4 HEMATOLOGIA l Volumen 9 - N 1, 2005

Automatizacin en hematologa
Nilda E. Fink

Ctedra de Hematologa, Departamento de Ciencias Biolgicas,

Facultad de Ciencias Exactas, Universidad Nacional de La Plata.
47 y 115, 1990 La Plata, Argentina. E-mail: fink@biol.unlp.edu.ar
REVISIN

Fecha de recepcin: 1/3/05 HEMATOLOGIA, Vol. 9 N 1: 4-16

Fecha de aceptacin: 20/4/05 Enero-Abril, 2005

RESUMEN FUNDAMENTOS TECNOLGICOS Y SISTEMAS

Gran parte de la prctica del laboratorio hematolgico
se relaciona con observaciones que incluyen la identifi-
cacin de tipos de clulas y la interpretacin de la com-
posicin de las poblaciones celulares sanguneas. Esta re-
visin describe la metodologa empleada en los instru-
mentos automatizados para el estudio hematolgico con-
vencional, incluyendo la medicin de Hb, recuento de
glbulos rojos e ndices eritrocitarios, el recuento de
plaquetas, el recuento total y diferencial de glbulos
blancos y reticulocitos. Se describen las diversas tecno-
logas utilizadas para realizar las mediciones, ejempli-
ficando su uso en los contadores hematolgicos automa-
tizados modernos disponibles comercialmente.
Palabras claves: Automatizacin, Hematologa, Siste-
mas analticos, Tecnologa
Muchas de las mediciones en el campo de la
Hematologa conciernen a variables continuas. Algu-
nos ejemplos de este tipo de variables son la medi-
cin de concentraciones de hemoglobina (Hb) en la
sangre y el hierro, as como su capacidad total de
unin en suero. Por otra parte, gran parte de la prc-
tica de la Hematologa se relaciona con observacio-
nes que incluyen la identificacin de tipos de clulas
y la interpretacin de la composicin de las poblacio-
nes celulares sanguneas1. Los temas centrales que se
abordarn a continuacin se centrarn principalmente
sobre estas determinaciones discontinuas.
En relacin con el recuento de clulas sanguneas,
los mtodos manuales son la base de algunos mto-
dos de referencia en el laboratorio hematolgico, a los
que an es necesario recurrir cuando hay discrepan-
cia con los mtodos automatizados. Suelen tambin
ser mtodos de rutina en laboratorios pequeos de
algunos pases, pero dada la enorme cantidad de in-
formacin disponible sobre los mismos2, en este tra-
bajo slo nos referiremos a los mtodos automatiza-
dos.
ANALTICOS EN EL RECUENTO AUTOMATIZADO
DE CLULAS SANGUNEAS
A continuacin trataremos sobre la metodologa
empleada en los instrumentos automatizados para el
estudio hematolgico convencional, incluyendo el
recuento de plaquetas y el recuento diferencial de
glbulos blancos. El recuento de reticulocitos tambin
ser considerado porque en la actualidad puede rea-
lizarse tanto en contadores automatizados que inclu-
yen el recuento en forma directa, o mediante un pro-
cedimiento especial previo en otros tipos de contado-
res (semiautomatizados).
En primer lugar, se describirn las diversas tec-
nologas utilizadas para realizar las mediciones,
ejemplificando su uso en los contadores hema-
tolgicos automatizados disponibles comercialmen-
te. Alguno de estos ejemplos han sido tomados de
los fabricantes que abarcan los principales segmen-
tos del mercado de laboratorio clnico, dato obteni-
do a partir de la estadstica de los participantes en
programas de evaluacin externa de calidad (PEEC).
Los fabricantes por lo general ofrecen un amplio
rango de instrumentos, pero las descripciones sern
limitadas, por razones de espacio, a los modelos
ms difundidos (Tabla 1).
La mayora de estos instrumentos son totalmente
automatizados, es decir las mediciones se realizan a
partir de sangre entera sin necesidad de que el ope-
rador la diluya en forma manual. En efecto, con el fin
de garantizar un manejo seguro, la mayora de los
instrumentos cuenta con dispositivos que atraviesan
la tapa del tubo de colecta de sangre, de modo que
el operador no tiene que quitarla. Tambin es comn
que los instrumentos mezclen las muestras de san-
gre antes de que las mismas sean includas en el an-
lisis. Un esquema que resume las distintas etapas de
estos sistemas se presenta en la Fig. 13.
AUTOMATIZACIN EN HEMATOLOGA 5

TABLA 1
Algunas caractersticas de autoanalizadotes hematolgicos modernos*

Tipo Fabricante Instrumento Ao de Instalados al

aparicin en US 2000 en US

Recuento diferencial Abbott Cell-Dyn 1200 1999 110

de leucocitos de Cell-Dyn 1700 y 1700CS 1995 2800
2-3 regiones ABX Micros 60 1998 81
Bayer ADVIA 60 1999 50
BD Bio-sciences QBS Star 1999 Nd
Beckman-Coulter Coulter Ac-T series 1996 500
Coulter Ac-T diff y diff 2 1999 800
Coulter Onyx/Onyx AL 1994 1300
Roche KX21 1999 100
K-4500 1995 nd
De alto volumen Abbott Cell-Dyn 3200 1997 >700
Cell-Dyn 3700 1999 >300
Cell-Dyn 4000 1997 >350
ABX Pentra 60c+ 2000 0
Pentra 120 Retic 1999 18
Bayer ADVIA 120 1998 500
Beckman-Coulter Coulter GEN-S 1996 >1100
Coulter HmX 1999 >100
Coulter STKS 1989 >2600
Coulter MAXM 1991 >2100
Sysmex Sysmex SF3000-Alpha 3000 1996 100
Sysmex SF3000-Alpha 1997 nd
Sysmex SE9500/SE 1994 350
Sysmex SE9500 Alpha 2 nd nd
Sysmex SE9500R/SE 1997 350
Sysmex XE2180/XL 2000 nd

* College of American Pathology (13, 15)

Fig. 1: Diagrama funcional simplificado de un sistema multiparamtrico de recuentos celulares.

Los contadores de sangre automatizados, como
cualquier otro instrumental de laboratorio, deben ser
manejados de manera apropiada. Esto requiere que
sean totalmente calibrados y que el desempeo sea
monitoreado tanto por el control de calidad interno
como por los PEEC. Por ltimo, debido a que el mer-
cado evoluciona muy rpido, es necesario entender
cmo se evalan los nuevos instrumentos o, al me-
nos, entender crticamente las evaluaciones empren-
didas por otros usuarios. Este aspecto no ser trata-
do en esta revisin, pero el lector puede remitirse MA
Fernndez Alberti y col4.
El desarrollo automatizado del recuento y la me-
dicin del tamao de las clulas sanguneas parte de
tcnicas de recuento simple, que fueron descriptas en
la segunda mitad del siglo XIX y que fueron usadas
6 HEMATOLOGIA l Volumen 9 - N 1, 2005

TABLA 2
Recuento de clulas sanguneas en los primeros instrumentos

Caractersticas Apertura-impedancia Dispersin de luz

Descripcin del prototipo Coulter, 1956 Crosland-Taylor, 1953

Ingreso de las clulas a la zona
sensora
Definicin de la zona sensora
Impulsos usados para contar las
clulas que atraviesan la zona
sensora
Pasaje a travs de un orificio estrecho
Medicin de impedancia a travs del
orificio
Cambios en la impedancia contados
electrnicamente
Pasaje por una corriente estrecha por
flujo hidrodinmico
Haz de luz que atraviesa la corriente
de clulas
Cambios en la salida de un fotmetro,
contados electrnicamente

durante mucho tiempo. Estas eran muy inexactas y,

hasta la dcada de 1950, se haban hecho pocos avan-
ces tecnolgicos5.
Se hicieron intentos iniciales y complejos para
automatizar el recuento de clulas en cmaras cuen-
taglbulos, pero an con tcnicas que fueron perfec-
cionadas, todava era difcil automatizar la dilucin
de la sangre y la carga de la cmara. Tambin resul-
taba imposible contar las clulas con exactitud me-
diante los mtodos de estudio de las propiedades
elctricas u pticas de las clulas en suspensin.
Para permitir que el recuento celular fuera auto-
matizado, tuvieron que disearse mtodos de dilu-
cin de la sangre e ingresar cantidades relativamen-
te pequeas de clulas dentro y fuera de una zona
conocida como zona sensora. As, las clulas podan
ser contadas con exactitud a medida que pasaban a
travs de esa zona sensible, siempre y cuando la mis-
ma fuera lo suficientemente pequea como para ha-
cer factible el recuento2, 6.
Los primeros contadores hematolgicos fueron
semiautomatizados; esto era as porque la prepara-
cin de una dilucin adecuada era una operacin
manual y el instrumento entonces, aspiraba la dilu-
cin ya preparada. Sin embargo, a fines de la dcada
del 60 se dispuso de instrumentos totalmente auto-
matizados, que aspiraban muestras de sangre entera
y llevaban a cabo los pasos necesarios para diluir y
aislar las clulas a ser contadas. Nos ocuparemos en
el presente trabajo slo de los instrumentos totalmen-
te automatizados. Los instrumentos semiautoma-
tizados, si bien se fabrican todava, se utilizan casi
con exclusividad en laboratorios pequeos porque la
preparacin de diluciones manuales a partir de una
gran cantidad de muestras sanguneas, demanda
mucho tiempo adems de ser poco precisa.
Los primeros contadores fueron descriptos por
Coulter7 y Crosland-Taylor8, quienes adoptaron dife-
rentes enfoques para limitar el volumen en la zona
sensora y realizar el recuento (Tabla 2).
Fig. 2: Contadores de apertura-impedancia. La impedancia se mide en-
tre un electrodo negativo dentro del tubo con orificio y el electrodo po-
sitivo en la dilucin de las clulas de la sangre. El rea delimitada por
lnea de puntos muestra la zona sensora por donde pasan las clulas. :
resistividad del electrolito, m: resistividad del electrolito modificada por
la partcula.
En el instrumento descripto por Coulter7, las c-
lulas son conducidas a travs de un estrecho orificio,
detectndose los cambios de impedancia (Fig. 2).
La impedancia es efectivamente medida en la
zona sensora situada entre los electrodos colocados
a ambos lados del orificio. As, las clulas funcionan
como aislantes frente a los diluyentes salinos, de
modo que la impedancia aumenta transitoriamente
a medida que las clulas pasan a travs de la zona
sensora. Los cambios de impedancia transitorios pro-
ducen impulsos elctricos que pueden ser contados.
Estos instrumentos han sido llamados contadores de
apertura-impedancia.
El instrumento descripto por Crosland-Taylor8
se basaba en hacer que las clulas pasen a travs
de un delgado haz de luz. La zona sensora estaba
restringida parcialmente por la estrechez del haz
de luz y por el pasaje de clulas en una corriente
de lquido muy delgada. A medida que las clulas
pasan a travs de la zona sensora, interceptan el
haz de luz que se dispersa, pudiendo ser colecta-
AUTOMATIZACIN EN HEMATOLOGA
Fig. 3: Contadores por dispersin de luz. La luz de la fuente lser se di-
rige hacia un foco y luego se dispersa. Una barrera impide la llegada de
luz al fotodetector. Cuando una clula entra en el foco, dispersa la luz,
que as pasa por fuera de la barrera, e impacta en el detector.
da por un sistema ptico adecuado y medida por
un fotmetro (Fig. 3).
Los aumentos transitorios en la luz dispersada
crean impulsos desde el fotmetro, que luego pueden
ser contados electrnicamente, por ello estos sistemas
son llamados contadores de dispersin de luz.
Los impulsos contados en los primeros instrumen-
tos de apertura-impedancia y de dispersin de luz
tambin se utilizaron para determinar el tamao ce-
lular, dado que el tamao del impulso es aproxima-
damente proporcional al tamao de la clula. Por lo
tanto, el tamao del impulso puede usarse para dis-
criminar entre la clula de inters y otras clulas, res-
tos o ruido electrnico. Este proceso lleva a la defini-
cin de un umbral (Fig. 4).
Adems de las diferentes tecnologas de deteccin,
haba importantes diferencias en cmo las clulas in-
gresan a la zona sensible en los dos tipos de instru-
mentos. Debido a que la geometra tiene que ser per-
fecta, en los sistemas de dispersin de luz, las clu-
las tienen que estar en una corriente muy estrecha
que interacte perfectamente con el haz de luz. Esa
corriente se logra por una tcnica donde se emplea
un flujo laminar envolvente.
El flujo del lquido se ajusta a travs de un capi-
lar delgado para crear un efecto de enfoque hidro-
dinmico que fuerza a la suspensin celular a perma-
necer en la corriente estrecha a medida que pasa por
el centro de la zona sensible.
Aunque este sistema fue descripto originalmente
para sistemas de dispersin de luz, tambin se pue-
de aplicar a los sistemas de apertura-impedancia y
tiene particular valor al potenciar la capacidad de los
sistemas de apertura-impedancia para medir el tama-
o celular, as como para mejorar el recuento celular.
7
Fig. 4: Diagrama de volmenes en el recuento de plaquetas. Sirve para
discriminar plaquetas pequeas de ruido (A), plaquetas grandes de gl-
bulos rojos pequeos (B). C representa el rea bajo la curva usada para
la estimacin terica del nmero de plaquetas.
Las mejoras en la capacidad de medir el tamao tam-
bin significa que es ms fcil discriminar entre di-
ferentes tipos de clulas, por ejemplo las plaquetas
grandes pueden ser discriminadas ms fcilmente de
los eritrocitos pequeos.
En la prctica, para hacer el recuento celular tan-
to los sistemas de apertura-impedancia como los de
dispersin de luz son adecuados para contar eritro-
citos, plaquetas o leucocitos totales. Sin embargo, es
necesario tener en cuenta cules son los requerimien-
tos bsicos para un recuento exacto de cualquier tipo
de clula5:
- La sangre entera debe ser homogeneizada, medi-
da y diluida con exactitud.
- Debe pasarse un volumen conocido de esa dilu-
cin a travs de la zona sensora.
- Las clulas de inters deben contarse una vez y
slo una vez y ninguna otra clula, resto celular
o ruido electrnico debe contribuir al recuento.
El primer requisito es fcil de alcanzar, procuran-
do que la sangre est bien mezclada antes del anli-
sis. En la actualidad, la mayora de los instrumentos
hacen esto en forma automtica y luego hacen las
diluciones con exactitud, generalmente por medio de
sistemas basados en jeringas calibradas.
El segundo requerimiento es ms difcil de lograr
en un instrumento automatizado. La mayora de los
fabricantes han elegido medir los recuentos por uni-
dad de tiempo en lugar de la unidad de volumen de
dilucin. Por lo tanto, tales sistemas tienen que ser
calibrados para convertir los recuentos por unidad de
tiempo a recuentos por unidad de volumen.
El tercer requerimiento es de dificultad interme-
dia. Puede parecer excesivo afirmar que las clulas
deben ser contadas una vez, pero el problema es que
8 HEMATOLOGIA l Volumen 9 - N 1, 2005

flujo laminar, las clulas podran recircular dentro del

orificio.
Esas clulas recirculantes pueden hacer una con-
tribucin mnima al recuento an cuando ellas tien-
den a producir impulsos ms pequeos que las clu-
las que pasan a travs del orificio. Sin embargo, los
eritrocitos que recirculan en esta forma causan sea-
les en el rango de plaquetas y dificultan los recuen-
tos de plaquetas, a menos que haya sistemas de flu-
jo de barrido ubicados en la parte posterior del orifi-
cio que prevengan la recirculacin

Fig. 5. Relacin entre el recuento celular y la concentracin de clulas.

A concentraciones altas comienza a producirse un plateau como conse- MTODOLOGA EMPLEADA EN LAS
cuencia del fenmeno de coincidencia. DETERMINACIONES DE UN ESTUDIO
SANGUNEO BSICO (HEMOGRAMA)

en el recuento pueden subestimarse si van a travs
de la zona sensora, casi al mismo tiempo, que otra
clula. Este problema, que se denomina coincidencia
(Fig. 5), surge del tiempo muerto en la electrnica
del instrumento y por lo general puede ser corregi-
do con un algoritmo matemtico adecuado, cons-
truido dentro del microprocesador del contador
hematolgico.
Decir que las clulas deben contarse slo una vez
parece igualmente excesivo, pero el problema es que
en los contadores de apertura-impedancia simple sin
Concentracin de Hb
Es l mtodo ms uniforme en todos los instru-
mentos y presenta dos opciones de uso comn (Ta-
bla 3).
La primera es convertir la hemoglobina en
cianmetahemoglobina (HiCN) y luego medir la
absorbancia alrededor de 540 nm. En la prctica, sin
embargo, el tiempo del ciclo de los instrumentos dis-
ponibles en el mercado es tan corto que puede im-
pedir que la conversin total se produzca por com-
pleto y que los derivados intermedios sean medidos.
La conversin a HiCN requiere el uso de un reactivo

TABLA 3
Fundamento de varias determinaciones hematolgicas en autoanalizadores de uso frecuente.

Instrumentos
Analito Abbott Bayer Beckman Sysmex
Coulter

Hemoglobina:
- Mtodo automatizado HiCN HiCN con Hb HiCN LSS-meta-Hb
celular directa
- Mtodo de deteccin Absorcin a 546 nm Absorcin a 546 nm Absorcin a 525 nm Absorcin a 555 nm
Leucocitos totales Dispersin ptica/ Citometra de flujo Impedancia Corriente directa
fluorescencia
Leucocitos: diferencial Dispersin ptica/ Peroxidasa y Tecnologa VCS de Corriente directa y
fluoresencia densidad nuclear Coulter 3-D frecuencia de radio
Leucocitos: linealidad 0-250 1-99,9 0-99,99 0-99,9
(109/L)
Plaquetas Recuento inmuno- Optico Umbral fijo de Impedancia
plaquetario de ptica/ impedancia
impedancia
Plaquetas: discriminacin Recuento inmuno- Indices ptico y Exactitud de Umbrales no fijos
con eventos no plaquetarios plaquetario de ptica/ refractario que umbrales fijos en que permiten la
impedancia permiten la la deteccin por discriminacin
discriminacin parmetro nico
Plaquetas: linealidad (109/L) 0-2000 0,005-3000 0-999 0-999
AUTOMATIZACIN EN HEMATOLOGA
tipo Drabkin, que contiene cianuro de potasio y
ferrocianuro de potasio, por lo tanto el efluente resi-
dual del instrumento puede no cumplir con los
estndares ambientales en algunos pases. Los mto-
dos alternativos -libres de cianuro- para la medicin
de la Hb, que usan laurilsulfato de sodio (LSS), han
sido introducidos en algunos instrumentos. Los resul-
tados parecen compararse bien con los mtodos de
HiCN9. Estos mtodos no cianamidas, adems de ser
ms seguros, son tambin promisorios en cuanto a
futuras mejoras en la calibracin y validacin de nue-
vas mediciones de Hb. El mtodo de LSS introduci-
do por Sysmex, parece ser de iguales caractersticas
a las del mtodo de referencia y es un avance signi-
ficativo para bajar la turbidez y permitir un rpido
anlisis automatizado10.
Eritrocitos
Por lo general, el recuento de eritrocitos se reali-
za sobre diluciones de sangre entera con un umbral
adecuado para discriminar entre grandes plaquetas
y pequeos eritrocitos (Fig. 4). Muchos sistemas no
tienen un umbral superior para discriminar grandes
eritrocitos de pequeos leucocitos, pero los nmeros
relativos de los dos tipos de clulas indican que esto
no suele ser un problema.
Indices eritrocitarios
Aunque todos los contadores hematolgicos au-
tomatizados miden el volumen corpuscular medio
(VCM), hay otros factores importantes que afectan las
mediciones, segn sean hechas por los instrumentos
de apertura-impedancia o por los de dispersin de
luz. Debido a que ninguna tecnologa es perfecta,
varios fabricantes han intentado resolver los proble-
mas, pero lo han hecho, con frecuencia, en diferente
forma.
La dificultad fundamental, que ya ha sido men-
cionada, es que el impulso producido por cualquier
clula es slo una aproximacin proporcional al vo-
lumen de la clula. Los impulsos aberrantes, que no
representan verdaderamente el tamao de la clula,
pueden ocurrir en cualquier contador, pero con fre-
cuencia estos impulsos tienen una caracterstica in-
usual que les permite ser identificados por circuitos
electrnicos adecuados y procesados de modo que no
afecten la magnitud del impulso promedio que se
utiliza como medicin de VCM. En los contadores de
apertura-impedancia sin flujo laminar, hay una nece-
sidad adicional de tratar los impulsos, ya que en ta-
les instrumentos las clulas que pasan cerca del bor-
de del orificio deben ser ignoradas porque producen
impulsos ms grandes que las clulas que pasan en
9
el centro del orificio. Afortunadamente, esas clulas
tienen un tiempo de pasaje ms largo a travs del
orificio, debido a que el flujo es ms lento en el bor-
de. Los impulsos que ellas producen son por lo tan-
to tan largos que deben y pueden ser procesados. Dos
clulas que atraviesan juntas tambin producen un
pulso sobredimensionado, pero de igual modo es tan
largo, que puede ser procesado.
En relacin a los eritrocitos, el aspecto ms serio,
de correccin ms dificultosa, es que el VCM tiende
a ser subestimado cuando la concentracin de Hb
corpuscular media (CHCM) real, medida manual-
mente, es reducida. Los fabricantes han adoptado
diferentes tcnicas para obviar el problema. Estas han
servido para reducir la magnitud del efecto aunque
en ninguna instancia ha sido eliminado totalmente.
Debido a que los ndices eritrocitarios se relacionan
entre s de acuerdo con lo siguiente:
HCM
CHCM =
VCM
Puede observarse que un VCM subestimado cau-
sar una CHCM sobrestimada. Por esto, con los mo-
dernos contadores sanguneos, rara vez se observa que
la CHCM descienda marcadamente en la deficiencia
de hierro severa, como sucede cuando las mediciones
de Hb y hematocrito son hechas en forma manual y
la CHCM se calcula usando la frmula:
Hemoglobina
CHCM =
Hematocrito centrifugado
Con los sistemas de apertura-impedancia hay una
explicacin simple para la subestimacin del VCM,
cuando la CHCM es baja y est relacionado con el
hecho de que la CHCM determina la viscosidad in-
terna del eritrocito y, como consecuencia, a su forma,
cuando pasa a travs del orificio del contador. Las
fuerzas de corte del fluido en el orificio son tales que
el eritrocito adopta una forma de cigarro, pero cuan-
do la viscosidad interna se reduce, la forma del eri-
trocito se vuelve similar a un cigarro ms largo y
delgado y crea un impulso ms pequeo de lo que
debiera (subestimacin del volumen). Esto es cono-
cido como el efecto del factor forma5.
A excepcin de los equipos de Bayer, todos los
dems calculan los ndices en funcin de la medicin
del tamao celular de las clulas por apertura-impe-
dancia luego de diluirlas en un medio isotnico. Con
el fin de minimizar estos efectos, hay sistemas de dis-
persin de luz en los que se trata el eritrocito para
que tome la forma esfrica y las clulas son fijadas
antes de su entrada a la zona sensora. Tal es el caso
10
de los equipos de Bayer que llevan a la esfericidad
las clulas con un volumen constante y luego miden
el volumen celular a partir de la lectura mediante un
sistema de dispersin de luz, donde la misma incide
con dos ngulos diferentes. Despus, proceden a
transformar esas seales mediante un algoritmo es-
pecial basado en la dispersin ptica de partculas
esfricas dielctricas10.
En estos casos suele aplicarse la teora de Mie que
relaciona la dispersin de luz con el volumen y el
ndice de refraccin interno11. El uso prctico de la
teora de Mie proviene de observar la dispersin de
luz en cada clula individual, con un ngulo peque-
o (2-3) y uno grande (5-15). La dispersin con un de helio-nen y esta determinacin se integra con las
ngulo pequeo est afectada primariamente por el
volumen y la dispersin con un ngulo grande, por
el ndice de refraccin interno, aunque cada uno est
afectado por ambos. Sin embargo, si ambos ngulos
de dispersin son ploteados uno contra el otro, la
posicin de cualquier impulso puede ser derivada
para medir el volumen y la concentracin de Hb de
la clula. Promediando las mediciones sobre muchas
clulas, se pueden derivar los valores medios que
equivalen al VCM y la CHCM5.
Como mencionamos antes, los cambios de forma
de los eritrocios deformados anormalmente en los
analizadores por apertura-impedancia, afectan la es-
timacin del VCM, la CHCM y el hematocrito. La
introduccin de la focalizacin hidrodinmica en los
equipos de apertura-impedancia, tales como el
Sysmex SE9500, parece reducir el efecto del cambio
de forma y de deformabilidad. En ese sentido, los
equipos de Beckman Coulter, particularmente para
CHCM, parecen estar afectados por no poseer esa
adaptacin10.
Reticulocitos
Los recuentos de reticulocitos teidos con varios
colorantes pueden realizarse en un instrumento au-
tomatizado, diseado para ese propsito, tal como el
Sysmex R3000, o en un citmetro de flujo convencio-
nal. Recientemente otros contadores hematolgicos
han incorporado una opcin de recuento de reti-
culocitos, en los que stos deben ser coloreados de
modo independiente y luego son introducidos den-
tro del contador para su anlisis.
En el caso de mediciones hechas con colorantes
fluorescentes, de acuerdo con la intensidad de fluo-
rescencia, los reticulocitos se pueden dividir en tres
sectores que representan estadios diferentes de ma-
duracin. El estadio ms joven, muy fluorescente, es
un indicador temprano de recuperacin, que apare-
ce antes de un recuento de reticulocitos total eleva-
do. Un alto recuento de elementos muy fluorescentes
HEMATOLOGIA l Volumen 9 - N 1, 2005
es un indicador de recuperacin medular despus de,
por ejemplo, un transplante de mdula sea (TMO)
o de la administracin de eritropoyetina exgena.
Actualmente, se pueden hacer los recuentos sin
necesidad de coloracin manual, ya que estn total-
mente automatizados. Sysmex fue el primero en in-
troducir un colorante fluorescente (Automune-O)
detectado por citometra de flujo, en tanto que otros
como Beckman Coulter usan el nuevo azul de
metileno. Este ltimo mtodo es menos preciso por-
que es ms dificultoso estandarizar la coloracin y
porque los cuerpos de Howell-Jolly pueden interfe-
rir. Bayer usa la oxazina-750 en el canal de luz lser
determinaciones del ancho de la distribucin del vo-
lumen eritrocitario (RDW) y el contenido de Hb, con
lo cual se obtienen los ndices celulares reticulo-
citarios. Estos parmetros de inmadurez reticulo-
citaria, que actualmente tienen un uso limitado, pue-
den ser usados para estimar la reduccin de la vida
media eritrocitaria y mejorar el tratamiento de una
variedad de anemias, en la recuperacin posquimio-
terapia y en el TMO.
Plaquetas
Estas clulas pueden contarse sobre la misma di-
lucin de sangre entera usada para el recuento de
eritrocitos. Hay, por lo general, un umbral superior
para eliminar pequeos eritrocitos y un umbral infe-
rior para discriminar del ruido electrnico y los res-
tos celulares (Fig. 4).
Estos umbrales simples son adecuados, siempre
y cuando el instrumento tenga flujo laminar, y vale
tanto si se usa apertura-impedancia como dispersin
de luz para su deteccin. Sin embargo, si no se usa
flujo laminar opcional para los contadores de aper-
tura-impedancia y obligatorio para contadores de dis-
persin de luz hay demasiado solapamiento entre
las seales de ruido o los residuos y la de los
eritrocitos pequeos para que el recuento sea efecti-
vo, entre los umbrales inferior y superior.
Bajo estas circunstancias es necesario ajustar una
curva de distribucin terica al histograma de volu-
men de plaquetas y extrapolar el recuento de
plaquetas a partir del rea bajo la distribucin teri-
ca5 (Fig. 4, C).
Recientemente, se han ampliado los diferentes ti-
pos de mtodos empleados por los distintos fabrican-
tes. Estos nuevos sistemas han sido importantes por-
que se sabe que el recuento de plaquetas con un solo
parmetro tal como la impedancia, tiene una tenden-
cia a sobreestimar el recuento verdadero de plaquetas,
que es importante en las trombocitopatas y en el
manejo de pacientes trombocitopnicos.
AUTOMATIZACIN EN HEMATOLOGA
Por otra parte, esto es importante en el caso de
tener que hacer recuentos elevados de plaquetas, en
pacientes con trombocitosis y en el control de calidad.
Una limitacin actual es la imposibildad de distinguir
plaquetas de fragmentos celulares y restos celulares.
Es importante tambin la capacidad de reconocer
plaquetas de mayor tamao, que suelen estar exclui-
das de los algoritmos de recuentos de plaquetas. Los
fabricantes trataron de resolver esto de diferentes for-
mas (Tabla 3).
Algunos fabricantes resuelven esto con mtodos
pticos y por impedancia y si no hay concordancia
tiene la alternativa de usar un mtodo inmunolgico
automatizado con un anticuerpo monoclonal contra
la glicoproptena gpIIIa, que es una gp presente slo
en plaquetas (Abbott). Otros usan un mtodo de im-
pedancia sin umbral fijo y los resultados correla-
cionan bien con el mtodo de referencia, pero con
menor frecuencia de alarmas con relacin a otros con-
tadores que tienen umbrales fijos (Sysmex).
Tambin se desarroll un sistema de medida
bidimensional en el cual se mide tanto el volumen
como el ndice de refraccin de cada una de las clu-
las (Bayer). Esto tiene una gran capacidad de discri-
minacin entre plaquetas, eritrocitos y partculas con-
taminantes. Esta tecnologa altamente novedosa es,
a la vez, muy confiable. Adems brinda otros par-
metros como el VPM, el ancho de la distribucin del
volumen plaquetario (PDW), el plaquetocrito y el
componente plaquetario medio (CPM), mediciones
stas cuyo valor clnico an est en discusin10.
Recuento total y diferencial de glbulos blancos
El examen mediante microscopa ptica de un
frotis teido de sangre perifrica para evaluar la mor-
fologa de eritrocitos y trombocitos (plaquetas) y la
generacin del recuento diferencial de leucocitos an
hoy resultan cruciales para el diagnstico de enfer-
medades hematolgicas1. Estos procedimientos, ade-
ms de la determinacin de recuentos celulares en la
sangre, tradicionalmente han sido las funciones prin-
cipales de un laboratorio de Hematologa. Sin embar-
go, el recuento diferencial visual se reconoce como
una de las tareas de labor ms intensa en el labora-
torio. Para lograr buena ejecucin se requiere un per-
sonal bien preparado y muy motivado. A pesar de su
honroso papel en el diagnstico de enfermedades
hematolgicas, estas mediciones estn plagadas de
errores. La confiabilidad del procedimiento debe su-
pervisarse regularmente por encargados especializa-
dos e intercambiando extendidos con otros laborato-
rios. Siempre que sea posible se recomienda que los
principiantes muestren a los supervisores todas las
anomalas importantes, tales como leucocitosis pri-
11
maria o reactivas, trombocitopenia o cambios noto-
rios en los eritrocitos. Una forma de estimular el in-
ters y aumentar el conocimiento de los responsables
en la evaluacin correcta de preparaciones sangu-
neas y frotis de mdula sea es la discusin peridi-
ca de extendidos de inters especial. Un anlisis cui-
dadoso de frotis sanguneo es una herramienta muy
til para la evaluacin clnica. Por otro lado, la triada
de factores formada por la importancia, el gasto y el
error aleatorio llev a los directores de laboratorios
y a los ingenieros industriales a la conclusin de que
la automatizacin del recuento diferencial proporcio-
nara informacin ms exacta, adems de reducir los
costos y los errores.
En relacin al almacenamiento de muestras de
sangre para hacer los frotis preparados con sangre
anticoagulada por EDTA, conservados durante no
ms de 60 minutos a temperatura ambiente, mues-
tran pocos cambios comparados con los que se pre-
paran inmediatamente despus de obtener la sangre.
Se pueden discernir cambios tres horas despus, y en-
tre 6 y 8 horas posteriores a la extraccin, los cam-
bios son notorios. Los leucocitos se vacuolan y mu-
chos muestran cambios nucleares degenerativos,
mientras que las concentraciones de leucocitos y de
plaquetas disminuyen. Todo esto ocurre a mayor ve-
locidad si la temperatura ambiente es ms alta y se
retrasa si la sangre se mantiene a 4C1.
Para el recuento diferencial visual de leucocitos,
las clulas individuales se clasifican adecuadamente
cuando se estudian en las etapas ms maduras. Sin
embargo, es difcil medirlas adecuadamente en frotis
sanguneos debido a la gran variacin en las fraccio-
nes numricas de poblaciones celulares. Los recuen-
tos diferenciales visuales se realizan de modo rutina-
rio en 100-200 clulas nucleadas. El coeficiente de
variacin al contar los leucocitos ms frecuentes (es
decir, linfocitos y neutrfilos) puede ser mayor al
25%, pero el de las clulas que ocurren en fracciones
numricas menores al 10% (es decir, eosinfilos y
monocitos) puede ser de hasta del 100%. La obten-
cin de resultados exactos de clulas que se presen-
tan en fracciones numricas menores al 1% (es decir,
eritrocitos nucleados o basfilos) es prcticamente
imposible ya que el total de clulas evaluadas es de
100-200 (Tabla 4).
A pesar de estas limitaciones, el recuento diferen-
cial visual constituye el estndar para comparar re-
sultados obtenidos con analizadores hematolgicos
automatizados. El papel del examen visual de frotis
sanguneos sigue siendo importante en el laborato-
rio clnico, ya que los analizadores hematolgicos au-
tomticos pueden rechazar un alto porcentaje de
muestras consideradas como anormales que deben
evaluarse visualmente1.
12
TABLA 4
Error de muestreo y variabilidad estadstica de recuentos
porcentuales en los recuentos diferenciales proporcionales*
N total de Porcentaje observado de clulas
clulas contadas 50 5 10 30
100 1-9* 4-16 21-39 40-60
200 2-8 6-14 24-36 43-57
1000 3.6-6.4 9-11 27-33 47-53
10000 4.6- 5.4 9.4-10.6 29-31 49-51
* Rango 95%
Los glbulos blancos totales no pueden contarse
en diluciones simples de sangre entera porque el n-
mero proporcionalmente elevado de eritrocitos los
enmascararan. Deben agregarse, por lo tanto, reac-
tivos adecuados para lisar los eritrocitos de modo que
los leucocitos remanentes puedan ser discriminados
de cualquier resto de eritrocitos. En los sistemas de
dispersin de luz tambin puede ser necesario aa-
dir compuestos para filtrar el resto, causante de in-
terferencia ptica. Con los primeros sistemas, se usa-
ban agentes lticos muy fuertes, que removan la
mayora del citoplasma del leucocito, de modo que
en realidad lo que se evaluaba eran los ncleos. Ms
recientemente, sin embargo, se utiliza una lisis ms
suave para proteger tanto como sea posible la arqui-
tectura celular, de modo que pueda ser usada como
base para el recuento diferencial de leucocitos5.
En el caso del recuento diferencial, los prime-
ros sistemas se basaban en diferencias en el volu-
men de leucocitos medido por apertura-impedan-
cia 12. Sin embargo, tales sistemas no son los ms
adecuados para discriminar entre clulas mono y
polinucleares, particularmente entre linfocitos y
granulocitos. Los intentos para clasificar otros ti-
pos celulares en tres poblaciones diferenciales son
menos satisfactorios.
La dispersin de luz sola no es de valor para el
recuento diferencial de leucocitos. Resulta interesan-
te que el ndice de refraccin interna de los leucocitos,
que est determinado por sus grnulos, sea tan im-
portante como el volumen, cuando se determina por
dispersin de luz, el volumen aparente de leucocitos.
De este modo, debido a sus grnulos, los neutrfilos
aparecen ms grandes que los eosinfilos aunque
realmente tienen el mismo volumen cuando son me-
didos por apertura-impedancia13.
A pesar de la limitada utilidad de la dispersin de
luz sola para el recuento diferencial de leucocitos,
puede usarse en conjunto con la absorcin de luz,
cuando se estudian los leucocitos teidos en suspen-
HEMATOLOGIA l Volumen 9 - N 1, 2005
Fig. 6: Recuento diferencial leucocitario, usando dispersin de luz (ver-
tical) y tincin de peroxidasa (horizontal). Los basfilos se estiman in-
dependientemente porque se superponen con los monocitos.
sin. Los primeros trabajos fueron hechos con
leucocitos teidos por su actividad de peroxidasa y
cuando la dispersin y la absorcin de luz se midie-
ron simultneamente clula por clula se hizo posi-
ble discriminar con exactitud cuatro clases de leu-
cocitos, es decir neutrfilos, linfocitos, monocitos y
eosinfilos junto con una categora conocida como
clulas grandes no coloreadas (Fig. 6).
Esta propuesta se describi como medicin
multiparamtrica simultnea, es decir los dos par-
metros de dispersin y absorcin resueltos en un ni-
co canal. El trmino canal en este contexto, se refera
al sistema para dilucin de sangre, lisante de
eritrocitos, donde se haca la reaccin de peroxidasa
y luego se meda la dispersin y la absorcin de luz.
El empleo de un canal de peroxidasa hizo una contri-
bucin mayor al recuento diferencial leucocitario, pero
no result adecuado para el recuento diferencial de
basfilos. Por lo tanto, los fabricantes tuvieron que
agregar un canal adicional para contar estas clulas.
Tales instrumentos multicanales de recuento diferen-
cial de leucocitos han sido desarrollados y tienen ac-
tualmente un uso difundido. Otro aspecto es que se
incluyen parmetros como los blastos, eritrocitos
nucleados y granulocitos inmaduros aunque todava
existen algunas discrepancias en la identificacin de
los polimorfonucleares (PMN) en bandas.
En paralelo con el desarrollo de los instrumen-
tos multicanales, tambin ha habido una tendencia
a realizar ms y ms mediciones simultneas, usan-
do con frecuencia un nico canal. Por ejemplo, los
sistemas de apertura-impedancia pueden ser me-
jorados para proporcionar informacin sobre la com-
AUTOMATIZACIN EN HEMATOLOGA
posicin interna de los leucocitos, mediante el uso de
una sonda electromagntica de alta frecuencia al mis-
mo tiempo que se meda el volumen. Los sistemas de
dispersin de luz tambin pueden ser enriquecidos
examinando la dispersin en diferentes ngulos. Final-
mente, ahora es posible combinar tanto la tecnologa
de apertura-impedancia como la dispersin de luz, con
sus varios refinamientos, dentro de un canal nico5.
A modo de resumen, en la Tabla 3 se indican las
distintas caractersticas del recuento total de blancos
y distintos aspectos del diferencial leucocitario, que
tradicionalmente fue hecho en forma manual por re-
visin microscpica de extendidos.
Las ventajas del mtodo automatizado son:
- Disminucin del error aleatorio por el gran nme-
ro de clulas contadas.
- Disminucin del tiempo de retorno por la veloci-
dad con que el instrumento hace la cuantificacin.
Para el recuento diferencial de leucocitos autom-
tico, el anlisis de imgenes tiene una aplicacin muy
limitada y de comercializacin reducida. En principio,
el anlisis de imagen automatiza y reproduce el re-
cuento diferencial visual. Los frotis sanguneos se ana-
lizan con ptica de alta velocidad en una plataforma
controlada por computadora. Se simulan los criterios
del diferencial visual con algoritmos, enumerando las
subpoblaciones celulares en forma ms reproducible
y cuantitativa. Varios contadores de leucocitos por an-
lisis de imagen fueron producidos durante los aos 70
y al principio de los 80 (Lara de Corning Medical
Instruments, Hematrak de Geometric Data, Dic 4 de
Coulter Electronics, ADC-500 de Abbott Diagnostics).
Fueron desplazados del mercado por contadores ms
rpidos y completos1.
En los sistemas comerciales disponibles actualmen-
te, se hacen recuentos de clulas sanguneas autom-
ticos incluyendo al menos un recuento diferencial de
blancos de cinco subclases. Estos analizadores usan
tecnologa sofisticada y constituyen un equipamiento
de ltima generacin que se integra a los laboratorios
de rutina. Las muestras sanguneas son procesadas en
sistemas de muestreo cerrados, usan sistemas autom-
ticos de lectura para la identificacin por cdigo de
barras y tienen interfases con el sistema de informa-
cin del laboratorio para introducir las pruebas reque-
ridas, los datos identificatorios del paciente y la obten-
cin de resultados. Procesan grandes cantidades de
muestras (ms de 100 por hora), se pueden seleccio-
nar variantes que cubren un rango amplio de opcio-
nes informatizadas como es el establecimiento de alar-
mas, acumulacin de datos de control interno y pro-
duccin de resultados grficos de materiales de con-
trol interno y de muestras de pacientes.
13
En relacin con los aspectos tecnolgicos, es im-
portante conocer qu informacin brindan los dife-
rentes sistemas y qu tecnologa usan de acuerdo
con los distintos mtodos descriptos por los fabri-
cantes. La capacidad y confiabilidad de los instru-
mentos para recuentos diferenciales evoluciona con-
tinuamente.
Actualmente, luego de que se ha usado el recuen-
to diferencial por ms de 25 aos, la confiabilidad y
la exactitud del instrumental automatizado ha alcan-
zado niveles muy altos. Por ello, donde se dispone
de los mismos no es conveniente reemplazarlos por
el recuento manual basado en la revisin de solo 100
clulas. Cada laboratorio debe establecer criterios
para revisar los extendidos, basado en las alarmas del
instrumento, pero por lo general la revisin est ms
relacionada con la observacin de la morfologa de
eritrocitos o de plaquetas que a un problema en el
recuento diferencial leucocitario.
Pero a pesar de estos avances, an hay necesi-
dad de examinar el extendido sanguneo para deter-
minar la naturaleza de un recuento anormal de po-
blaciones leucocitarias y de la morfologa de
plaquetas y de eritrocitos. En 1994 se recomend,
luego de un estudio definitivo, no informar discri-
minadamente los neutrfilos en banda de los
neutrfilos totales y que era aconsejable usar el n-
mero absoluto de neutrfilos para detectar una in-
feccin. Hay dos indicaciones para la revisin de un
extendido en caso de recuentos leucocitarios norma-
les, como el caso de un neonato con fiebre y pacien-
tes con sospecha de fiebre tifoidea. La deteccin de
un recuento alto de neutrfilos en banda, asociado
a un recuento de neutrfilos normal, tiene un valor
clnico significativo14.
Una adicin interesante a la artillera diagnstica
de los nuevos contadores es la inclusin del dispositi-
vo para hacer extendidos como el includo en el
Coulter GEN-S. El instrumento puede ser programa-
do para producir extendidos centinela automticamente
cuando aparece cualquier alarma para eritrocitos,
plaquetas y glbulos blancos con datos identificatorios
includos15. Otro dato interesante es la graficacin de
eritrocitos no lisados como en los Sysmex NE 8000 que
permite detectar clulas resistentes a la lisis como es
el caso de las clulas en diana15.
Otra consecuencia del mejoramiento continuo del
instrumental es que se ha podido ampliar el uso de
las alarmas. Por ejemplo si no hay clulas inmaduras
o blastos, no hay necesidad de revisar el extendido
para buscar anormalidades en los neutrfilos a me-
nos que el porcentaje de neutrfilos exceda el 90%.
As, a comienzos de los aos 90 en un centro
asistencial de agudos se hacan 100 revisiones manua-
les y esta cifra baj a 13%14-16.
14
Clulas madres o troncales
La concentracin de las clulas madres o troncales
(stem cells) es alta en mdula sea, en tanto que en
sangre perifrica es baja y pueden ser recolectadas
despus de tratar al paciente con quimioterapia se-
guida de factores de crecimiento, para aumentar su
concentracin.
Cuando se las recolecta por afresis es necesario
cuantificar la cantidad en sangre perifrica. Esto se
hace por inmunofluorescencia usando anticuerpo
monoclonal anti-CD34 FITC. Esta prueba requiere
tiempo y a veces no est disponible. Como estas c-
lulas (stem cells) contienen pocos lpidos y son resis-
tentes a la lisis por detergentes, pueden ser medidas
usando impedancia y radiofrecuencia tal como ha
sido desarrollado recientemente10. Esta prueba requie-
re poco tiempo comparado con las 2-3 h de la
citometra de flujo.
Ancho de la distribucin del volumen y de la
concentracin de hemoglobina eritrocitaria
Adems de estimar VCM es posible producir
histogramas que muestren el ancho de la distribucin
del volumen de eritrocitos (RDW). Tales histogramas
son tiles para medir la anisocitosis y para caracte-
rizar situaciones en las que dos poblaciones eritro-
citarias estn presentes, por ejemplo en la deficien-
cia de hierro que responde al tratamiento.
Si se utiliza una dispersin de luz de ngulo
dual es posible medir la concentracin de hemo-
globina individual de un eritrocito y construir
histogramas que muestren el ancho de la distribu-
cin de la concentracin celular de hemoglobina
(HDW).
Ancho de distribucin del volumen plaquetario
(PDW)
Este parmetro puede ser usado para determinar
el recuento de plaquetas as como para medir el vo-
lumen medio de la plaqueta y la anisocitosis pla-
quetaria. As, los contadores hematolgicos automa-
tizados ofrecen un rango de los llamados nuevos
parmetros, tales como anisocitosis eritrocitaria y
plaquetaria, volumen medio de plaquetas y otros
ms que reflejan otras caractersticas de los
eritrocitos, plaquetas y leucocitos. Desafortunada-
mente, la mayora de estos parmetros tienden a ser
especficos de un instrumento y la comparacin de
los parmetros del mismo nombre puede resultar
pobre entre diferentes instrumentos, an del mismo
fabricante. Es probable que por esta razn hayan
encontrado poca aplicacin en la hematologa
diagnstica.
HEMATOLOGIA l Volumen 9 - N 1, 2005
Se han publicado muchos estudios interesantes
que muestran diferencias entre diversos trastornos,
por ejemplo la anisocitosis plaquetaria en la trom-
bocitosis secundaria y la trombocitemia. Sin embar-
go, estas diferencias con frecuencia no son suficien-
tes o no estn suficientemente establecidas para con-
vertirse en criterios firmes de diagnstico, aunque
pueden arrojar alguna luz interesante sobre la fisio-
patologa subyacente.
Sin embargo, los nuevos parmetros disponibles
tienen un rol importante dentro del laboratorio, an
si no son informados, debido a que constituyen una
gua til sobre cmo y cuando debe examinarse un
extendido de sangre.
Alarmas e indicaciones para examinar un extendido
de sangre
Todos los instrumentos producen alarmas dise-
adas para alertar al operador sobre circunstancias
en las cuales las mediciones pueden no ser
confiables o en las que puede haber clulas anorma-
les como los blastos o eritrocitos nucleados en san-
gre perifrica.
Las alarmas deben ser consideradas, en conjunto
con los nuevos parmetros, con todos los diagramas
producidos por el instrumento, con los ltimos resul-
tados del recuento sanguneo, con cualquier cambio
de los resultados previos y los detalles clnicos, al
considerar si un extendido de sangre debe ser exa-
minado o no17.
En trminos generales, se espera que los contado-
res automatizados modernos de clulas sanguneas
brinden los siguientes servicios:
- Identificar la muestra por cdigo de barras
- Homogeneizar la muestra
- Perforar la tapa del tubo de colecta de sangre y
aspirar la muestra
- Distribuir la muestra en canales para mediciones
separadas, es decir canales de:
- Recuento y medicin del tamao de eritrocitos
y plaquetas
- Recuento total y diferencial de leucocitos (pue-
de haber uno o ms canales, dependiendo del
instrumento)
- Recuento de reticulocitos
- Hemoglobinometra
- Dentro de cada canal, deben hacerse las dilucio-
nes relevantes, agregar reactivos y esperar hasta
que la dilucin est lista para la medicin.
- Hacer las mediciones de cada uno de los canales
especificados arriba.
- Alertar sobre cualquier anomala y facilitar la vi-
sualizacin en forma adecuada por el operador
AUTOMATIZACIN EN HEMATOLOGA
- Verificar el control de calidad usando controles
adecuados o valores medios del paciente
- Trasmitir los datos en lnea al sistema de compu-
tacin del laboratorio
- Ser compatible con sistemas robotizados para la
automatizacin total del laboratorio.
Todos los instrumentos de ltima generacin tie-
nen buena conformidad con los requerimientos gene-
rales listados arriba y tienen relativamente pocas ca-
ractersticas distintivas.
Al seleccionar un contador uno puede requerir
desde un equipo que haga un bajo nmero de mues-
tras por hora a un instrumento que resuelva un gran
nmero en el mismo lapso. Los comentarios siguien-
tes tienen que ver con los equipos que procesan un
gran nmero de especmenes. Si se va a trabajar con
una poblacin anormal de pacientes, el nmero de
alarmas para el recuento manual es crtico si se quie-
re reducir la intensa labor de revisin manual de ex-
tendidos de sangre perifrica. Hay equipos que tra-
dicionalmente tienen muchas alarmas tanto para da-
tos normales como anormales, en particular para re-
cuentos plaquetarios y para leucocitos inmaduros.
Para ello se introdujeron nuevas tecnologas y la po-
sibilidad de contar con los cut off puestos por el usua-
rio. Dependiendo de los equipos, la revisin de los
extendidos es cada vez menos requerida.
Tambin para reducir el trabajo, hay equi-
pamientos que hacen marcado de extendidos
automticamente. Por otra parte, los hay para el
escaneo automtico de extendidos, anlisis de im-
genes y proyeccin en monitor a color y de alta reso-
lucin que hacen que la microscopa sea una activi-
dad cada vez ms lejana, en los laboratorios que po-
seen esa tecnologa.
Se le han agregado otras funciones a los contado-
res automticos como el estudio de antgenos de di-
ferenciacin en la superficie celular o marcadores
linfocitarios o el anlisis diferencial de clulas de
mdula sea. Es de remarcar que estos estudios con-
viene hacerlos con un citmetro de flujo destinado a
tal fin, con personal especializado. De todas formas
si se dispone de ese instrumental, esos estudios tie-
nen un valor importante para el mdico. Hay argu-
mentos a favor de que agregar mucha informacin
confunde al clnico y debe ser as ya que hay
parmetros como el VCM y RDW que an hoy resul-
tan poco familiares.
A partir de los aos 90, particularmente en Japn,
se generaron sistemas de laboratorio de tercera gene-
racin que estaban basados en dos conceptos claves
como la consolidacin y la integracin que permitieron
combinar distintas teconologas o estrategias analti-
cas e integrar instrumental con dispositivos pre y
15
postanalticos, de modo de reducir complicaciones
como algunas relacionadas a la bioseguridad. Inicial-
mente, la mayor parte (2/3) de los sistemas de labo-
ratorio de tercera generacin fue instalada en el la-
boratorio hematolgico, con lo cual se vislumbra que
a futuro los mayores avances sern en esa direccin18.
ABSTRACT
Most of the practices in the laboratory of
hematology are related with observations that include
the identification of cells and the interpretation of the
composition of blood cell populations. In this work,
the methodology used in automated instruments for
the conventional blood examination is reviewed,
including the measurement of hemoglobin, erythrocyte
count and erithrocyte indexes, platelets count, total
and differential leukocyte count, and reticulocytes.
Different technologies used for those measurements
are described, with examples of automated
hematology analyzers used, available in the market.
Key words: Automation, Hematology, Analytical
systems, Technology
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