 100 = 106 Sistemas Automticos
0,340 Blanco de reactivos: agua destilada o desionizada, o solucin del NaCl
150 mmol/L (0,85%).
Debido a la gran reproducibilidad que se puede obtener con la Estndar: usar calibradores proteicos. Las concentraciones de la glicose
metodologa, se puede emplear el mtodo del factor. en los calibradores de la lnea Calibra son trazables al SRM 917 del NIST.

100 Intervalo de las calibraciones

Factor de Calibracin =
Absorbancia del Estndar
Glucosa (mg/dL) = Absorbancia del Test x Factor
Ejemplo
100
Factor de Calibracin = = 294
0,340
Glucosa (mg/dL) = 0,362 x 294 = 106
Mtodo cintico . Debe ser usado en todas muestras lipmicas.
El procedimiento utiliza una cintica de 2 puntos y no requiere el blanco de
la reaccin. El control de la temperatura es absolutamente indispensable
para la reproducibilidad de los resultados. Tambin es de fundamental
importancia que las operaciones con muestras y patrnes sean
realizadas mantenindose rigurosamente constante el intervalo entre la
mezcla de la muestra o estndar con el reactivo y el comienzo de la
medicin en el fotmetro. Como el tiempo de reaccin es muy pequeo,
es necesario utilizar un fotmetro que tenga control de temperatura a
37 C en la cubeta.
Ajustar el cero del fotmetro en 505 nm con agua destilada o desionizada.
Aadir 0,01 mL de la muestra o Estndar a 1,0 mL del Reactivo 1
previamente calentado a 37 C. Mezclar y comenzar inmediatamente la
medida fotomtrica. Realizar una medicin de la absorbancia a los 30
segundos y otra medicin en 90 segundos, manteniendo la reaccin con
temperatura controlada en 37 C.
Clculos
A (Test o Estndar) = Absorbancia90 - Absorbancia30
A del Test
Glucosa (mg/dL) = x 100
A del Estndar
Calibracin del blanco al usar nuevos frascos de reactivos;
Calibracin de 2 puntos al cambiar el lote;
Calibracin de 2 puntos cuando el control interno de la calidad indicar.
Linealidad
El resultado de la medicin es lineal hasta 500 mg/dL. Cuando se obtenga
un valor igual o mayor que 500 mg/dL, diluir la muestra con NaCl
150 mmol/L, realizar nueva medicin y multiplicar el resultado obtenido
por el factor de dilucin. Sugerimos la verificacin de la linealidad
metodolgica y fotomtrica como mnimo a cada seis meses, utilizando
muestra con valores de hasta 500 mg/dL.
Control interno de la calidad . El laboratorio debe mantener un
programa de control interno de calidad que defina con claridad los
reglamentos aplicables, objetivos, procedimientos, criterios para
especificaciones de la calidad y lmites de tolerancia, acciones
correctivas y registro de las actividades. Controles deben ser utilizados
para evaluar la imprecisin e desviaciones de calibracin. Se sugiere que
las especificaciones para el coeficiente de variacin mximo y el error
total sean basados en los componentes de la variacin biolgica (VB).
Se sugiere utilizar los productos de la lnea Qualitrol - Labtest para el
control interno de la calidad en ensayos de qumica clnica.
Intervalo de referencia . Los intervalos deben ser usados slo
como orientacin. Se recomienda que cada laboratorio establezca su
propio rango de valores de referencia en la poblacin atendida.
Plasma (ayuno de 8 horas)
Edad mg/dL
Prematuro 20 a 60
0 a 1 da 40 a 60
> 1 da 50 a 80
Nios e Adultos 65 a 99

03 Espaol - Ref.: 133

Los criterios para diagnstico de pre diabetes y diabetes pueden ser
obtenidos en: American Diabetes Association. Diabetes Care 2006;
(suppl 29): S43-S48.
Lquor . 2/3 de la glicemia cuando la medicin es realizada en muestras
cosechadas simultneamente.
Efectos de la dilucin de la matriz . Dos muestras con valores
iguales a 634 y 625 mg/dL fueron utilizadas para evaluar la respuesta del
sistema en las diluciones de la matriz con NaCl 150 mmol/L (0,85%).
Usando factores de dilucin que variaron de 2 a 8 se encontraron
recuperaciones de entre un 95 y 99%.

En individuos sanos, la pequea cantidad de lquido presente en las

cavidades articular, pleural y peritoneal s originada de ultrafiltrado del
plasma. Por lo tanto, se puede considerar que en la prctica la glicose all
presente est en la misma concentracin del plasma.
Conversin . Unidades Convencionales (mg/dL) x 0,0556 = Unidades
SI (mmol/L)
Caractersticas del desempeo12
Exactitud . En dos muestras con concentraciones de glucosa iguales
a 78 y 150 mg/dL se aadieron cantidades diferentes del analito,
obtenindose en el mtodo de punto final recuperaciones entre el 98 y
99%. El error sistemtico proporcional medio obtenido en un valor de
120 mg/dL fue igual a 1,8 mg/dL 1,5%.
Significado clinico . Valores elevados de glucosa se dan en varios
tipos de diabetes primarias, en los estados de intolerancia a la glucosa y
en las diabetes secundarias en varias dolencias (hipertiroidismo,
hiperpituitarismo, hiperadrenocorticismo, etc).
Valores disminuidos se dan en las hipoglucemias que se pueden deber a
varias causas. Cuando la ocurrencia de hipoglucemia est relacionada a
la alimentacin, se pueden definir dos tipos de hipoglucemias: la del
ayuno y la posprandial.
Las causas ms comunes de hipoglucemia del ayuno son:
hiperinsulinismo endgeno (insulinoma y sulfonilurea), hiperinsulinismo
exgeno (factcio), tumores extrapancreticos, sndrome auto inmune
(formacin espontnea de anticuerpos para receptores de la insulina),
insuficiencia suprarenal y o hipofisiaria, dolencia heptica grave y
alcoholismo.

Especificidad . El mtodo propuesto fue comparado con un mtodo La hipoglucemia pospranadial, dependiendo de la historia clnica y de la
similar utilizando 40 muestras con valores situados entre 44 y 606 mg/dL respuesta al test oral de tolerancia a la glucosa, se clasifica en alimentaria,
medidas en duplicada. La comparacin result en la ecuacin de hipoglucemia del diabtico tipo II y del paciente con intolerancia a la
regresin y = 0,9637x + 2,8 y un coeficiente de correlacin (r) igual a glucosa, hipoglucemia funcional o reactiva.
0,999. El error sistemtico total (constante y proporcional) verificado en
el nivel de decisin (120 mg/dL) es igual a 1,58 mg/dL o 1,32%. El error Para una revisin de los criterios diagnsticos y clasificacin de la
total en el mismo nvel de decisin es 4,32%. Como las muestras fueron diabetes mellitus, consultar American Diabetes Association. Diabetes
seleccionadas aleatoriamente en pacientes de ambulatorio y Care 2012;(suppl): 1 S64-S71 ou:
hospitalizados, se puede inferir que el mtodo tiene una especificidad http://care.diabetesjournals.org/content/35/Supplement_1/S64.full
metodolgica adecuada y cumple con los requisitos especificados por la (acesso em 16/04/2012).
5
American Diabetes Association (ADA) .
La reduccin de la concentracin de glucosa en los lquidos corporales se
encuentra relacionada usualmente a los procesos inflamatorios o
infecciosos.
Repetitividad - imprecisin intra-ensayo
N Media DE CV (%) La determinacin de la concentracin de glucosa en el LCR es uno de los
Muestra 1 80 47 0,60 1,25 parmetros que permite diferenciar entre meningitis bacteriana y virsica,
Muestra 2 80 129 1,86 1,08 teniendo, sin embargo, sensibilidad inferior a la evaluacin celular en el
Muestra 3 80 194 2,81 0,62 mismo material.

Observaciones
Reproducibilidad - imprecisin total
N Media DE CV (%) 1. La limpieza y secado adecuado del material utilizado son factores
Muestra 1 80 47 1,04 2,19 fundamentales para la estabilidad de los reactivos y obtencin de
Muestra 2 80 129 1,47 1,82 resultados correctos.
Muestra 3 80 194 1,88 1,66
2. El laboratorio clnico tiene como objetivo fornecer resultados exactos
y precisos. La utilizacin de agua de calidad inadecuada es una causa
Sensibilidad metodolgica . Una muestra proteica conteniendo potencial de errores analticos. El agua desionizada o destilada utilizada
44 mg/dL de glucosa fue utilizada para calcular el lmite de deteccin del en el laboratorio debe tener la calidad adecuada para cada aplicacin.
ensayo, encontrndose un valor igual a 1,77 mg/dL, equivalente a 3 veces As, para preparar reactivos y usar en las mediciones y para su uso
el desvi estndar de las replicatas de la muestras. Usando la en enjuague final de la vidrera, el agua debe tener resistividad
absorbancia del estndar como parmetro, el lmite de deteccin 1 megaohm.cm o conductividad 1 microsiemens/cm y concentracin
fotomtrica es de 0,28 mg/dL que corresponde a una absorbancia igual a de silicatos <0,1 mg/L.
0,001.

04 Espaol - Ref.: 133

Cuando la columna desionizadora est con su capacidad saturada, se 10. Basques, JC. Especificaes da Qualidade Analtica. Labtest
produce agua con liberacin de varios iones, silicatos y sustancias con Diagnstica 2005.
gran poder de oxidacin o reduccin que deterioran los reactivos en
pocos das o incluso horas, alterando los resultados de modo 11. Burtis CA, Ashwood ER. Textbook of Clinical Chemistry, 2a. edio,
imprevisible. Por lo cual es fundamental establecer un programa de Philadelphia: W.B. Saunders, 1986:2175-2211.
control de la calidad del agua.
12. Labtest: Dados de Arquivo.
3. Varias publicaciones demuestran que la orina contiene numerosas
sustancias, especialmente el cido rico, que interfieren en los mtodos Presentacin
utilizando la reaccin de GOD-POD, conllevando a resultados falsamente
Producto Referencia Contenido
disminuidos.
1 1 x 500 mL
133-1/500
Referencias 1 x 5 mL
Glucosa Liquiform
1 2 x 500 mL
133-2/500
1. Bergmeyer HU. Methods of Enzimatic Analysis, 3a. edio, Vol VI, 1 x 5 mL
Deerfield Beach:VCH, 1986:178-184.

2. Blaedel WJ, Uhl JM. Clin Chem 1975;21:119-124. Estn disponibles las aplicaciones para sistema automticos y semi-
automticos.
3. Young DS. Effects of Preanalytical Variables on Clinical Laboratory
Tests, 1a. edio, Washington: AACC Press, 1993. El nmero de ensayos en aplicaciones en los sistemas automticos
depende de los parmetros de programacin.
4. Sociedad Espaola de Bioqumica Clnica y Patologa Molecular,
Base de Datos de Variacin Biolgica. Disponvel en: Informaciones al consumidor
< h t t p : / / w w w. s e q c . e s / a r t i c l e / a r t i c l e v i e w / 3 3 0 / 1 / 1 7 0 >
(acesso en 04/2006). [Trminos y Condiciones de Garanta]

5. Sachs DB, Bruns DE, Goldstein DE, Maclaren NK, Mc Donald JM, Labtest Diagnstica garantiza el desempeo de este producto, dentro de
Parrot M. Clin Chem 2002; 48:436-72. las especificaciones, hasta la fecha de expiracin indicada en los rtulos,
siempre que los cuidados de utilizacin y almacenamiento indicados en
6. Tietz NW. Fundamentals of Clinical Chemistry, Philadelphia: W.B. los rtulos y en estas instrucciones, sean seguidos correctamente.
Saunders, 1970:154-166.

7. Tonks DB Quality Control in Clinical Laboratories, Warner-Chilcot

Laboratories, Diagnostic Reagents Division, Scarborough, Canada,
1972.
Labtest Diagnstica S.A.
8. Westgard JO, Barry PL, Hunt MR, Groth T. Clin Chem 1981;27:493- CNPJ: 16.516.296 / 0001 - 38
501. Av. Paulo Ferreira da Costa, 600 - Vista Alegre - CEP 33400-000
Lagoa Santa . Minas Gerais Brasil - www.labtest.com.br
9. Martinello F, Silva E.L. Interferncia do cido ascrbico nas Servicio de Apoyo al Consumidor e-mail: sac@labtest.com.br
determinaes de parmetros bioqumicos sricos: estudos in vivo e
in vitro. Jorn. Bras. Pat. Med. Lab, 2003;39:323-334.
Edicin: Deciembre, 2011 Copyright by Labtest Diagnstica S.A.
Ref.: 240214 Reproduccin bajo previa autorizacin

05 Espaol - Ref.: 133

06 Espaol - Ref.: 133