TIPOS DE SIEMBRA

MICROBIOLOGIA

ALUMNOS
SOLIS OLIVAS KRISTEL PORTUGUEZ BAZALAR ANA MARCOS SANTOS WILIAMS

DOCENTE
S

2015 - 1
 INTRODUCCION

Las bacterias se cultivan en el laboratorio en materiales nutritivos denominados

medios de cultivo, cuyos componentes son muy variados. La eleccin del medio
se basa en el propsito del estudio.
El material que se inocula en el medio se denomina inocuo. Cuando se inocula
un medio como agar nutritivo u otros medios con agar en placas Petri, por el
mtodo de siembra por estra cruzada en placa, las clulas quedan separadas
individualmente.
Durante la incubacin, las clulas microbianas individuales se reproducen tan
rpidamente que en un tiempo de 18 a 24 horas producen masas visibles a
simple vista, denominadas colonias. Cada colonia que se observe diferente,
presumiblemente es un cultivo puro de una sola clase de bacterias. Si dos clulas
microbianas procedentes del inocuo original quedan muy cerca una de la otra
sobre el medio de agar, las colonias que resultan pueden quedar mezcladas o
muy juntas. La siembra por estra permite aislar las bacterias que dan lugar a
colonias separadas y posteriormente, transfiriendo una sola colonia a un medio
nuevo, se permite el desarrollo de un cultivo puro bacteriano.

OBJETIVOS

- Aprender aplicar diferentes tipos de tcnicas de siembra

- Comprobar la utilidad que tienen los medios de cultivos: usos generales,

diferenciales y selectivos.

- Aprender a trabajar en condiciones de asepsia, es decir, en un ambiente libre de

contaminacin microbiana.

- Aprender mediante el uso de las tcnicas tradicionales de laboratorio a aislar y

cultivar microorganismos en medios slidos y lquidos.
 Materiales

Placas Petri tubos de ensayo

Gradilla mechero de bunsen

Asa de Drigalsky Asa de koller

 Pipetas Papel toalla

Papel kraft Autoclave

 FUNDAMENTO TEORICO
Mtodos Generales:

1) Siembra por dilucin: Se toma el tubo de ensayo con medio

lquido, como el caldo simple. Se toma el material a diluir y se
siembra en el tubo con el uso del asa de Koller cargada con el
material bacteriolgico, se agita, con movimientos moderados.

- Medio de cultivo: Liquido

- Instrumento: Asa de Koller
- Finalidad: poner la bacteria en suspensin.

2) Siembra por estras en superficie: Se siembra el material en

la superficie del agar inclinado en un tubo de ensayo, all se
extiende por toda la superficie con el asa de Koller, previamente
esterilizada y cargada con el material a sembrar, haciendo
estras no muy amplias, pero tampoco muy estrechas. Se inicia
por la parte ms profunda de la superficie inclinada y se termina
la estra en la parte ms cerca de la boca del tubo.

- Medio de cultivo: agar base inclinado

- Instrumento: asa de Koller

3) Siembra por estra por agotamiento: Con ste procedimiento

se puede conseguir una buena separacin de las colonias y
aislarlas fcilmente. Para ello se funde el medio de cultivo, se
vuelca en la placa Petri y se deja solidificar. Con el asa de Koller
previamente esterilizada se toma material de un cultivo
heterogneo y se descarga sobre la superficie del medio formando
estras. Esto puede realizarse de varias formas:

a- Al comienzo se coloca el inoculo, luego se contina con las estras. Cuando se quiere
obtener colonias muy separadas se puede utilizar dos o tres placas de Petri, para lo cual
se repite la operacin sin tomar con el asa de Koller de nuevo el material.

b- Se puede dividir la placa de Petri en cuatro cuadrantes; una vez depositado el material
en el primero, siguiendo el sentido de las agujas del reloj, se hace una estra luego en
el segundo, tercero y cuarto cuadrante sin cargar nuevamente el asa; en el ltimo
cuadrante aparecern las colonias aisladas.

c- El inculo se extiende sobre una pequea zona de la placa, prxima al borde, se

esteriliza el asa y se traza otra estra a partir del depsito y as sucesivamente.

- Medio de cultivo: solido en placa de Petri

- Instrumento. Asa de Koller
- Finalidad. Obtener colonias aisladas
 4) Por picadura o puncin: Con una aguja se toma el material
que se quiere sembrar y se lo introduce en el tubo, con medio
semislido. Introducir la aguja hasta el fondo, formando un canal
de puncin, trayecto por el cual la retiraremos luego. Este
mtodo se utiliza para estudiar la movilidad de las bacterias.

- Medio de cultivo: Semislido

- Instrumento: aguja bacteriolgica
- Finalidad: Estudiar la movilidad de las bacterias

5) Siembra en TSI: (Por picadura y estras en superficie): el TSI (Triple Sugar

Iron) es un medio que contiene glucosa, sacarosa y lactosa, hierro y un
indicador que es el rojo fenol. En este medio sembraremos por picadura
y estras en superficie, como ya conocemos, para estudiar los cambios
que ocurrirn en superficie y profundidad. A lo largo del canal se
desarrollan los microorganismos, y segn lo hagan en la parte
superior o inferior del tubo, estarn indicando su comportamiento
frente a los azucares, los cambios indican lo siguiente:

6) Estra nica: depositamos la muestra lo ms alejado

de nosotros y realizamos la siembra en forma de zig-zag.
De esta forma vamos descargando la muestra del asa.
Es importante no volver a repasar el trozo de medio de
cultivo que ya hemos sembrado. Para conseguir que al
final de la estra tengamos colonias aisladas es
importante que al principio hagamos la estra ms junta
y que la cantidad de muestra tomada en el asa de Koller
sea la adecuada.
7) Siembra en superficie (diseminacin): se vierte sobre una placa de Petri el
medio de cultivo fundido, se deja solidificar y se coloca sobre la superficie 0,1ml
de la muestra del inculo. Con ayuda de una esptula de Drigalsky se extiende
el inculo hasta su absorcin total por el medio de cultivo. Este tipo de siembra
se recomienda para microorganismos aerobios estrictos.

8) siembra por difusin (inclusin o vertido en placa): se coloca una alcuota

de la muestra en una placa Petri y sobre el mismo se vierte el medio de cultivo
girando a la derecha y a la izquierda, previamente fundido. Este mtodo se utiliza
para microorganismos aerobios.
 RESULTADOS

En los cultivos lquidos no tiene lugar la formacin de colonias, por lo tanto se

examinar la existencia de enturbiamiento ms o menos intenso, la formacin de
una pelcula o velo sobre la superficie, la aparicin de sedimento en el fondo del
tubo, etc.
La utilizacin de medios de cultivo lquidos permite la obtencin de una
poblacin microbiana grande, con un elevado nmero de microorganismos, para
ser utilizados posteriormente.

En medio slido (agar inclinado) se observar el aspecto general del medio y

la aparicin de crecimiento sobre su superficie. Este tipo de siembra permite el
cultivo de microorganismos aerobios o anaerobios facultativos. Adems, se
utiliza para almacenar cultivos durante cortos perodos de tiempo, a
temperaturas de 4C.

En medio semislido se podr comprobar si el microorganismo es o no mvil,

ya que en el primer caso se observar que el crecimiento difunde alrededor de
la zona donde se hizo la picadura, detectndose turbidez. Por eso es tan
importante que, cuando se inocula el medio de cultivo, no se distorsione el agar
y se vuelva a sacar el hilo por el mismo sitio de inoculacin. Los microorganismos
inmviles crecern nicamente a lo largo de la picadura.
Este tipo de siembra en picadura sirve, tambin, como otro de mtodo de
conservacin de microorganismos anaerobios facultativos

CONCLUSIN

Esta prctica, se dividi en distintas sesiones, nos permiti conocer y aplicar de

manera favorable, los procesos bsicos para el estudio de microorganismos en
el laboratorio, tales como la esterilizacin, medios de cultivo, siembra, los cuales
son la base para realizar los pasos prcticos posteriores.

Tambin es necesario destacar que pudimos aprender sobre la seguridad en el

laboratorio y las medidas necesarias para evitar riesgos, los cuales son muy
importantes cuando se trabaja con microorganismos patgenos, ya que una
incorrecta manipulacin puede llevar a un contagio del manipulador o de quienes
le rodean.

Hemos podido observar los diferentes tipos de siembra, del mismo modo
pudimos reconocer las caractersticas de los microorganismos que se
desarrollan tanto el cambio de color del cultivo como las precipitaciones y otros.
 REFERENCIA BIBLIOGRAFICA

LIBROS

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Garca, A. Meja Chvez, G. Tsuzuki Reyes, L. Hernndez Gmez, I.
Mggenburg, A. Camacho Cruz y M del C. Urza Hernndez. 2006.
Manual de Prcticas de Microbiologa General. 5 edicin. Facultad de
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- Tortora Gerard J., Fonke Beidell R. y Case Christine L. 1995.

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Manual de laboratorio para la enseanza de Microbiologa bsica y
aplicada. 1 edicin. Atlante S. R. L. Argentina

PAGINAS WEBS

- http://html.rincondelvago.com/microbiologia_21.html

- https://libroslaboratorio.files.wordpress.com/2012/09/medios-de-cultivo-
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- https://www.google.com.pe/url?sa=t&rct=j&q=&esrc=s&source=web&cd=
4&cad=rja&uact=8&ved=0CC0QFjAD&url=http%3A%2F%2Fwww2.cbm.
uam.es%2Fjalopez%2FCLASES2002%2FCLASES0203%2FGUIONPRA
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Yuk1ftSoYOmYAru2AWxjHzA&sig2=ayar5394k2b3gAhQrlAhiw

- http://elblogdeadepi.blogspot.com/p/microbiologia-bacteriologia-medios-
de.html