Western Blot

Introduccin y Optimizacin
10 Abril 2013
Ariana Veiga
Western Blot
En qu Tambin llamado Inmunoblot
consiste el
Western Tcnica utilizada para identificar una protena en una muestra que contiene
Blot? varias protenas
Las protenas de la muestra se separan mediante electroforesis en gel en funcin de su
peso molecular
Cmo
funciona?
A continuacin se utiliza un anticuerpo especfico para detectar la protena de inters
El resultado aporta informacin sobre el peso molecular de la protena y su cantidad
relativa en la muestra

Calle 1: Anticuerpo anti- Actina (ab8226) diluido 1/1000

Calle 2: ab8226 diluido 1/10000

Calles 3-4: ab8226 diluido 1/500

Calle 1: Lisado celular HeLa (humano)

Calle 2: Lisado celular HeLa (humano)

Calle 3: Lisado celular HEK293 (humano)

Calle 4: Lisado celular 3T3 (ratn)

2
En qu casos es til utilizar
Western Blot?

Est la protena de inters presente en mi muestra?

El tratamiento con un determinado agente X,

aumenta o reduce el nivel de expresin de mi
protena?

Cmo vara el nivel de expresin de la protena en

distintos tejidos o lneas celulares?

Mi muestra es sana o patolgica? El WB permite

detectar enfermedades tales como la enfermedad de
Lyme, la de las vacas locas, el VIH, etc.

3
Organizacin del Webinar

Paso 1: Preparacin de la muestra

Paso 2: Electroforesis en gel

Paso 3: Transferencia gel - membrana

Paso 4: Inmunodeteccin

Controles recomendados en WB

Seleccin de anticuerpos

Problemas tcnicos y optimizacin.

Ejemplos.

Enlaces a otros productos de inters

4
Protocolo de Western Blot

Paso 1: Preparacin de la muestra

Paso 2: Electroforesis en gel

Paso 3: Transferencia gel - membrana

Paso 4: Inmunodeteccin

Controles recomendados en WB

Seleccin de anticuerpos

Problemas tcnicos y optimizacin.

Ejemplos.

Enlaces a otros productos de inters

5
Preparacin de las muestras para la
electroforesis

Lisis: Las clulas o los tejidos se tratan con un tampn de lisis y seguidamente se
degradan mecnicamente para liberar las protenas

Clulas: mantenerlas en hielo, lavar con PBS fro y aadir el tampn de lisis (~1ml por
cada milln de clulas). Despus agitar durante 30 minutos a 4 C

Tejido: diseccionar rpidamente el tejido y mantenerlo en hielo. Congelar inmediatamente

en nitrgeno lquido y homogeneizar en tampn de lisis (300 l por cada 5 g de tejido).
Aclarar las cuchillas del homogeneizador con 2 x 300 l de tampn, y agitar despus
durante 2 horas a 4 C

Centrifugar a 4 C durante 20 minutos, aspirar el sobrenadante y mantenerlo

en hielo

6
Lisis

Mantener las muestras en hielo o a 4C para evitar degradacin de las protenas

Los tampones deben prepararse en el momento y mantenerse en fro. Antes de realizar la

lisis, aadir al tampn un cocktail de inhibidores de proteasas
Si la protena de inters est fosforilada, es importante asegurarse de incluir inhibidores de
fosfatasas al tampn de lisis
Elegir un tampn de lisis adecuado en funcin de la localizacin celular de la protena
de inters

Localizacin de la protena Tampn de lisis recomendado

Clula entera NP-40 o RIPA
Citoplasmtica (soluble) Tris-HCl
Citoplasmtica (citoesqueleto) Tris-Triton
Membranal NP-40 o RIPA
Nuclear RIPA
Mitocondrial RIPA
7
Preparacin de las muestras para la
electroforesis

Lisis: Las clulas o los tejidos se tratan con un tampn de lisis y seguidamente se
degradan mecnicamente para liberar las protenas
Clulas: mantenerlas en hielo, lavar con PBS fro y aadir el tampn de lisis
(~1ml por cada milln de clulas). Despus agitar durante 30 minutos a 4 C
Tejido: diseccionar rpidamente el tejido y mantenerlo en hielo. Congelar
inmediatamente en nitrgeno lquido y homogeneizar en tampn de lisis (300 l
por cada 5 g de tejido). Aclarar las cuchillas del homogeneizador con 2 x 300
l de tampn, y agitar despus durante 2 horas a 4 C
Centrifugar a 4 C durante 20 minutos, aspirar el sobrenadante y mantenerlo
en hielo

Determinar la concentracin de protenas

Condiciones reductoras y desnaturalizantes: las muestras son normalmente

tratadas con agentes que rompen las estructuras tridimensionales de las protenas
(dmeros, estructuras terciarias)
Aadir el tampn de carga a la muestra y calentar 5 minutos a 95-100C o
durante 5-10 minutos a 70C

8
Condiciones reductoras y
desnaturalizantes

Un tampn de carga estndar contiene SDS (dodecilsulfato sdico) y -

mercaptoetanol o DTT (ditiotreitol)
El SDS desnaturaliza la protena en su estructura primaria y la recubre de
cargas negativas
El -mercaptoetanol y el DTT son agentes reductores que rompen los
puentes disulfuro
Todo ello permite que las protenas se separen en funcin del peso molecular
mediante SDS-PAGE
La reduccin y desnaturalizacin permiten adems la accesibilidad del
anticuerpo a su sitio de unin

SDS y DTT/
-mercaptoetanol

Nota: Algunos anticuerpos solo reconocen las protenas nativas (no reducidas y/o no desnaturalizadas). En este caso SDS y/o -mercaptoetanol o
DTT no deben aadirse a los tampones.

9
Protocolo de Western Blot

Paso 1: Preparacin de la muestra

Paso 2: Electroforesis en gel

Paso 3: Transferencia gel - membrana

Paso 4: Inmunodeteccin

Controles recomendados en WB

Seleccin de anticuerpos

Problemas tcnicos y optimizacin.

Ejemplos.

Enlaces a otros productos de inters

10
SDS-PAGE

Mtodo que permite separar las protenas bajo un campo elctrico

Definicin
de acuerdo a su movilidad electrofortica

SDS : Dodecilsulfato Sdico; PAGE : Electroforesis en gel de poliacrilamida

11
SDS-PAGE

El gel de poliacrilamida se coloca en un compartimento que contiene el

tampn de migracin. Un tampn de migracin suele contener 25mM Tris;
190mM glicina; 0,1% SDS; pH 8,3
Los lisados proteicos se cargan en las calles del gel, normalmente entre
20 y 40 g por calle
Se aplica un campo elctrico que provoca el movimiento de las protenas
Cmo
hacia el polo positivo
funciona? Al haberse tratado las protenas con SDS (cargas negativas), las cargas
endgenas de las mismas son despreciables
El resultado es que las protenas se separan en funcin de su talla, o
peso molecular
Las protenas de menor tamao quedan menos retenidas en la matriz del
gel y por tanto migran mas rpidamente

-
Corriente elctrica
Frente de migracin
+
12
Geles

Constituidos de poliacrilamida, N, N-metilenbisacrilamida (Bis), persulfato de

amonio (APS) y TEMED

La estructura del gel puede modificarse alterando la proporcin de acrilamida

Para protenas pequeas, se usa un gel con un porcentaje elevado de

acrilamida, y viceversa para protenas de gran tamao
Los geles en gradiente se recomiendan en aquellos casos en los que el tamao
de la protena es desconocida

Tamao de la protena (kDa) Porcentaje del gel

4-40 20
12-45 15
10-70 12,5
15-100 10
25-200 8
13
Electroforesis en condiciones no
reductoras y/o no desnaturalizantes

Forma requerida de Condiciones Tampn de

la protena electroforesis Tampn de carga migracin
Reducida- Reductor y Con -mercaptoetanol Con SDS
Desnaturalizada desnaturalizante o DTT
Con SDS
Reducida - Nativa Reductor no Con -mercaptoetanol o Sin SDS
desnaturalizante DTT
Sin SDS
Oxidada No reductor y Sin -mercaptoetanol ni Con SDS
Desnaturalizada desnaturalizante DTT
Con SDS
Oxidada - Nativa No reductor y Sin -mercaptoetanol ni Sin SDS
nativo DTT
SinSDS

14
Protocolo de Western Blot

Paso 1: Preparacin de la muestra

Paso 2: Electroforesis en gel

Paso 3: Transferencia gel - membrana

Paso 4: Inmunodeteccin

Controles recomendados en WB

Seleccin de anticuerpos

Problemas tcnicos y optimizacin.

Ejemplos.

Enlaces a otros productos de inters

15
Objetivo de la transferencia

Una vez realizada la electroforesis, es necesario marcar la protena de inters

para poder visualizarla

El gel no es una superficie adecuada para poder marcar las protenas

Los anticuerpos no son retenidos en el gel
Los geles son frgiles y difciles de manipular

Por tanto, es necesario transferir las protenas a un soporte ms adecuado

16
Cmo funciona la transferencia?

El principio es similar al de PAGE, es decir, las protenas cargadas

negativamente migran hacia el polo positivo bajo el efecto de un campo elctrico

Se intercala una membrana entre el gel y el electrodo positivo

Las protenas se adhieren a la membrana siguiendo la misma disposicin que

en el gel
Las membranas pueden ser de nitrocelulosa o polifluoruro de vinilideno (PVDF).
Estas ltimas requieren un pretratamiento con metanol

Montaje de la transferencia

17
Transferencia en medio
hmedo o semi seco?
Ventajas Inconvenientes
El gel y la membrana se intercalan y fijan Adecuado El proceso de
firmemente entre finas esponjas y papel para protenas transferencia es
absorbente grandes o ms largo
Este montaje sndwich se sumerge en un difciles de
Medio compartimento que contiene el tampn de transferir
Hmedo transferencia donde se aplica a continuacin
la corriente elctrica
Un tampn de transferencia se compone
normalmente de 25mM Tris, 190mM Glicina
y 20% de Metanol

El montaje papel-gel-membrana-papel se Ms rpido La membrana

humedece con tampn de transferencia puede secarse
Semi
El montaje se coloca directamente entre el afectando a la
ctodo y el nodo donde se aplica la corriente transferencia de
Seca las protenas
El tampn de transferencia estndar suele
contener 48mM Tris, 39mM Glicina, 0,04%
SDS, y 20% Metanol
18
Transferencia de protenas >100 kDa

Transferencia en medio hmedo durante la noche a 4 C y bajo voltaje

Aadir 0.1% SDS al tampn de transferencia para reducir la formacin de

aglomerados en el gel

Reducir la cantidad de metanol en el tampn de transferencia a 10% o incluso

menos para evitar la dispersin de protenas en el gel

Si la membrana es de PVDF, el metanol puede retirarse completamente del

tampn (sigue siendo necesario sin embargo su pre-tratamiento con metanol)

19
Protocolo de Western Blot

Paso 1: Preparacin de la muestra

Paso 2: Electroforesis en gel

Paso 3: Transferencia gel - membrana

Paso 4: Inmunodeteccin

Controles recomendados en WB

Seleccin de anticuerpos

Problemas tcnicos y optimizacin.

Ejemplos.

Enlaces a otros productos de inters

20
Por qu se utilizan anticuerpos?

Colorantes como Coomassie pueden

usarse para teir las protenas
despus de realizar el SDS-PAGE SDS3

Pero, cul de las bandas

corresponde a la protena de inters?

Lisado celular de SDS3 transfectado

El uso de anticuerpos especficos (ab94303) en SDS-PAGE (izquierda)
soluciona el problema detectando y en Western Blot con el anticuerpo
nicamente la protena de inters ab89345 anti-SDS3 (derecha).

21
Inmunodeteccin

Bloqueo de la
membrana Leche, BSA, etc

Eptopo

Incubacin con el Protena Protena

anticuerpo primario Anticuerpo

Lavado (TBST)

Incubacin con
Protena Protena
anticuerpo secundario Anticuerpo
conjugado

Lavado (TBST)

Deteccin
Protena

22
Deteccin
Sustrato (perxido de hidrgeno + luminol)

Producto (sensible a la luz)

Un sustrato quimioluminiscente, como el ECL, reacciona con un anticuerpo

secundario conjugado a la enzima HRP, produciendo una seal que se captura en
una pelcula fotogrfica

Los sustratos cromognicos (4-cloronaftol o DAB) tambin pueden utilizarse con las
enzimas HRP o AP, dando lugar a un producto coloreado que se deposita en la
membrana prximo a la zona del anticuerpo

Los anticuerpos secundarios conjugados a fluorforos tambin pueden usarse

siempre y cuando se disponga de un equipo de deteccin especial

ECL : Enhanced chemiluminescence DAB : 3,3'-diaminobenzidine tetrahydrochloride

HRP : HorseRadish Peroxidase AP : Alkaline Phosphatase
23
Protocolo de Western Blot

Paso 1: Preparacin de la muestra

Paso 2: Electroforesis en gel

Paso 3: Transferencia gel - membrana

Paso 4: Inmunodeteccin

Controles recomendados en WB

Seleccin de anticuerpos

Problemas tcnicos y optimizacin.

Ejemplos.

Enlaces a otros productos de inters

24
Controles de carga
Los controles de carga son anticuerpos usados para asegurar que la carga de protenas en cada calle del gel de
SDS PAGE es constante
Un anticuerpo control de carga detecta una protena altamente conservada y presente en cantidades similares
independientemente del tipo de muestra

Tipo de Peso molecular

Control de carga muestra (KDa) Precauciones
Actina Clula entera / 42 No es vlido para muestras del musculo esqueltico. Cambios en
Citoplasma las condiciones de crecimiento celular e interacciones con los
componentes de la matriz extracelular pueden alterar la sntesis de
la protena actina (Farmer et al, 1983)
GAPDH Clula entera / 30-40 Algunos factores fisiolgicos, como hipoxia o diabetes, aumentan
Citoplasma el nivel de expresin de GAPDH en determinados tipos celulares
Tubulina Clula entera / 55 La expresin de tubulina puede variar con la resistencia a
Citoplasma sustancias antimicrobianas y antimitticas (Sangrajrang S. et al,
1998, Prasad V et al, 2000)
VDCA1/Porinas Mitocondria 31
COXIV Mitocondria 16 Muchas protenas migran al mismo peso molecular (16KDa) que
COXIV
Lamin B1 Ncleo 66 No es vlido para muestras en las que se ha eliminado la
membrana nuclear
Protena de unin Ncleo 38 No es vlido para muestras sin ADN
a TATA (TBP)

25
Controles de carga

Nota: la afinidad del anticuerpo puede variar segn la especie o naturaleza de la protena (nativa o
recombinante), etc

Todas las calles - anticuerpo anti - Actina control de

carga (ab8227) diludo 1/1000
Calle 1: Clulas HeLa (humano) a 20 g
Calle 2: Clulas 3T3 (ratn) a 20 g
Calle 3: Hgado de pescado a 20 g
Calle 4: Hgado de conejo a 20 g
Calle 5: Clulas MDCK (perro) a 20 g
Calle 6: Clulas EBTr (bovino) a 20 g
Calle 7: Clulas SL-29 (pollo) a 20 g
Calle 8: Clulas CHO (Hamster chino) a 20 g
Calle 9: Embrin de Xenopus a 20 g

26
Controles positivos y negativos

Realizar en paralelo el ensayo de muestras desconocidas con muestras

en las que se ha comprobado el nivel de expresin de la protena de
inters
Protena recombinante
Clulas transfectadas con la protena de inters
Tejidos o lneas celulares que expresen la protena

Incluir tambin una muestra que no exprese la protena a detectar

Muestras knockout o siRNA
Tejidos o lneas celulares que no expresen la protena

27
Pptidos de bloqueo

La pre-incubacin del anticuerpo primario con el pptido inmungeno permite bloquear de

manera especfica los sitios de unin del anticuerpo

Las bandas especficas no sern visibles en el blot ya que el anticuerpo pre-incubado no

puede unirse a la protena en la membrana

til para determinar si las bandas observadas corresponden a isoformas, fragmentos de la

protena o protenas no especficas

Todas las calles:

Anti-Histona H3 (fosfoS10) [mAbcam 14955] - ChIP Grade (ab14955) a 1 g/ml

Calle 1: Preparado de Histona, clulas HeLa

Calle 2: Preparado de Histona de clulas HeLa tratadas con colcemida

Calle 3: Preparacin de histona de clulas HeLa 0,5g con pptido de bloqueo

Histona H3 fosfo S10, trimetil K9 (ab15644) a 1 g/ml

Calle 4: Preparacin de histona de clulas HeLa tratadas con colcemida 0,5g

con pptido de bloqueo Histona H3 fosfo S10, tri metil K9 (ab15644) a 1 g/ml

28
Protocolo de Western Blot

Paso 1: Preparacin de la muestra

Paso 2: Electroforesis en gel

Paso 3: Transferencia gel - membrana

Paso 4: Inmunodeteccin

Controles recomendados en WB

Seleccin de anticuerpos

Problemas tcnicos y optimizacin.

Ejemplos.

Enlaces a otros productos de inters

29
Adecuado para Western Blot

Utilizar anticuerpos que hayan sido previamente testados en Western Blot

Las aplicaciones en las que un anticuerpo ha sido testado se indican en la

ficha tcnica del anticuerpo

30
Inmungeno y especificidad

Inmungeno: protena especfica o secuencia de amino cidos que se inyecta en un animal

para provocarle una respuesta inmunitaria y producir anticuerpos especficos contra ella

La seleccin del inmungeno permite producir un anticuerpo que reconozca y se fije sobre
una regin especfica de la protena (eptopo)

Asegurarse que la secuencia del inmungeno est presente en la protena de inters

cuando se est estudiando una isoforma concreta de la protena, la forma madura o un
precursor de la misma si no, el anticuerpo no reconocer la protena

NERTCRCDKP

NERTCRCDKP

31
Protocolo de Western Blot

Paso 1: Preparacin de la muestra

Paso 2: Electroforesis en gel

Paso 3: Transferencia gel - membrana

Paso 4: Inmunodeteccin

Controles recomendados en WB

Seleccin de anticuerpos

Problemas tcnicos y optimizacin.

Ejemplos.

Enlaces a otros productos de inters

32
Ausencia de bandas,
o bandas muy dbiles
Origen del problema
Incompatibilidad con el anticuerpo
secundario
No hay suficiente protena o
anticuerpo para producir una seal
Tiempo de incubacin insuficiente
para producir una seal
La membrana no se ha bloqueado
correctamente
La protena no se ha transferido
correctamente del gel a la
membrana
Las protenas hidrfobas son ms
difciles de transferir
La muestra no expresa la protena
de inters
El anticuerpo no reconoce la
protena de inters
Solucin
Seleccionar un anticuerpo secundario que sea
compatible con la especie y el isotipo del anticuerpo
primario (ej. Anticuerpo secundario anti-IgM de ratn
con anticuerpo primario IgM hecho en ratn)
Aumentar la cantidad de lisado, de anticuerpo
primario o de anticuerpo secundario (incluso una
combinacin de los tres)
Incubar la membrana con el anticuerpo primario
durante la noche a 4C
Bloquear durante menos tiempo o usando un agente
de bloqueo diferente. La adicin de Tween 20 al
tampn de bloqueo reduce la fijacin del anticuerpo
al agente de bloqueo
Comprobar que se ha producido la transferencia
usando un colorante como rojo de Ponceau. Es
posible que sea necesario aumentar o disminuir el
tiempo de transferencia
Para este tipo de protenas usar membranas de
PVDF
Revisar literatura y bases de datos sobre la protena
de inters
Verificar que la secuencia del inmungeno est
presente en la protena a estudiar
33
Ruido de fondo
Origen del problema Solucin
Exceso de lisado celular, anticuerpo Reducir la carga de protena en el gel y/o diluir ms
primario o secundario que provocan los anticuerpos
uniones no especficas

Temperatura de incubacin del Incubar durante la noche a 4C

anticuerpo primario muy elevada

La membrana no se ha bloqueado Aumentar el tiempo de lavado, y aadir un

correctamente detergente, como Tween 20, al tampn de lavado.
Probar otro agente de bloqueo

Uso de una membrana no Las membranas de nitrocelulosa suelen dar menos

adecuada ruido de fondo que las membranas de PVDF

Degradacin de la protena Optimizar la preparacin de la muestra. Mantener

las muestras en hielo y aadir una solucin recin
preparada de inhibidores de proteasas.
Almacenamiento de muestras a largo plazo puede
daar las protenas

Presencia de isoformas o Consultar la literatura y SwissProt

fragmentos de la protena de inters

Presencia de polmeros Hervir las muestras durante 10 minutos antes de

realizar la electroforesis

34
Exceso de protena y/o anticuerpo

Dilucin de
la muestra y
anticuerpo
primario

35
Optimizacin del tampn de bloqueo

5% leche 5% BSA

5% BSA 5% leche

Anti-GAPDH [mAbcam 9484] - Loading Control

(ab9484) a una dilucin 1/1000

A cada anticuerpo le corresponder una solucin de bloqueo ptima

36
Burbujas de aire, lavados insuficientes,
transferencia incompleta

Durante la transferencia,
contacto insuficiente entre
el gel y la membrana

Burbujas de aire entre el

gel y la membrana durante
la transferencia

Lavados insuficientes

37
Protenas en estado nativo

Algunos anticuerpos presentan mayor afinidad por las estructuras nativas de las
protenas que por las formas desnaturalizadas y/o reducidas
La imagen muestra un Western Blot de colgeno III humano purificado, en la
forma reducida y desnaturalizada a la izquierda, y en su forma nativa a la derecha
La estructura tridimensional del sitio de unin del anticuerpo al antgeno se
pierde al desnaturalizar y reducir la protena

Forma reducida y Forma

desnaturalizada nativa
Colgeno humano purificado (ab7535) a 5 g por
calle con el anticuerpo anti-colgeno III(ab6310)

Calle 1: Protena en su forma reducida y

desnaturalizada

Calle 2: Protena nativa (son reducir ni desnaturalizar)

Imagen cortesa de un Abreview enviado por

Michaela Leyh

38
Conocer la protena de inters

Las protenas no siempre muestran una nica banda al peso

molecular esperado
Posibles motivos: fragmentacin de la protena, modificaciones post
-traduccionales, expresin de isoformas, propiedades isoelctricas
Una diferencia del 10-15% respecto al tamao esperado se
considera aceptable y dentro de la normalidad

Se aconseja consultar siempre SwissProt y la literatura

39
Protocolo de Western Blot

Paso 1: Preparacin de la muestra

Paso 2: Electroforesis en gel

Paso 3: Transferencia gel - membrana

Paso 4: Inmunodeteccin

Controles recomendados en WB

Seleccin de anticuerpos

Problemas tcnicos y optimizacin.

Ejemplos.

Enlaces a otros productos de inters

40
Protocolos y material de inters

SwissProt www.uniprot.org

Protocolos detallados de WB
www.abcam.com/protocols

Gua sobre controles de carga:

http://www.abcam.com/loadingcontrolguide

Vdeo detallado sobre WB:

http://www.abcam.com/westernblotguide
Gua de trucos para WB

Descarga tu gua de trucos para WB en nuestra pgina de protocolos

O pide tu copia por e-mail: mailrequest@abcam.com
41
Reactivos para Western Blot

Geles prefabricados y soluciones tampn optimizadas para WB

Optiblot Otros reactivos (tincin de gel, Bradford, etc )
www.abcam.com/Optiblot
Marcadores
de peso Marcadores de peso molecular pre coloreados y listos para usar
molecular www.abcam.com/prismproteinladders
Prism

Anticuerpos
Anticuerpos secundarios validados para WB
secondarios Conjugados a fosfatasa alcalina (AP) o peroxidasa (HRP)
AbExcel
www.abcam.com/abexcel

Sustratos ECL de alta sensibilidad para WB

Kits ECL
www.abcam.com/ecl

42
Optiblot reactivos para WB

Fciles de usar pocillos Hasta 10 veces ms

coloreados para facilitar la fuertes que los geles
carga de la muestra convencionales

Pocillos de alta Larga duracin 1-2

capacidad y sin peine aos de caducidad
que remover

Fciles de abrir, sin Geles compatibles con la

esptulas o cuchillos mayora de tanques

Todos los reactivos necesarios para tus experimentos:

Tampones optimizados
Optiblot Blue (ab119211) tincin tipo Coomassie del gel en tan slo 15 minuots
Reactivo Bradford y ensayo BCA compatible con detergentes en la muestra
Otros productos membranas PVDF de baja fluorescencia, etc

Ms informacin: www.abcam.com/Optiblot

43
Anticuerpos monoclonales de conejo
( ), ptimos para WB
Histona H3
(fosfoT3) RabMAb
Anticuerpo histona H3 (fosfoT3)
(ab78351), dilucin 1/500,000 en HeLa.
1) Sin tratar,
2) Tratadas con FBS + Caliculina A.
RabMAb: ventajas para WB
Alta afinidad mayor factor de dilucin (hasta
1:500.000 en algunos RabMAbs)
Alta especificidad seal especfica, sin o
con muy poco ruido de fondo
Reconocen eptopos diversos ideal para la
deteccin de modificaciones post-
traduccionales (ej. fosforilacin, metilacin,
acetilacin)
Cada RabMAb has sido testado en WB en
muestras humanas, de ratn y rata para
determinar la reactividad
Ms de 4000 RabMAbs disponibles
Ms informacin: www.abcam.com/rabmabs
44
AbExcel anticuerpos secundarios

5 razones para usar secundarios AbExcel

Altamente testados
AbExcel conjugados a AP se pueden usar en
diluciones de 1/5000 a 1/50000
Con 1 vial de AbExcel conjugado a AP, se
pueden conseguir hasta 1.500 blots (usando
dilucin 1/5000 en 3ml leche/BSA)
AbExcel conjugados a HRP se pueden usar en
diluciones de 1/2000 a 1/20000
Con 1 vial de AbExcel conjugado a HRP, se
pueden conseguir hasta 600 blots (usando
dilucin 1/2000 en 3ml leche/BSA)

Ms informacin:
AbExcel: http://www.abcam.com/AbExcel

45
Bolgrafo Luminol para membrana
(ab166858)

La forma ms fcil y segura de calcular el peso molecular de la protena de

inters. Una vez las protenas han sido transferidas a la membrana:

Marca los estndares de PM con el boli Lumimol en la membrana

Contina con la hibridacin de la membrana segn tu procedimiento

habitual (bloqueo, etc)

Revela la membrana por quimioluminiscencia o colorimetra

Visualiza y localiza las bandas del estndar con pelcula o procesador

CCD

46
Contctanos

soportecientifico@abcam.com

Espaa: Telfono: 91 114 65 54, email: orders@abcam.com

Argentina: Tecnolab; Telfono: +54-11-4555-0010, email: patologia@tecnolab.com.ar

Chile: Biosonda; Telfono: +56-2-209-6770, email: ventas@biosonda.cl

Mjico: CTR Scientific; Telfono: +52-81-8158-0600, email: nallely.lopez@ctr.com.mx

Otros paises: Abcam; Telfono: +1-617-577-4200, email: us.orders@abcam.com

47
Promocin especial para participantes

20% descuento en los siguientes productos:

(hasta el 31 de mayo 2013)

Gama Optiblot
RAbMAbs
Gama AbExcel
Cdigo : SPWEB-XBIS1

48
Preguntas?

49