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Microtecnica de Aglutinacion en Gel PDF
Microtecnica de Aglutinacion en Gel PDF
2
PRLOGO
La microtcnica de aglutinacin en gel represent un avance cuntico en
cuanto a la inmunohematologa. En una poca en la cual las enfermedades
transmisibles dominaban el inters de quienes trabajaban en Medicina
Transfusional, sta tcnica vino a centrar nuevamente la atencin en la
inmunohematologa: centro focal de la transfusin de sangre.
La rapidez, facilidad de empleo y sensibilidad de la microtcnica de
aglutinacin en gel permiten resolver las complejas situaciones planteadas
en pacientes que presentan aloinmunizacin antieritrocitaria y requieren
soporte transfusional o cursan un embarazo.
No obstante, la microtcnica en gel requiere aplicar cuidadosamente los
procedimientos recomendados a los efectos de obtener resultados
confiables y reproducibles.
3
En memoria de mi querido viejo:
Jos Golffed.
(12.12.1928 - 14.03.1998)
4
PREFACIO
5
Argentina por permitirme nombrar la marca del producto y autorizarme a
reproducir fotografas de insumos y aplicacin de las tcnicas.
6
Un libro abierto es un cerebro que habla; cerrado, un amigo que espera;
olvidado, un alma que perdona; destruido, un corazn que llora.
Proverbio hind.
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MICROTCNICA DE AGLUTINACIN EN
GEL.
INTRODUCCIN.
Fue as que en la dcada de los 80, el Dr. Yves Lapierre desarrolla y patenta
el mtodo de hemaglutinacin en gel, el cual fue comercializado por la
empresa Diamed-Suiza a partir del ao 1988.
DiaMed Suiza fue fundada en 1977 por un pequeo grupo de expertos en
diagnstico de laboratorio para el desarrollo y fabricacin de sistemas de
prueba destinada a proporcionar a los laboratorios la facilidad de uso,
seguridad y fiabilidad.
En el ao 2007 Bio-Rad Laboratories, una empresa multinacional vinculada a
la investigacin biolgica fundada en 1952, adquiere el paquete accionario de
DiaMed Holding AG.
8
El Sistema DiaMed de Micro Tipificacin en Gel revolucion el trabajo en
los laboratorios de inmunohematologa de los grupos sanguneos.
Ha sido desarrollado tanto para la determinacin de grupo sanguneo,
investigacin, identificacin, titulacin de anticuerpos irregulares y pruebas
de compatibilidad sangunea pretransfusionales en un nuevo formato cuya
lectura no admite dudas de interpretacin y ms an permite nuevas lecturas
hasta 48 horas despus de la ejecucin de la prueba.
El catlogo ID-System de Bio-Rad rene 65 variedades de tarjetas de gel con
una gama que abarca la determinacin de grupos sanguneos ABO y Rh D
para donantes, pacientes y recin nacidos, prueba inversa, fenotipo Rh, Kell,
antgenos simples, test de coombs directo, investigacin e identificacin de
anticuerpos irregulares, pruebas de compatibilidad y estudios en medio
enzimtico entre otras aplicaciones.
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PRINCIPIO DEL MTODO.
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FORMA DE LOS MICROTUBOS.
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El fondo del microtubo tiene aspecto CNICO. Cuando los hemates
atraviesan la columna de gel durante la fase de centrifugacin forman un
punto en el fondo del mismo segn sea el gradiente de aglutinacin.
ASPECTO DE LA TARJETA
GEL ESPECFICO.
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COMPOSICION DEL GEL
NEUTRO ESPECFICO
Sin antisuero especfico. Mezcla de gel y antisuero
Contiene NaCl. especfico.
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VOLMENES A DISPENSAR
ID-PIPETOR FP-4
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CONDICIONES DE INCUBACIN.
CONDICIONES DE CENTRIFUGACIN.
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Una vez finalizada la misma, la lectura macroscpica permite distinguir todo
el rango de aglutinaciones: desde los resultados negativos (-) hasta toda la
variedad de resultados positivos que se expresan en forma de cruces segn su
intensidad en: 1+,2+,3+,4+ y dp (doble poblacin).
La tcnica de gel tiene la capacidad de separar los hemates del fluido que lo
rodea.
Durante la centrifugacin de la tarjeta, los hemates son removidos fuera de la
suspensin por accin de la fuerza centrfuga e ingresan al gel, en tanto que
las inmunoglobulinas no conjugadas permanecen sobre el gel.
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Cada tarjeta de gel tiene en su reverso un cdigo de barras para su
identificacin.
Si bien la macrolectura es posible, un lector automtico y con un software
especial, permite visualizar en pantalla los resultados y tambin transcribirlos
a una impresora con lo cual acotamos los errores administrativos.
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PATRONES DE LECTURA
REACCIN 4+
Las clulas rojas aglutinadas forman una banda slida en la parte superior del
gel.
REACCIN 3+
REACCIN 2+
REACCIN 1+
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REACCIN NEGATIVA
Todas las clulas rojas atraviesan el gel y forman un botn celular bien
definido en la base del microtubo.
DOBLE POBLACIN.
La reaccin de doble poblacin tambin conocida como campo mixto se
caracteriza por una banda de clulas rojas aglutinadas en la parte superior de
la columna de gel en tanto que las clulas no aglutinadas se depositan en el
fondo del microtubo. Un ejemplo de doble poblacin se observa en detalle en
la tarjeta de la pgina 22.
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Microtubo #5: reaccin negativa Microtubo #6: reaccin negativa.
OTRAS CONSIDERACIONES.
PLASMA O SUERO? :
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Se desaconseja la congelacin y descongelacin de sueros, dado que durante
esa prctica, se destruyen protenas e inmunoglobulinas.
Por tal motivo, se sugiere conservar los sueros en estudio en forma de
alcuotas congeladas.
DILUYENTES.
Diluyente 1:
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La papana suele emplearse para el tratamiento enzimtico de los hemates
antes de su uso, en tanto que la bromelina se utiliza adems como reactivo
aditivo.
22
El elefante muerto deja sus colmillos; el tigre su piel, y el hombre, su
nombre.
Annimo.
23
REACCIN SEROLGICA DE
AGLUTINACIN
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Las reacciones antgeno - anticuerpo son exotrmicas, por tanto a
temperaturas ms bajas la velocidad de reaccin disminuye y existe
menor fijacin de anticuerpo.
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Efecto de la temperatura en la morfologa del antgeno.
b) pH
Las modificaciones de pH pueden afectar las uniones electrostticas.
Se desconoce el pH ptimo de la mayora de los anticuerpos de grupo
sanguneo, pero se presume que se aproxima al rango fisiolgico.
Ciertos anticuerpos como ser los anti M, reaccionan mejor a pH por
debajo de 7.
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A un pH inferior al punto isoelctrico, el anticuerpo tiene carga
positiva.
Esto facilita la unin con los hemates (que tienen carga superficial
negativa), por tanto el pH ptimo para la fase de sensibilizacin estara
entre 6,5 y 7.
Un marcado descenso en el pH, incrementa la disociacin de los
complejos antgeno anticuerpo.
La solucin salina fisiolgica tiene un pH que oscila entre 5 y 6.
La solucin salina amortiguada (PBS o Solucin Salina Buffer Fosfato
por su sigla en ingls) asegura ptimas condiciones de trabajo para los
estudios serolgicos.
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Es ms probable que se produzca la sensibilizacin cuando el
anticuerpo se presente en una concentracin elevada. Esto puede
lograrse aumentando la proporcin de suero en relacin a la de
hemates.
A tener en cuenta:
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Los iones Na+ (con carga positiva) de la solucin salina fisiolgica son
atrados por la carga negativa de los hemates y forman la capa interna
y los iones Cl- (con carga negativa) forman la capa externa.
El potencial elctrico que se desarrolla entre la carga negativa de los
hemates y las capas inicas es lo que se conoce con el nombre de
potencial Z.
Este debe ser superado para que se produzca la aglutinacin.
e) Tiempo de incubacin
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Segunda etapa: AGLUTINACIN
Hemates aglutinados.
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Cuando la reaccin antgeno anticuerpo es mediada por anticuerpos de tipo
IgM, las dos etapas (sensibilizacin y aglutinacin) se superponen y se
observa fcilmente la aglutinacin resultante.
Los anticuerpos de tipo Ig M son molculas grandes (pentmeros de
inmunoglobulinas) de elevado peso molecular y de gran carga neta, lo que les
posibilita cubrir la distancia adyacente entre un hemate y otro, estableciendo
puentes de unin entre ellos.
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Tratamiento enzimtico de los hemates.
32
CUADRO COMPARATIVO DE
ENZIMAS PROTEOLTICAS
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La solucin de baja fuerza inica (LISS: Low Ionic Strength Solution)
aumenta notablemente la velocidad de sensibilizacin de los hemates y sus
respectivos anticuerpos.
En comparacin con la solucin salina normal (0,17 M) la solucin LISS
tiene una molaridad de 0,03 M.
b) Temperatura.
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arrastrados a travs de la membrana por la accin de anticuerpos
pasando as a formar agrupaciones.
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PRUEBA ANTIGLOBULNICA HUMANA
El principio de esta prueba fue descrito por Moreschi en 1908 pero fue
en el ao 1945 cuando Coombs, Mourant y Race la aplicaron para
detectar la fijacin de anticuerpos que no provocan el fenmeno de
aglutinacin.
Esta prueba emplea anticuerpos contra globulinas humanas y se
denomina Prueba Antiglobulina Humana.
Todas las molculas de anticuerpo son globulinas.
En inmunohematologa, las pruebas antiglobulnicas producen
aglutinacin visible de los hemates sensibilizados.
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Test Antiglobulina Humana Directo practicado en ID-Card
37
Esta prueba se aplica, entre otros, para:
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REACTIVOS ANTIGLOBULNICOS HUMANOS.
Anti-IgG.
Contiene anti-IgG sin actividad anti-complemento (no necesariamente
especfico para cadenas gamma).
Anti-C3b.
Slo contiene anticuerpos anti-C3b sin actividad anti-
inmunoglobulnica.
NOTA: el anticuerpo que se produce en respuesta a la inmunizacin
generalmente se dirige contra el determinante antignico que se
encuentra en la sub-unidad C3c; algunos profesionales lo denominan
anti-C3c pero en el rtulo del envase se debe designar como anti-
C3b.
Anti-C3d.
Slo contiene anticuerpos anti-C3d sin actividad-inmunoglobulnica.
Anti-C4b.
Slo contiene anticuerpos anti-C4b sin actividad anti-
inmunoglobulnica.
Anti-C4d.
Slo contiene anticuerpos anti-C4d sin actividad anti-
inmunoglobulnica.
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MECANISMO DE SENSIBILIZACIN DE
ERITROCITOS CON COMPLEMENTO.
40
Mecanismo de adsorcin. La droga se fija a las protenas de la
membrana eritrocitaria. Si el paciente desarrolla anticuerpos antidroga
potentes, stos reaccionan con el frmaco fijado. En consecuencia la
prueba de Coombs Directa con reactivos anti-IgG es positiva. En
general el complemento no se activa y la lisis es sobre todo
extravascular. La droga prototpica es la penicilina.
41
Mecanismo de accin del reactivo antiglobulina humana.
42
Un experto es una persona que ha cometido todos los errores que se
pueden cometer en un determinado campo.
Niels Bohr.
Fsico dans
1885 - 1962
43
Pruebas en ID-Card Liss/Coombs
ID-Diluyente 2 1.0 ml
+
44
(*) En caso de utilizar sangre tomada del segmento de tubuladura se
aconseja realizar un lavado con solucin salina fisiolgica previo a su
suspensin en el diluyente 2.
45
A continuacin se muestra un ejemplo:
46
Ejemplo:
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III) INVESTIGACIN DE ANTICUERPOS IRREGULARES
(SCREENING o TAMIZAJE)
48
Para los sistemas Rh, MNSs, Duffy y Kidd la dotacin antignica debe estar
presente en forma homocigota. Tambin han de estar presentes los antgenos
Lewis y el raro antgeno Kpa.
49
7. Centrifugue la tarjeta ID-Card durante 10 minutos en la ID-
Centrifugue.
8. Lea y registre los resultados.
50
51
Segn sea el patrn de reacciones y la configuracin de antgenos, puede
llegarse a dilucidar el o los anticuerpos involucrados.
Si existe una reaccin positiva a todos los hemates que conforman el panel,
un autocontrol positivo, pero uno o ms hemates que muestren una reaccin
positiva ms intensa que el autocontrol, deben cumplirse pruebas adicionales
en la muestra para estudiar la posibilidad de un aloanticuerpo subyacente.
52
4. Transfiera de cada vial numerado del 1 al 11, una gota (50l) a cada
microtubo igualmente numerado.
5. En el ltimo microtubo (nmero 12) destinado a autocontrol (AC),
pipetee 50l de la propia suspensin de hemates.
6. Agregue a todos los microtubos 25l del plasma o suero del paciente o
donante en estudio.
7. Incube ambas tarjetas durante 15 minutos a 37C en el ID-Incubator.
8. Centrifugue ambas tarjetas durante 10 minutos en la ID-Centrifuge.
9. Lea y registre los resultados en la tabla de antgenos.
EFECTO de DOSIS
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54
Segn el patrn de las reacciones y la configuracin de los antgenos,
el tipo de anticuerpo presente puede identificarse en la mayora de los
casos, tenga presente que la reaccin del microtubo de autocontrol debe
dar resultado negativo.
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Pruebas en ID-Card NaCl
Enzime Test and Cold Agglutinins
Esta tarjeta es apta para la deteccin de anticuerpos reactivos en tcnica salina
y enzimtica, a saber:
Introduccin:
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No se considera necesario incluir la prueba salina a temperatura ambiente en
las pruebas de rutina de deteccin de anticuerpos, pero la prueba salina a 4C
puede emplearse para detectar aglutininas fras.
ID-Diluent 2 1.0ml
+
Hemates concentrados 10l
o
Antes de su uso, deje que los reactivos de eritrocitos de prueba ID, los
diluyentes ID, y las muestras de suero o plasma alcancen la temperatura
ambiente (salvo para aglutininas fras).
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A continuacin describiremos el procedimiento de las pruebas.
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reactivo A1, A2, B y O. Quite el papel aluminio de todos los
microtubos identificados.
3. Pipetee 50l de cada tipo de eritrocitos de prueba ID-DiaCell ABO
(A1, A2, B y O) en los microtubos identificados a tales efectos.
4. Aada 50l de plasma o suero del paciente o donante a cada
microtubo.
5. Incube la tarjeta ID-Card durante 10 minutos a temperatura ambiente,
entre 18 y 25C.
6. Centrifugue la tarjeta ID-Card durante 10 minutos en la ID-
Centrifugue.
7. Lea y registre los resultados obtenidos.
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1. Marque los microtubos correspondientes de la ID-Card NaCl, enzime
test and cold agglutinins con el nombre o nmero del paciente o
donante en estudio.
2. Quite el papel aluminio de todos los microtubo que vaya a utilizar.
3. Pipetee 50l de cada tipo de eritrocitos de prueba ID-DiaPanel I-II-III
P papainizados en los microtubos correspondientes identificados
como I, II y III.
4. Si va a incluirse un autocontrol, pipetee 50l de la propia suspensin
de eritrocitos del paciente en el microtubo destinado como AC (Auto
Control) y agregue 25l de ID-Papan (**).
5. Aada 25l de plasma o suero del paciente o donante a cada
microtubo.
6. Incube la tarjeta ID-Card durante 15 minutos a 37C en el ID-
Incubator.
7. Centrifugue la tarjeta ID-card durante 10 minutos en la ID-Centrifugue.
8. Lea y registre los resultados obtenidos.
Antes de su uso coloque las tarjetas ID-Card NaCl,enzime test and cold
agglutinins en la heladera (4C 2) durante dos horas.
Mantenga refrigerados hasta el momento de la prueba tanto los hemates ID-
Cell I-II-III como el suero o plasma a analizar.
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3. Si va a incluirse un autocontrol, pipetee 50l de la propia suspensin
de eritrocitos del paciente en el correspondiente microtubo.
4. Aada 25l de plasma o suero del paciente a cada microtubo.
5. Incube la tarjeta ID-Card durante 30 minutos en la heladera (4C2).
6. Centrifugue la ID-Card durante 10 minutos en la ID-Centrifugue.
7. Lea y registre los resultados obtenidos.
61
Identificacin de Anticuerpos.
1. Marque dos tarjetas ID-Card, enzime test ando cold agglutinins con el
nombre o nmero del paciente o donante y numere los microtubos del 1 al
11 (12 en caso de incluir autocontrol). Quite el papel de aluminio.
2. Pipetee 50l de cada tipo de eritrocitos de prueba ID-DiaPanel en los
microtubos correspondientes marcados del 1 al 11.
3. Si va a incluirse un autocontrol, pipetee 50l de la suspensin de eritrocitos
del paciente en el microtubo nmero 12.
4. Aada 25l de plasma o suero del paciente o donante a cada microtubo.
5. Incube las tarjetas ID-Card durante 30 minutos en la heladera (4C2).
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6. Centrifugue las tarjetas ID-Card durante 10 minutos en la ID-Centrifugue.
7. Lea y registre los resultados en la cartilla de antgenos.
En la deteccin de anticuerpos:
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En la identificacin de anticuerpos:
En la prueba de compatibilidad:
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IDENTIFICACIN DE ANTICUERPOS IRREGULARES (*)
65
Es ms fcil juzgar el talento de una persona por sus preguntas que por sus
respuestas.
66
Comportamiento Serolgico e Importancia
Clnica de los Anticuerpos de Grupo
Sanguneo.
67
68
69
70
En este mundo, todos necesitamos de todos
O.R.L. uruguayo.
71
ALOINMUNIZACIN
Claro est que una prueba de compatibilidad negativa no impide una eventual
inmunizacin, como as tambin los eventos transfusionales y el embarazo no
acarrean la misma suerte de inmunizacin.
72
Un elemento a tener en cuenta en la posibilidad de aloinmunizacin por
transfusin radica en la FRECUENCIA con que un antgeno se presenta en
la poblacin.
73
La probabilidad de aloinmunizacin a distintos antgenos es muy variada en
comparacin con el antgeno D, para el cual existe el tratamiento preventivo
de la misma por administracin de globulina hiperinmune anti D capz de
evitarla.
74
IDENTIFICACIN DE ANTICUERPOS
Para decidir cules sern los estudios a practicar al suero problema, a que
hemates enfrentarlos (con o sin tratamiento enzimtico) y a que temperatura
incubar las pruebas, se debe tener en cuenta los resultados obtenidos en la
etapa de investigacin de aloanticuerpos.
Tambin es fundamental recabar datos tales como:
* edad
* sexo
* raza
* transfusiones y/o trasplante de rganos recibidos
* diagnstico clnico
* medicacin que recibe
* nmero de embarazos
* abortos
* recin nacidos con EHRN
* administracin de IgG anti Rh D
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Cada panel es acompaado de una cartilla de trabajo en las que estn
consignados los antgenos presentes en cada muestra o vial.
El uso de los mismos requiere experiencia y claros conocimientos del
comportamiento serolgico de los diferentes anticuerpos de grupo sanguneo.
A la derecha del panel podemos observar los resultados que arrojaron los
estudios en diferentes medios y temperaturas ensayados.
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Para este ejemplo, se eliminan los antgenos presentes en las muestras
nmero 2 (antgenos c, e ,K ,k ,Fy b), nmero 3 (C, c, e, k y Fy a) y
nmero 6 (E, c, e, k, Fy b).
COMENTARIOS:
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exaltados por el uso enzimtico mientras que los anticuerpos de los sistemas
Duffy y MNSs son inhibidos por las mismas.
Es posible recurrir a estudios con muestras de eritrocitos suplementarios que
presentan el antgeno cuyo anticuerpo se quiere confirmar y que no presentan
los dems antgenos imputados.
De esa manera se incrementa el poder discriminatorio.
78
Ejemplo # 2: de identificacin de aloanticuerpo.
79
Dicho en otros trminos: qu tienen en su composicin antignica en comn,
las muestras nmero 2, 5 y 6?
Muestra nmero 2: E negativa Le b positivo.
Muestra nmero 5: E positiva Le b negativo.
Muestra nmero 6: E positiva Le b positivo.
Estos resultados nos orientan a la presencia de ms de un anticuerpo.
D C E c e Cw K k Le a Le b M N
0 0 0 + + 0 + + 0 + +
80
Algoritmo de Investigacin de Anticuerpos Irregulares utilizado por el
Laboratorio de Inmunohematologa del
Servicio Nacional de Sangre.
81
Algoritmo de Identificacin de Anticuerpos Irregulares utilizado por el
Laboratorio de Inmunohematologa del
Servicio Nacional de Sangre.
82
TEST de COOMBS.
Algoritmo utilizado en el Laboratorio de Inmunohematologa del
Servicio Nacional de Sangre.
83
FORMULARIO PARA REMITIR ESUDIO
ESPECIALIZADO AL S.N.S
84
CARACTERES DE LA MUESTRA Y CONDICIONES DE
ENVO DE LAS MISMAS PARA LA REALIZACIN DE
ESTUDIOS EN INMUNOHEMATOLOGA. (*)
85
La solicitud deber ser firmada por un funcionario debidamente
autorizado a tales efectos. En caso de que la solicitud sea realizada por un
Servicio de Hemoterapia que no sea de ASSE, la solicitud deber contener la
autorizacin correspondiente para abonar el costo del estudio.
86
No se facilitarn resultados por va telefnica. Los resultados se podrn
retirar en RECEPCIN en el plazo estipulado, generalmente 24 horas,
aunque en situaciones especiales el estudio podr requerir ms tiempo. En
caso de urgencia en disponer del resultado del estudio solicitado, los
Servicios se debern comunicar con el Tcnico Transfusionista del
Laboratorio de Inmunohematologa para anticipar la entrega del
RESULTADO.
87
Modelo de Informe de Estudio
Inmunohematolgico.
88
CLCULO DE PROBABILIDADES
La probabilidad mide la mayor o menor posibilidad de conseguir unidades
compatibles para un receptor y toma valores entre 0 y 1 expresados en
porcentaje entre 0% y 100%.
Donde el clculo de x es = 23
Vale decir que por cada 100 unidades de sangre tomadas al azar, tendremos la
posibilidad de conseguir 23 con el fenotipo Jk (a-b+). O lo que es igual, por
cada 10 unidades testeadas, encontraremos 2,3 unidades Jk a-.
89
Pacientes aloinmunizados a mltiples antgenos.
Ejemplo 1:
N% = F1 x F2 x .FX
100
90
Donde:
Ejemplo 2:
91
El xito es hijo seguro de la perseverancia y firmeza en el trabajo.
92
TIPIFICACIN ABO Rh D
Para asegurar que se tomen las medidas teraputicas apropiadas, los hemates
de los pacientes DVI deben considerarse como Rh D NEGATIVO.
93
Los que plantean dudas son aquellas muestras que no aglutinan en forma
inmediata o directa.
En algunos eritrocitos D positivos, la demostracin del antgeno D requiere
incubacin con anti D y el agregado ulterior de suero antiglobulina humana
(test de coombs indirecto).
En el pasado, los hemates que demandaban pasos adicionales para la
demostracin del antgeno D, se clasificaban como Du.
Esta designacin ya no se considera apropiada y los hemates portadores
de antgenos que reaccionan dbilmente con el anti D, podran describirse
como D dbil y son considerados Rh D POSITIVOS.
94
Los eritrocitos que carecen del complejo antignico D, se denominan D
mosaicos, D variantes, siendo en la actualidad la denominacin D
parcial como la ms apropiada.
95
CLASIFICACIN ABO-Rh EN PACIENTES:
O. 46%
A. 41%
B 9%
AB. 4%
96
Preparacin de la muestra de sangre:
Procedimiento de la prueba:
Positivo: Los hemates aglutinados forman una lnea roja sobre la superficie
del gel o estn dispersos en el gel.
97
Las reacciones ms dbiles que +++ pueden indicar sub-grupos A o B y
deben realizarse estudios adicionales.
Para una interpretacin correcta debe realizarse una determinacin completa
del grupo (prueba hemtica y prueba srica inversa).
Importante: el microtubo control (ctl) debe mostrar una reaccin negativa, de
lo contario la prueba no es vlida para la determinacin ABO.
Reacciones para Rh D:
Observaciones:
Para dar por vlidos los resultados, el control negativo siempre debe mostrar
una reaccin negativa.
Si el control negativo (ctl) arrojara reaccin positiva, lave inicialmente los
eritrocitos en estudio con solucin salina templada o bien con ID-Diluent 2
antes de preparar la suspensin de eritrocitos.
Si a continuacin, el control negativo muestra resultado negativo, las
reacciones pueden interpretarse y darse por vlidas.
Si la reaccin del control negativo persiste en su positividad, los resultados
ABO/Rh no son vlidos y deben realizarse estudios ulteriores para saber la
causa que origin la discrepancia.
98
CLASIFICACIN ABO Rh EN RECIN NACIDOS:
99
bromelina), con una incubacin de 10 minutos a temperatura
ambiente.
Esto permite la determinacin directa de la mayor parte de los antgenos
D dbiles (D weak).
O bien:
MUESTRA de SANGRE:
Procedimiento de la prueba:
100
Interpretacin de los resultados:
Reacciones para Rh D:
Observaciones:
101
Si el control ctl permanece an positivo, no se puede asegurar la
interpretacin de los resultados del grupo sanguneo ABO y Rh D y ser
necesario ampliar el estudio.
El anti-D monoclonal includo en la tarjeta DiaClon ABO/Rh for newborns
fue seleccionado para que reaccionara con la variante DVI.
Tenga en cuenta que algunas variantes DVI pueden dar reacciones muy
dbiles.
102
CLASIFICACIN ABO Rh EN DONANTES DE SANGRE:
O. 46%
A. 41%
B 9%
AB. 4%
103
El antgeno D consta de numerosos epitopos y en el modelo de 9 epitopos, los
eritrocitos DVI carecen de todos ellos salvo tres.
Esto significa que los individuos con fenotipo DVI pueden producir anti-D
contra los epitopos ausentes tras la inmunizacin por eritrocitos Rh D
positivos fetales o procedentes de una transfusin.
Para asegurarse que se toman las medidas teraputicas adecuadas, los
eritrocitos de pacientes DVI deben considerarse como Rh negativos.
A la inversa, la sangre de donantes debe analizarse con un anti-D que detecte
la variante DVI y considerar a los portadores de la variante como Rh
positivos, para evitar su transfusin a pacientes Rh (D) negativos o D
parciales.
Procedimiento de la prueba:
104
Interpretacin de los resultados:
Reacciones para Rh D:
105
Observaciones:
Para dar por vlidos los resultados, el control negativo siempre debe mostrar
una reaccin negativa.
Si el control negativo (ctl) arrojara reaccin positiva, lave inicialmente los
eritrocitos en estudio con solucin salina isotnica o ID-Diluent 2 antes de
preparar la suspensin de eritrocitos y proceda a reiterar la prueba.
Si a continuacin, el control negativo muestra resultado negativo, las
reacciones pueden interpretarse y darse por vlidas.
Si la reaccin del control negativo persiste en su positividad, los resultados
ABO/Rh , CDE no son vlidos y debe realizarse estudios ulteriores para saber
la causa que origin la discrepancia.
106
Anti-DVI+ Anti-DVI- Interpretacin
+++ a ++++ +++ a ++++ Rh D positivo
a ++ ** a ++ ** Rh D dbil
negativo negativo Rh D negativo
+ a ++++ negativo DVI+ *
negativo + a ++++ DVI- *
107
CARACTERIZACIN DEL TIPO D PARCIAL POR TEST EN GEL.
108
DETERMINACIN DE LOS FENOTIPOS Rh y KELL:
C . 70%
c . 80%
E . 30%
e. 98%
109
El microtubo ctl es el control negativo.
MUESTRAS:
CONTROLES:
PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA:
110
INTERPRETACIN DE LOS RESULTADOS.
111
El antgeno C puede expresarse muy dbilmente en sujetos Cw+ o en
otros fenotipos con expresin deprimida del antgeno C.
En estas raras circunstancias pueden observarse reacciones dbiles o
negativas.
El antgeno Kpa en posicin cis debilita la expresin de los antgenos
K.
112
ESTUDIO DE UNA EMBARAZADA:
113
MUESTRA de SANGRE:
Una vez obtenidas las muestras de plasma o suero por centrifugacin, debern
conservarse refrigeradas a 4C por un mximo de 48 horas. Transcurrido ese
lapso, congelarlas a -20C.
Controles:
Deben incluirse muestras positivas y negativas conocidas de acuerdo con las
normas de garanta de calidad aplicables.
Procedimiento de la prueba:
114
1. Identifique la tarjeta ID-Card con el nmero o nombre de la paciente.
2. Retirar la lmina de sellado solo de aquellos microtubos que se vayan a
utilizar manteniendo la ID-Card en posicin vertical.
3. Pipetear 12.5l de la suspensin de hemates de la gestante en los tres
primeros microtubos (anti-A, anti-B, anti-D) de la tarjeta.
4. Dispensar 50l de cada ID-Cell I-II-III en los microtubos 4, 5 y 6 de
la tarjeta.
5. Agregar 25l de plasma o de suero de la gestante en los microtubos 4,
5 y 6.
6. Incubar la tarjeta ID-Card durante 15 minutos a 37C en la ID-
Incubadora.
7. Transcurrido ese tiempo, centrifugar la tarjeta durante 10 minutos en la
ID-Centrfuga.
8. Lea y registre las reacciones.
Positivo: los hemates forman una lnea roja sobre la superficie del gel o
estn dispersos en el gel.
Reacciones para Rh D.
115
(*)Las reacciones dbiles, las trazas o estn sujetas a una ampliacin del
estudio para distinguir entre los tipos D parciales y D dbiles.
El suero anti-D de esta tarjeta no reacciona con las variantes DVI.
Un antgeno Rh D dbil puede dar una reaccin negativa.
Si se la tarjeta se utiliza para el estudio de pacientes y/o gestantes, recuerde
que la mayora de las guas NO recomienda ampliar el estudio para
determinar fenotipos D dbiles o D parciales.
Cuando se observe una reaccin positiva con todos los hemates test
ID-DiaCell I-II-III; se aconseja realizar un autocontrol (en una
tarjeta Liss/Coombs).
116
LIMITACIONES EN LOS PROCEDIMIENTOS REALIZADOS
EN LAS TARJETAS ID-Card
117
Todo error deja una enseanza, toda enseanza deja experiencia y
toda experiencia deja una huella.
Annimo.
118
PROTOCOLO DE SEGUIMIENTO
INMUNOHEMATOLGICO DE LA GESTACIN.
119
En suma: lo primordial es determinar si la gestante tiene o no
anticuerpos irregulares, independientemente si es Rh (D) positiva o
negativa.
Si presenta anticuerpos, se los debe identificar para saber si pueden
causar EHFN o no.
En caso de carecer de anticuerpos irregulares, interesa el factor Rh (D).
Si es Rh (D) positiva no son necesarios ms controles, pero en caso de
resultar ser Rh (D) negativa, se debern repetir los estudios
inmunohematolgicos entre las semanas 25 y 28 de la gestacin.
120
ALGORITMO DIAGNSTICO DE E.H.F.N EN EL
EMBARAZO
121
Invertir en conocimiento produce siempre los mejores intereses
Benjamn Franklin.
(1706-1790).
122
EPLOGO
Direccin
123
Definiciones tiles
Aglutinina: anticuerpo.
Aglutingeno: antgeno.
124
Anticuerpo caliente: anticuerpo cuyo rango ideal de accin se ubica en el
orden de los 37C.
Autoaglutinina: aglutinina que reacciona con los propios hemates del sujeto
en el cual se encuentra.
125
Determinante antignico: llamado tambin epitopo, comprende el sitio
particular de un antgeno que determinas la especificidad de la reaccin
antgeno anticuerpo.
126
ID-Card: trmino comercial con el que se conoce a las tarjetas para trabajo
en inmunohematologa utilizando el sistema MTS (Micro Typing System).
Liss: sigla en ingls del reactivo de Solucin de Baja Fuerza Inica (Low
Ionic Strength Solution).
127
sangunea, inhibe la participacin del ion Ca++ en la cascada de la
coagulacin de la sangre.
128
BIBLIOGRAFA CONSULTADA.
129
21.Microplacas: SU APLICACIN EN INMUNOHEMATOLOGA
BSICA DE BANCO DE SANGRE. Dra. Elena Franco 1998.
22.Manual de Tcnicas Bsicas en Hemoterapia. Jorge Golffed.
Oficina del Libro A.E.M 1992.
23.Enfermedad Hemoltica Perinatal. Dr. Jorge Decaro. Laboratorio
Clausen .2003.
24.MEDICINA TRANSFUSIONAL PERINATAL. Dr. Jorge Decaro.
Laboratorio Clausen. 2011.
25.Transfusion Medicine. Second Edition. Jeffrey McCullough. Editorial
Elsevier. 2005.
26.GUA SOBRE LA TRANSFUSIN DE COMPONENTES
SANGUNEOS Y DERIVADOS PLASMTICOS. Sociedad Espaola
de Transfusin Sangunea. 2006.
27.Instrucciones de Uso. DiaMed-ID Micro Typing System. DiaMed
Argentina S.A.
28.Handbook of Transfusion Medicine. Robert G. Westphal, M.D.
American Red Cross. 1990.
29.Hemotherapy of the Infant and Premature. American Assiciation of
Blood Banks. 1983.
30.Hemolytic Disease of the Newborn. American association of Blood
Banks. 1984.
31.Pgina web: www.diamed.com
32.Pgina web: www.biorad.com/inmunohematology (para consultas
sobre los insertos de las diferentes ID-Card).
33.Instruccin Tcnica. Hospital son Lltzer. Govern de les Illes Balears.
2007.
34.Investigacin de Anticuerpos Irregulares por los Tcnicos Miguel
Gmez y Sergio Ramos.
35.Diccionario de Inmunologa. W.J. Herbert y P.C. Wilkinson Editorial
JIMS. 1974
36.UNIVERSIDAD INDUSTRIAL DE SANTANDER. Manual Tcnico
de Camilo Andrs Valderrama Carrasco. Tesis de Pregrado. 2008.
130
N D I C E
131
60. Prueba en salino a 4C (ID-Cell I-II-III)
62. Identificacin de anticuerpos
62. Prueba enzimtica con eritrocitos papanizados ID-DiaPanel P)
62. Prueba salina a 4C (ID-DiaPanel)
63. Interpretacin de los resultados
63. Principios y consideraciones generales
72. Aloinmunizacin
75. Panel de antgenos eritrocitarios
76. Cmo interpretar los resultados de un panel eritrocitario?
81. Algoritmo de investigacin de anticuerpos irregulares
82. Algoritmo de identificacin de anticuerpos irregulares
83. Algoritmo del Test de Coombs
84. Formulario para remitir estudio especializado al Servicio Nacional de
Sangre
85. Caracteres de la muestra y condiciones de envo de las mismas para la
realizacin de estudios en inmunohematologa
88. Modelo de informe de estudio inmunohematolgico
89. Clculo de probabilidades
90. Pacientes aloinmunizados a mltiples antgenos
93. Tipificacin ABO Rh D
96. Clasificacin ABO-Rh en pacientes
99. Clasificacin ABO-Rh en recin nacidos
103.Clasificacin ABO-Rh en donantes de sangre
109. Determinacin de los fenotipos Rh y Kell
113. Estudio de una embarazada
117. Limitaciones en los procedimientos realizados en las tarjetas ID-Card
119. Protocolo de seguimiento inmunohematolgico de la gestacin
121. Algoritmo diagnstico de E.H.F.N. en el embarazo
123. Eplogo: Dra. Lourdes Viano.
124. Definiciones tiles
131. ndice
132
Libros, caminos y das dan al hombre sabidura.
Proverbio rabe.
Montevideo - Uruguay
Jorge Golffed
Reservados todos los derechos
ISBN 978-9974-99-524-6
Miguelete 1881
www.print.com.uy
133