Aquel que posee un conjunto de

propiedades que le dan la excelencia y por

la cual se produce el efecto esperado
cuando se administra de acuerdo a la
prescripcin del mdico y las
recomendaciones del fabricante.
 TIPO DE MUESTRAS CAMBIOS MICROORGANISMO
PRODUCTO OBSERVADOS
Soluciones Soluciones acuosas Hongos, mohos, bacterias,
simples Turbidez levaduras

Suspensiones Hidrxido de
aluminio-anticido Olor amoniacal Coliformes

Jarabes Jarabe BP Fermentacin Levaduras osmotolerantes

Separacin de fases,
decoloracin, sabor y Pseudomona aeruginosa,
Emulsiones Aceite en agua olor desagradables Aspergillus flavus, Aspergillus
niger

Tabletas Nitrazepam Decoloracin y olor Hongos

extrao
Cremas Cosmticos Crecimiento Hongos
algodonoso
 PRODUCTO TRANSFORMACIN MICROORGANISMO
Gotas de atropina Prdida de atropina Corynebacterium
spp., Pseudomonas
spp.
Mixtura de aspirina Hidrlisis de la aspirina Actinobacter lwoffii
Aspirina y codena Hidrlisis de la aspirina Actinobacter lwoffii
tabletas

Prednisolona Transformacin Aspergillus spp

tabletas localizada de
esteroides
Hidrocortisona Transformacin de la Cladosporium
crema hidrocortisona herbarum
 Materias primas

CALIDAD MICROBIOLGICA

Manufactura
y productos terminados
 CONTROL MICROBIOLGICO
CONTROL MICROBIOLGICO DEFICIENTE

Proceso de produccin de un
medicamento

Presencia de
microorganismos (patgenos)

Alteraciones del producto

Problema de Prdidas Descrdito

salud pblica econmicas de la
empresa
 TIPOS DE CONTAMINACIN
CONTAMINACIN CONTAMINACIN
PRIMARIA SECUNDARIA
TIPOS DE CONTAMINACIN
CONTAMINACIN TERCIARIA

CONTAMINACIN CUATERNARIA
 FACTORES DE CONTAMINACIN

Personal Procesos
Instalaciones Envases
Agua Almacenamiento
Aire Transporte
Equipos Expendio
Materias primas Uso
Transmisin de la contaminacin:

1. Por la boca
2. El cabello: caspa, pelo
3. La piel
4. Por heridas
5. Por enfermedades entricas
6. Por hbitos de higiene inadecuados.
7. Por el comportamiento.
N de partculas liberadas / min, de acuerdo con el movimiento
Bacterias Enterobacterias Hongos
Streptomyces E. coli Aspergillus
Micrococcus Salmonellas Penicillium
Alcaligenes Enterococos Rhizopus
Corynebacterium Botrytis
Pseudomonas Fusarium
Acinetobacter
Aeromonas
Chromobacterium
 Gnero Streptomyces
Bacilos normales Gram (+): Bacillus subtilis
Microccocus
Hongos: Penicillum, Aspergillus, Cladosporium,
Fusarium.
Levadura: Torulopsis
 Bacterias: Bacillus, Clostridium

Hongos: Penicillium, Aspergillus, Rhizopus,

Fusarium

Levaduras: Saccharomyces
 GNERO ESPECIE PATOGENICIDAD ALTERACIN
Escherichia (5 esp.) coli Intestinal, urinario y ocular Fermentacin

Salmonella (10 esp.) typhi Fiebre tifoidea

cholerae suis Intestinal - salmonelosis
Shiguella (4) dysenteriae Intestinal
Klebsiella (7) pneumoniae Tracto respiratorio
Serratia (10) marcescens Pigmentacin
Proteus (4) vulgaris Tracto urinario
Enterobacter (13) aerogenes Oportunista Fermentacin
Citrobacter (9) freundii Oportunista
Edwarsiella (4) tarda Oportunista intestinal
Yersinia (11) pestis Intestinal
Hafnia alvei Oportunista
Erwinia (10) amylovora Vegetales
 GNERO ESPECIE PATOGENICIDAD ALTERACIN
Pseudomonas Patgeno oportunista Productos
(76 especies) farmacuticos
Tracto urinario
Bacilos Gram (-)
aeruginosa Infecciones oculares
Rectos o
ligeramente curvos Contaminaciones
hospitalarias
No forman esporas
Quemaduras Pus azul
Aerobios fluorescens Contaminacin bolsas
de sangre
T crecimiento Medicamentos y
ptimo: 30-37C. alimentos,
putrefaciens produce
Oxidasa (+) pigmentacin y
H2S
 GNERO ESPECIE PATOGENICIDAD
Staphylococcus aureus Lesiones en piel
(47 especies)
Osteomielitis
Cocos Gram (+)
Intoxicacin
Aislados, en alimentaria
pares o en epidermidis
cadenas

Temperatura
de crecimiento:
30 37C
Gnero Clostridium
131 especies: C. botulium, C. perfringens, C. tetani

Bacilos Gram (+) en cultivos jvenes.

Dispuestos en cadenas cortas con extremos redondos.

Endosporas ovales o esfricas.

Temperatura ptima de crecimiento entre 10 65C.

Anaerobios obligados o estrictos.

 Los medicamentos no estriles presentan una
pureza microbiolgica relativa.

POR QU?
EXAMEN MICROBIOLGICO A MEDICAMENTOS NO
ESTRILES:

MTODO GENERAL <61>: Examen Microbiolgico de

Productos No Estriles: Pruebas de Recuento Microbiano

MTODO GENERAL <62>: Examen Microbiolgico de

Productos No Estriles: Pruebas de Microorganismos
Especficos

MTODO GENERAL <1111>: Criterios de aceptacin

para preparaciones farmacuticas y sustancias de uso
farmacutico.
Estima el nmero de microorganismos
aerobios mesfilos viables.

Aplica a toda clase de artculos

farmacuticos no estriles, desde
las materias primas hasta las formas
terminadas.

OBJETIVO
Cuantificar las bacterias mesfilas y
los hongos que pueden crecer bajo
condiciones aerbicas.
 CULES SON LOS MICROORGANISMOS
AEROBIOS?

Son aquellos que necesitan oxgeno para su

crecimiento.

CULES SON LAS BACTERIAS MESFILAS?

Aquellas que se desarrollan mejor a temperaturas

moderadas (30 37C).

Rango entre 25 y 43 C.
Objetivo
Cuantificar la cantidad de unidades formadoras
de colonias (ufc) en una cantidad determinada
de muestra.

Agar digerido de casena - soya (Agar CASOY-

agar de casena de soya).
Condiciones de incubacin: 30 a 35C de 3-5
das.
Si se presentan ufc de hongos en este
medio, stas forman parte del RTMA.
Objetivo

Cuantificar el nmero de ufc de hongos y

levaduras encontrados en una cantidad
determinada de muestra.

Se usa agar Sabouraud dextrosa.

Condiciones de incubacin: 20 a 25C de
5-7 das.
Si se encuentran ufc de bacterias, stas
se cuentan para el RTCHL.
Requerimientos Fsicos
Temperatura adecuada
pH adecuado del medio de crecimiento
Presin osmtica adecuada o actividad acuosa aw
Libre de presin hidrosttica perjudicial
Libre de radiacin perjudicial
 <1112> ACTIVIDAD ACUOSA O ACTIVIDAD DE AGUA

Es la relacin entre la presin de vapor del agua del producto

farmacutico y la del agua pura a la misma temperatura.

aw = (P / Po)T
El valor de aw nos da una idea de la cantidad de agua disponible
metablicamente para que un microorganismo se desarrolle.
Es la cantidad de agua disponible para reaccionar qumicamente
con otras sustancias y provocar el crecimiento microbiano.
 Microorganismo aw Microorganismo aw
BACTERIAS > 0.910 Pseudomonas fluorescens 0.957
Escherichia coli 0.950 LEVADURAS > 0.870
Salmonella sp. 0.950 S. cerevisiae 0.90 - 0.94
Staphylococcus aureus 0.860 Rhodotorula 0.900
Clostridium botulinum E 0.970 MOHOS >0.700
Clostridium perfringens 0.970 Aspergillus flavus 0.78
Clostridium botulinum A, B 0.950 Aspergillus clavatus 0.85
Bacillus subtilis 0.900 Penicillum expansum 0.85

La actividad de agua "aw", es un trmino que se emplea

para indicar la disponibilidad del agua.
Qu tipo de microorganismos puede contaminar
ms fcilmente a un producto en polvo?

Cmo podra disminuirle la actividad acuosa (aw) a

un granulado?
 pH

Indica los H+ en el medio o producto e incide

sobre las reacciones qumicas y bioqumicas.

ptimo Mnimo Mximo

Bacterias entre 6,5 7,5 4,5 9,0
Hongos entre 4,0 6,0 2,0 11,0
Levaduras 2,0 9,0
BACTERIA MINIMO OPTIMO MAXIMO
P. aeruginosa 3.0 6.6 - 7.0 11.0
S. typhi 4.0 - 4.5 6.5 - 7.2 8.0 - 9.6
E. coli 4.3 6.0 - 8.0 9.0
Staphylococcus 4.2 6.8 - 7.5 9.3
Qu hara para evitar la contaminacin por
coliformes en un jarabe?

Qu hara si un producto farmacutico que est

en proceso de fabricacin presenta contaminacin
por coliformes?
 FACTOR INTRNSECO
PRESIN OSMTICA
Las membranas semipermeables de las clulas
pueden romperse por cambios en la presin osmtica
o puede dar origen a la contraccin de la membrana y
la deshidratacin del microorganismo.
REQUERIMIENTOS NUTRICIONALES
Agua
Nutrientes: fuentes de C, H, N, P, S, Mg, Fe, Ca
Minerales en trazas: Zn, Mn, Co, Cu, Mo
Oxgeno: potencial REDOX apropiado
Factores de crecimiento orgnicos
Libres de sustancias qumicas inhibitorias
(preservantes, antibiticos o desinfectantes)
 Potencial de xido reduccin (Redox)
(Eh)

Prdida o ganancia de
electrones

El Eh indica las relaciones de los microorganismos vivos

con el oxgeno.
Los microorganismos aerobios requieren valores redox
positivos (ambiente oxidante) y los anaerobios negativos
(ambiente reductor). Cada tipo de microorganismo slo
puede vivir en un estrecho rango de valores redox.
 Temperatura de almacenamiento
Tiempo de duracin del producto en estante
Humedad relativa
Modo de acondicionamiento
 Muestreo
Preparacin de muestras
Medios de cultivo
Tcnicas de recuento oficiales
Pruebas para microorganismos especficos
Tinciones generales
OBJETIVO
Conocer la calidad microbiolgica de un lote de
producto o controlar un proceso o un rea.

PROCEDIMIENTO
Plan de muestreo y criterios de decisin.

MUESTRA:
REPRESENTATIVA Y
LIBRE DE SESGOS
TOMA DE MUESTRAS
Toma asptica y en recipientes estriles

Lquidas: Gran cantidad homogenizar

Slidas: Volumen grande tomar muestra de

diferentes sitios

Superficies recoger microorganismos en mota

de algodn, enjuagues o cintas adhesivas
1-PRUEBAS DE APTITUD DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Esterilidad del medio

Medio adecuado = no presenta ningn crecimiento

Promocin del crecimiento

Medio adecuado = si se produce crecimiento de

microorganismos
OBJETIVO
Establecer la habilidad de la prueba para detectar los
microorganismos que estn presentes en el producto
farmacutico.

SE DEBE
Confirmar si al presentarse un cambio en el
desarrollo de la prueba o un cambio en el producto,
esto puede afectar el resultado de la prueba.
 Promocin del crecimiento
del medio de cultivo- recuentos

Cundo realizar esta prueba?

Cada lote de medio que viene preparado o listo, o a
cada lote de medio preparado a partir de un medio
deshidratado o realizado a partir de sus componentes.

Medios: Agar o caldo de casena de soya (Agar

CASOY). Agar Sabouraud dextrosa en placas o tubos

Microorganismos: Cepas certificadas segn ATCC

(AmericanType Culture Collection)
 ASEGURAMIENTO DE CALIDAD
MICROORGANISMOS CERTIFICADOS PARA LA PRUEBA DE
PROMOCIN DEL CRECIMIENTO Y LA ADECUACIN DEL
MTODO ANALTICO
MICROORGANISMO REFERENCIA DEL MICROORGANISMO
BACTERIAS AEROBIAS
Staphylococcus aureus ATCC 6538
Bacillus subtilis ATCC 6633
Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027
BACTERIA ANAEROBIA
Clostridium sporogenes ATCC 19404, ATCC 11437
HONGOS
Candida albicans ATCC 10231
Aspergillus niger ATCC 16404
 Promocin del crecimiento
del medio de cultivo- recuentos

Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Bacillus

subtilis, Candida albicans, Aspergillus niger

1. Activar las cepas (con no ms de 5 subcultivos)

Las suspensiones de microorganismos se realizan en:

Solucin tamponada de cloruro de sodio peptona pH 7.0

Solucin tampn de fosfato pH 7.2

Se pueden usar en 2 horas, pero guardadas a 2 - 8 duran

hasta 24 horas.
2. Procedimiento
100 UFC S. aureus 100 UFC Ps. aeruginosa 100 UFC B. subtilis

o o o

Agar CASO Caldo CASO Agar CASO Caldo CASO Agar CASO Caldo CASO

100 UFC C. albicans 100 UFC A. niger

Agar Saboureaud-dextrosa Agar Saboureaud-dextrosa

Incubar cada placa o tubo segn condiciones para cada microorganismo

y segn monografa USP.
3. Interpretacin

Para el medio slido

El crecimiento obtenido no debe diferir por un factor mayor

de 2 al valor calculado para el inculo estandarizado.

Para un inoculo preparado recientemente, el crecimiento de

los microorganismos es comparable a aquel obtenido con
un lote de medio previamente aprobado y ensayado.

Para el medio lquido

Es adecuado si el crecimiento de los microorganismos es

comparable a aquel obtenido con un lote de medio
ensayado anteriormente y aprobado.
 PROCEDIMIENTOS ESTABLECIDOS PARA
RECUENTOS
1. Recuento estndar en placa por siembra en profundidad
Recuento total de microorganismos mesfilos aerobios

-1 1 mL 15 mL de agar Casoy
Dilucin 10 o la ltima
dilucin de la muestra Incubar 35aa30-35C
37C
Incubar
preparada
1mL Durante 48 a 72 horas

2. Mtodo en placa por extensin en superficies

 PROCEDIMIENTOS ESTABLECIDOS
PARA RECUENTOS
3. Tcnica de filtracin por membrana

4. Tcnica del nmero ms

probable (NMP)

Se basa en la determinacin
de presencia o ausencia de
microorganismos en rplicas
de diluciones consecutivas.
RESULTADO E INTERPRETACIN DE LA PRUEBA DE
ADECUACIN DE LOS RECUENTOS
Cuando hay inhibicin del crecimiento por la
muestra:
Se debe neutralizar / remocin de la actividad antimicrobiana
1. Neutralizacin, diluye o filtra.
2. Despus se inocula con la suspensin de microorganismos.

Inactivante o neutralizante

Depende del agente preservante usado en el producto:

Para halgenos clorados: el tiosulfato

Para parabenos: compuestos de amonio cuaternario, el

polisorbato, la lecitina.
 La mayora de los mtodos de microbiologa son
mtodos basados en el crecimiento

En Citomertia de Flujo no se necesita una etapa de

crecimiento (multiplicacin de las clulas)

Basado en el marcaje fluorescente de clulas

individuales intactas

Resultados disponibles el mismo da de produccin*

(*depende de las aplicaciones)

Resultados no dependientes de las condiciones de

crecimiento
Principio de la citometra de flujo
Muestra marcada
Clula de flujo :
Flujo laminar

Deteccin de clulas Detector 1

individuales
Laser

Detectores sensibles
Detector 2

Muestra
Criterios de viabilidad:
Sustrato de viabilidad
Actividad enzimtica
Integridad de la membrana Enzima

Aplicable a:

Bacterias anaerobias Fluorescencia libre Microorganismo

Bacteria aerobias
Hongos (Levaduras y hongos, incluyendo micelios)
Esporas y formas vegetativas
 Tests de esterilidad del producto final
Resultados en 24 a 72 horas el plazo depende de la
aplicacin

Recuento directo en las materias primas, productos

intermediarios y finales (carne, leche cruda, frutas, zumos,
concentrados)
Resultados en 45 minutos
Total Viable Count
Fungi Count

Test agua de proceso

Resultados en 30 minutos
VALIDACIN

Series de acciones documentadas que demuestran que

algn procedimiento, proceso, equipo, material, actividad o
desempeo de un sistema son adecuados y consistentes y
que conllevan a los resultados esperados de lotes
uniformes que cumplen las especificaciones requeridas y
los atributos de calidad.
 ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD
PRUEBA DE VALIDACIN DEL MTODO
ANALTICO
Objetivo

Demostrar la validez del mtodo de la prueba para

recuperar un nmero pequeo de microorganismos en
presencia del producto.

Consiste en evaluar la preparacin de la muestra para la

prueba adicionando los microorganismos al medio que
contiene el producto.
 ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD
VALIDACIN DEL MTODO DE ANLISIS
Muestra 1 1 mL de inculo de
medio de dilucin E. coli.
(buffer de fosfato
Muestra 2 preservativo + 1 mL de inculo
pH 7.2) +
+ (Ej: metilparabeno) + de St. aureus
inactivante
Muestra 3 (polisorbato 20) 1 mL de inculo de
Ps. aeruginosa
Muestra 4 1 mL de inculo de
Salmonella
Seguir procedimiento segn monografa
Resultado:

Si hubo crecimiento, LA PRUEBA ES VLIDA

No hubo crecimiento, LA PRUEBA NO ES VLIDA, proceder a mejorar el mtodo

de inactivacin del preservativo.
 EXAMEN MICROBIOLGICO:
MICROORGANISMOS ESPECFICOS
Con estas pruebas se determina la ausencia o el lmite de
ocurrencia de microorganismos especficos que pueden ser
detectados bajo las condiciones aprobadas en los mtodos
oficiales.

PRUEBAS PARA ASEGURAMIENTO DE LAS PRUEBAS

Propiedades de promocin del crecimiento e inhibicin del

crecimiento (para los medios).

Adecuacin de la prueba
 ETAPAS DE BSQUEDA

Enriquecimiento
Aislamiento
Identificacin bioqumica
Identificacin serolgica
 EXAMEN MICROBIOLGICO
MICROORGANISMOS ESPECFICOS
Staphylococcus aureus Pseudomonas aeruginosa
Familia Staphylococcaceae
Bacilos Gram (-).

Bacterias Gram (+).

Rectos o ligeramente
Forma esfrica, agrupados curvos, muy pequeos.
en racimo o aislados.
Oxidasa (+).

Fermentadores de manitol.

Ps. aeruginosa es lipasa

Coagulasa positiva.
positiva y formador del
pigmento piocianina.
 EXAMEN MICROBIOLGICO
MICROORGANISMOS ESPECFICOS
Familia Enterobacteriaceae

Escherichia coli Salmonellas

Bacilo pequeo Gram (-
) Bacilo pequeo Gram (-)
Oxidasa (-)
Oxidasa (-)
Fermentador de
glucosa y de lactosa Fermentador de glucosa

Indicador de
higiene
 EXAMEN MICROBIOLGICO
MICROORGANISMOS ESPECFICOS

Bacterias gram-negativas bilis-tolerantes

Clostridium
Candida albicans
PRODUCTO RTMA RTCHL MICROORGANISMO
(ufc/mL) (ufc/mL) ESPECIFICO
Sustancia para uso 103 102 De acuerdo al uso y via
farmacutico de administracin
Preparaciones no 103 102 Ausencia de E. coli
acuosas para uso oral
Preparaciones acuosas 102 101 Ausencia de E. coli
para uso oral
Uso rectal 103 102 -
Uso oromucosal 102 101 Ausencia de S. aureus y Ps.
aeruginosa
Uso vaginal 102 101 Idem y C. albicans
 PROBLEMA POSIBLE CAUSA
Sobrecalentamiento del medio durante la preparacin
Formacin de pH medido incorrectamente
precipitado Pobre calidad del agua
Pobre calidad del medio deshidratado

Pobre calidad del agua

Medio inhibitorio/ Formulacin inadecuada, ejemplo: suplementos mal
Productividad pesados
baja Sobrecalentamiento del medio durante la preparacin
Pobre calidad del medio deshidratado

Sobrecalentamiento del medio durante la preparacin

pH incorrecto
Selectividad Formulacin inadecuada
pobre Pobre calidad del medio deshidratado
Suplementos adicionados incorrectamente, ejemplo: con
el medio demasiado caliente o en alta proporcin
 USP 32-NF27. The Official Compendia of Standards. 2009. Vol 1.
The United States Pharmacopeial Convention. Rockville, p 76-
85.

VELEZ, MT., CUADRADO, B. Control Microbiolgico a

Medicamentos, cosmticos y desinfectantes. Editorial
Universitaria, Universidad de Cartagena. 2005. 108 pgs.

McFADDIN, J. Pruebas bioqumicas para la identificacin de

bacterias de importancia clnica. 3 a. Ed. Editorial Panamericana.
Bogot. 2003. 850 pags.

Diapositivas de la profesora Gloria Holgun.