VALIDACIN DE

MTODOS ANALTICOS
Pablo Richter
 Introduccin

La validacin de un mtodo analtico tiene como objetivo

establecer por medio de estudios cientficos, que un
mtodo tiene las caractersticas de desempeo que son
adecuadas para cumplir los requerimientos de las
aplicaciones analticas pretendidas.
Una vez validada una metodologa analtica, el laboratorio
de ensayo deber fijar los intervalos de aceptabilidad para
el control de calidad de cada una de las propiedades
analticas del mtodo. Una metodologa, an cuando tenga
el carcter de mtodo estndar u oficial, debera ser
validada antes de ser utilizada en forma rutinaria.
 Introduccin
Las propiedades analticas que necesariamente debern ser
documentadas en un proceso de validacin, son la
siguientes:

Precisin al nivel de replicabilidad y repetibilidad

Exactitud
Incertidumbre
Intervalo de linealidad
Lmite de deteccin del mtodo
Lmite de cuantificacin del mtodo
 Campo de Aplicacin
El presente documento corresponde a una gua tcnica que
define los trminos y los procedimientos relativos a la
validacin de un mtodo de anlisis.

En todas las actividades de laboratorio es esencial

uniformar las definiciones y los mtodos de clculo para los
diferentes trminos. En este documento se establecen las
definiciones relativas a propiedades de mtodos analticos
que se utilizarn en los laboratorios de rutina del pas.
 Definiciones
CURVA DE CALIBRACIN: Representacin grfica
bidimensional, que muestra la variacin de la seal
analtica con la concentracin del analito. Esta ltima se
obtiene al graficar el valor obtenido de la seal analtica
(valor absoluto, altura, rea, etc.) versus las
concentraciones de los estndares respectivos.
SENSIBILIDAD: Propiedad analtica que se define como la
capacidad de un mtodo para discriminar entre
concentraciones (cantidades) semejantes de analito. La
sensibilidad de un mtodo analtico corresponde a la
pendiente de la curva de calibracin. Algunas veces se
expresa informando la razn entre el valor de seal
obtenida a una concentracin dada de estndar.
 Definiciones
LIMITE DE DETECCIN: Existen distintas
formas de definir los lmites de deteccin de un
mtodo de acuerdo a criterios estadsticos,
basados en el cuociente entre la magnitud de la
seal de la medida y el ruido de fondo producido
por el instrumento o por el blanco analtico.

a) Lmite de Deteccin IUPAC: Concentracin de

analito que origina una seal que puede
diferenciarse estadsticamente de un blanco
analtico.
 Lmites de deteccin y cuantificacin
Cul es la menor concentracin que podemos detectar o cuantificar con este mtodo
de anlisis?

S= Seal
Razn seal ruido S/n

LD => S/n = 3
n = ruido LC => S/n = 10
b) Lmite de Deteccin Instrumental (LDI):
Corresponde a la concentracin mnima de un compuesto
analizado que, sin la presencia de la matriz, un
instrumento puede detectar con una fiabilidad definida y
que es estadsticamente diferente de la respuesta
correspondiente al ruido de fondo obtenido por el
instrumento.

c) Lmite de Deteccin del Mtodo (LDM): Corresponde

a la concentracin mnima de un compuesto que puede
ser detectada en una matriz real, la cual es tratada
siguiendo todas las etapas del mtodo completo,
incluyendo separaciones y pretratamientos. Esta mnima
concentracin produce una seal detectable con una
fiabilidad definida, estadsticamente diferente a la seal
producto del blanco obtenido en las mismas condiciones.
 Definiciones
LMITE DE CUANTIFICACIN DEL MTODO (LCM):
Corresponde a la concentracin mnima de un analito que
puede ser cuantificada en una matriz real, la cual es
tratada siguiendo todas las etapas del mtodo empleado,
incluyendo separaciones y pretratamientos. Esta mnima
concentracin produce una seal cuantificable con una
nivel de confianza definido.

INTERVALO DE LINEALIDAD O DE DETERMINACIN:

Corresponde al intervalo de concentracin ms fiable de
medida para la determinacin analtica del analito. Este
intervalo esta comprendido entre la concentracin
correspondiente al del LCM y la concentracin mxima que
entrega el lmite de linealidad.
Definiciones

PRECISIN: Grado de concordancia de un

grupo de resultados entre s. Dispersin de estos
resultados alrededor de su media. Existen tres
formas de plantear un estudio de precisin:

Replicabilidad (Repeatability, within run precision)

Repetibilidad (Intermediate precision, within lab reproducibility)
Reproducibilidad (Reproducibility conditions, between lab precision)
Niveles de Precisin
Replicabilidad: Forma de plantear el estudio de precisin. Se define
como la dispersin de resultados originados por aplicaciones del mismo
mtodo a alcuotas de la misma muestra, para determinar el mismo
analito, en el mismo laboratorio, por el mismo operador y con las mismas
herramientas analticas, en un corto intervalo de tiempo.
Repetibilidad: Forma de plantear el estudio de precisin. Se define
como la dispersin de resultados originados por aplicaciones del mismo
mtodo a alcuotas de la misma muestra, para determinar el mismo
analito, en el mismo laboratorio, y al menos una de las siguientes
condiciones es diferente: analista, instrumento, da.
Reproducibilidad : Forma de plantear el estudio de precisin. Se define
como la dispersin de resultados originados por aplicaciones del mismo
mtodo a alcuotas de la misma muestra, para determinar el mismo
analito, en diferentes laboratorios, y en las siguientes condiciones:
diferente analista, diferente instrumento, igual o diferente da.

Esta propiedad analtica no se determina de forma rutinaria en un procedimiento de

validacin. Slo es aplicable a ejercicios de intercomparacin.
 Definiciones
EXACTITUD: Expresa la cercana entre el valor que es aceptado,
como un valor de referencia (material de referencia certificado) y
el valor encontrado (valor promedio) obtenido al aplicar el
procedimiento de anlisis un cierto nmero de veces. La exactitud
se expresa en trminos de error, generalmente como error
relativo (Ver ms adelante SESGO).

RECUPERACIN: Corresponde a la diferencia (en porcentaje)

entre la concentracin medida de un analito en una muestra
fortificada (a la que se le ha agregado una cantidad conocida de
estndar) y la concentracin medida en la misma muestra sin
fortificar, dividido por la concentracin de sustancia agregada.
 Definiciones
INCERTIDUMBRE: Se puede distinguir entre los siguientes
conceptos:

a) Incertidumbre genrica: Duda acerca de la composicin

qumica de un objeto o una muestra. Es lo contrario a
informacin.

b) Incertidumbre especfica: Intervalo de valores en que puede

encontrarse un resultado, una media de los mismos y el valor
considerado verdadero.

SELECTIVIDAD: Capacidad de un mtodo analtico para

originar resultados que dependan de forma exclusiva del
analito, para su identificacin y/o cuantificacin.
Error vs Incertidumbre

Resultado de un anlisis: 2,5 0,8 mg / Kg

Valor certificado: 2,9 0,2 mg / Kg

Error: 2,9 2,5 = 0,4 mg / Kg

Incertidumbre: 0,8 mg / Kg
PROCEDIMIENTOS
I. Calibracin del mtodo

1) Procedimiento para construir una Curva de

calibracin
Preparar una batera de estndares de concentracin conocida en el
solvente apropiado, dentro del intervalo de concentraciones en que
se estima que estarn las muestras a analizar. Posteriormente
determinar la seal analtica que origina cada una de las soluciones,
y
 Realizar una inspeccin preliminar, graficando los puntos
experimentales disponibles y verificando visualmente si existe
alguna desviacin de la linealidad y aproximadamente a partir de
qu valor sta se manifiesta.

A partir de la curva de calibracin estimar la parte lineal, obtener

la recta de calibracin: Y = S C + Yb, donde C es la masa o la
concentracin de la sustancia a ser cuantificada y S e Yb la
pendiente y ordenada en el origen de la recta, respectivamente.
Calcular los coeficientes S, Yb y r (coeficiente de correlacin)
para la curva de calibracin, descartando los puntos
preliminarmente eliminados en la etapa anterior. Calcular tambin
los lmites inferior (LI) y superior (LS) a partir de los cuales los
cuocientes (seal / masa) o (seal / concentracin) indiquen que
un punto est fuera del intervalo lineal LI = 0,95s y LS= 1,05s,
respectivamente.
 Verificar si existe algn punto preliminarmente incluido
en la curva de calibracin que, por comparacin con los
lmites de corte calculados en b) debera de ser excluido
(o sea, si el correspondiente cuociente (seal / masa) o
(seal / concentracin) es menor que LI o mayor que LS)
o si algn punto inicialmente excluido debera de ser
considerado para el clculo de la curva de calibracin.

Inclusin o exclusin de nuevos valores en la curva: Si el

examen hecho en c) indica que todos los puntos de la
curva preliminarmente incluidos (o excluidos) lo han sido
correctamente, el procedimiento est terminado. En caso
contrario, repetir las etapas de b) a d), incluyendo o
excluyendo los puntos necesarios, hasta que ningn valor
sea rechazado o considerado para el clculo de la curva
de calibracin.
EJEMPLO Curva calibrado
Los siguientes datos son las reas Conc. MVK, mM rea relativa
mximas relativas en 0,5 3,02
cromatogramas de disoluciones
1,5 9,00
patrn de metil vinil cetona
(MVK): 2,5 15,03
Determine la recta por el mtodo 3,5 21,42
de los mnimos cuadrados
4,5 27,03
Una muestra dio una seal para
MVK con un rea relativa de 10,3. 5,5 32,97
Calcule la concentracin de MVK 6,5 39,00
en la muestra. 7,5 44,20
Dos evaluaciones adicionales de
8,5 47,00
la muestra dieron como resultado
las siguientes reas; 10,8 y 10,1. 9,5 50,20
Calcule la precisin de esta
determinacin.
I. Calibracin del mtodo

2) Adicin de estndares
Cuando en el proceso de calibracin del mtodo, se determine que hay
interferencia de la matriz, utilizar el mtodo de la adicin estndar de
acuerdo a los siguientes procedimientos alternativos.

a) Con muestra sinttica: Utilizar una mezcla preparada en el

laboratorio de todos los componentes de la matriz de la muestra
sin el principio activo a determinar, luego enriquecer con estndar
a diferentes niveles de concentracin. Para preparar las soluciones,
en este caso se mantiene constante la cantidad de muestra
sinttica y se agregan cantidades variables del estndar.
(curva en presencia de matriz)
cido oxolnico
Curva de Calibracin de Estndar Curva de Calibracin de cido
de cido Oxolnico Oxolnico en matriz

Curva Oxolnico Curva Calibracin c. Oxolnico en Matriz

y = 42084x - 9036,7 y = 19162x + 4564,4

15000000 5000000
R2 = 0,9997 R2 = 0,9982
4000000
10000000
rea

3000000

rea
5000000 2000000
1000000
0 0
0,00 100,00 200,00 300,00 400,00 0,00 50,00 100,00 150,00 200,00
Conc: (ng/ml) Conc. (ng/g)
I. Calibracin del mtodo

2) Adicin de estndares

b) Con muestra: Cuando no es posible contar con una muestra

sinttica (o matriz blanco), trabajar directamente con una muestra
real. Determinar por duplicado la seal promedio del analito en la
muestra, con el mtodo a validar; una vez conocida la seal
promedio, proceder a enriquecer las muestras con estndar a
diferentes niveles de concentracin. Para preparar las soluciones,
en este caso se mantiene constante la cantidad de muestra tomada
y se agregan cantidades variables del estndar.

La ICH (International Conference Harmonization), recomienda preparar

muestras independientes por triplicado a cada nivel de concentracin.
EJEMPLO Adicin estndar
En una muestra de agua de mar se determina cobre por voltamperometra de
redisolucin andica (ASV). Una alcuota de 5 ml de muestra es diluida en un
matraz de 10 ml con agua destilada. Enseguida en tres matraces de aforo de
10 ml se agrega una alcuta de 5 ml de muestra y respectivamente se agrega
un volumen de 1, 2 y 3 ml de solucin estndar del analito de 10 g/l. Las
seales respectivamente obtenidas son: 4,11 A; 6,15 A; 7,99 A y 10,05
A. Determinar la concentracin de cobre en la muestra.

Cu, g/l Seal, A

0 4,1
1 6,15
ejemplo adicion estndar.xls
2 7,99
3 10,05
I. Calibracin del mtodo
3) Uso de estndar interno
Siempre que sea posible, particularmente en cromatografa, debe emplearse un
estndar interno (explicar diferencia con estndar subrrogate), puesto que
esto minimiza los errores debidos a la adsorcin en superficies, a la prdida
durante la extraccin, a las prdidas durante la evaporacin del solvente, o
durante los procedimientos de derivatizacin, y la irreproducibilidad debida a las
tcnicas de transferencia y de inyeccin.

Los estndares internos deben ser, idealmente, un homlogo del analito. Si esto
no es posible, se elegir un compuesto que posea propiedades fsico-
qumicas similares a las del analito. Las propiedades cromatogrficas del
estndar interno deben ser tales que eluya muy cerca del analito pero an as,
completamente resuelto de cualquier otra sustancia presente.
EJEMPLO Estndar Interno

Los siguientes datos de calibracin han sido obtenidos en una

determinacin de benzopireno (BP) por GC-MS. Como estndar interno
se utiliz pireno (C13). Construya la curva de calibrado correspondiente.
Area
Conc. BP, ppm Area BP Area estndar interno relativa

0,1 1100 8600 0,13

0,5 5200 8000 0,65

1,0 18000 12800 1,41

5,0 59000 9100 6,48

10,0 95000 7300 13,01

 II. Procedimiento para determinar la
sensibilidad

Una vez establecida la curva de calibracin de acuerdo al

procedimiento anterior, determinar la pendiente de la curva (S),
lo cual define la sensibilidad del mtodo.

Curva Oxolnico Curva Calibracin c. Oxolnico en Matriz

y = 42084x - 9036,7 y = 19162x + 4564,4

15000000 5000000
R2 = 0,9997 R2 = 0,9982
4000000
10000000
rea

3000000
rea 2000000
5000000
1000000
0 0
0,00 100,00 200,00 300,00 400,00 0,00 50,00 100,00 150,00 200,00
Conc: (ng/ml) Conc. (ng/g)
III. Procedimiento para determinar el
lmite de deteccin IUPAC
Medir la respuesta de al menos 10 blancos analticos independientes, de
los que se deduce la media YB y la desviacin estndar B. De acuerdo
a la IUPAC, el lmite de deteccin es:
YLD = YB + 3 B

A una seal YLD le corresponde una concentracin CLD, lo que se

consigue por extrapolacin grfica en la curva de calibrado.

YLD Curva de Calibrado CLD

El lmite de deteccin debe expresarse en

unidades de concentracin
 EJEMPLO LD
Para estudiar la sensibilidad de un mtodo de determinacin de qunina
en agua tnica se han realizado dos series de experimentos. En la
primera, se realizan 11 medidas repetidas del blanco (agua tnica en
ausencia de quinina suministrada por el fabricante) y se obtiene los
siguientes datos de intensidad de fluorescencia: 0,70; 0,74; 0,72; 0,71;
0,73; 0,71; 0,73; 0,74; 0,70; 0,69 y 0,75. En otra serie de experimentos,
al agua tnica sin quinina, se le aaden cantidades crecientes de quinina
para preparar 7 muestras artificiales, obtenindose los siguientes
resultados:

Quinina, ug/L 1,0 2,0 3,0 4,0 6,0 8,0 10,0

Intensidad de
Fluorescencia 2,51 4,60 6,52 8,60 12,71 16,68 20,81

Determinar la sensibilidad y lmite de deteccin del mtodo

ejemplo Limite deteccion quinina.xls

IV. Procedimiento para la determinacin del
Lmite de Deteccin Instrumental (LDI)
Agregar una alcuota de solucin estndar de analito en agua pura o
en el solvente adecuado, de manera de obtener una concentracin
correspondiente a 2-10 veces el LDI estimado (obtener el lmite
estimado alternativamente de valores reportados en literatura, catlogo
del equipo, razn seal / ruido, etc.). Someter esta solucin a medicin
(n replicas independientes de la solucin) en el sistema instrumental.
Se determina la seal analtica Yb y su desviacin estndar (B) de
acuerdo a la siguiente expresin:

B = ( (Xi- promedio)2/n-1)1/2

La expresin para calcular el lmite de deteccin instrumental es la

siguiente:

YLD = 3 B n 10
Despus utilizando la curva de calibrado se obtiene la concentracin en
el lmite de deteccin.
V. Procedimiento para la determinacin del
Lmite de Deteccin del Mtodo (LDM)
Determinar el lmite de deteccin del mtodo en una muestra
real, segn el siguiente procedimiento

1) Si la concentracin del compuesto analizado se sita entre 2 y 10

veces la concentracin del lmite de deteccin estimado, pasar a
la etapa siguiente. Si por el contrario la concentracin es
demasiado elevada, cambiar de muestra. Si la concentracin es
demasiado baja, ajustar mediante la adicin de un estndar la
concentracin del compuesto de inters, para situarla entre 2 y
10 veces el lmite de deteccin estimado.
2) Separar a lo menos 10 alcuotas de la muestra utilizada para
evaluar el LDM y realizar todas las etapas implicadas en el
mtodo analtico.
V. Procedimiento para la determinacin del
Lmite de Deteccin del Mtodo (LDM)

3) A partir de los resultados obtenidos, calcular la media y la

desviacin estndar (B) de las replicas:

La expresin para calcular el lmite de deteccin del mtodo es

la misma anterior.
VI. Procedimiento para la determinacin del lmite
de deteccin de un mtodo analtico, a travs
de la construccin de una curva de calibracin

1) Construir curva de calibracin, sobre matriz de muestra, en un

intervalo de concentraciones cercano al cero (lo ms bajo que pueda
ser detectado) (n 4) .

2) A partir de la curva, determinar:

a) Ordenada en el origen de la lnea de regresin: YB
b) Desviacin estndar de la regresin (se obtiene con cualquier programa
estadstico): y/x

2
(yi y i)
y/x
n 2

Donde:
yi: Valor observado del punto en la ordenada
i: Valor terico del punto obtenido por la prediccin del modelo de regresin
n: Nmero de puntos de la curva de calibracin (n 4)

c) Pendiente de la curva de calibracin: S

VI. Procedimiento para la determinacin del lmite
de deteccin de un mtodo analtico, a travs
de la construccin de una curva de calibracin

3) Calcular Lmite de deteccin:

Seal del Lmite de deteccin:

yLD = yB + 3 sy/x

Concentracin del Lmite de deteccin se calcula haciendo uso

de la ecuacin de la curva de calibracin.
VII. Procedimiento para la determinacin del
Lmite de Cuantificacin del Mtodo (LCM)

El lmite de cuantificacin del mtodo se determina

siguiendo el mismo procedimiento que el usado para el
LDM pero finalmente en la expresiones respectivas el
factor 3 se sustituye por 10.
VIII. Ej: Procedimiento para la determinacin del lmite de
cuantificacin de un mtodo analtico, a travs de la
construccin de una curva de calibracin

El lmite de cuantificacin del mtodo, a travs de una

curva de calibracin, se determina siguiendo el mismo
procedimiento que el usado para el LDM, pero finalmente
la expresin que debe considerarse es:

Seal del Lmite de cuantificacin:

yLCM = yB + 10 sy/x

Concentracin del lmite de cuantificacin a travs de la

curva de calibracin
IX. Procedimiento para calcular la
replicabilidad (Precisin)

Dentro del intervalo de 2 a 10 veces el lmite de cuantificacin

del mtodo, separar 10 alcuotas de una muestra y aplicarles
el mtodo completo, respetando las siguientes condiciones:
mismo analista, mismo instrumento y mismo da. Para realizar
los clculos que requiere el mtodo e informar los resultados,
utilizar las unidades apropiadas y el nmero de cifras
significativas necesarias.
La replicabilidad se expresa como la desviacin estndar
relativa o coeficiente de variacin (CV).
X. Procedimiento para calcular la
repetibilidad (Precisin)

Dentro del intervalo de 2 a 10 veces el lmite de cuantificacin

del mtodo, separar 10 alcuotas de una muestra y aplicarles
el mtodo completo, cambiando al menos una de las
siguientes condiciones: el analista, el instrumento o el da.
Para realizar los clculos que requiere el mtodo e informar
los resultados, utilizar las unidades apropiadas y el nmero de
cifras significativas necesarias.

Los resultados se expresan como desviacin estndar relativa

o coeficiente de variacin (CV).
XI. Procedimiento para determinar la
exactitud
Dentro del intervalo de determinacin, aplicar el mtodo
analtico completo n veces (n = 3-10 replicas) a una muestra
en la cual el parmetro a medir est certificado por un
organismo reconocido (material de referencia certificado).

Para determinar el error relativo del mtodo (E, %), aplique la

siguiente ecuacin:

(Vo Vc)
E(%) 100
Vc
Vc = Valor certificado;
Vo = media de los valores obtenidos aplicado el mtodo.

Adems, puede ser necesario hacer el clculo estadstico para

la equivalencia con el material de referencia, utilizando el test
de varianzas homogneas
XI. Procedimiento para determinar la
exactitud

Si no existe o no est disponible el material de referencia, la determinacin de

la exactitud puede llevarse a cabo de acuerdo a una de las siguientes
posibilidades, y en siguiente orden de prioridad:

1) Comparacin del mtodo en la misma muestra, con un mtodo

absoluto

2) Comparar el mtodo con un mtodo independiente, ya sea ste de

referencia o validado previamente.

3) Recuperacin en una matriz real con 2 niveles de concentracin

distintos. Los niveles de concentracin deben estar, en un caso entre 2
y 10 veces el LCM y en el otro, entre 20 y 30 veces el LCM.

4) Intercomparacin entre a lo menos 2 laboratorios que utilicen

metodologas validadas.
XII. Procedimiento para determinar la
recuperacin
Analizar una muestra real y en paralelo analizar la misma
muestra a la que se ha agregado una concentracin dada de
estndar. La concentracin final debe estar dentro del rango de
determinacin del mtodo. Calcular la recuperacin de acuerdo
a la siguiente expresin:

(Cs C)
Recuperacin (%) 100
Ca

Cs = concentracin de la muestra fortificada

C = concentracin en la muestra no fortificada
Ca= concentracin agregada.
XIII. Procedimiento para el clculo de
la incertidumbre

Cuantificacin de los componentes de incertidumbre.

Una forma comn de presentar las diferentes contribuciones a la

incertidumbre de la medicin total es usar los diagramas de causa y efecto.
Este enfoque puede resultar muy til cuando se estudia o cuantifica
componentes de incertidumbres individuales.

Se ha demostrado, sin embargo, que en algunos casos esta metodologa

subestima la incertidumbre de las mediciones, dado que es difcil poder incluir
todas las posibles contribuciones de incertidumbre en tal enfoque.

En este contexto, el grupo de expertos en calidad y metrologa de Nordtest

(2004) ha propuesto el modelo para el clculo de la incertidumbre en el que
la repetibilidad (P. intermedia) de las mediciones se combina con la estimacin
del sesgo del mtodo. As, usando el control de calidad existente y los datos
obtenidos en la validacin del mtodo analtico, la probabilidad de incluir todas
las contribuciones de incertidumbre se maximiza.
Sesgo: Diferencia entre el valor medio medido a partir de una serie de resultados de ensayo y un valor de referencia aceptado (un valor
certificado o nominal).
XIII. Procedimiento para el clculo de
la incertidumbre
En este plano, un laboratorio puede combinar dichos componentes individuales
en 2 tipos de incertidumbre: incertidumbre derivada de la repetibilidad
(P. Intermedia) del mtodo (urep) y la incertidumbre derivada del
sesgo (usesgo).

La manera ms comn de estimar los componentes del sesgo son: el

uso de material de referencia certificado, participacin en rondas
interlaboratorios o ensayos de recuperacin.
XIII. Procedimiento para el clculo de
la incertidumbre

Clculo de Incertidumbre Expandida (U).

Para realizar el clculo de U, se deben determinar previamente las dos
incertidumbres estndares antes expuestas.

Clculo de incertidumbre repetibilidad del mtodo (urep):

*t (0.95, n 1)
urep = n

Donde:
= Desviacin estndar al nivel de repetibilidad.
t = Coeficiente de student para un 95% de nivel de confianza.
n = nmero de datos.
XIII. Procedimiento para el clculo de
la incertidumbre

Clculo de incertidumbre derivada del sesgo (usesgo):

usesgo = (sesgo) 2 (uCER) 2

Donde:

sesgo = el valor puede ser determinado alternativamente por medio del

anlisis de un material de referencia certificado, participacin en rondas
interlaboratorios o ensayos de recuperacin .

u(CER) = Incertidumbre del material de referencia certificado o del patrn de

referencia (valor certificado) utilizado en el ensayo de recuperacin
XIII. Procedimiento para el clculo de
la incertidumbre

Finalmente la incertidumbre expandida (U) del proceso analtico, se

expresa combinando ambas incertidumbres antes mencionadas, considerando
un factor de recubrimiento igual a 2:

U= 2 (urep) 2 (usesgo) 2

Incertidumbre Expandida (U): Cantidad que define un intervalo alrededor del

resultado de una medicin que se espera que abarque una gran parte de la
distribucin de valores que se podran atribuir razonablemente al mensurando,
para un cierto nivel de confianza. Una Incertidumbre expandida (U) se calcula
de una incertidumbre estndar combinada (u) y un factor de cobertura k
usando: U = k x u.
 EJEMPLO Calculo incertidumbre
Determinacin de BTEX
Se lleva a cabo una determinacin de benceno, tolueno, etilbenceno y xilenos
(m+p, o) en una muestra de agua.
El estndar de calibracin corresponde a una solucin en metanol que certifica
que las concentraciones de los compuestos son las nominales 0,5%.
El sesgo del mtodo fue determinado a travs de un ensayo de recuperacin,
con los siguientes datos (O: valor promedio obtenido; R: valor de referencia):

Benceno Tolueno E-Bz (m+p)-XIL o-XIL

g/g g/g g/g g/g g/g
O R O R O R O R O R

10,2 11,0 9,9 11,0 11,5 11,0 25,0 11,0 11,1 11,0
Determinacin de BTEX
En la validacin del mtodo analizaron separadamente 8 alcuotas
de una muestra real obtenindose las siguientes concentraciones:

N g/g BEN g/g TOL g/g ET-BEN g/g (m+p)-XIL g/g o-XIL

1 43,42 48,62 32,14 44,15 14,15

2 43,41 48,44 32,17 44,64 13,07

3 43,52 48,20 31,36 44,67 13,59

4 43,60 48,27 31,14 43,68 13,06

5 43,61 48,41 31,91 44,22 12,91

6 43,57 48,56 31,80 44,67 12,96

7 42,17 47,63 31,21 45,33 13,19

8 42,29 47,70 31,25 43,03 12,80

Ejemplo incertidumbre.xls
 1. Para la determinacin analtica de nitrofurantona en formas farmacuticas se aaden cantidades crecientes de la
droga de la droga en dimetilformamida (DMF). En seguida se mide la respuesta instrumental (seal analtica) de cada
solucin y se obtienen los siguientes datos:
CONCENTRACIN Respuesta
mg/l Instrumental
0 0,01
0,5 0,058
1 0,11
2 0,225
4 0,445
6 0,67
8 0,89
10 1,08
12 1,1
15 1,12
20 1,11

(a)Determine la Sensibilidad del mtodo.

Por otra parte, al no disponer de un material de referencia certificado, se prepara una muestra artificial de tableta que contiene 750
mg de excipientes comunes (estereato de magnesio, talco, almidon, colorante, gelatina etc.) y 250 mg de nitrofurantoina pura. Una
porcin de 10 mg de muestra artificial se agrega en un matraz de aforo de 1 litro y se afora con DMF. A la solucin resultante se le
determina su respuesta instrumental dando un valor de 0,272. (b) Determine la exactitud del mtodo (error relativo) e indique si
hay interferencia por parte de los excipientes de la formulacin.
10 muestras que contienen slo la mezcla de excipientes (sin nitrofurantona) son analizadas independientemente por el mtodo. Las
respuestas instrumental obtenidas son: 0,015; 0,010; 0,012; 0,015; 0,010; 0,012; 0,009; 0,010; 0,015; 0,008. (c) Determine el lmite
de deteccin del mtodo.
10 porciones de una muestra real de tabletas de nitrofurantona se analizan independientemente por el mtodo analtico y se obtienen
los siguientes resultados (mg): 250,35; 250,44; 249,36; 248,99; 250,98; 250,00; 249,98; 251,05; 250,39; 248,98. (d) Determine la
precisin del mtodo (desviacin estndar relativa).
Rechazo de datos dudosos
Un dato dudoso difiere excesivamente de la media.
La prueba estadstica Q se utiliza para decidir si un dato debe
retenerse o rechazarse.
Primero se calcula un valor de Qexp y se rechaza el dato
cuando el valor es mayor que el valor estadstico (Qcrit)

xq xn
Qexp , xq es el valor dudoso.
xm ax xm in
xn es el valor ms cercanoal valor dudoso.
Valores de Qcrit
Nmero Qcrit a 90% Qcrit a 95%
de Datos de probabilidad de probabilidad
3 0.941 0.970

4 0.765 0.829

5 0.642 0.710

6 0.560 0.625
 Ejemplo: Prueba Q
Valor (x) x2
Para las mediciones replicadas que 3.5 12.25
aparecen al lado, aplique la
prueba Q para el valor 2.5. Use 3.1 9.61
un Qcrit a 90% de confianza. 3.1 9.61
3.3 10.89
2.5 6.25
(x)=15.5 (x2)=48.61

Qcrit 0.642 para 5 valores y a 90% de probabilid ad.

2.5 3.1
Qexp 0.60
3.5 2.5
Qexp Qcrit , se retiene el valor.
EJEMPLO Dato dudoso
En el mundial de ftbol de Alemania 2006, al final de cada partido,
llevan a un par de jugadores para hacer la prueba del doping. En la
orina se determinan si hay substancias prohibidas (en este caso
efedrina).
Previamente el laboratorio que hizo el anlisis valid su mtodo con
muestras certificadas de efedrina en orina. Esta tena un contenido
certificado de 2,05 0,08 ng/ml. Al analizar esta muestra diez veces
de manera independiente se obtuvieron los siguientes valores en
ng/ml: 2,08; 2,14; 2,09; 2,21; 3,91; 2,01; 2,09; 1,99; 1,98; 2,05.
Indique: cul es el objeto, el analito y la muestra para el anlisis.
cul es la exactitud y precisin del mtodo que utiliza el laboratorio.
Qcrit (tabla (n=10) 0,464)

ejemplo prueba Q.xls

Cartas de Control

Una vez que ha sido validada una metodologa y se comienza con su

aplicacin en anlisis de rutina, todos los controles de calidad
relacionados con las propiedades analticas deben ser documentadas a
travs de la construccin de Cartas de Control, de forma tal que el
comportamiento del mtodo en el tiempo pueda ser trazable.

EJEMPLO carta control turbiedad.xls

GLOSARIO
 Alcuota: porcin bien definida (masa, volumen) de la muestra

Muestra: es la parte (alcuota) del objeto que contiene los analitos

Anlisis: someter una muestra a un proceso analtico para conocer informacin

qumica sobre la misma

Blanco analtico: Muestra, generalmente artificial, que no contiene el analito.

Tericamente no debera originar seal, si lo hace sta se denomina seal blanco.
El blanco analtico es un elemento de control de calidad utilizado en la rutina
analtica el que se procesa como una muestra ms en un anlisis

Interferente: Todo compuesto, todo elemento, toda partcula o todo factor que
afecte el resultado generado por un mtodo analtico

Determinacin (cuantificacin): proceso para conocer la cantidad

/concentracin de un analito (o familia) de una muestra que es analizada

Detectar: Accin de un instrumento para producir una seal y transducirla en una

magnitud fsica fcilmente medible. Proceso de medicin con fines cualitativos.

Identificar: proceso analtico cualitativo que implica un reconocimiento del analito,

a travs de las caractersticas qumicas o fisicoqumicas del mismo o de su
producto de reaccin

Caracterizar: accin de establecer los aspectos diferenciales de un objeto o

sistema, a partir de los resultados analticos
 Tcnica: principio cientfico que se utiliza para extraer informacin analtica.
Implica el empleo de un instrumento

Mtodo Analtico: corresponde a la Adaptacin especfica de una tcnica analtica

para un propsito de medicin seleccionado. Es un conjunto de operaciones
especificas para caracterizar cuali y/o cuantitativamente a un analito (o familia) en
una determinada muestra. Implica el empleo de un tcnica (instrumento)

Mtodo absoluto: es aquel mtodo de cuantificacin calculable que no se basa en

el empleo de estndares analticos

Procedimiento: descripcin pormenorizada de una metodologa analtica

Material de referencia: Material o sustancia, en el cual una o ms de sus

propiedades estn suficientemente bien establecidas, homogneas y estables, que
se emplean para calibracin, asignacin de valores a materiales o evaluacin de
mtodos analticos

Material de referencia certificado: son materiales de referencia que tienen

certificados uno o varios valores de sus propiedades (con sus incertidumbres
especficas) obtenidos por procedimientos especiales (Ejemplo: ejercicio de
intercomparacin) bajo la responsabilidad de un organismo competente e
independiente

Ejercicio de intercomparacin: conjunto de procesos de medida (mtodo)

llevados a acabo por diferentes laboratorios, bajo la coordinacin de un ente
competente, para analizar alcuotas de la misma muestra para determinar los
mismos analitos
Referencias
J.C. Miller and J.N.Miller, Statistic for Analytical Chemistry, Ellis Horwood Limited
edition, Chichester, England, 3rd edition, pag. 115-118, 1993.

M. Valcarcel, Principios de Qumica Analtica, Springer-Verlag Ibrica, Barcelona,

Espaa, 1999.

Norma IRAM 301:2000-Norma ISO/IEC 17025: 1999.

The Fitness for Purpose of Analytical Methods. A Laboratory Guide to Method

Validation and Related Topics. EURACHEM Guide. Editor: H. Holcombe, LGC,
Teddington: 1998.

Quantifying Uncertainty in Analytical Measurement. Guide EURACHEM- CITAC Guide:

2000.

Nordtest Report 537. 2004. Handbook for Calculation of Measurement Uncertainty in

Environmental Laboratories.

Norma ISO 9000: 2000.

IUPAC, Limit of Detection, Spectrochim. Acta 33 B, 242, 1978.

Centre d'expertise en analyse environnementale du Qubec. Protocole pour la

validation d'une mthode d'analyse en chimie DR-12-VMC. Edition 2000-03-01