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Construccion Camara Electroforesis Casera Estudiante PDF
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Introducci6n
La electroforesis es una herramienta comun en la biotecnologfa utilizada para analizar y separar
macromoleculas como el ADN, ARN Y protefnas por medio de un campo electrico aplicado a una
gelatina de agar. Durante el proceso la muestra de la macromolecula se carga en la gelatina
hecha a base de polisacaridos en conjunto can un tinte para visualizar las moleculas, se aplica
una corriente electrica y las moleculas se separan en base a su tamano y carga . Debido a esto,
la tecnica nos permite separar por tamano una muestra mixta de moleculas, determinar el
tamano molecular y purificar muestras de macromoleculas. EI equipo utilizado para electroforesis
es simple. Esta compuesto de una camara can polos opuestos, una fuente de energfa (power
supply) y soluci6n amortiguadora para conducir la electricidad y mantener el pH estable.
Terminos de Trasfondo
Electroforesis de gelatina
Macromolecula
ADN
Protefna
Masa
Agar
Experimento
Materiales para cad a persona
1 Jabonera
1 Cable de "stainless steel" (entre 18" y 24" de ancho)
1 Pinzas para cortar metal
5 baterfas de 9V
2 "alligator clips"
Un pedazo de "styrofoam" (parecido al utilizado para empacar la carne) con dimensiones
aproximadas de 4"x3"
1 Tijera
1 Balanza de cocina 0 cucharas de medida
1 Probeta 0 instrumento de medici6n de volumen en mL
1 Microondas
1 Envase para hacer mezclas
2 g Baking Soda (Aprox. Y2 cucharadita)
200 mL de agua destilada
1 g Agar-Agar 0 Agarosa (Aprox. % cucharadita)
3 Colores de tintes para cocinar
1 Gotero 0 pipeta
1 regia en em 0 mm
Construccion de la camara de electroforesis:
1. Corta dos pedazos de un poco mas largos que la jabonera del cable de "stainless steel" 0
2. Dobla ambos alambres en forma de gancho para ser puestos en el borde de la jabonera y el
ancho de la misma. Uno de los alambres debe de estar colocado en la parte superior de la
jabonera (electrodo negativo) y el otro en la parte inferior (electrodo positivo). Ver Figura 1. EI
alambre que vaya en el extremo superior de la jabonera debe ir un poco mas elevado que el de
la parte inferior.
3. Conecta las 5 baterfas de 9-voltios en serie conectando el polo positivo con el negativo hasta
conectar las 5 baterfas. Debe de quedar Iibre un polo positivo y uno negativo. Ver Figura 2.
4. Cuando esten Iistos para comenzar el experimento, conecta el clip tipo cocodrilo a cada
terminal expuesto en el set de baterfas. Luego conecta el lade opuesto del clip a los electrodos
de la jabonera. (Recuerda no conectar el circuito completamente hasta el momenta exacto de
comenzar el experimento)
a. La peinilla debe de ser cortada mas ancha en la parte superior de for a que pueda
ponerse sobre 105 bordes de la jabonera. Los dientes de la misma deben de ser cortados
de igual forma y con al menos 2mm de separaci6n entre dientes. Ver Figura 4.
8. Remueva la gelatina de la jabonera y corte los bordes para dejar espacio para los
electrodos. Vuelva a poner los mismos en la jabonera.
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3. Verifique el progreso del movimiento de los tintes en la gelatina cada 10-15 minutos.
Corra la gelatina hasta que yea buena separaci6n de los tintes y migraci6n.
4. Compare cada muestra de tinte. ("Cuantas bandas observa para cada color? ("Cual migro
la mayor distancia? Utilizando una regia en cm/mm mida la distancia recorrida por cada
banda. Luego haga una tabla para anotar sus observaciones como la que se presenta a
continuaci6n.
Preguntas de diseusi6n
1. ("C6mo el proceso de electroforesis separa moleculas?
7. RETO: Unos investigadores realizaron electroforesis para separar una mezcla de mohculas.
En el ultimo carril, ~que molecula es mas grande, A 0 B? Explica.
Figura 7: Representacion de una Electroforesis