Espectroscopia de resonancia magntica

nuclear

La espectroscopa de resonancia magntica nuclear tos descubrimientos.[1] La aplicacin qumica de la RMN

(RMN) es una tcnica empleada principalmente en la elu- fue descubierta a principios de los cincuenta, al observar-
cidacin de estructuras moleculares, aunque tambin se se que la frecuencia de resonancia de un ncleo depen-
puede emplear con nes cuantitativos y en estudios cin- da fuertemente de su entorno qumico (chemical shift). A
ticos y termodinmicos. partir de los aos setenta, el desarrollo de nuevas tcnicas
Algunos ncleos atmicos sometidos a un campo mag- y mayores campos magnticos (que incrementan tanto la
sensibilidad como la resolucin de las seales) permitie-
ntico externo absorben radiacin electromagntica en la
regin de las frecuencias de radio o radiofrecuencias. Co- ron estudiar molculas cada vez ms grandes. El adveni-
miento de la RMN multidimensional y el uso del marcaje
mo la frecuencia exacta de esta absorcin depende del en- 13
torno de estos ncleos, se puede emplear para determinar C y 15 N marc el inicio de la RMN biolgica.
la estructura de la molcula en donde se encuentran estos.
Para que se pueda emplear la tcnica los ncleos deben
tener un momento magntico distinto de cero. Esta con- 2 Tipos de RMN
dicin no la cumplen los ncleos con nmero msico y
nmero atmico par (como el 12 C, 16 O, 32 S). Los ncleos 2.1 Espectroscopia de RMN con Onda
ms importantes en qumica orgnica son: 1 H, 13 C, 31 P, Continua (CW: Continuous Wave)
19
F y 15 N. Otros ncleos importantes: 7 Li, 11 B, 27 Al,
29
Si, 77 Se, 117 Sn, 195 Pt, 199 Hg, 203 Tl, 205 Tl, 207 Pb Desde sus comienzos hasta nales de los 60, la
Se preeren los ncleos de nmero cuntico de espn nu- espectroscopia de RMN utiliz una tcnica conocida co-
clear igual a 1/2, ya que carecen de un momento cua- mo espectroscopia de onda continua (CW). La manera
drupolar elctrico que produce un ensanchamiento de las de registrar un espectro de RMN en el modo de CW era,
seales de RMN. Tambin es mejor que el istopo sea bien mantener constante el campo magntico e ir hacien-
abundante en la naturaleza, ya que la intensidad de la se- do un barrido de frecuencias con un campo oscilante, o
al depender de la concentracin de esos ncleos acti- bien, lo que era usado ms a menudo, se mantena cons-
vos. Por eso, uno de los ms tiles en la elucidacin de tante la frecuencia del campo oscilante, y se iba varian-
estructuras es el 1 H, dando lugar a la espectroscopia de do la intensidad del campo magntico para encontrar las
resonancia magntica nuclear de protn. Tambin es im- transiciones (picos del espectro). En la RMN de CW las
portante en qumica orgnica el 13 C, aunque se trata de seales del espectro se registran como seales en reso-
un ncleo poco abundante y poco sensible. nancia.
La tcnica se ha empleado en qumica orgnica, qumica La espectroscopia CW est limitada por su baja sensibi-
inorgnica y bioqumica. La misma tecnologa tambin ha lidad, ya que cada seal se registra una sola vez por cada
terminado por extenderse a otros campos, por ejemplo en barrido y la tcnica de resonancia magntica nuclear ya
medicina, en donde se obtienen imgenes por resonancia es de por s no demasiado sensible; esto quiere decir que
magntica. la tcnica sufre de una baja relacin seal-ruido. Afortu-
nadamente, en RMN es posible mejorar la relacin seal-
ruido mediante el promediado de seal. El promediado
de seal consiste en repetir la adquisicin del experimen-
1 Historia to e ir sumando los espectros que se obtienen. De esta
manera, las zonas del espectro en que existen seales se
La primera deteccin de Resonancia Magntica Nuclear suman de manera constructiva, mientras que, por su par-
debida a la formacin de una diferencia en las energas te, las zonas en que hay ruido, por su carcter aleatorio,
de ciertos ncleos en presencia de un campo magntico se acumula ms lentamente que la seal. Mediante el pro-
fue reportada independientemente por el grupo de Felix mediado de seal se incrementa la relacin seal-ruido en
Bloch de la Stanford University (para el agua lquida) y un valor que es la raz cuadrada del nmero de espectros
el grupo de Edward Mills Purcell en la Harvard Univer- que se han acumulado. Esta relacin se cumple con es-
sity (para la cera de parana) en 1946. Purcell y Bloch pectros de RMN en los que intervienen un slo tipo de
compartieron en 1952 el Premio Nobel de Fsica por es- ncleos, por ejemplo, slo 1 H, 13 C, etc., tambin llama-

1
2 2 TIPOS DE RMN

dos espectros homonucleares. po magntico externo, induciendo una pequea corriente

oscilante de RF en una bobina receptora situada en las
inmediaciones de la muestra. A medida que los ncleos
2.2 Espectroscopia de RMN de pulsos y van regresando poco a poco a la situacin inicial de equi-
Transformada de Fourier librio alineados con en el campo magntico principal, la
seal detectada va disminuyendo de intensidad hasta ha-
La tcnica de RMN con transformada de Fourier (FT- cerse cero. Esta cada de la seal se conoce como cada
NMR) es la que se utiliza en los espectrmetros actuales. libre de la induccin (Free Induction Decay) (FID) y da
Uno de los pioneros en este campo es Richard R. Ernst, lugar al espectro de RMN.
que la desarroll a partir del ao 1966 y por la que fue
galardonado con el Premio Nobel de Qumica en 1991.
FT-NMR permite disminuir drsticamente el tiempo que
requiere adquirir una acumulacin (scan) del espectro
completo de RMN. En vez de realizar un barrido lento
de la frecuencia, una en cada instante, esta tcnica explo-
ra simultnea e instantneamente todo un rango de fre-
cuencias. Dos desarrollos tcnicos fueron fundamentales
para poder hacer realidad la tcnica FT-NMR: ordenado-
res capaces de llevar a cabo las operaciones matemticas
necesarias para pasar desde el dominio de tiempo al de la
frecuencia, es decir, para obtener el espectro; y el conoci- La seal que se detecta FID (Free Induction Decay) es una seal
miento sobre cmo poder excitar simultneamente todo oscilante que contiene todas las seales del espectro y decae hasta
un rango de frecuencias. hacerse cero.
La FT-NMR funciona con la muestra (espines nucleares)
La FID es una onda que contiene todas las seales del es-
sometida a un campo magntico externo constante. Se
pectro en una forma que es dependiente del tiempo. Es-
irradia la muestra con un pulso electromagntico de muy
ta onda puede convertirse en un espectro de seales en
corta duracin en la regin de las radiofrecuencias. La
funcin de su frecuencia. Para ello se utiliza una funcin
forma que suele usarse para este pulso es rectangular, es
matemtica conocida como Transformada de Fourier. El
decir, la intensidad de la radiofrecuencia oscila entre un
resultado es lo que se conoce como un espectro de RMN
mximo y un mnimo que es constante mientras dura el
(espectro de frecuencias).
pulso. Un pulso de corta duracin tiene una cierta incerti-
dumbre en la frecuencia (principio de indeterminacin de
Heisenberg). La descomposicin de fourier de una onda
rectangular contiene contribuciones de una de todas las
2.3 RMN Multidimensional
frecuencias. El pulso que se genera es por tanto policro-
mtico y cuanto ms corto sea, es capaz de excitar un La posibilidad de excitar la muestra con uno o ms pulsos
de radiofrecuencia (RF), cada uno de ellos aplicado con
mayor rango de frecuencias.
una potencia, duracin, frecuencia, forma y fase particu-
La aplicacin de un pulso policromtico en una regin lares, e introducirlos en momentos especcos de tiempo
estrecha de la banda de radiofrecuencias (MHz) afecta durante el experimento de RMN, generalmente antes de
a aquellos espines nucleares que resuenen en esa regin. que el sistema haya regresado al equilibrio por relajacin,
Un pulso policromtico con una anchura en frecuencia permite disear toda una gama de secuencias de pulsos de
de unos pocos kHz puede llegar a excitar simltaneamen- las que se puede extraer informacin molecular muy va-
te slo a los espines nucleares de un mismo tipo de n- riada.
cleo atmico dentro de una molcula, por ejemplo, todos
los ncleos de hidrgeno (1H). Antes del pulso el vector Una secuencia de pulsos es una distribucin en el tiem-
de polarizacin neta de cada uno de los espines nuclea- po de alguno o varios de los siguientes elementos: i) un
res se encuentra en situacin de equilibrio alineado en la cierto nmero de pulsos de RF que afecten a uno o ms
direccin del campo magntico. Durante el tiempo que tipos de ncleos, ii) tiempos de espera en los que no se ha-
se aplica el pulso, el pulso introduce un segundo campo ce nada sino esperar a que el sistema evolucione de una
magntico en una direccin perpendicular al campo prin- determinada forma. Estos tiempos de espera pueden ser
cipal del imn y el vector polarizacin realiza un deter- jos o bien incrementables si su duracin se va aumentan-
minado movimiento de precesin. Tras cesar el pulso, el do a medida que se repite el experimento. iii) gradientes
vector polarizacin de todos los espines afectados puede de campo magntico y iv) una etapa nal en la que se
formar un cierto ngulo con el eje del campo magntico adquiere la FID.
principal. En este momento, los espines, comportndose En un experimento de RMN multidimensional la secuen-
como pequeos imanes polarizados, comienzan a prece- cia de pulsos debe constar de al menos dos pulsos y stos
sionar con su frecuencia caracterstica en torno al cam- deben separados por un periodo de espera incrementable.

La secuencia de pulsos se repite un nmero de veces ad-
quirindose una FID en cada ocasin. La fase de alguno
de los pulsos puede alterarse en cada repeticin as como
incrementarse la duracin de uno o ms tiempos de es-
pera variables. Si la secuencia de pulsos tiene un tiempo
de espera incrementable el experimento tendr dos di-
mensiones, si tiene dos ser de tres dimensiones, si tiene
tres el experimento ser de cuatro dimensiones. Aunque
en teora no existe lmite en el nmero de dimensiones
de un experimento, experimentalmente hay limitaciones
impuestas por la consiguiente prdida de seal por rela-
jacin que conlleva la deteccin de las distintas dimen-
siones. Los tiempos de registro de los experimentos de
RMN multidimensional se pueden acortar drsticamen-
te con las tcnicas rpidas de RMN desarrolladas en la
presente dcada.
Los experimentos multidimensionales se pueden clasi-
car en dos tipos principales:
Experimentos de correlacin homonuclear: Son aque-
llos en los que todas las dimensiones corresponden al
mismo ncleo. Ejemplos: COSY (COrrelation Spec-
troscopY), TOCSY (TOtal Correlation SpectroscopY),
NOESY (Nuclear Overhauser Eect SpectroscopY).
Experimentos de correlacin heteronuclear: En este ex-
perimentos se obtienen espectros cuyas dimensiones per-
tenecen a diferentes ncleos. Ejemplos: HMQC (Hetero-
nuclear Multiple Quantum Correlation), HSQC (Hetero-
nuclear Simple Quantum Correlation), HMBC (Hetero-
nuclear Multiple Bond Correlation), HOESY (Heteronu-
clear Overhauser Eect SpectroscopY).
Grosso modo, las interacciones que pueden detectarse cleos
por RMN se pueden clasiscar en dos tipos:
1. Las interacciones a travs de enlaces se basan en el encuentra la tcnica de HR-MAS (High Resolution with
acoplamiento escalar
2. Las interacciones a travs del espacio se basan en
el acoplamiento dipolar. En el caso de muestras en
disolucin, el acoplamiento dipolar se maniesta co-
mo efecto Overhauser nuclear que permite determi-
nar la distancia entre los tomos.
Richard Ernst en 1991 y Kurt Wthrich en el 2002 fue-
ron galardonados con el premio Nobel de Qumica por su
contribuciones al desarrollo de la RMN de 2-dimensiones
y multidimensional con transformada de Fourier. Los
avances conseguidos por ellos y por otros grupos de in- 4 Sensibilidad
vestigadores han expandido la RMN a la bioqumica, y
en particular a la determinacin de la estructura en diso-
lucin de biopolmeros como protenas o incluso cidos
nucleicos de tamao pequeo.
3 Slidos
La RMN en disolucin es complementaria de la loga audio-visual e informtica tambin han mejorado
cristalografa de rayos X ya que la primera permite es- los aspectos de generacin de pulsos y la recepcin de
3
tudiar la estructura tridimensional de las molculas en fa-
se lquida o disuelta en un cristal lquido, mientras que la
cristalografa de rayos-X, como su nombre indica, estudia
las molculas en fase slida.
La RMN puede utilizarse tambin para el estudio de
muestras en estado slido. Si bien en su estado actual que-
da lejos de poder proporcionar con buen detalle la estruc-
tura tridimensional de una biomolcula.
En el estado slido las molculas estn estticas y no exis-
te, como ocurre con las molculas en disolucin, un pro-
mediado de la seal de RMN por el efecto de la rotacin
trmica de la molcula respecto a la direccin del cam-
po magntico. Las molculas de un slido estn prcti-
camente inmviles, y cada una de ellas experimenta un
entorno electrnico ligeramente diferente, dando lugar a
una seal diferente. Esta variacin del entorno electrnico
disminuye la resolucin de las seales y diculta su inter-
pretacin. Raymond Andrew fue uno de los pioneros en el
desarrollo de mtodos de alta resolucin para resonancia
magntica nuclear en estado slido. l fue quien intro-
dujo la tcnica de la rotacin en el ngulo mgico Magic
Angle Spinning (MAS) que permiti incrementar la reso-
lucin de los espectros de slidos varios rdenes de mag-
nitud. En MAS, las interacciones se promedian rotando
la muestra a una velocidad de varios kilohertzios.
Alex Pines en colaboracin con John Waugh revoluciona-
ron tambin la RMN de slidos introduciendo la tcnica
de la polarizacin cruzada (CP) que consigue incremen-
tar la sensibilidad de ncleos poco abundantes gracias a
la transferencia de polarizacin de los protones a los n-
ms insensibles cercanos, generalmente 13 C, 15 N o
29
Si.
A caballo entre la RMN en disolucin y en fase slida, se
Magic Angle Sinning), cuya aplicacin fundamental es el
anlisis de geles y materiales semislidos. El fundamento
del HR-MAS es hacer girar la muestra, al ngulo mgico,
a una velocidad muy superior que en slidos habituales.
El efecto conseguido son espectros mono y bidimensiona-
les de gran calidad, prxima a la RMN en disolucin. La
principal aplicacin de esta tcnica es el anlisis de ma-
trices biolgicas y polimricas, como resinas para sntesis
en fase slida solvatadas.
Debido a que la intensidad de la seal de RMN, y por
tanto, tambin la sensibilidad de la tcnica depende de
la fortaleza del campo magntico, desde los inicios de la
RMN ha existido gran inters por el desarrollo de ima-
nes ms potentes. En la actualidad los imanes comercia-
les ms potentes estn en torno a los 22.31 T, o 950 MHz
frecuencia de resonancia de 1H. Los avances en la tecno-
4 6 INFORMACIN OBTENIDA MEDIANTE RMN

seal y el procesado de la informacin. 6 Informacin obtenida mediante

La sensibilidad de las seales tambin depende de la pre- RMN
sencia de ncleos magnticamente-susceptibles a la RMN
y, por tanto, de la abundancia natural de tales ncleos. Pa- La aplicacin fundamental de la espectroscopia de RMN
ra el caso de biomolculas los ncleos ms abundantes y es la determinacin estructural, ya sea de molculas org-
magnticamente susceptibles son los istopos de hidr- nicas, organometlicas o biolgicas. Para ello es necesa-
geno 1 H y fsforo 31 P. Por el contrario, ncleos como rio la realizacin de diferentes tipos de experimentos de
carbono y nitrgeno tienen istopos tiles a la RMN, 13 C los cuales se obtiene una determinada informacin.
y 15 N, respectivamente, pero se presentan en baja abun-
dancia natural. Para hacer frente a esta dicultad existe Para la elucidacin estructural de molculas orgnicas y
la posibilidad de enriquecer las molculas de la muestra organometlicas los experimentos ms utilizados son los
con estos istopos (ej. sustitucin de 12 C por 13 C y/o de siguientes:
14
N por 15 N) para poder estudiarlos por RMN con la su-
ciente sensibilidad. Se trata de istopos perfectamente
estables que no producen ms que una pequea variacin
en la masa molecular de la molcula, sin afectar para nada
a otras propiedades estructurales o qumicas de la mues-
tra.

5 Instrumentacin en Resonancia
Magntica Nuclear: el espectr-
metro
Ejemplo de un espectro 1 H de RMN.
Un espectrmetro de RMN consta de las siguientes partes
fundamentales:
Espectro monodimensional de 1 H: Da informacin
del nmero y tipo de hidrgenos diferentes que hay
Un imn que genere un campo magntico estable, el en la molcula. La posicin en el espectro (desplaza-
cual puede ser de una intensidad variable, deniendo miento qumico) determina el entorno qumico del
la frecuencia de resonancia de cada ncleo. General- ncleo, y por tanto da informacin de grupos fun-
mente se identica cada espectrmetro por la fre- cionales a los que pertenecen o que estn cerca. La
cuencia de resonancia del protn, as en un imn de forma de la seal da informacin de los protones cer-
7.046 Tesla, los ncleos de 1 H resuenan a 300 MHz, canos acoplados escalarmente.
y por tanto sera un espectrmetro de 300 MHz. Por
el momento el imn de mayor campo magntico del
mundo lo ha instalado Bruker en la Unviersiad de
ciencia y tecnologa Rey Abdullah en Arabia Saudi-
ta, de 950 MHz (22.3 Tesla).[2]

Una sonda, que se sita dentro del imn, en la que

se introduce la muestra y que consta de las bobinas
responsables de emitir y recibir las radiofrecuencias
(RF). El nmero de bobinas y su disposicin deter-
minan el tipo y las aplicaciones de cada sonda.

Una consola en la que se generan los pulsos de RF

y se controla el resto de la parte electrnica del es-
pectrmetro.
Ejemplo de un espectro APT, un tipo de experimento de 13 C.

Un ordenador que sirve de interfaz con el espectr-

metro y con el que se analiza toda la informacin Espectro monodimensional de 13 C: Al igual que en
1
obtenida. H el desplazamiento qumico da informacin de los
 5

grupos funcionales. Dependiendo del tipo de expe- 9 Enlaces externos

rimento realizado se puede obtener informacin del
nmero de hidrgenos unidos a cada carbono. Artculo sobre espectrometra de Resonancia Mag-
ntica Nuclear
www.organicworldwide.net/nmr.html (en)

Ejemplo de un espectro COSY.

Espectros bidimensionales homonucleares: Los ex-

perimentos COSY y TOCSY dan informacin de
las relaciones entre los protones de la molcula, por
acomplamiento escalar o dipolar (NOESY)

Espectros bidimensionales heteronucleares: Los ex-

perimentos HMQC y HSQC indican qu hidrgenos
estn unidos a qu carbonos. El experimento HMBC
permite determinar relaciones entre protones y car-
bonos a mayor distancia (2 o 3 enlaces)

Experimentos con otros ncleos: Si la molcula po-

see otros ncleos activos en RMN es posible su me-
dida a travs de experimentos monodimensionales o
bidimensionales (por deteccin indirecta)

7 Vase tambin
Espectroscopia

Espectroscopia mediante resonancia magntica nu-

clear de protenas

8 Referencias
[1] Background and Theory Page of Nuclear Magnetic Re-
sonance Facility. Mark Wainwright Analytical Centre -
University of Southern Wales Sydney. 9 de diciembre de
2011. Consultado el 9 de febrero de 2014.

[2] Instalaciones cientcas de la U.C.T.R.A. (KAUST)

6 10 ORIGEN DEL TEXTO Y LAS IMGENES, COLABORADORES Y LICENCIAS

10 Origen del texto y las imgenes, colaboradores y licencias

10.1 Texto
Espectroscopia de resonancia magntica nuclear Fuente: https://es.wikipedia.org/wiki/Espectroscopia_de_resonancia_magn%C3%
A9tica_nuclear?oldid=97403547 Colaboradores: 4lex, Untrozo, Ascnder, Cookie, Jsanchezes, Troodon, Boticario, Yrbot, CleverChemist,
Idelso, Baneld, Chlewbot, CEM-bot, Dsavall, Rosarinagazo, Lauranrg, Manuelmartin, Soulbot, CommonsDelinker, Tmwsbg, VolkovBot,
Urdangaray, Technopat, AlleborgoBot, Aelo, Muro Bot, SieBot, Alexbot, Agualin, Camilo, Luckas-bot, MystBot, BenzolBot, Canyq, Hum-
befa, Jorge c2010, EmausBot, MerlIwBot, Elvisor, Addbot, BenjaBot, Equipo22-UOC y Annimos: 25

10.2 Imgenes
Archivo:Espectro_RMN_1H.png Fuente: https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/6/6d/Espectro_RMN_1H.png Licencia:
GFDL Colaboradores: Trabajo propio Artista original: Idelso
Archivo:Espectro_RMN_APT.png Fuente: https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/7/70/Espectro_RMN_APT.png Licen-
cia: GFDL Colaboradores: Trabajo propio Artista original: Idelso
Archivo:Espectro_RMN_COSY.png Fuente: https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/8/80/Espectro_RMN_COSY.png Li-
cencia: GFDL Colaboradores: Trabajo propio Artista original: Idelso
Archivo:Fid.jpg Fuente: https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/8/8c/Fid.jpg Licencia: Public domain Colaboradores: No
machine-readable source provided. Own work assumed (based on copyright claims). Artista original: No machine-readable author pro-
vided. Manuelmartin assumed (based on copyright claims).

10.3 Licencia del contenido

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