FACULTAD DE CIENCIAS

Departamento Acadmico de Biologa, Microbiologa y Biotecnologa

ALUMNO: ..................................................................................................................................... CICLO: III

SEMANA: 5 PROFESOR: Mg. Bilogo. Jos David Medina Moreno FECHA: /05/2017
EAP: INGENIERIA AGRONOMA ASIGNATURA: BIOQUIMICA
Practica N 03
01UNIDAD
DEMOSTRACION DE LA ACTIVIDAD DE UNA OXIDORREDUCTASA

I. INTRODUCCION

Las enzimas son protenas altamente especializadas que funcionan como catalizadores biolgicos de las
reacciones celulares. Existen seis clases principales de enzimas de acuerdo al tipo de reaccin catalizada;
una de estas es la clase de las oxidorreductasas.
Como ya se sabe, los organismos obtienen su energa a travs de reacciones de oxidacin reduccin
catalizadas por las oxidorreductasas y su capacidad de realizar una determinada reaccin depende del
potencial redox (Eh).
Existen microorganismos que pueden desarrollarse en ambientes pobres o ricos en oxgeno, la presencia de
mayores o menores concentraciones de oxgeno en un alimento indicarn si ste es un medio oxidante o no,
o lo que es lo mismo si posee valores altos o bajos de Eh respectivamente; de acuerdo con esto, los
microorganismos se clasifican en:

1. Aerobios estrictos: Crecen en presencia de oxgeno

Eh: + 350 a 500mv
2. Anaerobios estrictos: Crecen en ausencia de oxgeno
Eh: - 150mv
3. Aerobios facultativos: Crecen en presencia o ausencia de oxgeno
Eh: - 350 a + 500 mv

La determinacin de los potenciales de xido reduccin en alimentos se realiza con electrodos

apropiados y tambin se usan algunas sustancias que se van a colorear o decolorar a diferentes valores de
Eh

En la prctica se usar el azul de metileno, un indicador de xido reduccin, con la finalidad de estimar
en forma aproximada la carga microbiana de leche. El ensayo se denomina PRUEBA DE LA
REDUCTASA, una prueba rpida que se usa para inspeccionar leche tratada o no por el calor y
destinada a los consumidores. El fundamento radica en que por la actividad microbiana sus nutrientes
van a ser oxidados y otras sustancias, entre ellas el indicador, van a ser reducidas por accin enzimtica.

II. OBJETIVOS
2.1. Verificar la actividad de una enzima de xido reduccin
2.2. Estimar el nmero de microorganismos presentes en un alimento mediante la prueba de la reductasa.

III. EQUIPOS MATERIALES Y REACTIVOS

3.1 EQUIPOS
3.1.1 Balanza analtica
3.1.2 Bao mara
3.2 MATERIALES Y REACTIVOS
3.2.1 50 ml de leche fresca (por sub grupo de prctica)
3.2.2 05 ml Solucin diluida de azul de metileno
3.2.3 Termmetro
3.2.4 100 ml Agua destilada
3.2.5 Pipetas de 1 - 10 ml
3.2.6 03 Tubos de ensayo 15 X 150

IV. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

4.1 Mezclar cuidadosamente la muestra por inversin y agitacin y colocar 10 ml en un tubo de ensayo,
cuidando que los lados internos no se mojen de leche.
4.2 Aade 1 ml de la solucin de azul de metileno evitando que la pipeta haga contacto con la muestra,
ni con las paredes del tubo.
 4.3 Tapar aspticamente el tubo con tapn de goma, invirtelo 2 veces de tal manera que toda la columna
de aire se eleve por encima de la leche.
4.4 Despus de 5 minutos colocar el tubo de ensayo en el bao de agua a 37.5 0,5 C, cuida que el agua se
mantenga por encima del nivel de la leche en el tubo y que el interior del bao sea oscura.
4.5 Preparar 2 tubos control, uno que contenga 1 ml de agua corriente y 10 ml de leche similar a la que se
est probando, y otro que contenga 1 ml del indicador y 10 ml de leche. Ambos tubos control tienen
que introducirse en agua hirviente por lo menos durante 3 minutos.
4.6 Se considera que la leche est en buen estado cuando no se decolora despus de haberla incubado 30
minutos los tres tubos a 37 C. Una leche decolorada es aquella que ha perdido el color en toda la columna
o hasta 5 mm de la superficie. Registra tus resultados.

V. RESULTADOS Y DISCUSION
5.1. Representar mediante esquemas los resultados obtenidos

VI. CONCLUSIONES
6.1. Anotar las conclusiones de la prctica de acuerdo a los objetivos propuestos

VII. CUESTIONARIO
7.1. Qu es el potencial redox?
7.2. Qu correlacin existe entre el nmero de microorganismos en una muestra alimenticia y el tiempo de
reduccin del azul de metileno?
7.3. Una muestra de carne tendr los mismos valores de E h en toda su masa?
7.4. Seale dos muestras alimenticias en las que se puede aplicar la prueba de la reductasa?
7.5. Qu razones hacen difcil la determinacin de Eh en alimentos?

VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRAF ICAS

8.1. Horna, E.1988. Transformaciones energticas. Mdulo 2 de Bioqumica. Universidad Nacional del Santa.
Chimbote - Per
8.2. Morris, J. G. 1976. Fisicoqumica para Bilogos. Revert S.A. Espaa.