UNIVERSIDAD INTERAMERICANA PARA EL DESARROLLO
TEMA: ANALISIS TOXICOLOGICO DE cannabinoides EN ORINA
LaBORATORIO: LAB 12
PROFESORa:
DRA. QF: ROQUE SUSANA
INTEGRANTES:
Cordova azaero renzo
Garcia Toribio Alexandra
Torres Vergara Cinthya
CICLO: IX TURNO: NOCHE
LIMA PER
2017
INTRODUCCIN:
La Marihuana es una planta herbcea anual cuya nica especie es la Cannabis
sativa que presenta tres variedades: Cannabis sativa indica, Cannabis sativa
Americana y Cannabis sativa Rudelaris. La planta, de la familia Cannabinceas, es
originaria de Asia Central, cultivada en extremo Oriente desde tiempos remotos
y se extendi su cultivo a todo Occidente. La marihuana se compone de hojas,
tallo, semillas y flores secas de la planta, mientras que el hachs es obtenido de
la resina de la planta. Su aspecto es el de una pasta ms o menos dura y aceitosa;
el color vara del marrn al negro. Usualmente es fumada en cigarrillos, pipa o
adicionada a alimentos como galletas, brownies y t de hierbas. La resina de la
planta puede ser secada y comprimida en bloques llamados hachis que se fuma.
Todas las partes de la planta poseen las sustancias psicoactivas que caracterizan
su accin txica.
La planta de cannabis contiene alrededor de 400 sustancias qumicas diferentes,
60 de las cuales estn estructuralmente relacionadas con el delta-9-
tetrahidrocanabinol o THC, que es el principal psicoactivo de esta planta, aislado
por R. Mechoulam a mediados de la dcada de 1960. Este canabinoide alcanza
una mayor concentracin en las floraciones de las plantas femeninas, tambin
puede venir en forma de cpsulas (dronabinol o marinol).
Estimulante y depresor del sistema nervioso Principio activo: 9-
tetrahidrocannabinol Hay cannabinoides endgenos para los receptores a nivel
de los que actua el THC, como la Anandamida
MARCO TEORICO
La concentracin de sustancias psicoactivas depende de la variedad de la
Cannabis: las ms psicoactivas son la ndica y la sativa y la menos concentrada es
la rudelaris. La cantidad de THC vara entre 1 y 4% en los cultivos americanos y
de 5 a 15% en las plantas asiticas ms resinosas. En las variedades
genticamente desarrolladas por lo general se busca que los valores sean los ms
altos posibles. La preparacin de la droga a partir de la planta, vara ampliamente
en calidad y potencia, dependiendo del tipo, clima, suelo, cultivo y mtodo de
preparacin. Habitualmente la planta es cortada, secada, picada y utilizada para
la formacin de cigarrillos o incorporada a los que se expenden comnmente.
Entre los distribuidores y usuarios se les conoce con distintos nombres como
marijuana, marihuana, camo, charas, grifa, hierba, mota, rosa mara, juanita,
yerba, doa juanita y otros.
Los principales compuestos de la planta Cannabis sativa pertenecen a varios
grupos:
A. Cannabinoides: constituyen una serie de sustancias de naturaleza fenlica,
derivados del difenilo y del benzopirano. A este grupo pertenecen una serie de
ismeros del tetrahidrocannabinol, los denominados Delta 1 THC y Delta 6 THC;
los ms abundantes son el cannabinol, cannabidiol, cannabigenol, y el Delta 2 THC.
Dentro de los compuestos de naturaleza cida, los ms importantes son cido A
Delta 1THC, cido B Delta 1THC, cido Cannabidiolico y cido Cannabinlico.
B. Alcaloides: Naturaleza simple: nicotina y tetranocannabina (alcaloide con
propiedades similares a la estricnina). Naturaleza compleja: Cannabinas, A, B, C
y D.
C. Ceras: Compuestos de naturaleza parafnica. El ms importante es el
Nonecosano.
D. Aceites esenciales: Los ms importantes encontrados son: Carofileno, B-
humileno, Limoneno, Selineno.
Adems contiene 50 tipos distintos de hidrocarburos serosos que ayudan a crear
el alquitrn al fumar la marihuana, 103 terpenos, la mayora de los cuales irrita
las membranas pulmonares; tambin contienen 12 cidos grasos, 11 esteroides,
20 componentes nitrogenados, as como agentes txicos incluyendo el monxido
de carbono, el amonaco, la acetona y el benceno, adems el benzaltraceno y la
benzolpirina, que son inductores del cncer y que estn presentes en la
marihuana en cantidades de 50 a 100% ms altas que el fumar el tabaco. Puede
contener mltiples contaminantes.
Microscopa electrnica de barrido de una glndula pedunculada de una hoja de
la planta Cannabis sativa.
Los cannabinoides son substancias que tienen una estructura carboxlica con
veintin carbonos y estn formados por tres anillos, ciclohexano,
tetrahidropirano y benceno (Figura 2). Los principales cannabinoides son el D9-
tetrahidrocannabinol (D9-THC), el D8-tetrahidrocannabinol (D8-THC), el
cannabidiol (CBD) y el cannabinol (CBN). Otros cannabinoides presentes en la
planta aparecen en cantidades diferentes segn la variedad de Cannabis . El
cido cannabidilico, que tiene actividad antibitica, es un constituyente del
camo.
A la izquierda, la estructura del principal cannabinoides psicoactivo, el D9-
tetrahidrocannabinol y la estructura de los principales cannabinoides endgenos:
la anandamida (araquidonil-etanolamida) y el 2-araquidonil-glicerol. A la derecha,
principales acciones de los cannabinoides a nivel neuronal. Los cannabinoides se
sintetizan a partir de lpidos de membrana, se producen bajo demanda y no se
almacenan en vesculas como ocurre con otros neurotransmisores. Los
endocannabinoides se producen como consecuencia de aumentos en el
Ca2+ intracelular e interactan con receptores CB1 ubicados en las neuronas
presinpticas, modulando la liberacin del neurotransmisor (NT). ste activa a
receptores ionotrpicos (iR) y/o metabotrpicos (mR). Los endocannabinoides
son removidos del espacio sinptico por un transportador especfico (T); ya en
el citoplasma, son degradados por la hidrolasa de la amida de cidos grasos.
Estimulante y depresor del sistema nervioso Principio activo: 9-
tetrahidrocannabinol Hay cannabinoides endgenos para los receptores a nivel
de los que acta el THC, como la Anandamida
MECANISMOS DE ACCIN
Unin a receptores especficos CB1:
Ganglios basales
Hipocampo
Cerebelo y crtex frontal
Corazn z pulmn
Parte del aparato reproductivo y urinario
El CB2:
Leucocitos (macrfagos), bazo, amgdalas
Receptores cannabinoides relacionados con: memoria, aprendizaje, actividad
motora, endocrina, analgesia.
FARMACOCINTICA
Absorcin: 5%-10% va oral
15-30% fumada
Distribucin:
Ampliamente en el tejido graso z Menos del 1% alcanza el cerebro
Atraviesa la barrera placentaria
Transfiere a leche materna
Metabolizacin: Hidroxilado en Hgado en 11-hidroxi-THC (activo) y en 11-nor-
9-carboxi-THC que se elimina en su mayor parte en orina.
FARMACOCINTICA
Eliminacin:
80% por bilis z 20% a travs de la orina
Circulacin entero heptica
Vida media una semana y su completa eliminacin aproximadamente un mes
En consumidores crnicos, varias semanas
Dosis txica: No se conoce dosis letal en humanos y en animales de
experimentacin tras administrar dosis muy elevadas (5 g en chimpance) no se
ha observado mortalidad
EFECTOS SNC:
Sedantes
Euforizante
Aumenta el apetito, la autoestima y la capacidad de comunicacin
Disminuye la depresin z sueo placentero y reparador
Sist cardiovascular
Aumento de la frecuencia cardiaca z Aumento presin arterial z
vasodilatacin de los vasos corneales z Aumenta el apetito
EFECTOS
Efectos broncodilatadores y miorelajantes
Inmunosupresin del Sistema inmune
Sist reproductor:
Infertilidad en el hombre
Disminuye la potencia sexual
En las mujeres provoca trastornos menstruales.
INTOXICACIN
Alteraciones del comportamiento
Deterioro de la coordinacin
Sensacin de lentitud en el paso del tiempo
Taquicardia Hipotensin
Sequedad de boca
Impiden la concentracin prolongada
Episodios psicticos Combinado con el alcohol potencian los efectos
depresores sobre el sistema nervioso
Producen un aumento del metabolismo heptico
USO TERAPEUTICO Anorexia Esclerosis mltiple Antiemtico Glaucoma
Analgesia En procesos asmticos Inductor del sueo.
EFECTO ANTITUMORAL DE CANABIOBES
El efecto antitumoral de los cannabinoides se basa fundamentalmente en la
capacidad de estos compuestos para inducir la muerte de las clulas tumorales,
pero cul es la cascada de eventos que lleva a la activacin de ese proceso por
los cannabinoides? Uno de los cambios que ocurre de manera temprana tras la
activacin de los receptores de cannabinoides en las clulas tumorales es la
estimulacin de la biosntesis de esfingolpidos (una familia de lpidos que
desempea un importante papel estructural y sealizador en la clula) y su
acumulacin en el orgnulo donde tiene lugar dicho proceso: el retculo
endoplsmico (RE). En el RE se dan funciones de gran importancia para la clula
entre las que se encuentran la propia sntesis lipdica, la sntesis y plegamiento
de protenas o el almacenamiento de calcio. Cuando este orgnulo sufre algn
tipo de alteracin se activan una serie de mecanismos, denominados de manera
genrica respuesta al estrs de RE, que tienen como objetivo restablecer el
normal funcionamiento del RE. Sin embargo, en ocasiones, la intensidad o
duracin del estmulo que origina la alteracin hace que la ruta de respuesta a
estrs de RE conduzca a la activacin de la muerte celular programada. En
nuestro laboratorio, hemos encontrado que la acumulacin que promueven los
cannabinoides de ciertas especies de esfingolpidos conduce a la activacin de
una ruta de sealizacin relacionada con la respuesta a estrs de RE que lleva a
la muerte de las clulas tumorales. En dicha ruta desempean un papel destacado
dos protenas denominadas p8 (un factor de transcripcin que controla la
expresin de otras protenas) y una de sus dianas, TRB3. El tratamiento con
cannabinoides origina un aumento en los niveles de estas dos protenas, lo que
conduce a la inhibicin de otro importante complejo sealizador denominado
mTORC1 ("mammalian target of rapamycin complex 1") y a la activacin de un
proceso celular que dicho complejo controla, la autofagia.
OBJETIVO:
Conocer el procedimiento del anlisis toxicolgicos de CANABINOIDES
Conocer el procedimiento de extraccin de CANABIONOIDES
Identificar los materiales usados en la extraccin de las
CANABINOIDES
Conocer los reactivos usados en la extraccin de CANABINOIDES
Aplicar las normas de bioseguridad en la manipulacin de reactivos y/o
sustancias.
Conocer los mecanismos de accin y toxicocinetica de las
CANABINOIDES
MATERIALES Y REACTIVOS
Materiales
Vaso de 250 ml
Bagueta
Pera de bromo
Pipeta de 5ml
Tubos de ensayo
Varilla de vidrio
Gradilla, lpiz, regla
Silica gel, Viales
Capilares
Lamina de vidrio
Bao mara
Baln, brobeta de 25 ml
REACTIVOS
HCL Concentrado
Sulfanilato de Na
Cetona,sol. MgNO2(10%)
Benceno-hexano
ter etlico, papel de pH
Fuente de luz Uv
Mx de orina con marihuana, satandar de cannabinoides
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
PREPARACION DE ESTANDAR
Paso 1. En un vial agregar
muestra pura de marihuana
Paso 2.
Luego se
agreg
tolueno
Paso 3. Luego agregar
3ml de metanol
Paso 4. Se agreg 1
gota Hcl concentrado
Paso 5. Colocar en
bao Mara por 30
minutos
PROCEDIMIENTO DE LA EXTRACCION DEL EXTTRACTO DE
CANABIOIDES
Paso 1
Verter la
orina en el
Beaker
Paso 3. Lectura en el
peachimetro estndar. Paso 2. Medir el pH de la
orina introduciendo la tira
Resultado pH 6 reactiva
Paso [Link]
en la Pera de
vidrio: la orina,
3 mL de ETER
y 1 mL de
TOLUENO;
agitndole
suavemente y
esperar 15
minutos.
Obtenindose el
EXTRACTO
CANNABIDOL y
verter en un vial
IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA.
La cromatografa en capa fina (en ingls thin layer chromatography o TLC) es
una tcnica analtica rpida y sencilla, muy utilizada en un laboratorio de Qumica
Orgnica. Entre otras cosas permite:
Determinar el grado de pureza de un compuesto. Se puede determinar
as, por ejemplo, la efectividad de una etapa de purificacin.
Comparar muestras. Si dos muestras corren igual en placa podran ser
idnticas. Si, por el contrario, corren distinto entonces no son la misma
sustancia.
Realizar el seguimiento de una reaccin. Es posible estudiar cmo
desaparecen los reactivos y cmo aparecen los productos finales o, lo
que es lo mismo, saber cundo la reaccin ha acabado.
La muestra a analizar se deposita cerca de un extremo de una lmina de plstico
o aluminio que previamente ha sido recubierta de una fina capa de adsorbente
(fase estacionaria). Entonces, la lmina se coloca en una cubeta cerrada que
contiene uno o varios disolventes mezclados (eluyente o fase mvil). A medida
que la mezcla de disolventes asciende por capilaridad a travs del adsorbente,
se produce un reparto diferencial de los productos presentes en la muestra
entre el disolvente y el adsorbente.
ADSOBENTES Y ELUYENTES
Los dos adsorbentes (fase estacionaria) ms ampliamente utilizados son la gel
de slice (SiO2) y la almina (Al2O3), ambas de carcter polar. La almina
anhidra es el ms activo de los dos, es decir, es el que retiene con ms fuerza a
los compuestos; por ello se utiliza para separar compuestos relativamente
apolares (hidrocarburos, haluros de alquilo, teres, aldehdos y cetonas). El gel
de slice, por el contrario, se utiliza para separar sustancias ms polares
(alcoholes, aminas, cidos carboxlicos). El proceso de adsorcin se debe a
interacciones intermoleculares de tipo dipolodipolo o enlaces de hidrgeno
entre el soluto y el adsorbente. El adsorbente debe ser inerte con las sustancias
a analizar y no actuar como catalizador en reacciones de descomposicin. El
adsorbente interacciona con las sustancias mediante interaccin dipolodipolo o
mediante enlace de hidrgeno si lo presentan.
En general, estos disolventes se caracterizan por tener bajos puntos de
ebullicin y viscosidad, lo que les permite moverse con rapidez. Raramente se
emplea un disolvente ms polar que el metanol. Usualmente se emplea una mezcla
de dos disolventes en proporcin variable; la polaridad de la mezcla ser el valor
promediado en funcin de la cantidad de cada disolvente empleada. El eluyente
idneo para cada caso ha de encontrarse por "el mtodo del ensayo y del error
SEPARACION E IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA DE CAPA FINA
Fase Mvil: cetona
Revelador: disolver 50 ml de sulfanilato de sodio, agregar 20 ml de
solucin NANO2(10%) en bario de hielo y 1ml de HCL concentrado.
Paso 1.
Paso se prepara el capilar,
Paso 2.
Se preparar placa silica gel
haciendo divisiones con una
cuchilla donde se van a
depositar las muestras
problema y el estndar
3.
Con un capilar tomar un poco
del extracto de canabioides .
Luego picar cada una al
extremo de la placa
cromatografica 33veces, y
muestra estndar 9 veces
dejando secar, vaciar el
contenido del capilar
lentamente sobre su punto y
soplar suavemente cada vez
para secar el disolvente.
Rotulas y
sembrar
4.
Luego de sembrar las muestras
problema y el estndar colocar
en la cmara o cuba
cromatografica contenida con
la fase mvil y tapar.
Esperar que se evapore dicho
disolvente.
Retirar antes que el recorrido
llegue a la parte final
Luego colocar las
placas bajo la luz
UV. Para su
respectiva
observacin y
marcar con la
ayuda de in lpiz
Luego marcar
cada uno de
los recorridos
con un lpiz
y medir
DETERMINACION DE RF
La retencin se puede explicar en base a la competencia que se establece entre
el soluto a separar y la fase mvil por adsorberse a los centros activos polares
de la fase estacionaria. As, las molculas de soluto se encuentran adsorbidas
en la fase estacionaria y a medida que se produce la elucin van siendo
desplazadas por la fase mvil. La retencin y la selectividad en la separacin
dependen de los valores respectivos de las constantes de los diferentes
equilibrios qumicos que tienen lugar, que estn en funcin de:
la polaridad del compuesto, determinada por el nmero y naturaleza
de los grupos funcionales presentes. Los solutos ms polares quedarn
ms retenidos puesto que se adsorben ms firmemente a los centros
activos de la fase estacionaria, mientras que los no polares se eluirn
con mayor facilidad.
Naturaleza del disolvente. As, para un mismo compuesto, un aumento
en la polaridad del disolvente facilita su desplazamiento en la placa. La
relacin entre las distancias recorridas por el soluto y por el eluyente
desde el origen de la placa se conoce como Rf, y tiene un valor
constante para cada compuesto en unas condiciones cromatografas
determinadas (adsorbente, disolvente, tamao de la cubeta,
temperatura, etc.). Debido a que es prcticamente imposible
reproducir exactamente las condiciones experimentales, la
comparacin de una muestra con otra debe realizarse eluyendo ambas
en la misma placa.
La distancia recorrida por el compuesto se mide desde el centro de la mancha.
Si sta es excesivamente grande se obtendr un valor errneo del Rf. Se
recomienda elegir un eluyente en el que los componentes de la mezcla
presenten un Rf medio en torno a 0.30.5. Para compuestos poco polares, se
debe utilizar un disolvente apolar como el hexano. En el caso de compuestos
con polaridad media, se aconseja utilizar mezclas hexano/acetato de etilo en
distintas proporciones. Los productos ms polares, requieren disolventes ms
polares como mezclas de diclorometano/metanol en distintas proporciones.
RESULTADOS
MUESTRA: orina con marihuana
RF = = =0
ESTANDAR: MARIHUANA PURA
.
RF = = = .
Conclusin: se lleg a la conclusin de que la muestra de orina obtenida con
marihuana solo dio como RESULATADO la FORMA ENTERA DE DICHA
SUSTANCIA, esto debido que posiblemente en consumidor de MARIHUANA
HAYA CONSUMIDO TRES DIAS ANTES DEL ANALISIS.
Por otro lado el estndar si nos positivo observndose los metabolitos con la
luz UV.
CUESTIONARIO
1. Escriba la reaccin qumica en la preparacin de revelador azoico
Los colorantes azoicos son colores sinttico o artificiales que contienen un grupo
AZO como parte de su estructura, normalmente son mas estable que los
colorantes naturales(es decir son ms resistentes al calor y no se decoloran ante
la luz).Su cloroformo principal es el grupo AZO (-N-N) en funcin del cloroformo
obtenemos un color u otro
2. Escriba la reaccin qumica en el proceso del revelado.
3. Escriba otras tcnicas del revelado
Cromatografa en capa delgada (CCD) Existe una serie de mtodos de CCD
para realizar un anlisis cualitativo y semicuantitativo del cannabis, por medio
de diversas fases estacionarias (placas de CCD) y sistemas de disolventes, y
tcnicas ligeramente distintas respecto de la preparacin de la muestra y la
visualizacin por punto. Muchos de estos mtodos tambin producen resultados
aceptables, pero cada mtodo que se emplee en un laboratorio por primera vez
debe ser validado y/o verificado antes de su uso habitual. El siguiente mtodo
se ha ensayado en la prctica y se considera adecuado para su fin.
Espectrometra de movilidad inica (EMI) El anlisis de THC puede realizase
mediante un espectrmetro de movilidad inica. Se han constatado diversos
problemas relacionados con la separacin de seales de la herona y humedad
[51]. Por lo tanto, no es el mtodo ideal.
Cromatografa en capa delgada (CCD) Existe una serie de mtodos de CCD para
realizar un anlisis cualitativo y semicuantitativo del cannabis, por medio de
diversas fases estacionarias (placas de CCD) y sistemas de disolventes, y
tcnicas ligeramente distintas respecto de la preparacin de la muestra y la
visualizacin por punto. Muchos de estos mtodos tambin producen resultados
aceptables, pero cada mtodo que se emplee en un laboratorio por primera vez
debe ser validado y/o verificado antes de su uso habitual. El siguiente mtodo
se ha ensayado en la prctica y se considera adecuado para su fin.
Cromatografa de gases - detector de ionizacin de llama (GC-FID), sin y
con derivacin El propsito del anlisis determina la necesidad de realizar o no
derivacin. Sin derivacin previa (sililacin) de THC y THCA, el anlisis GC
descarboxilar al segundo y producir el contenido total de THC de la muestra
de cannabis, que es la suma del THC libre y el THC que forma el THCA. Puesto
que el contenido total de THC determina la potencia mxima del cannabis que se
fuma habitualmente (y por lo tanto que se descarboxila), la mayora de los
sistemas de justicia penal consideran como parmetro pertinente el contenido
total de THC. Sin embargo, si se deben comunicar ambos contenidos, la
derivacin previa s ser necesaria
Cromatografa de gases-Espectrometra de masa (GC-EM) El anlisis de GC-
EM puede llevarse a cabo de manera anloga a la del anlisis de GD-FID. Se
dispone de espectros patrn de los cannabinoides ms comunes, tanto con forma
derivada como no derivada, en las bases de datos comerciales de EM de uso
corriente.
Cromatografa de lquidos de alto rendimiento (HPLC) El mtodo descrito a
continuacin es un mtodo validado para el anlisis del contenido total de THC
(THC + THCOOH) en la hierba de cannabis despus de la extraccin con
metanol/cloroformo y la ulterior descarboxilacin [54, 55]. La validacin abarca
todo el proceso, desde la preparacin de las muestras hasta el anlisis por HPLC.
Otros mtodos pueden producir tambin resultados aceptables, pero se deben
validar y/o verificar antes de su uso habitual. Mediante la adecuada verificacin,
puede aplicarse tambin el mismo mtodo a otros productos del cannabis.
4. escriba las formulas qumicas de los otros constituyentes de la especie
de cannabis( diferentes al THC, CBD, CBN)
BIBLIOGRAFIA
[Link]
[Link]
[Link]
cientificos/257-guillermo-velasco-mayo-2013-cannabinoides
ANEXOS
