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CRDITOS
Lic. Patricia Lissette Mira Gmez Sub-Jefe, Laboratorio Central Dr. Max Bloch
COORDINACIN
ASESORA TCNICA
DIAGRAMACIN Y DISEO
PRESENTACIN
Este documento se ha desarrollado con la finalidad de contar con un instrumento que con-
tenga la secuencia de los pasos necesarios, que aseguren la correcta ejecucin de todos los proce-
dimientos tcnicos de cada uno de los Laboratorios, y de esta manera contribuir al ordenamiento y
estandarizacin de los mismos.
Por lo anterior, este Despacho Ministerial pone a disposicin de todos los profesionales
involucrados en los procesos descritos, el presente documento denominado: Manual de Procedi-
mientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin.
Los contenidos de esta publicacin deben incorporarse en las actividades diarias de los
Laboratorios Clnicos de los establecimientos del Primer Nivel de Atencin, a fin de garantizar la
emisin de resultados confiables, comparables y oportunos, que colaboren a mejorar la condicin
de salud de la poblacin.
Ministro de Salud.
Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
NDICE
1. INTRODUCCIN
2.0 OBJETIVOS....................................................................................................................... 1
2.1. OBJETIVO GENERAL ............................................................................................... 1
2.2. OBJETIVOS ESPECFICOS ...................................................................................... 1
3. BIOSEGURIDAD ................................................................................................................. 2
4. CONTROL DE CALIDAD .................................................................................................... 4
4.1. CONTROL DE CALIDAD EN COPROLOGA ............................................................ 5
4.2. CONTROL DE CALIDAD EN URIANLISIS .............................................................. 5
4.3. CONTROL DE CALIDAD EN QUMICA CLNICA ...................................................... 6
4.4. CONTROL DE CALIDAD EN HEMATOLOGA .......................................................... 6
4.5. CONTROL DE CALIDAD EN INMUNOLOGA ........................................................... 6
4.6. CONTROL DE CALIDAD EN MICROBIOLOGA ....................................................... 7
5. COPROLOGA..................................................................................................................... 8
5.1. EXAMEN FSICO DE HECES ................................................................................... 9
5.2. EXAMEN MICROSCPICO DE HECES .................................................................... 11
5.3. PRUEBA DE AZUL DE METILENO ............................................................................ 14
5.4. COLORACIN DE ZIELH NEELSEN MODIFICADA PARA LA INVESTIGACIN `
DE COCCIDIOS ................................................................................................................ 17
6. URIANLISIS ...................................................................................................................... 20
6.1. TOMA DE MUESTRA PARA ANLISIS DE ORINA .................................................... 21
6.2. EXAMEN FSICO DE ORINA ..................................................................................... 22
6.3. EXAMEN QUMICO DE ORINA ................................................................................. 24
6.4. EXAMEN MICROSCPICO DEL SEDIMENTO URINARIO ...................................... 27
7. QUMICA CLNICA ............................................................................................................. 30
7.1. TOMA DE MUESTRA DE SANGRE VENOSA PARA EXMENES DE QUMICA
CLNICA ............................................................................................................................ 31
7.2. GLUCOSA SANGUNEA ............................................................................................ 34
7.3. COLESTEROL ........................................................................................................... 37
7.4. TRIGLICRIDOS ....................................................................................................... 40
7.5. CIDO RICO ........................................................................................................... 43
8. HEMATOLOGA .................................................................................................................. 46
8.1. TOMA DE MUESTRA DE SANGRE CAPILAR PARA EXMENES
HEMATOLGICOS .............................................................................................................. 47
8.2. TOMA DE MUESTRA DE SANGRE VENOSA PARA EXMENES
HEMATOLGICOS ............................................................................................................ 49
Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
1. INTRODUCCIN
Se espera que este manual sea una gua efectiva y til para lograr la estandarizacin de
los procedimientos y calidad de los resultados obtenidos en los Laboratorios Clnicos del Ministerio
de Salud.
Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
2. OBJETIVOS
- Brindar una herramienta que permita realizar los procedimientos tcnicos de laboratorio
uniformemente, de manera que se eviten desviaciones en su desarrollo.
- Ordenar todos los procedimientos tcnicos de los Laboratorios Clnicos del Primer Nivel
de Atencin, en un solo documento apropiado para responder a las necesidades de este
nivel.
- Contar con un instrumento que sirva de gua para la evaluacin y monitoreo de las
actividades de laboratorio.
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
3. BIOSEGURIDAD
Todas las personas que trabajan en un laboratorio deben conocer los riesgos potenciales a los
que se exponen y ser versados en las prcticas y tcnicas requeridas para manipular materiales
infecciosos en forma segura.
Cuando ocurre un accidente es fundamental que se haga un anlisis de sus causas y se adopten
medidas correctivas para evitar su repeticin.
- Aerosoles.
- Inoculacin accidental.
- Derrames y salpicaduras:
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
4. CONTROL DE CALIDAD
La calidad se obtiene y se mejora a lo largo de todo el proceso por lo que el control de calidad debe
ejercerse en las tres fases del proceso: la fase pre-analtica, analtica y post-analtica.
La mayora de las tcnicas analticas cuantitativas implican diversas operaciones que estn sujetas
a cierto grado de imprecisin y cierta posibilidad de error. El objetivo del control de calidad radica
en asegurar que los productos finales, es decir los valores analticos que son producidos por un
laboratorio clnico, sean suficientemente fiables y adecuados a la finalidad que persiguen. Este
objetivo se cumple a medida que todo el personal del laboratorio sea consciente de las causas de
las imprecisiones analticas y de las tcnicas disponibles para su deteccin, correccin y control.
Entre las principales variables que pueden evitar imprecisiones podemos citar:
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
- Todos los laboratorios deben enviar al Laboratorio Central para control de calidad el
10% de lminas de azul de metileno (PAM) realizadas.
- Los laboratorios del Primer Nivel de Atencin deben participar en el control de calidad
externo que le enve el Nivel Central.
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
- Calibrar el espectrofotmetro cada vez que se cambie la fuente de luz y al menos cada
mes.
- Registrar diariamente todas las lecturas de estndares y sueros controles internos los
cuales sern procesados en cada corrida.
- La separacin del suero del paquete globular no debe ser mayor de dos horas despus
de obtenida la muestra. Una vez separados los sueros se deben refrigerar si no se procesan
inmediatamente.
- Los laboratorios del Primer Nivel de Atencin deben participar en el control de calidad
externo que le enve el Nivel Central cada ao.
- Determinar los tiempos de coloracin de los frotis con colorante Wright, siempre que se
cambie el lote de colorante.
- Los laboratorios del Primer Nivel de Atencin deben participar en el control de calidad
externo de hematologa que les enve el Nivel Central cada ao.
- Dejar que las muestras y reactivos lleguen a temperatura ambiente antes de iniciar los
procedimientos.
- Procesar los controles de las casas comerciales y el control interno en cada tiraje de
muestras.
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
Los laboratorios del Primer Nivel de Atencin deben participar en el control de calidad externo
de inmunologa que les enve el Nivel Central cada ao.
- Tener especial cuidado con el alcohol acetona, pues de este depende que la coloracin
sea excesiva o dbil.
Controlar la fijacin de la preparacin pues el exceso de calor produce dao en la pared celular de
las bacterias que pueden afectar, la retencin de los colorantes.
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5. COPROLOGA
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5.1.1. PROPSITO:
5 gramos de heces recin emitidas, instruir al paciente que colecte en el frasco la porcin de muestra
que evidencia el dao intestinal (Mucus, sangre, parsitos). No son recomendables las muestras
obtenidas con laxantes o enemas.
5.1.3. MATERIALES:
- Frascos plsticos de boca ancha y tapn de rosca con capacidad para 2 onzas.
- Aplicadores de madera.
- Guantes descartables.
- Marcador de vidrio.
- Papel lente.
5.1.4. PROCEDIMIENTO:
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- Frascos sucios.
Valores de referencia:
- COLOR: Caf.
5.1.7. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
5.2.1. PROPSITO:
5 gramos de heces recin emitidas. No son recomendables las muestras obtenidas con laxantes o
enemas.
- Aplicaciones de madera.
- Guantes descartables.
- Papel lente.
5.2.4. EQUIPO:
- Microscopio
5.2.5. PROCEDIMIENTO:
- Identificar la lmina porta objeto
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
- Colocar en el otro extremo del portaobjeto, una gota de lugol para heces y repetir el
procedimiento anterior.
- Observar en forma sistemtica al microscopio, con el objetivo 10x y luego con el 40x.
Con solucin salina 0.85%, los trofozoitos y quistes de los protozoarios se observan en forma natural
y con lugol se visualizan las estructuras internas, ncleos y vacuolas.
- Desecacin de la preparacin.
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Valores de referencia:
5.2.8. RESPONSABLE:
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5.3.1. PROPSITO:
5gr. de heces frescas y lquidas, instruir al paciente sobre la forma de colectar la muestra.
- Lmina portaobjeto.
- Aplicadores de madera.
- Aceite de inmersin.
- Papel filtro.
- Embudo.
- Guantes descartables.
- Marcador de vidrio.
- Papel toalla.
- Fsforos.
- Papel lente.
5.3.4. EQUIPO:
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
- Microscopio.
- Mechero.
5.3.5. PROCEDIMIENTO
- Fijar al calor pasndolo rpidamente sobre la llama de un mechero tres veces en forma
horizontal.
- Extendidos gruesos.
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
Reportar el porcentaje de leucocitos encontrados con el predominio del que tenga mayor
porcentaje.
Interpretacin:
5.3.8. RESPONSABLE:
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5.4.1. PROPSITO:
La bsqueda de los ooquistes de coccidios en una coloracin teida con Zielh Neelsen modificada,
la cual se basa en el comportamiento cido resistente de la cubierta de estos parsitos, que se tien
de rojo, destacndose sobre un fondo azul.
- Aplicadores de madera.
- Fucsina fenicada.
- Azl de metileno.
- Papel filtro.
- Embudo.
- Alcohol cido.
- Papel toalla.
- Marcador de vidrio.
- Aceite de inmersin.
- Fsforos.
- Guantes descartables.
- Papel lente.
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5.4.4. EQUIPO:
- Mechero.
- Microscopio.
5.4.5. PROCEDIMIENTO
- Hacer un extendido de materia fecal sobre un portaobjeto en las dos terceras partes de la
lmina (No ejercer presin para hacer e extendido).
- Fijar con calor pasndolo rpidamente tres veces sobre la llama de un mechero en forma
horizontal.
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En presencia de ooquistes:
5.4.8. RESPONSABLE:
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6. URIANLISIS
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
6.1.1. PROPSITO:
Obtener una muestra de orina con el volumen y condiciones adecuadas para realizar un anlisis
fsico, qumico y microscpico.
6.1.3. MATERIALES:
6.1.4. PROCEDIMIENTO:
- Frascos sucios.
6.1.6. RESPONSABLE:
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
6.2.1. PROPSITO:
Por medio de la observacin directa de la muestra de orina determinar el color y el aspecto de sta,
lo cual puede sugerir una patologa del tracto urinario u otras enfermedades que estn en diferente
localizacin, pero que sus manifestaciones secundarias son a nivel del rin.
6.2.3. MATERIALES:
- Papel toalla.
- Marcador de vidrio.
- Guantes descartables.
6.2.4. PROCEDIMIENTO:
- Anotar lo observado.
- Frascos sucios.
- Muestras medicamentosas.
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Valores de referencia:
COLOR: Amarillo.
ASPECTO: limpia.
6.2.7. RESPONSABLE:
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6.3.1. PROPSITO:
Determinar las sustancias qumicas presentes en una muestra de orina, as como su densidad y
pH, a travs de las zonas de reaccin presentes en una tira reactiva.
- Papel toalla.
- Marcador de vidrio.
- Guantes descartables.
6.3.4. PROCEDIMIENTO:
- Identificar el tubo cnico.
Los cambios de color que aparecen despus de dos ms minutos carecen de importancia
diagnstica.
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
- Leer las tiras reactivas despus del tiempo indicado por el fabricante.
Valores de referencia:
pH: de 5 a 6.
NITRITOS: Negativo.
GLUCOSA: 0 mg por dL .
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BILIRRUBINA: Negativa.
6.3.7. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
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6.4.1. PROPSITO:
Observar microscpicamente en el sedimento urinario elementos celulares, cilindros, cristales,
parsitos, filamentos mucoides y bacterias. Con el fin de sugerir una patologa del tracto urinario u
otras enfermedades que estn en diferente localizacin.
6.4.3. MATERIALES:
- Tubos cnicos de 15 mL .
- Lminas portaobjetos.
- Laminillas cubreobjetos.
- Guantes descartables.
6.4.4. EQUIPO:
- Reloj marcador.
- Macrocentrfuga.
- Microscopio.
6.4.5. PROCEDIMIENTO:
- Centrifugar durante 5 minutos a 2,500 rpm .
- Observar la preparacin con el objetivo 10x para lograr una visin general del sedimento.
(Anexo 3)
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- Centrifugacin inadecuada.
CILINDROS: se pueden encontrar en la orina los siguientes cilindros: hialinos, granulosos finos y
gruesos, leucocitarios, hemticos, grasos y creos. Reportar el nmero de cilindros observados por
campo.
CRISTALES: se pueden encontrar en la orina los siguientes cristales: oxalatos de calcio, acido
rico, uratos amorfos, fosfatos amorfos, fosfatos triples, urato de amonio, leucina, cistina y tirosina.
Reportar en la forma siguiente: escasos, moderados o abundantes.
PARSITOS: Se pueden encontrar en orina Trichomonas vaginalis, Phitirus pubis, huevos y quistes
de parsitos por contaminacin con heces.
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
Valores de referencia
6.4.8. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
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7. QUMICA CLNICA
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
7.1.1. PROPSITO:
Obtener sangre venosa para realizar pruebas de qumica sangunea.
7.1.3. MATERIALES:
- Jeringa estril para extraer 5 - 10 mL. con aguja 21 X 1 o sistema de extraccin al
vaco.
- Torundas de algodn.
- Marcador de vidrio.
- Torniquete.
- Tubos sin anticoagulante 13 x 100 mm y tapn de hule o tubos del sistema de extraccin
al vaco.
- Guantes descartables.
7.1.4. PROCEDIMIENTO:
- Lavar y secar las manos y colocarse los guantes.
- Realizar asepsia con torunda de algodn humedecida con alcohol etlico al 70% de
adentro hacia fuera.
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
- Colocar el torniquete firmemente alrededor del brazo, y pedir al paciente que abra y cierre
la mano varias veces para favorecer la dilatacin de las venas.
- Tirar hacia atrs el mbolo de la jeringa muy lentamente para que penetre la sangre en
la jeringa hasta llenar con la cantidad de sangre necesaria. Si utiliza sistema de sangrado
al vaco introducir el tubo en el dispositivo (holder) de manera que al ejercer presin se
atraviese el extremo inferior de la aguja, para que la sangre fluya hacia el tubo por efecto
del vaco.
- Retirar torniquete tirando del extremo doblado y colocar una torunda de algodn sobre la
piel donde se encuentra oculta la punta de la aguja.
- Extraer la aguja con un movimiento rpido por debajo de la pieza de algodn, pedir al
paciente que presione firmemente la torunda durante 3 minutos con el brazo extendido.
- Separar la aguja de la jeringa o del holder cuidadosamente, llenar los tubos deslizando la
sangre por las paredes del mismo.
- Que el paciente no cumpla con las indicaciones de acuerdo al anlisis qumico a realizar.
- Separacin inadecuada del cogulo antes de centrifugar (no poner en bao de Mara).
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7.1.6. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
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7.2.1. PRINCIPIO:
La glucosa se determina despus de la oxidacin enzimtica en presencia de glucosa oxidasa. El
perxido de hidrgeno formado reacciona bajo catlisis de la peroxidasa con fenol y 4-aminofenazona
produciendo un complejo rojo violeta usando la quinoneimina como indicador.
- Puntas plsticas.
- Tubos.
- Reactivo enzimtico.
- Papel toalla.
- Guantes descartables.
7.2.4. EQUIPO:
- Espectrofotmetro.
- Reloj marcador.
- Centrfuga.
- Refrigeradora.
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7.2.5. PROCEDIMIENTO:
- Llevar los reactivos a temperatura ambiente.
- Los reactivos se preparan de acuerdo a las instrucciones del fabricante en el cual estar
indicado la estabilidad del reactivo.
En caso que los Espectrofotmetros no lean la cantidad de 1 mL, duplicar las cantidades.
- Tubos sucios.
- Pipeteado inadecuado.
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Clculo:
Lectura de muestra
Concentracin= x 100 (mg/dL)
Lectura del estndar
La prueba es lineal hasta la concentracin de 1000 mg/dL (Revisar inserto incluido en el Set a
utilizar) .
Si la concentracin de glucosa en la muestra es superior a estos lmites diluir la muestra 1+2 con
agua destilada y repetir la determinacin.
Valor de referencia:
60 -115 mg/dL
7.2.8. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
7.3 COLESTEROL
MTODO ENZIMTICO COLORIMTRICO PARA COLESTEROL CON
FACTOR ACLARANTE DE LPIDOS
7.3.1. PRINCIPIO:
El colesterol se determina despus de la hidrlisis enzimtica y la oxidacin. En presencia de un
indicador el cual desarrolla el color de acuerdo a la concentracin del colesterol presente en la
muestra.
- Puntas plsticas.
- Tubos.
- Reactivo enzimtico.
- Papel toalla.
Guantes descartables.
7.3.4. EQUIPO:
- Espectrofotmetro.
- Reloj marcador.
- Centrfuga.
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
7.3.5. PROCEDIMIENTO:
- Llevar los reactivos a temperatura ambiente.
- Los reactivos se preparan de acuerdo a las instrucciones del fabricante en el cual estar
indicado la estabilidad del reactivo.
En caso que los Espectrofotmetros no lean la cantidad de 1 mL, duplicar las cantidades.
- Tubos sucios.
- Pipeteado inadecuado.
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
Clculo
Lectura de muestra
Concentracin= x 200 (mg/dL)
Lectura del estndar
La prueba es lineal hasta la concentracin de 750 mg/dL (Revisar tcnica ya que depende de la
casa comercial).
Si la concentracin del colesterol en la muestra es superior a estos limites diluir la muestra 1+2 con
solucin fisiolgica y repetir la determinacin.
Valor de referencia:
7.3.8. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
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7.4 TRIGLICRIDOS
MTODO ENZIMTICO COLORIMTRICO PARA
TRIGLICRIDOS ACLARANTES DE LPIDOS
7.4.1. PRINCIPIO:
El triglicrido se determina despus de la hidrlisis enzimtica con lipasa. En presencia de un
indicador que desarrolla color de acuerdo a la concentracin del triglicrido presente en la
muestra.
- Puntas plsticas.
- Tubos.
- Reactivo enzimtico.
- Papel toalla.
- Guantes descartables.
7.4.4. EQUIPO:
- Espectrofotmetro.
- Reloj marcador.
- Centrfuga.
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
7.4.5. PROCEDIMIENTO:
- Llevar los reactivos a temperatura ambiente.
- Los reactivos se preparan de acuerdo a las instrucciones del fabricante en el cual estar
indicado la estabilidad del reactivo.
En caso que los Espectrofotmetros no lean la cantidad de 1 mL, duplicar las cantidades.
- Tubos sucios.
- Pipeteado inadecuado.
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
Clculo:
Lectura de muestra
Concentracin= x 200 (mg/dL)
Lectura del estndar
La prueba es lineal hasta la concentracin de 1000 mg/dL (Revisar tcnica ya que depende de la
casa comercial).
Si la concentracin de triglicridos en la muestra es superior a estos lmites diluir la muestra 1+4 con
solucin salina fisiolgica y repetir la determinacin.
Valor de referencia:
7.4.8. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
7.5.1. PRINCIPIO:
El cido rico se determina despus de la hidrlisis enzimtica de la uricasa, que en presencia de
un indicador que desarrolla color rojo-violeta que es proporcional a la concentracin de cido rico
presente en la muestra.
- Puntas plsticas.
- Tubos.
- Reactivo enzimtico.
- Papel toalla.
- Guantes descartables.
7.5.4. EQUIPO:
- Espectrofotmetro.
- Reloj marcador.
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
- Centrfuga.
7.5.5. PROCEDIMIENTO
- Llevar los reactivos a temperatura ambiente.
- Los reactivos se preparan de acuerdo a las instrucciones del fabri cante en el cual
estar indicado la estabilidad del reactivo.
En caso que los Espectrofotmetros no lean la cantidad de 1 mL, duplicar las cantidades.
- Tubos sucios.
- Pipeteado inadecuado.
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
Clculo:
Lectura de muestra
X concentracin del estndar (mg/
Concentracin=
Lectura del estndar dL)
Si la concentracin de cido rico en la muestra es superior a estos lmites, diluir la muestra 1+1
con solucin salina fisiolgica y repetir la determinacin.
Valor de referencia:
7.5.8. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
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8. HEMATOLOGA
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
8.1.1. PROPSITO:
Obtener sangre capilar para realizar pruebas hematolgicas.
8.1.3. MATERIALES:
- Torunda de algodn.
- Marcador de vidrio.
- Capilares heparinizados.
- Lancetas desechables.
- Lminas esmeriladas.
- Guantes descartables.
8.1.4. PROCEDIMIENTO:
- Lavar, secar las manos y colocar los guantes.
- Seleccionar el dedo anular de la mano a puncionar y dar masaje para mejorar la irrigacin
sangunea.
- Realizar asepsia con torunda de algodn humedecida con alcohol etlico al 70%.
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- Puncin inadecuada.
8.1.6. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
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8.2.1. PROPSITO:
Obtener sangre venosa para realizar pruebas hematolgicas.
8.2.3. MATERIALES:
- Jeringa estril para extraer 3 mL con aguja 21 X 1 o sistema de extraccin al vaco.
- Torundas de algodn.
- Marcador de vidrio.
- Lminas esmeriladas.
- Torniquete.
- Gradilla.
- Guantes decartables.
8.2.4. PROCEDIMIENTO:
- Lavar, secar las manos y colocarse los guantes.
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
- Retirar torniquete tirando del extremo doblado y colocar una torunda de algodn sobre la
piel donde se encuentra oculta la punta de la aguja.
- Extraer la aguja con un movimiento rpido por debajo de la pieza de algodn, pedir al
paciente que presione firmemente la torunda durante 3 minutos con el brazo extendido.
- Separar la aguja de la jeringa o del holder cuidadosamente, llenar los tubos deslizando la
sangre por las paredes del mismo.
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- Dejar los tubos con muestras destapados (evaporacin del plasma, y contaminacin).
8.2.6. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
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8.3.1. PROPSITO:
Obtencin de un frotis sanguneo coloreado para el reconocimiento de los elementos celulares de
la sangre.
- Torunda de algodn.
- Marcador de vidrio.
- Aceite de inmersin.
- Reloj marcador.
- Perilla de hule.
- Papel toalla.
- Guantes descartables.
- Solucin de Wright.
- Buffer pH 6.8.
8.3.4. PROCEDIMIENTO:
- Antes de utilizar los portaobjetos de vidrio, limpiarlos con alcohol y aclarar con agua.
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- Para evitar la coagulacin; se puede utilizar sangre con EDTA. (Siempre conviene realizar
cuando menos dos frotis).
- Poner la lmina extensora a un ngulo de 45 del portaobjeto y moverla hacia atrs para
que haga contacto con la gota, que debe extenderse rpidamente.
- Cubrir todo el frotis con coloracin de Wright y dejarlo en reposo 3 minutos (o el tiempo
necesario segn la maduracin del colorante).
- Agregar una cantidad igual de buffer (pH 6.8) evitando derramar el Wright, mezclar con
una perilla de hule con suavidad para asegurar una mezcla uniforme, aparecer una
pelcula verde metlico, dejarlo en reposo por 5 minutos o el tiempo necesario segn la
maduracin del Wright.
- Limpiar la parte posterior del portaobjeto con una torunda de algodn impregnada con
alcohol, para eliminar todos los restos de colorante.
- Dejar secar la preparacin al aire colocando la lmina en posicin vertical en una rejilla
para portaobjeto.
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8.3.6. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
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8.4.1. PROPSITO:
Establecer y evaluar las caractersticas morfolgicas de cada tipo de clulas y ver la frecuencia de
las diferentes lneas leucocitarias.
8.4.3. MATERIALES:
- Frotis de sangre coloreado.
- Aceite de inmersin.
- Guantes descartables.
8.4.4. EQUIPO:
- Microscopio con objetivo 40x y 100x.
8.4.5. PROCEDIMIENTO:
- La observacin inicia con el objetivo 40x para obtener un cuadro general del nmero de
clulas, la distribucin de las mismas y la calidad de la tincin.
- Seleccionar las reas a observar con objetivo de inmersin 100x buscando una distribucin
homognea de las clulas.
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Valores de referencia:
NEUTRFILOS SEGMENTADOS 20 45 % 60 70 %
NEUTRFILOS EN BANDA 04% 26%
LINFOCITOS 40 60 % 15 40 %
EOSINFILOS 15% 14%
BASFILOS 01% 01%
MONOCITOS 28% 28%
Las cifras de Leucocitos tambin pueden expresarse en valores absolutos, aplicando la siguiente
formula:
N: Neutrfilos.
L: Linfocitos.
B: Basfilos.
M: Monocitos.
E. Eosinfilos.
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
Esto nos dar como resultado el valor absoluto de leucocitos por milmetro cbico, donde la suma
es igual al recuento del total de los leucocitos.
8.4.8. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
57
Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
8.5.1. PROPSITO:
Observacin detallada de todos los elementos de la sangre, con el fin de evaluar la condicin
hematolgica del paciente.
8.5.3. MATERIALES:
- Aceite de inmersin.
8.5.4. EQUIPO:
- Microscopio con objetivo 40x y 100x.
8.5.5. PROCEDIMIENTO:
Cada tcnico debe aprender a observar todos los elementos del frotis mientras lleva a cabo el
recuento diferencial. Debe formar el hbito de verificar los puntos siguientes.
ERITROCITOS:
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
LEUCOCITOS:
PLAQUETAS:
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LNEA BLANCA:
LNEA PLAQUETARIA:
- Cantidad.
Valores de referencia:
Eritrocitos normocrmicos.
8.5.8. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
60
Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
8.6. HEMATOCRITO
8.6.1. PROPSITO:
El hematocrito es el volumen de eritrocitos expresados en porcentaje del volumen de sangre como
una fraccin del volumen de sangre, para determinar si un paciente presenta o no anemia.
8.6.3. MATERIALES:
- Tubos capilares heparinizados o no heparinizados.
- Plastilina.
- Lector de hematocrito.
8.6.4. EQUIPO:
- Micro centrfuga para hematocrito con una fuerza de 10,000 - 13,000 rpm.
8.6.5. PROCEDIMIENTO:
- Llenar el tubo de micro hematocrito mediante accin capilar, ya sea por una puncin que
hace que la sangre fluya libremente o por sangre venosa bien mezclada. Los tubos capilares
deben estar llenos en dos terceras partes.
- Colocar el capilar sellado en una centrfuga para el micro hematocrito, con el extremo
abierto hacia el centro de la microcentrfuga.
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
- Exceso de anticoagulante.
- Centrifugacin inadecuada.
Valores de referencia:
Hombre: 42%-51%
Mujer: 38%-42%
Nios: 33%-38%
RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
62
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8.7. HEMOGLOBINA
MTODO DE LA CIANAMETAHEMOGLOBINA
8.7.1. PROPSITO:
Evaluar la presencia y la severidad de la anemia. Este mtodo consiste en efectuar una dilucin
exacta de sangre en una solucin que contiene ferrocianuro de potasio, que convierte la
hemoglobina en cianametahemoglobina y se compara colorimetricamente con una solucin patrn
de cianametahemoglobina de concentracin exacta y estable.
- Pipeta automtica de 20 L.
- Marcador de vidrio.
- Puntas plsticas.
- Papel parafilm.
- Guantes descartables.
- Pipeta serolgica.
- Reactivo de cianametahemoglobina.
- Estndar de hemoglobina.
8.7.4. EQUIPO:
- Espectrofotmetro.
63
Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
Reloj marcador.
8.7.5. PROCEDIMIENTO:
- Hacer una serie de tres tubos con el estndar de hemoglobina para calcular el factor de
calibracin.
- Este ser el factor de calibracin por el cual se multiplicarn las densidades pticas de las
muestras. (Anexo 7)
64
Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
- Coagulacin de la muestra.
- Calibracin incorrecta.
Calculo:
Valores de referencia:
8.7.8. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
65
Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
8.8.1. PROPSITO:
Evaluar la cantidad de clulas nucleadas que se encuentran en la muestra de sangre (leucocitos y
eritroblastos).
- Cmara de Neubauer.
- Pipeta automtica de 20 L.
- Puntas plsticas.
- Guantes descartables.
8.8.4. EQUIPO:
- Microscopio.
- Contmetro manual.
- Agitador.
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
- Dispensar con pipeta automtica o con capilar la dilucin en el borde de la laminilla para
cmara Neubauer. (Anexo 8)
- Luego se procede a contar los glbulos blancos en el microscopio con el objetivo 10x y
con poca luz en las dos reas primarias opuestas de la cmara, contar las clulas que
aparecen. Cuando el trabajo no es excesivo se cuentan las cuatro reas primarias para
tener un dato ms exacto.
- En caso de una leucocitosis de mas de 30,000 leucocito/mm, la dilucin se hace 1:200 con
diluyente de leucocitos.
- Dilucin incorrecta.
- Puntas defectuosas.
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
Clculos:
- Cuando la dilucin es 1:20 el numero de leucocitos contados en las dos reas primarias
opuestas de la cmara se multiplica x 100 = N de leucocitos/mm, y se multiplicar por
50 si se cuentan 4 rea primarias.
- Cuando la dilucin es 1:10 el factor por el cual se multiplican los leucocitos, ser 50 si se
cuentan dos reas primarias opuestas y ser 25 si se cuentan 4 reas primarias.
- Cuando la dilucin es 1:200 y se cuenta toda el rea central, el factor ser 2,000.
Correccin
Si en una formula diferencial salieron 80% de eritroblastos, en realidad se han contado 180 clulas
nucleadas, luego de 180 clulas Nucleadas 80 son eritroblastos, en el nmero de leucocitos
contados se obtendr una cantidad X de eritroblastos.
Valores de referencia:
Adultos: 5,000-10,000 x mm
Nios: 5,000-12,000 x mm
8.8.8. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
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8.9.1. PROPSITO:
Evaluar la cantidad de plaquetas existentes en la sangre para lo cual se diluye una muestra de
sangre con una sustancia con un lquido diluyente que hace a las plaquetas ms visibles.
- Cmara Neubauer.
- Tubo capilar.
- Papel filtro.
- Caja de Petri.
- Pipeta automtica de 10 L.
- Puntas plsticas.
- Guantes descartables.
- Solucin de Gower.
8.9.4. EQUIPO:
- Microscopio.
- Contmetro manual.
- Reloj marcador.
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
- Colocar la cmara en una caja de petri sobre un disco del papel filtro hmedo, para evitar
la evaporacin, se tapa y se espera de 10 a 20 minutos para que se depositen bien las
plaquetas.
- Proceder al conteo de las plaquetas en el microscopio con el objetivo 40x y poca luz.
- Dilucin incorrecta.
70
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Valores de referencia:
150,000-450,000/mm
8.9.8. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
8.10.1. PROPSITO:
Evaluar el nmero de plaquetas presentes en la sangre, a travs de la observacin de un frotis
coloreado, con el fin de comparar con el conteo directo.
- Aceite de inmersin.
8.10.4. EQUIPO:
- Contmetro.
- Microscopio.
8.10.5. PROCEDIMIENTO:
- Colocar la lmina coloreada en la platina del microscopio.
- Contar las plaquetas en 10 campos situados entre el cuerpo y la cola del frotis (los campos
deben contener aproximadamente 100 glbulos rojos).
72
Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
8.10.8. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
73
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8.11.1. PROPSITO:
Evaluar el funcionamiento de la mdula sea ya que los reticulocitos son glbulos rojos jvenes que
constituyen un ndice de la respuesta eritropoytica.
8.11.2. MUESTRA:
Sangre venosa con EDTA o sangre capilar.
- Capilares.
- Guantes descartables.
8.11.4. EQUIPO:
- Microscopio.
- Contmetro manual.
8.11.5. PROCEDIMIENTO:
- Verter un capilar lleno de azul cresil brillante y dos capilares llenos de sangre en un tubo
12x75 mm.
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
Contar 10 campos en donde se observen 100 eritrocitos por campo, anotar los reticulocitos
observados.
Clculo:
Valores de referencia:
8.11.8. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
8.12.1. PROPSITO:
La velocidad de Eritrosedimentacin mide la velocidad de sedimentacin de los glbulos rojos en
el plasma.
8.12.3. MATERIALES:
- Agujas Wintrobe.
- Tubos Wintrobe.
- Guantes descartables.
8.12.4. EQUIPO:
- Reloj marcador.
8.12.5. PROCEDIMIENTO:
- Mezclar la muestra de sangre.
- A la hora exacta leer de arriba hacia abajo el valor numrico en mm, midiendo la distancia
que hay entre el punto ms bajo del menisco de la superficie y el lmite superior del
sedimento de glbulos rojos; los mm, ledos corresponden a la velocidad de sedimentacin
por hora.
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
Toda eritrosedimentacin con hematocrito menor de 40%, se corregir usando la tabla de correccin
de la manera siguiente:
- Llevar valores de hematocrito y sedimentacin a la tabla de correccin.
- Tome el punto dnde se interceptan ambos, este punto caer sobre una de las lneas
curvas de dicha tabla, la que deber seguir hacia la derecha y abajo, hasta el punto de
intercepcin con la lnea negra mas gruesa, que corresponde al valor de hematocrito de
40%.
- Lea a la derecha de la tabla el valor de eritrosedimentacin corregida, este valor es el que
se deber reportar.
8.12.8. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
77
Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
8.13.1. PROPSITO:
Evaluar el funcionamiento y nmero de plaquetas as como la contractilidad capilar.
8.13.2. MUESTRA:
Sangre capilar del dedo o del lbulo de la oreja.
8.13.3. MATERIALES:
- Lanceta descartable estril.
- Papel filtro.
- Guantes descartables.
8.13.4. EQUIPO:
- Cronmetro.
8.13.5. PROCEDIMIENTO:
- Lavar y secar las manos y colocarse los guantes.
- Puncionar el dedo ndice a modo que corte transversalmente la direccin de las huellas
digitales, o el lbulo de la oreja.
- Secar con el papel filtro cada medio minuto hasta que cese el sangramiento.
- Anotar el tiempo desde que se punciona hasta que cesa el sangramiento y reportar.
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
Valor de referencia:
1 - 4 minutos.
8.13.8. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
8.14.1. PROPSITO:
Evaluar en forma global el mecanismo intrnseco de la coagulacin.
8.14.2. MUESTRA:
Sangre venosa.
8.14.3. MATERIALES:
- Jeringas descartables.
- Tubos 12x75mm.
- Torundas de algodn.
- Torniquete.
- Guantes descartables.
8.14.4. EQUIPO:
- Bao de Mara a 37C.
- Reloj marcador.
- Termmetro.
8.14.5. PROCEDIMIENTOS:
- Lavar y secar las manos y colocarse los guantes.
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
- Invertir cada medio minuto (sin agitar) los 3 tubos hasta que cada uno pueda invertirse sin
que se vierta su contenido.
- Tomar el tiempo de coagulacin de cada uno de los tubos y luego sacar un promedio de
los tres.
Valores de referencia:
5-10 minutos.
8.14.8. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
8.15.1. PROPSITO:
Concentrar los parsitos por medio de la centrifugacin repetida de tal modo que permita observarlos
microscpicamente.
- Pipeta Pasteur.
- Portaobjetos.
- Cubreobjetos.
- Aplicadores de madera.
- Torniquete.
- Guantes descartables.
- Buffers pH 6.8.
8.15.4. EQUIPO:
- Centrfuga.
- Microscopio.
- Reloj marcador.
82
Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
8.15.5. PROCEDIMIENTO:
- Desinfectar cuidadosamente el rea de puncin.
- Centrifugar a 1000 rpm por 3 minutos, para separa los glbulos rojos.
- Observar el sedimento entre porta y cubreobjeto con objetivo 10x y 40x, buscando formas
mviles.
- Siempre que una prueba resulte positiva hacer lmina (gota gruesa o frotis) coloreada por
Giemsa o Wright para enviar a control de calidad al Laboratorio Central.
- Realizar la prueba en la fase crnica despus de los 30 das o antes de los 6 das posteriores
a la picadura.
8.15.8. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
Este procedimiento no se desarrolla en este manual, por existir a nivel nacional el Manual de
Procedimientos Tcnicos para el Diagnstico Microscpico de la Malaria, Primera Edicin ao
2007, para realizar el procedimiento de gota gruesa se deber consultar lo contemplado en el
mencionado manual.
84
Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
9. INMUNOLOGA
85
Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
9.1.1. PROPSITO:
Obtener sangre venosa para realizar pruebas de inmunologa.
9.1.3. MATERIALES:
- Jeringa estril para extraer 5 mL con aguja 21 X 1 o sistema de extraccin al vaco.
- Torundas de algodn.
- Marcador de vidrio.
- Torniquete.
- Tubos sin anticoagulante 13 x 100 mm y tapn de hule o tubos del sistema de extraccin
al vaco.
- Guantes descartables.
9.1.4. PROCEDIMIENTO:
- Lavar y secar las manos y colocarse los guantes.
- Realizar asepsia con torunda de algodn humedecida con alcohol etlico al 70% de
adentro hacia fuera.
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
- Colocar el torniquete firmemente alrededor del brazo, y pedir al paciente que abra y cierre
la mano varias veces para favorecer la dilatacin de las venas.
- Tirar hacia atrs el mbolo de la jeringa muy lentamente para que penetre la sangre en
la jeringa hasta llenar con la cantidad de sangre necesaria. Si utiliza sistema de sangrado
al vaco introducir el tubo en el dispositivo (holder) de manera que al ejercer presin se
atraviese el extremo inferior de la aguja, para que la sangre fluya hacia el tubo por efecto
del vaco.
- Retirar torniquete tirando del extremo doblado y colocar una torunda de algodn sobre la
piel donde se encuentra oculta la punta de la aguja.
- Extraer la aguja con un movimiento rpido por debajo de la pieza de algodn, pedir al
paciente que presione firmemente la torunda durante 3 minutos con el brazo extendido.
- Separar la aguja de la jeringa o del holder cuidadosamente, llenar los tubos deslizando la
sangre por las paredes del mismo.
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
- Separacin inadecuada del coagulo antes de centrifugar (no poner en bao de Mara).
9.1.6. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
88
Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
9.2.1. PROPSITO:
Detectar y cuantificar anticuerpos reagnicos en suero, que corresponde a un diagnostico presuntivo
de Sfilis, La prueba de RPR, es una modificacin del antgeno VDRL (pruebas no treponmicas).
El RPR es una prueba que contiene micropartculas de carbn para visualizar la
reaccin
antgeno anticuerpo.
- Dispensadores de 50 uL.
- Agua destilada.
- Papel toalla.
- Aplicadores de madera.
- Puntas plsticas.
- Marcador de vidrio.
- Guantes descartables.
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
9.2.4. EQUIPO:
- Reloj marcador.
- Macrocentrfuga.
9.2.5. PROCEDIMIENTO:
Prueba cualitativa:
- Extender el suero sobre la superficie del crculo con el extremo opuesto del dispensador.
- Inclinando la lmina de adelante hacia atrs observar a simple vista con buena iluminacin
agregados bien diferenciados en el centro y en la periferia del crculo.
Toda prueba cualitativa que presente aglutinacin se debe hacer prueba semicuantitativa.
Prueba semicuantitativa:
- En cinco crculos poner con el dispensador una gota (50 L) de solucin salina 0.85 %, no
extender.
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
- A partir de esta mezcla que constituye la dilucin 1:2 proseguir las diluciones seriadas, en
base 2 mezclando y pasando sucesivamente de un crculo a otro 50 L; descartar los 50
L de la ltima dilucin. (Anexo 5)
Crculos 1 2 3 4 5
- Extender las gotas por la superficie del crculo, utilizando un mezclador e iniciando por la
dilucin ms alta.
- Colocar en cada crculo una gota (16 L) de antgeno bien homogenizado, no agitar
violentamente.
- Inclinando la lmina de adelante hacia atrs observar a simple vista con buena iluminacin
agregados bien diferenciados en el centro y en la periferia del crculo.
Toda prueba que de una reaccin de 1:32 se debe hacer la prueba cuantitativa.
Prueba cuantitativa:
- En un tubo colocar 1.5 mL de solucin salina a 0.85 % y 0.1 mL de suero. (Esta constituye
una dilucin 1:16)
91
Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
Crculos 6 7 8 9 10
- Diluciones inexactas.
- Muestras hiperlipmicas.
9.2.8. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
9.3.1. PROPSITO:
Detectar in vitro los anticuerpos formados en el torrente sanguneo por el virus de la Inmunodeficiencia
Humana (VIH 1 y VIH 2).
- Puntas plsticas.
- Aplicadores de madera.
- Marcador de vidrio.
- Guantes descartables.
- Papel toalla.
9.3.4. EQUIPO:
- Macrocentrfuga.
- Reloj marcador.
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
9.3.5. PROCEDIMIENTO:
- Centrifugar la sangre a 2,500 rpm durante 5 minutos.
- Leer el resultado.
- Infeccin con una variante del virus que no reacciona con los antgenos especficos
utilizados en la configuracin del ensayo.
- Presenta barra roja en las dos ventanas del rea de reaccin, tanto la del paciente con la
ventana del control.
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
INDETERMINADO:
Presenta barra tenue en la ventana del rea de reaccin del paciente y barra roja en la
ventana del control.
NO REACTIVO A LA FECHA:
Presenta barra roja solamente en la ventana de control y no presenta barra roja en la ventana
del resultado del paciente.
REACCIN NO VLIDA:
No aparece ninguna barra roja ni en la ventana de control ni en la ventana del paciente, esta
prueba debe repetirse.
No aparece ninguna barra roja en la ventana de control pero s en la ventana del paciente,
esta prueba debe repetirse.
9.3.8. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
95
Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
9.4.1. PROPSITO:
Investigar en el suero del paciente anticuerpos producidos por infecciones causadas por Salmonellas,
Brucellas, Rickettsias u otras infecciones bacterianas, por las cuales el organismo del paciente
reacciona con la produccin de anticuerpos especficos.
- Puntas plsticas.
- Lmina de reaccin.
- Aplicadores de madera.
- Marcador de vidrio.
- Guantes descartables.
- Papel toalla.
- Antgeno somtico O.
- Antgeno flagelar H.
- Antgeno paratyphico A.
- Antgeno paratyphico B.
96
Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
9.4.4. EQUIPO:
- Macrocentrfuga.
- Reloj marcador.
- Pipetas automticas.
- Rotador serolgico.
9.4.5. PROCEDIMIENTO:
- Centrifugar la sangre a 2,500 rpm durante 5 minutos.
Prueba cualitativa:
- Colocar una gota de muestra en los 6 crculos y una gota de cada control positivo y
negativo en su respectivo crculo.
- Mezclar con palillos descartables por separado y esparcir el lquido sobre el rea completa
de cada crculo.
Prueba semicuantitativa:
- Colocar en seis tubos 100 L. de solucin salina 0.85% y adicionar en el primer tubo 100
L de muestra.
- Hacer diluciones seriadas en base a 2 en los siguientes tubos, de modo de obtener las
siguientes diluciones: 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32 y 1:64.
97
Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
- Rotacin inadecuada.
9.4.8. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
9.5.1. PROPSITO:
Investigar en la sangre la presencia o ausencia de los antgenos A, B y Rh que se localizan en la
superficie de los glbulos rojos, utilizando anticuerpos especficos para cada uno de ellos.
- Puntas plsticas.
- Aplicadores de madera.
- Frasco lavador.
- Marcador de vidrio.
- Guantes descartables.
- Papel toalla.
- Antisuero A.
- AntisueroB.
- Antisuero RH (anti-D).
9.5.4. EQUIPO:
- Macrocentrfuga.
- Reloj marcador.
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
- Pipetas automticas.
9.5.5. PROCEDIMIENTO:
- Identificar previamente los tubos.
b) Mezclar y llenar con solucin salina 0.85% el tubo hasta 3/4 partes.
- Preparar una suspensin al 5%, colocando una gota de los glbulos rojos lavados y 19
gotas de solucin salina y mezclar.
- Rotular 3 tubos con las letras A, B, Rh por cada muestra a analizar, a cada uno agregar
una gota de glbulos rojos al 5%.
a) Tubo A antisuero A.
b) Tubo B antisuero B.
c) Tubo Rh antisuero D.
100
Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
9.5.8. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
9.6.1. PROPSITO:
Comprobar si una persona es verdadero positivo o negativo con respecto al factor Rh (D). La
variante Du se determina cuando el factor Rh es negativo.
- Marcador de vidrio.
- Guantes descartables.
- Papel toalla.
- Albmina bovina.
9.6.4. EQUIPO:
- Bao de Mara.
- Centrfuga.
9.6.5. PROCEDIMIENTO:
- Identificar dos tubos
- En el tubo 1: colocar una gota de suero anti D y agregar una gota de suspensin de
eritrocitos al 5% a estudiar.
102
Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
- Mezclar suavemente.
- En el tubo 2 (control): colocar una gota de albmina bovina y agregar una gota de
suspensin de eritrocitos al 5% a estudiar.
- Mezclar suavemente.
- Lavar los glbulos rojos de ambos tubos cuatro veces llenndolos con solucin salina al
0.85%.
- Centrifugar por 2 minutos a 3400 rpm cada vez y descartar la solucin despus de cada
lavada.
- Leer frente a la luz de una lmpara y buscar aglutinacin tratando de desprender suavemente
el botn de clulas.
- Observar aglutinacin.
103
Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
9.6.8. RESPONSABLE:
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
9.7.1. PROPSITO:
Investigar en orina la presencia de la hormona gonadotropina corinica (HCG); el mtodo se basa en
la reaccin de aglutinacin de una suspensin de Ltex recubiertas con anticuerpos monoclonales
Anti-hormona gonadotropina corinica.
- Papel toalla.
- Marcador de vidrio.
- Dispensadores plsticos.
- Tubos cnicos.
- Guantes descartables.
- Control positivo: orina humana con una concentracin conocida de hormona gonadotropina
corinica.
9.7.4. EQUIPO:
- Macrocentrfuga.
- Rotador serolgico.
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
- Lmpara de luz.
- Reloj marcador.
9.7.5. PROCEDIMIENTO:
- La muestras de orina que presente turbidez debe centrifugarse antes de iniciar la prueba.
- Sobre cada crculo de lmina o tarjeta depositar 100 L de muestras a analizar e incluir
un control Positivo y un negativo por cada tiraje.
- Depositar una gota de reactivo de Ltex sobre cada una de las muestras y los controles.
- Mezclar con el extremo opuesto del dispensador, procurando extender la suspensin por
toda la superficie interior del crculo
- Colocar la tarjeta o lmina sobre un agitador rotatorio de 80 - 100 rpm durante 2 minutos.
- Muestras con bajo niveles de hormona gonadotropina corinica (antes de las seis semanas,
se recomienda repetir la prueba unos das ms tarde).
- Realizar la prueba con reactivos que no han sido llevados a temperatura ambiente.
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REACCIN DIRECTA:
POSITIVA: Formacin aglutinacin.
NEGATIVA A LA FECHA: No se observa aglutinacin.
REACCIN INDIRECTA:
POSITIVA: No se observa aglutinacin.
NEGATIVA A LA FECHA: Formacin de aglutinacin.
9.7.8. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
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10. MICROBIOLOGA
BSICA
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10.1.1. PROPSITO:
Estudiar mediante un frotis teido la presencia de bacterias, lo cual aporta una informacin til para
el diagnstico de la enfermedad del paciente y contribuye a establecer un tratamiento inmediato.
- Lmina portaobjeto.
- Marcador de vidrio.
- Papel toalla.
- Gasa.
- Fsforos.
- Guantes descartables.
10.1.4. EQUIPO:
Mechero.
10.1.5. PROCEDIMIENTO:
- Identificar la lmina porta objeto.
- Extender en el centro de una lmina portaobjeto una porcin de la muestra con asa o
aplicador de madera en forma de capa fina, trazando una espiral del centro a la periferia.
- Fijar al calor.
- Fijar al calor pasndolo rpidamente sobre la llama de un mechero, tres veces en forma
horizontal con la muestra hacia arriba.
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- Dejar enfriar.
10.1.7. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
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10.2.1. PROPSITO:
Colorear las bacterias presentes en un frotis mediante la tincin de Gram, la cual permite diferenciar
en dos grandes grupos, bacterias grampositivas que toman el color violeta y bacterias gramnegativas
que toman el color rosado.
- Papel filtro.
- Embudo.
- Guantes descartables.
- Marcador de vidrio.
- Papel toalla.
- Alcohol Acetona.
- Safranina.
10.2.4. EQUIPO:
- Reloj marcador.
- Microscopio.
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10.2.5. PROCEDIMIENTO:
- Filtrar los colorantes antes de utilizar.
- Cubrir el frotis completamente con Lugol o solucin de Yodo para Gram durante un
minuto.
- Aplicar alcohol acetona gota a gota hasta que no salga Cristal Violeta.
Gramnegativa falsa
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10.2.8. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
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10.3.1. PROPSITO:
Investigar en una muestra de secrecin vaginal, la presencia de Trichomonas vaginalis, levaduras
y/o pseudohifas.
- Lmina portaobjeto.
- Laminilla cubreobjeto.
- Hisopos estriles.
- Marcador de vidrio.
- Papel toalla.
- Gasa.
10.3.4. EQUIPO:
- Microscopio.
10.3.5. PROCEDIMIENTO:
- Identificar la lmina portaobjeto.
- Colocar una gota en el portaobjeto y cubrir con laminilla cubre objeto, con el cuidado de
no formar burbujas de aire.
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10.3.8. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
10.4.1. PROPSITO:
Investigar en una muestra de secrecin vaginal coloreada, la presencia de Lactobacilos, mobiluncos,
o gardnerella.
- Lmina portaobjeto.
- Hisopos estriles.
- Marcador de vidrio.
- Papel toalla.
- Guantes descartables.
- Gasa.
- Aceite de inmersin.
10.4.4. EQUIPO:
- Microscopio.
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
10.4.5. PROCEDIMIENTO:
- Identificar la lmina portaobjeto.
- Reportar lo observado.
FLORA NORMAL:
10.4.8. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
10.5.1. PROPSITO:
Investigar en una muestra de secrecin uretral coloreada, la presencia de Diplococos gramnegativos
intracelulares (leucocitos) y extracelulares.
- Marcador de vidrio.
- Guantes descartables.
- Papel toalla.
- Gasa.
- Aceite de inmersin.
- Alcohol Acetona.
- Safranina.
10.5.4. EQUIPO:
- Microscopio.
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
10.5.5. PROCEDIMIENTO:
- Identificar la lmina portaobjeto.
- Tomar la muestra aplicando una ligera presin en el pene de atrs hacia delante de
manera que salga una gota de pus por el meato, la cual ser recibida en una lmina
portaobjeto.
- Cuando la muestra es demasiada espesa, agregar una gota de solucin salina estril
0.85%.
- Prestar especial atencin a las orillas del frotis donde los elementos se extienden en una
capa ms delgada, son ms fciles de reconocer y la tincin es menos concentrada.
- Reportar lo observado.
10.5.8. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
Este procedimiento no se desarrolla en este manual, por existir a nivel nacional la Gua Tcnica
para el Diagnstico de Tuberculosis por Microscopa Directa, Ao 2005, para realizar estos
procedimientos, remitirse a lo contemplado en la mencionada Gua.
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
E ste manual ser revisado y actualizado al menos cada 5 aos, o antes cuando sea
necesario un cambio en las metodologas. La revisin estar a cargo de un equipo
tcnico multidisciplinario, el cual enriquecer con nuevos aportes e integrar los conocimientos y
experiencias en el rea.
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
Asepsia: Mtodo de prevenir las infecciones mediante la destruccin de los agentes infectivos.
Clulas epiteliales: Clulas superficiales que protegen las cavidades internas y la superficie externa
del cuerpo.
Cilindros urinarios: Aglomerados de protenas de estructura tubular que se forman durante las
enfermedades de los tbulos renales, pueden contener en su matriz eritrocitos, otras clulas y
depsitos de sustancias qumicas.
Cogulo: La conversin del fibringeno en una red de molculas de fibrina polimerizada, que
transforma la sangre en una masa gelatinosa.
Densidad ptica: Cantidad de luz absorbida por una sustancia que puede ser medida por un
espectrofotmetro.
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
EDTA: sales de sodio o potasio del cido etilendiaminotetractico, son poderosos anticoagulantes y
suelen elegirse para el trabajo hematolgico normal.
Ensayo: Experimento.
Eritrocito: Clulas sanguneas de forma discoide, bicncava y elstica que carecen de ncleo y cuya
principal funcin es el transporte de hemoglobina.
Esferocito: Glbulo rojo que tiene forma de esfera, sin palidez en el centro, es un defecto de
membrana.
Estndar: Una solucin patrn que se utiliza para comparar o para la elaboracin de otras
diluciones.
Gramnegativa: Caracterstica de los tejidos o bacterias que pierden la coloracin por el mtodo de
Gram (toman color rosado).
Grampositiva: Caracterstica de los tejido o bacteria que conservan la coloracin por el mtodo de
Gram (toman color azul).
Hematocrito: Volumen de glbulos rojos por volumen de sangre, se obtiene mediante la centrifugacin
de sangre venosa o capilar.
Hemoglobina: Componente principal de los glbulos rojos, protena conjugada que sirve de vehculo
para el transporte de oxgeno y bixido de carbono.
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
Hidrlisis: Adicin de agua a una sustancia, con descomposicin de esta en otras ms sencillas.
Imprecisin: Mediciones que siendo realizadas en las mismas condiciones dan diferentes
resultados.
Linfocitos: Clulas mononucleadas; con ncleo nico que sirven de defensa, se dividen en Linfocitos
B y Linfocitos T.
Monocito: clula del sistema retculo-endotelial presente en la sangre normal con carcter
fagoctico.
Mononucleares: Leucocito que posee un solo ncleo simple, como el linfocito y el monocito.
Neutrfilo: Tipo de leucocito caracterizado por citoplasma granuloso que se tie fcilmente con los
colorantes cidos o bsicos.
Neutropenia: Disminucin del nmero absoluto de neutrfilos por debajo de los valores normales.
Plaquetopenia: disminucin del nmero de plaquetas por debajo del valor normal.
Plasma: Componente lquido de la sangre que se obtiene al separar una sangre con anticoagulante
del paquete globular, contiene fibringeno y componentes de la coagulacin neutralizados.
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
Procedimiento: Serie de pasos en forma cronolgica, por los cuales se logra un resultado
deseado.
Pseudohifas: Hongo de tipo de levadura que presenta una extensin tubular de protoplasma que
difiere de las hifas porque continan con la clula madre.
Quiste: Forma resistente de los protozoos los cuales se rodean de una membrana dura e
impermeable.
Reaccin colorimtrica: Reaccin qumica que tiene como producto final un compuesto de color.
Reaccin enzimtica: Reaccin qumica que tiene por catalizador una enzima.
Riesgo: Posibilidad o probabilidad de que ocurra un dao a la salud, puede ser causado por
accidente, enfermedades u otros.
Suero: Componente lquido de la sangre que se obtiene al separar una sangre sin anticoagulante
del paquete globular.
Tipocroma: Glbulo rojo con un halo mayor en el centro que lo normal (baja de hemoglobina).
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
13. ABREVIATURAS
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
14. Anexos
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
Preparacin:
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
Quiste maduro de E. histolytica con cuatro Trofozoito de E. histolytica con hemates Trofozoito de E. hartmanni.
ncleos y corpsculos cromatoides; tincin ingeridos teidos de rojo; ncleo visible en el Izquierda: tincin tricrmica.
tricrmica. borde inferior; tincin tricrmica. Derecha: hematoxilina-hierro.
Huevos de Ascaris Lumbricoide (arriba), Los huevos tpicos de Trichuris trichiura En una preparacin de kato-kats, los
Trichuris trichiura (centro) y Ancylostoma miden 50-55 por 22-24 um, tienen una huevos de Trichuris pueden aparecer
(abajo) en el mismo campo microscpico. cubierta parda y lisa con prominencias hinchados y de mayor tamao, con un
Obsrvense las diferencias de tamao. (tapones) bipolares y contienen un ovum contenido degenerado. Las prominencias
monocelular bipolares y las capas de la cubierta no estn
claramente definidas
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
Oocisto de C. Parvum; tincin cido Oocisto de C. Calletanencys; tincin Espora de Encephalitozoon hellem; tincin
resistente. Con diversas modificaciones acidorresistente. El microorganismo de de gram.
del mtodo de tincin acidorresistente, los la izquierda no se tie mientras que a la Estas esporas microspordicas se
oocistos pueden pasar de rojo a rosa (como derecha puede verse un tpico oocisto encuentran en el sedimento urinario; llama
en este caso) teido de rojo. la atencin un pequeo tamao.
Tambin se observan grnulos negros.
Oocisto de C. Parvum; tincin tricrmica. Oocistos esporulados y esporosistos de Esporas de un microsporidio intestinal
Los oosistos no siempre toman la tincin Sarcocystis Spp. Preparacin en fresco (Enterocytozoon bieneusi o Septada
tricrmica, pero cuando se tien pueden con Formol. El oocisto de finas paredes intestinalis) en una preparacin de calcoflor
ser visibles los cuatro esporozoitos, como contiene dos esporosistos pero puede blanco KOH con iluminacin ultravioleta.
sucede en este caso. romperse fcilmente por lo que a menudo El pequeo tamao de ambas especies
se encuentra en las heces esporocistos impide hacer una identificacin precisa de
libres como sucede en este caso. esta preparacin.
Los oocisto de todas las especies de
Sarcocystis son aproximadamente del
mismo tamao
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Anexo 4 Mediciones.
Sistema mtrico decimal: El sistema mtrico decimal, con el cual usted puede estar familiarizado, es
un sistema decimal que tiene relaciones numricas simples entre sus unidades.
Unidades del sistema mtrico: El sistema mtrico incluye medidas de longitud, capacidad y masa. La
unidad bsica de la longitud es el metro (m), de la capacidad es el litro (L) y de la masa el kilogramo
(Kg). Prefijos latinos son usados para identificar valores mltiples descendentes, ejemplo: deci
(0.1), centi (0.01), etc. Prefijos griegos son usados para identificar valores mltiples ascendentes,
ejemplo: deca (10), hecto (100), etc.
Prefijos comunes:
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Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
Longitud:
10 milmetros (mm) 1 centmetro (cm.)
100 centmetros 1 metro (m)
1000 metros 1 kilmetro (Km.)
Capacidad:
1000 mililitros 1 litro
1000 litros 1 kilolitro (Kl.)
Masa:
1000 miligramos 1 gramo (gr.)
1000 gramos 1 kilogramo (Kg)
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Anexo 5 - Diluciones
E
l acto de diluir es hacer una solucin menos concentrada de una ms
concentrada. Esto generalmente se lleva a cabo agregando un diluyente
como agua, la cual no contiene nada de soluto, a una solucin. Las diluciones
generalmente se expresan como una unidad de la solucin original en un nmero total
de unidades de solucin final. As, una dilucin 1:10, se hace tomando una unidad de la
solucin concentrada que ser diluida a un volumen total de 10 unidades. Esto produce
una solucin que tiene una concentracin igual a 1/10 de la concentracin original.
Aunque las diluciones generalmente se escriben 1:10, 1:50, etc. quiz sera mas fcil
entender si las diluciones se expresaran como fracciones, tal como 1/10, 1/25, etc.
Cualquier expresin de dilucin se puede tratar como una simple fraccin, y el numerador
y el denominador pueden ser multiplicados por un nmero. Ejemplo: si 500 mL de una
dilucin 1:5 de una solucin cualquiera se tiene que preparar, el razonamiento matemtico
es como sigue: 1/1 x 1/5 = 1/5
Grandes diluciones que pueden ser muy difciles de llevar a cabo en una sola operacin
se pueden realizar haciendo ms de una dilucin.
Por ejemplo: no se puede utilizar ms de 10 litros de diluyente para hacer una dilucin de
1:10,000, as como ocupar un frasco volumtrico de 10 litros, o el reducir la cantidad de
solucin concentrada en una fraccin de mL, puede introducir un gran error en la dilucin.
La mejor alternativa es la de usar una serie de dos o mas diluciones. Cualquier nmero de
diluciones diferentes puede usarse, el nico requisito es que cuando estas se multiplican
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Extensor
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OBSERVACIONES:
La concentracin de la ampolla Standard es 20.8 mg/dL (este dato lo trae anotado cada ampolla
en su etiqueta)
Standard
FACTOR =
Lectura
La dilucin de la sangre es 1/251 por que se toman 0.02 ml de sangre en 5 mL de solucin diluyente
o sea que hay 0.02 ml de sangre en 5.02 de solucin.
1mL ---------------- X
1 mL X 5.02 mL
X= = 251 factor de dilucin.
0.02
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Adicionar 0,1 mL
de solucin diluyente
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INFECCIOSAS
- Mononucleosis infecciosa.
- Hepatitis infecciosa.
- Sarampin.
- Varicela.
- Ricketsia.
- Tifus.
- Micoplasma.
- Bacterias.
- Lepra.
- Fiebre escarlatina.
- Tuberculosis (avanzada).
- Neumona neumoccica.
- Protozoos.
- Tripanosomiasis.
NO INFECCIOSAS
- Lupus eritematoso.
- Artritis reumatoidea.
- Embarazo.
- Narcoadiccin.
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REACTIVO
TCNICA:_________________________ LOTE:_______________________
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15. BIBLIOGRAFA
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Kahleen Morrison Treseler. Laboratorio Clnico y pruebas de diagnstico, manual modernos, primera
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Ministerio de Salud Pblica y Asistencia Social. Manual de Bioseguridad de los Laboratorios Clnicos,
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Ministerio de Salud Pblica y Asistencia Social. Manual para control de calidad en los laboratorios
VIH, Primera Edicin, El Salvador, 2005.
Tood Sanford & Savid Sohn. El Laboratorio en el diagnostico clnico, primera edicin, 2006.
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