Unidad1 Biotransformaciones PDF

Ingeniera de biorreactores I
Unidad 1. Biotransformaciones
1. Biotransformaciones
ndice
Unidad 1. Biotransformaciones..2
Presentacin de la unidad2
Propsitos de la unidad3
Competencia especfica...4
1.1. Concepto de biotransformacin..4
1.1.1. Procesos biocatalizados5
1.1.2. Fundamentos de la biocatlisis7
1.2. Teora de la catlisis enzimtica...10
1.2.1. Cintica enzimtica..11
1.2.2. Mecanismo de reaccin enzimtica..15
1.3. Factores que afectan la cintica enzimtica...17
1.3.1. Especificidad.18
1.3.2. Desnaturalizacin.19
1.3.3. pH...20
1.3.4. Temperatura..21
1.3.5. Inhibicin21
1.3.6. Inmovilizacin de enzimas..24
Actividades...26
Autorreflexiones...27
Cierre de la unidad..27
Para saber ms27
Fuentes de consulta28
Universidad Abierta y a Distancia de Mxico

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Presentacin de la unidad
Sabas que hoy en da las transformaciones biolgicas de la materia tienen gran auge
y que los bioprocesos son indispensables para la produccin de antibiticos, probiticos,
biopolmeros, biocombustibles?
La respuesta a esta pregunta tiene fundamento en las biotransformaciones, que son

aquellos procesos por los que una sustancia se convierte en otra a travs de una
reaccin bioqumica o un conjunto de ellas. Estos procesos pueden llevarse a cabo en
equipamientos especficos denominados biorreactores.
Para ser capaz de disearlos, es necesario, como punto de partida, que comprendas
cules son las sustancias y factores que pueden o no favorecer dichos bioprocesos; de
ah la importancia del estudio de esta primera unidad.
Para comenzar, debes considerar que la velocidad de una reaccin qumica se aumenta o
disminuye agregando una sustancia llamada catalizador.
En el caso particular de las reacciones qumicas orgnicas, estos biocatalizadores

reciben el nombre de enzimas, las cuales hacen posibles los procesos de degradacin de
algunas sustancias complejas; la transformacin de una en otra o la produccin de
nuevos compuestos a partir de otros ms pequeos (figura 1).
Nuevos compuestos
Sustrato
Enzima
Figura 1. Representacin del proceso de degradacin de una sustancia (sustrato) por una
enzima. Fuente: personas.ya.com, s.f.

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Sabas que las enzimas son importantes en los procesos industriales?
Por ejemplo, el detergente en polvo tiene unas enzimas llamadas lipasas que remueven
selectivamente las manchas de manteca, aceite o lpiz labial de la ropa, o bien, proteasas
que remueven las manchas de sangre y huevo.
Otra enzima de amplia aplicacin industrial es la lactasa, la cual se emplea para la

produccin de leche deslactosada, o las dextrinas que en presencia de una
amiloglucosidasa y la -amilasa se convierten en jarabes que se usan en industrias, tales
como: produccin de bebidas, confitera, fermentaciones, helados, alimentos infantiles y
muchas ms.
Estas enzimas son amigables con el ambiente ya que permiten remplazar compuestos
qumicos poco biodegradables, minimizar el uso del agua y por supuesto, el consumo de
energa.
Las enzimas que se usan actualmente son producidas por bacterias y hongos, las cuales
se reproducen en grandes equipos llamados biorreactores o fermentadores.
Estos equipos proveen a los microorganismos, los requerimientos necesarios para su

correcto crecimiento y reproduccin, tales como: mezclado, suministro de oxgeno,
nutrientes, control de pH, entre otros.
As, a travs del desarrollo de la presente unidad, conocers con ms detalles qu es y

para qu sirve una enzima, cuales son los factores que afectan su actividad y cmo
puedes medir la velocidad de una reaccin catalizada por este grupo de sustancias.
Propsitos de la unidad
El estudio de esta unidad te permitir:
Identificar que la mayor parte de las enzimas son

especficas de acuerdo al tipo de reaccin que
catalizan.
Diferenciar entre las seis clases principales de enzimas:
oxidorreductasas, transferasas, hidrolasas, liasas,
isomerasas y ligasas.
Describir el mecanismo enzimtico relacionado con el
proceso de catlisis.
Identificar aquellos factores que influyen en las

3
propiedades catalticas de las enzimas y por ende en su
actividad tales como: especificidad, temperatura, pH,
inhibicin e inmovilizacin.
Competencia especfica
Analizar el empleo de enzimas dentro de la biocatlisis y

biotransformaciones mediante el estudio de la cintica
enzimtica para describir la influencia de los distintos
factores fsico-qumicos.
1.1. Concepto de biotransformacin
Alguna vez te has preguntado cules son los bioprocesos y los mecanismos
responsables de que la fermentacin de la pia se lleve a cabo? o bien qu sustancias
son las responsables de la conversin del alimento en la boca, en el estmago y en el
intestino? Todos estos fenmenos, se llevan a cabo gracias al empleo de enzimas que
actan como biocatalizadores, a travs del proceso llamado biotransformacin.
Las biotransformaciones son aquellos procesos que emplean biocatalizadores (enzimas)

para la conversin de sustratos y obtener, a partir de ellos, un producto de amplia utilidad
(figura 2).
Glucosa
Fructosa
Sacarosa
Enzima
Figura 2. Ejemplificacin de un proceso de biotransformacin de sacarosa para produccin de
glucosa y fructosa. Fuente: genomasur.com, s.f.

4
Un ejemplo de biotransformacin tiene lugar cuando la leche se almacena en bolsas
hechas con estmagos de terneras recin sacrificadas (figura 3), as, las enzimas ah
presentes, dan lugar a la formacin de una sustancia semislida y fcil de almacenar que
conoces con el nombre de queso.
Figura 3. Produccin de queso. Fuente: emverde, s.f.
Te imaginas todo lo que puedes llegar a crear a partir de las biotransformaciones? Hoy
da se acepta incluso, que estos procesos sustituirn en gran parte a la sntesis orgnica,
con lo que, se evitarn problemas de contaminacin ambiental, ya que los
biocatalizadores son biodegradables, las condiciones suaves de trabajo implican poco
consumo energtico y por tanto, poco costo y emisin de contaminantes.
A travs del desarrollo del presente tema comprenders la importancia de la biocatlisis

en los procesos industriales, as como las ventajas y desventajas de su uso, lo que te
permitir analizar el empleo de enzimas dentro de los bioprocesos.
1.1.1. Procesos biocatalizados
Tal como se mencion en la introduccin del tema, el proceso de biotransformacin

tambin recibe el nombre de biocatlisis.
La palabra biocatlisis proviene de dos trminos: bio=vida y catlisis=acelerar. Dentro de

cada ser vivo, se realizan un sin nmero de reacciones qumicas, las cuales se efectan
de manera simultnea y a temperaturas moderadas. Las transformaciones se llevan a
cabo gracias a un conjunto de molculas orgnicas denominadas enzimas, que actan
como catalizadores biolgicos acelerando las reacciones dentro de los organismos.

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Por lo tanto, el objetivo de la biocatlisis es el uso de las enzimas y de dichas reacciones
con fines tecnolgicos. Para desarrollar procesos biocatalticos a gran escala, se suelen
seguir las etapas a continuacin citadas:
Etapas de un proceso biocataltico
Eleccin del organismo a cultivar: este debe contener una cantidad

importante de metabolitos que faciliten la generacin del producto de inters,
adems de ser fcil de conseguir y cultivar, as como, ser econmicamente
Etapa 1 viable.
Ensayos a nivel laboratorio: permite estudiar el comportamiento de los

microorganismos, es decir, conocer: su velocidad de crecimiento, condiciones
ptimas de nutrientes, pH, temperatura, oxgeno disuelto, velocidad de
Etapa 2 agitacin, entre otros.
Escalado a nivel planta piloto: permite determinar los parmetros de diseo,

materiales de construccin, operaciones unitarias, impurezas, corrosin,
Etapa 3 procedimientos operativos y problemas de trabajo y ambientales.
Escalado a nivel planta industrial: se genera el producto de inters a gran

escala y a niveles rentables.
Etapa 4
La naturaleza proteica de los biocatalizadores permite que las molculas se degraden

fcilmente, recuerda que en contraposicin hay catalizadores qumicos que, al estar
constituidos por metales pesados, son difciles de destruir. Sin duda, las ventajas de los
biocatalizadores no slo se limitan al aspecto ambiental, sino tambin al desarrollo de
diversas reas industriales, tales como: la farmacutica, la alimentara y la de cosmticos,
entre otras.
Para seguir documentndote y comprendiendo el subtema, es

recomendable que realices la lectura del documento
Biotransformacin, de la Escuela Politcnica del Ejrcito de
Ecuador (2012). El este texto encontrars el concepto de
biotransformacin y biocatlisis, los bioprocesos industriales en
los que est involucrado y finalmente, sus ventajas y desventajas.

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1.1.2. Fundamentos de la biocatlisis
De acuerdo a lo estudiado en el subtema anterior, las enzimas o biocatalizadores, son las

molculas encargadas de acelerar las biotransformaciones. Para comprender lo
previamente citado, a continuacin se explicar el mecanismo por el que ocurre una
reaccin qumica ordinaria.
En una reaccin qumica una o ms sustancias, dan lugar a la formacin de productos,

por una serie de reacomodos en los enlaces qumicos de los reactivos de partida. Para
que esto ocurra, se requiere de una cierta cantidad de energa, a la que se denomina
energa de activacin.
La forma ms comn de proporcionar dicha

energa, es a travs del incremento de la
temperatura, sin embargo, existen
transformaciones que deben verificarse a
temperatura ambiente. Para favorecer
estos procesos, se emplean catalizadores,
cuya funcin es disminuir la energa
activacin, requirindose de menos calor
para que se lleve a cabo la reaccin
(Figura 4).
Figura 4. Reaccin qumica catalizada. Fuente:
The oil crash, 2013.
Pues bien, las enzimas son complejos protenicos, encargados de disminuir la energa
necesaria para que se realicen reacciones qumicas al interior de los organismos
biolgicos (figura 5).
Figura 5. Biocatlisis de una reaccin. Fuente: Luengo, L., s.f.

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Estos biocatalizadores, actan sobre una sustancia denominada sustrato. Al unirse a l,
a travs del sitio activo (parte funcional de la enzima), se forma un complejo (complejo
enzima-sustrato) que posteriormente da lugar al producto de inters, tal como se
muestra en la siguiente figura 6:
Figura 6. Formacin de complejo enzima-sustrato. Fuente: Luengo, L., s.f.
De acuerdo a ITESCAM (s.f.), la actividad de algunas enzimas depende solamente de su

estructura como protena (tal como la observada en la figura anterior), mientras que otras
necesitan, adems, uno o ms componentes no proteicos, llamados cofactores.
El cofactor puede ser un ion metlico o bien una molcula orgnica, llamada coenzima,
aunque algunos enzimas necesitan de ambos. El cofactor puede estar fuertemente unido
a la protena (suele ser el in metlico, aunque puede igualmente ser un coenzima) y
recibe entonces el nombre de grupo prosttico, o dbilmente unido, por lo que en
realidad acta como un sustrato especfico de la enzima (co-sustrato; suele ser una
molcula orgnica, coenzima). El complejo enzima-cofactor catalticamente activo recibe
el nombre de holoenzima. Cuando se separa el cofactor, la protena restante, que por s
misma es inactiva catalticamente, se designa con el nombre de apoenzima (Figura 7).

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Cofactor Sitio activo Coenzima
Apoenzima
Holoenzima
Figura 7. Holoenzima-apoenzima. Fuente: Pearson Education, 2006.
Las enzimas se clasifican, de acuerdo al tipo de reaccin que catalizan, en:
Oxidorreductasas: catalizan reacciones de transferencia de electrones.

Transferasas: catalizan reacciones de transferencia de grupos qumicos
especficos.
Hidrolasas: catalizan reacciones de ruptura o de unin de grupos qumicos,
asociadas con la ruptura o la sntesis de una molcula de agua.
Liasas: catalizan la ruptura o la formacin de uniones qumicas, con la formacin
o eliminacin de enlaces dobles. Tambin llamadas Sintasas.
Isomerasas: desplazan grupos qumicos dentro de una molcula, sin cambiar la
frmula general del substrato.
Ligasas: catalizan reacciones de unin de molculas, asociadas con la hidrlisis
de nuclesidos trifosfato (principalmente ATP). Tambin llamadas Sintetasas.
Para concluir este tema, es importante enfatizar que los procesos de biotransformacin
o biocatlisis son importantes ya que reducen riesgos de contaminacin, esta es una de
las razones por las que se han convertido en una herramienta valiosa para la sociedad,
especialmente dentro del campo industrial.
La naturaleza proteica de los biocatalizadores permite que las molculas se degraden

fcilmente, recuerda que en contraposicin hay catalizadores qumicos que, al estar
constituidos por metales pesados, son difciles de destruir. Sin duda, las ventajas de los
biocatalizadores no slo se limitan al aspecto ambiental, sino tambin al desarrollo de
diversas reas industriales, tales como: la farmacutica, la alimentara, la de cosmticos,
entre otras.

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Es importante, para el control de un bioproceso, conocer aspectos fundamentales de los
biocatalizadores empleados, tales como los mecanismo de reaccin y cintica
enzimtica, mismos que sern abordados en el siguiente tema.
1.2. Teora de la catlisis enzimtica
Sabas que las enzimas son biocatalizadores que pueden llegar a acelerar unas 106
veces ms la velocidad de una reaccin? As, por ejemplo, un proceso de fermentacin
que sin ayuda de enzimas podra tardar hasta 180 das en efectuarse, bajo condiciones
normales de temperatura, puede reducirse de 15 a 20 das, interesante no crees?
Tal como estudiaste en el tema anterior, en todos los sistemas vivos se realizan
reacciones qumicas que por s mismas ocurren a velocidades muy bajas. Las enzimas
son herramientas moleculares que permiten que dichas reacciones ocurran a niveles
tiles para las clulas (figura 8).
Figura 8. La catlisis permite que las reacciones costosas transcurran por caminos mucho ms
sencillos. Fuente: WILEY-VCH, 2008.
Entonces Cmo se determina la velocidad con que se efecta una reaccin en

presencia de un biocatalizador?
Pues bien, esta incgnita ser respondida a travs del desarrollo del presente tema, que
tiene como propsito que analices cmo la presencia de enzimas dentro de una reaccin
qumica influencia la velocidad de la misma. Asimismo, identificars las herramientas que

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te permitirn calcular la afinidad que tiene un biocatalizador por un sustrato y la velocidad
mxima que puede llegar a adquirir.
1.2.1. Cintica enzimtica
La actividad enzimtica se mide cuantificando la velocidad de reaccin, que

generalmente se expresa como cambios de concentracin por unidad de tiempo, es decir,
la cintica enzimtica estudia la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas.
El comportamiento caracterstico de la mayora de las enzimas se describe a travs de

la ecuacin de Michaelis-Menten que muestra la relacin entre la velocidad inicial y la
concentracin de sustrato.
Tal como se estudi en el tema anterior, las reacciones qumicas que se efectan en
presencia de biocatalizadores, ocurren en dos etapas (figura 9):
Etapa 1. La enzima se une, a travs del sitio activo, al sustrato, formando el

complejo enzima-sustrato.
Etapa 2. El complejo enzima-sustrato da lugar a la generacin del producto,
liberando la enzima para volver a iniciar la etapa 1.
Etapa 2
Etapa 1
Figura 9. Etapas de una reaccin biocatalizada. Fuente: Biologacelular-iq.blogspot.mx, 2010.

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En la etapa 1 puede distinguirse que se forma el complejo enzima-sustrato, sin embargo,
cierta parte de dicho complejo, se disocia para restablecer la enzima libre y el sustrato; en
cambio, en la etapa 2, el complejo enzima-sustrato se disocia para generar la enzima libre
y el producto; de tal forma, que las velocidades con sus respectivas constantes cinticas,
para cada uno de los procesos individuales, se pueden expresar como:
1 = 1 [][] 1:
= [] 1:
= [] 2:
Donde:
k1, k2, k3=constantes microscpicas de velocidad
[E]=concentracin de enzima libre
[S]=concentracin de sustrato
[ES]=concentracin del complejo enzima-sustrato
Dado que la concentracin de enzima permanece constante a lo largo de la reaccin, la

concentracin total de enzima se puede expresar como:
[ ] = [] + []
Donde:
[ET]=concentracin total de enzima
Despejando [E] de la expresin anterior, se tiene que:
[] = [ ] []
Sustituyendo la ecuacin anterior en la expresin de 1 = 1 [][], se tiene:
1 = 1 ([ ] [])[]
= [ ][] [][]
Este modelo cintico adopta la hiptesis del estado estacionario, segn la cual la
concentracin del complejo enzima-sustrato es pequea y constante a lo largo de la
reaccin. Por tanto, la velocidad de formacin del complejo enzima-sustrato (v1) es igual a
la de su disociacin (v2 + v3):
1 = 2 + 3

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Entonces, sustituyendo en esta expresin, las ecuaciones respectivas de velocidad, se
tiene:
1 [ ][] 1 [][] = 2 [] + 3 []
Multiplicando por 1/k1:
1
(1 [ ][] 1 [][] = 2 [] + 3 []) ( )
1
2 3
[ ][] [][] = [] + []
1 1
Despejando la [ES]:
2 3
[][] + [] + [] = [ ][]
1 1
2 3
[] ([] + + ) = [ ][]
1 1
2 + 3
[] ([] + ) = [ ][]
1
[ ][]
[] = 2 +3
[] +
1
2 +3
Sustituyendo 1
= , se tiene:
[ ][]
[] =
+ []
Donde:
km=constante de Michaelis-Menten
Sustituyendo la expresin anterior, en la ecuacin de velocidad de formacin del producto,

se tiene:
= 3 = 3 []

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3 [ ][]
=
+ []
Si la velocidad mxima de la reaccin (Vmax) se alcanza cuando toda la enzima se

encuentra unida al sustrato, es decir, = 3 [ ], sustituyendo en la ecuacin anterior,
se obtiene que:
[]
=
+ []
Esta expresin es conocida como la ecuacin de Michaelis-Menten.
A partir del modelo previamente citado, se realiza el clculo de las constantes cinticas
Vmax y km.
De acuerdo a Ehu (s.f.), la constante de Michaelis-Menten (km) es un parmetro cintico

importante por mltiples razones:
La km es la concentracin de sustrato para la cual la velocidad de reaccin es

la mitad de la velocidad mxima. En efecto, si km=[S], la ecuacin de Michaelis-
Menten se reduce a: v=Vmax/2.
El valor de km da idea de la afinidad de la enzima por el sustrato: a menor km,

mayor afinidad de la enzima por el sustrato, y a mayor km, menor afinidad.
Este hecho tiene fcil explicacin si tenemos en cuenta que km se define como
(k2+k3/k1), donde las reacciones 2 y 3 destruyen el complejo ES, mientras que la
reaccin 1 lo forma. As, si km es grande, el complejo ES es inestable pues
predomina la tendencia a destruirlo (poca afinidad hacia el sustrato), y si km es
pequea, el complejo ES es estable, ya que predomina la tendencia a formarlo
(gran afinidad hacia el sustrato).
Para seguir documentndote y comprendiendo el subtema, es

recomendable que realices la lectura del documento Enzimas: qu
son y para qu sirven, de Franco Vera (2007), en el que se
presenta informacin que te permitir comprender el funcionamiento
de una enzima y el control de su actividad.

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1.2.2. Mecanismo de reaccin enzimtica
La representacin grfica de la ecuacin de Michaelis-Menten, deducida en el subtema

anterior, es una hiprbola, tal como puedes observar en la siguiente figura 10:
Figura 10. Representacin grfica de la ecuacin de Michaelis-Mentes. Fuente: Wikimedia

commons, 2010.
El valor de Vmax se puede determinar a partir del valor mximo obtenido de la curva;
mientras que la km corresponde a la concentracin de sustrato a la cual la velocidad de la
reaccin es la mitad de la Vmax.
Otra forma de determinar las constantes cinticas, es a travs de la representacin de

Lineweaver-Burk, en la que se grfica el inverso de la velocidad inicial contra el inverso
de la concentracin de sustrato.
A partir de este grfico, que corresponde con una lnea recta, se toman las siguientes
consideraciones:
La pendiente corresponde a km/Vmax

La abscisa en el origen (1/vo=0) corresponde a -1/km
La ordenada en el origen (1/[S]=0 corresponde a 1/Vmax

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Figura 11. Grfico de Lineaweaver-Burk. Fuente: payala.mayo.uson.mx, s.f.
En conclusin, existen mtodos grficos que facilitan el clculo preciso de km y Vmax. Los
cuales se hacen a partir de la manipulacin matemtica de los datos empleados para la
representacin de Michaelis-Menten y de Lineweaver-Burk (figura 12).
Para seguir documentndote y comprendiendo el subtema,

es recomendable que realices la lectura del artculo Anlisis
informtico de cintica enzimtica por medio de macros de
Ms Excel de Maldonado et al. (2004), en el que se presenta
que mediante el empleo de una hoja de clculo, es posible
evaluar la velocidad de la reaccin en un tiempo dado y a
diferentes concentraciones tanto del sustrato como de un
inhibidor. Tambin podrs entender cmo se efectan los
grficos de Michaelis-Menten y de Lineweaver-Burk y el
clculo de Vmax y km.
Posteriormente, te invitamos a revisar los documentos Enzimas de la Universidad del Pas

Vasco (2012) y Enzimas II de la Universidad de Huelva (2012), en los que se exponen: la
nomenclatura, clasificacin y modo de accin de las enzimas; as como, una introduccin
a la cintica enzimtica en la que debers prestar especial atencin a la ecuacin de
Michaelis-Menten y a la representacin de Lineweaver-Burk.

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1.3. Factores que afectan la cintica enzimtica
Como ya has estudiado en los temas anteriores, las biotransformaciones se pueden

acelerar a travs de enzimas denominadas biocatalizadores y que, a travs de un estudio
de cintica enzimtica, es posible monitorear la velocidad con que se efectan las
reacciones bioqumicas.
Ahora, es conveniente plantearse una serie de preguntas relacionadas con lo previamente

descrito.
Has notado que cuando dejas un alimento a temperatura ambiente, por un determinado
lapso de tiempo, este tiende a descomponerse a mayor velocidad que uno que se
encuentra en el congelador; o que si agregas unas gotas de limn sobre la pulpa, de una
manzana partida por la mitad, disminuye su oxidacin; o que cuando hierves la leche
tiende a descomponerse ms lentamente; o bien, que la fruta se conserva por ms tiempo
cuando la preparas en mermelada? (figura 12).
Figura 12. Descomposicin de alimentos. Fuente: noticiasinteresantes.info, s.f.
Todos los fenmenos descritos indican que existen factores que son capaces de modificar
la velocidad de una reaccin enzimtica.
Un claro ejemplo donde se observa la influencia de la temperatura sobre un biocatalizador

en la vida cotidiana, es en la cocina de tu casa. Por ejemplo, un pastel al ser horneado
acelera las reacciones que transforman la mezcla lquida en un producto esponjoso o
cuando los alimentos se guardan en lugares fros, debido a la baja temperatura, se
retardan las reacciones que los descomponen.
Ahora bien, existen sustancias que son capaces de modificar la velocidad de reaccin
enzimtica pero hacindola ms lenta, es decir, la retrasan. A estas sustancias se les

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llama inhibidores. El uso de inhibidores es muy importante en la industria farmacutica y
en la industria alimenticia ya que al hacer ms lentas las reacciones evitamos la
formacin, durante un tiempo determinado, de sustancias o productos indeseables que
hacen que tanto los medicamentos como los alimentos se descompongan rpidamente.
En la industria alimenticia a estos inhibidores se les llama conservadores. Estos
pertenecen a un grupo de sustancias llamadas aditivos que suelen agregarse a los
alimentos procesados para mejorarlos.
Como ves, existen mltiples factores que aceleran o retardan la velocidad de reaccin,
por lo que, a travs del desarrollo del tema Factores que afectan la cintica enzimtica
podrs analizar el empleo de enzimas en las biotransformaciones y describir la influencia
de dichos factores fisicoqumicos.
1.3.1. Especificidad
Tal como se mencion en la introduccin del tema, la velocidad de una biotransformacin,

catalizada por enzimas, se ve modificada por diversos factores fisicoqumicos, entre los
que se encuentra la especificidad.
Los biocatalizadores son especficos para un determinado tipo de sustrato, o bien de

reaccin.
Cuando la enzima slo puede actuar sobre un tipo de sustrato, se dice que muestra
especificidad absoluta. Si puede actuar sobre sustratos con estructuras muy similares,
se dice que muestra especificidad relativa.
De acuerdo a Rebolledo, L. y Rebolledo, I. (s.f.), la especificidad est determinada por el

sitio activo de la enzima, es decir, el sector de la molcula que contiene los grupos
funcionales particulares que le permiten unirse especficamente con el sustrato.
Generalmente el sitio activo se encuentra en una grieta, en una leve depresin en la
superficie de la molcula proteica. La geometra del sitio activo est estrechamente
relacionada con la conformacin tridimensional de la molcula del sustrato.
Las enzimas aceleran las reacciones alterando la conformacin de sus sustratos para que
logren llegar al estado de transicin. El modelo ms simple para entender esta interaccin
enzimasustrato es el modelo de llave-cerradura, en el cual el sustrato encaja
perfectamente en el sitio activo de la enzima.
En muchos casos, las conformaciones tanto de la enzima como del sustrato son
modificadas cuando logran unirse: es el llamado modelo de encaje inducido. Esta

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alteracin de las conformaciones hace que logren llegar ms rpido al estado de
transicin.
En la siguiente figura 13 se puede observar que el sitio activo ocupa un rea

relativamente pequea de la superficie de la molcula de enzima. Esto significa que una
pequea porcin de la molcula de enzima participa realmente en la catlisis. Las otras
regiones de la superficie de la enzima pueden permitir la unin con otras molculas
involucradas en la regulacin de la actividad enzimtica.
Modelo de llave-cerradura Modelo de encaje inducido
Figura 13. Modelos de especificidad enzimtica. Fuente: Luengo, L., s.f.
1.3.2. Desnaturalizacin
Otros de los factores que afectan la actividad enzimtica es la temperatura. Los aumentos
de temperatura aceleran las reacciones enzimticas, por cada 10C de incremento, la
velocidad de reaccin se duplica. Sin embargo, cuando la temperatura es muy elevada,
dichos biocatalizadores se desnaturalizan, es decir, sufren un cambio en su estructura,
por lo que se observa prdida de actividad cataltica hasta la anulacin.

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Otros factores que intervienen en esta modificacin son: el pH, los cambios de
concentracin, la velocidad de agitacin o la presencia de agentes desnaturalizantes
(figura 14).
Figura 14. Desnaturalizacin. Fuente: Reyes, E. J., 2013.
Se puede concluir que existe prdida o disminucin de la capacidad cataltica de las

enzimas, ya que al modificarse su estructura, la conformacin del sitio activo tambin se
ve alterada.
1.3.3. pH
Los aminocidos que forman a las enzimas estn ionizados, es decir, se encuentran
cargados positiva o negativamente, dependiendo el pH del medio. Los biocatalizadores al
contener ambas cargas a lo largo de su cadena, experimentan fuerzas de atraccin y
repulsin que permiten el mantenimiento de la estructura tridimensional de la protena.
Cualquier modificacin del pH, por encima o debajo del ptimo, afecta drsticamente la
actividad enzimtica.
De acuerdo a Merino, P. J. y a Noriega, B. M. J. (s.f.), dependiendo del pH del medio en el

que se encuentren las enzimas pueden no tener carga, o por el contrario estar cargados,
bien positiva o negativamente. Estas cargas sirven para estabilizar la conformacin
natural de la protena y cuando el pH las cambia, tambin se modifica la estructura,
llevando en ltimo extremo a la desnaturalizacin de la protena, y en el caso de las
enzimas a la prdida de actividad.

20
Dependiendo del medio dnde deba ejercer su

accin cataltica, cada enzima tendr su
conformacin ms adecuada, y por lo tanto su
mxima actividad, alrededor de un valor
concreto de pH, que recibe el nombre de pH
ptimo. El cambio, bien sea hacia valores ms
altos o ms bajos provocar una disminucin de
la actividad (figura 15).
Figura 15. Grfica de pH ptimo para dos
enzimas. Fuente: Luengo, L., s.f.
1.3.4. Temperatura
La velocidad de una reaccin enzimtica vara al aumentar la temperatura. Esto es, la

velocidad de una reaccin enzimtica se incrementa al aumentar la temperatura dentro de
un determinado rango, alcanzando un valor mximo a la denominada temperatura
ptima. A valores superiores la actividad disminuye debido a que el enzima, como
cualquier otra protena, sufre procesos de desnaturalizacin y, por lo tanto, de inactivacin
(Tena, A. M. y Jorrn, N. J. V, s.f.) (figura 16).
Figura 16. Grfica de temperatura ptima. Fuente: Luengo, L., s.f.
1.3.5. Inhibicin
La actividad enzimtica disminuye por accin de sustancias que se unen fuertemente al

sitio activo y bloquea la entrada del sustrato. Dichas sustancias reciben el nombre de
inhibidores, (figura 17) los cuales pueden ser:

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Figura 17. Efecto del inhibidor en la actividad enzimtica. Fuente: Luengo, L., s.f.
a) Irreversibles: se enlazan permanentemente a la enzima con lo que la inhibicin

es completa. Los inhibidores reversibles se unen covalentemente a la enzima con
lo cual resultan muy difciles de eliminar.
b) Reversibles: se enlazan a la enzima pero no permanentemente con lo que la

inhibicin es transitoria. Los inhibidores reversibles se pueden eliminar
normalmente mediante dilisis o cambios en el pH o en la disolucin tampn. Hay
tres formas principales de inhibicin reversible: competitiva, no competitiva y
acompetitiva.
De acuerdo a UPCT (2008), un inhibidor

competitivo (figura 18) normalmente es
similar a la enzima en tamao y forma por
lo que compite por la enzima con el
sustrato al unirse a la enzima por el mismo
centro activo. La velocidad de reaccin se
reduce porque baja la proporcin de
molculas unidas al sustrato. Cuanto ms
inhibidor (I) hay presente, ms complejo
enzima-inhibidor se forma y menos
producto se forma. Figura 18. Inhibicin competitiva. Fuente:
Donoso, J., 2006.
El nivel de inhibicin real que causa un inhibidor competitivo depende de las

concentraciones relativas de inhibidor [I] y de sustrato [S]. Ambas sustancias compiten por

22
la enzima, a bajas concentraciones de I, la inhibicin puede vencerse aadiendo una gran
cantidad de S con lo que aumenta la cantidad de complejo enzima-sustrato sobre el
complejo enzima-inhibidor. Ya que es necesario aadir ms sustrato para vencer la
inhibicin, km ser mayor. Matemticamente la ecuacin para una cintica Michaelis
Menten con inhibicin competitiva es:
[]
=
[] + (1 + []/ )
En la inhibicin no competitiva (figura

19), tanto el sustrato como el inhibidor se
enlazan a la enzima pero en sitios activos
diferentes.
El enlace de I ejerce un efecto sobre el

centro activo probablemente afectando a la
estructura de la enzima que ya no funciona
tan eficientemente. En consecuencia Vmax
se altera pero no se altera km (UPCT,
Figura 19. Inhibicin no competitiva. Fuente: 2008).
Donoso, J., 2006.
La expresin matemtica para el mecanismo Michaelis-Menten para este tipo de

inhibicin es:
[]
=
([] + )(1 + []/ )
En la inhibicin acompetitiva (figura 20) el inhibidor se enlaza al centro activo pero solo
despus de que el sustrato lo haya hecho y, por tanto, el inhibidor y el sustrato no
compiten.

23
De esta manera, aunque todo el sustrato est
saturando la enzima y toda la enzima est como
complejo enzima-sustrato, el inhibidor puede
enlazarse produciendo un complejo inactivo
enzima-sustrato-inhibidor.
Como el inhibidor solo se une al complejo

enzima-sustrato estimula la formacin del
complejo enzima-sustrato y, por tanto,
incrementa la unin del sustrato a la enzima,
disminuyendo km. Sin embargo, el complejo
enzima-sustrato-inhibidor no conduce a Figura 20. Inhibicin acompetitiva.
productos y Vmax disminuye (UPCT, 2008). Fuente: Donoso, J., 2006.
1.3.6. Inmovilizacin de enzimas
La inmovilizacin de enzimas es un proceso en el que se confina o localiza a la enzima

en una regin definida del espacio, para dar lugar a formas insolubles que retienen su
actividad cataltica y que pueden ser reutilizadas repetidamente (Arroyo, 1998).
Tras una inmovilizacin, la actividad de los biocatalizadores puede disminuir e incluso

perderse por:
Impedimento del paso de sustrato al centro activo por bloqueo durante la unin
al soporte.
Los grupos reactivos del soporte reaccionan con algn grupo del centro activo
de la enzima esencial para la actividad cataltica.
Durante la unin al soporte se puede originar cambio en la estructura
tridimensional de la enzima.
Las condiciones del proceso pueden causar desnaturalizacin.

24
Figura 21. Simulacin del efecto de la inmovilizacin en la actividad enzimtica. Fuente: Tripod,
s.f.
De acuerdo a la figura 21, la enzima puede desnaturalizarse por reactivos o productos

involucrados en el procedimiento de inmovilizacin (formacin de la matriz de
atrapamiento, reaccin para el enlace covalente o reacciones de entrecruzamiento;
esquema 1).
Las condiciones de inmovilizacin pueden conducir a la desnaturalizacin o a la

desactivacin (Esquema 2).
La desactivacin enzimtica puede causarse por un grupo reactivo en el sitio activo que
participa en la reaccin de enlace (Esquema 3).
Las fuerzas de enlace pueden mantener la molcula enzimtica en una configuracin

inactiva (cambios conformacionales; Esquema 4).

25
La orientacin de la molcula de enzima unida al soporte puede impedir el acceso del
sustrato al sitio activo, o la liberacin del producto (efectos estricos; Esquema 5).
Para seguir documentndote y comprendiendo el subtema, te

recomendamos realizar la lectura del documento Enzimas:
fundamentos que es un fragmento del libro Bioqumica. Texto y
Atlas de Koolman (2004), en el que encontrars informacin
relacionada con la catlisis enzimtica y su dependencia con la
temperatura, presin, pH, fuerza inica y la concentracin de
sustratos, como factores e inhibidores ms importantes.
Puedes continuar con el estudio de la liga:

http://www.lourdesluengo.es/animaciones/unidad8/inhibicion_enzi
matica.swf, en la que observars como se efectan las
inhibiciones competitivas y no competitivas.
Tambin, puedes revisar el texto Enzimas II en el apartado de Inhibicin enzimtica. En el

cual podrs encontrar los diversos tipos de inhibicin e inhibidores, as como su
identificacin a travs del modelo de Lineweaver-Burk.
Finalmente, te recomendamos realizar la lectura y anlisis del artculo Inmovilizacin de

Enzimas. Fundamentos, Mtodos y Aplicaciones de Arroyo (1998). En esta informacin
encontrars que la inmovilizacin de enzimas permite una mejora significativa de su
estabilidad, lo que hace posible su empleo en la industria para la elaboracin de
productos qumicos, farmacuticos, alimenticios; y otras muchas aplicaciones. En esta
revisin se analizan los diferentes mtodos de inmovilizacin de enzimas, y el efecto
sobre las propiedades catalticas y la estabilidad de los biocatalizadores obtenidos.
Actividades
La elaboracin de las actividades estar guiada por tu docente en lnea, mismo que
te indicar, a travs de la Planeacin didctica del docente en lnea, la dinmica que t
y tus compaeros (as) llevarn a cabo, as como los envos que tendrn que realizar.
Para el envo de tus trabajos usars la siguiente nomenclatura: BIB1_U1_A1_XXYZ,

donde BIB1 corresponde a las siglas de la asignatura, U1 es la etapa de conocimiento,
A1 es el nmero de actividad, el cual debes sustituir considerando la actividad que se
realices, XX son las primeras letras de tu nombre, Y la primera letra de tu apellido
paterno y Z la primera letra de tu apellido materno.

26
Autorreflexiones
Para la parte de autorreflexiones debes responder las Preguntas de Autorreflexin
indicadas por tu docente en lnea y enviar tu archivo. Cabe recordar que esta actividad
tiene una ponderacin del 10% de tu evaluacin.
Cierre de la unidad
A lo largo de la unidad abordaste aspectos relacionados con las biotransformaciones y el

modo en que son catalizadas para incrementar o disminuir la velocidad de la reaccin.
De esta forma, has logrado:
Identificar el tipo de reaccin catalizada de acuerdo a clasificacin enzimtica.

Describir el mecanismo enzimtico relacionado con el proceso de catlisis.
Analizar los factores de influyen en la actividad enzimtica a travs de modelos
matemticos.
Esto te prepara para aplicar los conocimientos adquiridos en el diseo de biorreactores, a

fin de identificar el modo en qu las biotransformaciones son catalizadas y cules son los
parmetros fisicoqumicos que debers cuidar para el correcto escalamiento de dichos
dispositivos.
Para saber ms
Puedes consultar el video realizado por Gonzlez et al. (2010), de Investigadores del 4to.
Grado de PEDECIBA Qumica. El propsito de este documental es profundizar en el
concepto de biocatlisis, sus aplicaciones, usos y fuentes de diversas enzimas con fines
tecnolgicos
(http://www.youtube.com/watch?feature=player_detailpage&v=VgqJ88vBc2E).
Posteriormente, es recomendable que consultes el video desarrollado por el Instituto de

Biotecnologa de la UNAM, campus Morelos (2009), en el que se presenta como la
biocatlisis es importante para reducir, en el ambiente, los impactos negativos
ocasionados por sustancias provenientes de diversos procesos industriales
(http://www.youtube.com/watch?v=kXyCaS6HQ7g&feature=player_detailpage).
Enseguida puedes consultar el problemario propuesto por el Departamento de Bioqumica

y Biologa Molecular de la Universidad de Alcal (2010), en que se podrs visualizar y

27
analizar paso a paso la resolucin de problemas relacionados con la ecuacin de
Michaelis-Menten, y el clculo de las constantes cinticas km y Vmax
(http://www2.uah.es/sancho/farmacia/problemas%20cinetica%20enzimatica%2010-
11%20con%20respuestas.pdf).
La consulta de la liga: http://csm.jmu.edu/biology/courses/bio220/aotw3.html en el

apartado The model/kinetics_model.xls de Jonathan Monroe (2004), te permitir
descargar los clculos en formato Excel de cintica enzimtica, que te ayudar a
manipular el grfico representativo de la ecuacin de Michaelis-Menten; podrs observar
cmo se modifican los parmetros de km y Vmax, si manipulas los valores de la
concentracin inicial.
Fuentes de consulta
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Ehu. (s.f.). Motivos que hacen de km un parmetro cintico importante. Recuperado de:
http://www.ehu.es/biomoleculas/enzimas/enz3.htm#km
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https://www.itescam.edu.mx/principal/sylabus/fpdb/recursos/r60942.PDF
Merino, P. J., Noriega, B. M. J. (s.f.). Enzimas. Fisiologa General. Universidad de

Cantabria. Recuperado de: http://ocw.unican.es/ciencias-de-la-salud/fisiologia-
general/materiales-de-clase-1/tema-1.-introduccion-al-estudio-de-la-
fisiologia/Tema%202B-Bloque%20I-Enzimas.pdf
Rebolledo, L., Rebolledo, I. (s.f.). Enzimas. Recuperado de:

http://bibmed.ucla.edu.ve/DB/bmucla/edocs/materialdidactico/celular/enzimas.pdf
Tena, A. M., Jorrn, N. J. V. (s.f.). Estudio cintico de la actividad invertasa de levadura de

panadera. Departamento de Bioqumica y Biologa Molecular. Campus Universitario de
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mol/pdfs/32%20INVERTASA%20CIN%C3%89TICA.pdf
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http://repositorio.bib.upct.es/dspace/bitstream/10317/282/5/ANEXO%20II.%20MODELO%
20DE%20MICHAELIS-%20MENTEN.pdf

28
Complementarias:
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Pharmaceutica. 39 (2), 23-98.
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Escuela Politcnica del Ejrcito de Ecuador. (2012). Biotransformacin. Procesos Bio.

Pg.1-6. Recuperado de http://procesosbio.wikispaces.com/BioTransformaci%C3%B3n
Franco, V. L. (2007). Enzimas: qu son y para qu sirven. Rev. R. Acad. Cienc. Exact.
Fs. Nat. VIII Programa de Promocin de la Cultura Cientfica y Tecnolgica.
Koolman y Rohm. (2004). Enzimas: fundamentos. Bioqumica. En: Texto y Atlas. 3era.
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Maldonado, C. E., Giraldo, J. F., Quijano, A. (2004). Anlisis informtico de cintica

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Tripod. (s.f.). Simulacin del efecto de la inmovilizacin en la actividad enzimtica.

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Menten_saturation_curve_of_an_enzyme_reaction-es.svg
WILEY-VCH. (2008). La catlisis permite que las reacciones costosas transcurran por
caminos mucho ms sencillos. [Imagen]. Recuperado de: http://ebookee.org/Catalysis-
Concepts-and-Green-Applications_166415.html

31

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Ingeniera de biorreactores I

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La respuesta a esta pregunta tiene fundamento en las biotransformaciones, que son

En el caso particular de las reacciones qumicas orgnicas, estos biocatalizadores

Universidad Abierta y a Distancia de Mxico

Otra enzima de amplia aplicacin industrial es la lactasa, la cual se emplea para la

Estos equipos proveen a los microorganismos, los requerimientos necesarios para su

As, a travs del desarrollo de la presente unidad, conocers con ms detalles qu es y

El estudio de esta unidad te permitir:

Identificar que la mayor parte de las enzimas son

Universidad Abierta y a Distancia de Mxico

Analizar el empleo de enzimas dentro de la biocatlisis y

1.1. Concepto de biotransformacin

Las biotransformaciones son aquellos procesos que emplean biocatalizadores (enzimas)

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Figura 3. Produccin de queso. Fuente: emverde, s.f.

A travs del desarrollo del presente tema comprenders la importancia de la biocatlisis

1.1.1. Procesos biocatalizados

Tal como se mencion en la introduccin del tema, el proceso de biotransformacin

La palabra biocatlisis proviene de dos trminos: bio=vida y catlisis=acelerar. Dentro de

Universidad Abierta y a Distancia de Mxico

Etapas de un proceso biocataltico

Eleccin del organismo a cultivar: este debe contener una cantidad

Ensayos a nivel laboratorio: permite estudiar el comportamiento de los

Escalado a nivel planta piloto: permite determinar los parmetros de diseo,

Escalado a nivel planta industrial: se genera el producto de inters a gran

La naturaleza proteica de los biocatalizadores permite que las molculas se degraden

Para seguir documentndote y comprendiendo el subtema, es

Universidad Abierta y a Distancia de Mxico

1.1.2. Fundamentos de la biocatlisis

De acuerdo a lo estudiado en el subtema anterior, las enzimas o biocatalizadores, son las

En una reaccin qumica una o ms sustancias, dan lugar a la formacin de productos,

La forma ms comn de proporcionar dicha

Figura 5. Biocatlisis de una reaccin. Fuente: Luengo, L., s.f.

Universidad Abierta y a Distancia de Mxico

Figura 6. Formacin de complejo enzima-sustrato. Fuente: Luengo, L., s.f.

De acuerdo a ITESCAM (s.f.), la actividad de algunas enzimas depende solamente de su

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Cofactor Sitio activo Coenzima

Figura 7. Holoenzima-apoenzima. Fuente: Pearson Education, 2006.

Las enzimas se clasifican, de acuerdo al tipo de reaccin que catalizan, en:

Oxidorreductasas: catalizan reacciones de transferencia de electrones.

La naturaleza proteica de los biocatalizadores permite que las molculas se degraden

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1.2. Teora de la catlisis enzimtica

Entonces Cmo se determina la velocidad con que se efecta una reaccin en

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1.2.1. Cintica enzimtica

La actividad enzimtica se mide cuantificando la velocidad de reaccin, que

El comportamiento caracterstico de la mayora de las enzimas se describe a travs de

Etapa 1. La enzima se une, a travs del sitio activo, al sustrato, formando el

Figura 9. Etapas de una reaccin biocatalizada. Fuente: Biologacelular-iq.blogspot.mx, 2010.

Universidad Abierta y a Distancia de Mxico

Dado que la concentracin de enzima permanece constante a lo largo de la reaccin, la

Despejando [E] de la expresin anterior, se tiene que:

Sustituyendo la ecuacin anterior en la expresin de 1 = 1 [][], se tiene:

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Multiplicando por 1/k1:

Sustituyendo la expresin anterior, en la ecuacin de velocidad de formacin del producto,

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Si la velocidad mxima de la reaccin (Vmax) se alcanza cuando toda la enzima se

Esta expresin es conocida como la ecuacin de Michaelis-Menten.

De acuerdo a Ehu (s.f.), la constante de Michaelis-Menten (km) es un parmetro cintico