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5.5cromatografiadeliquidos 7806 PDF
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Lquidos
Elba Rojas Escudero
ERE
Ab o Ad ???
Temario
Fundamentos
Definiciones bsicas
Aspectos tericos
Instrumentacin
Elementos bsicos
Columnas
Inyectores
Detectores y sistemas acoplados
Anlisis
cualitativo y cuantitativo
Cromatografa de lquidos
Gas Lquido
Columna Plano
CPG CFG
Tipos de CL
PM < 2000
Cromatografa de intercambio inico
Adsorcin: lquido-slido
Particin: lquido-lquido
Cromatografia en fase normal
Cromatografia en fase inversa
PM > 2000
Cromatografia de exclusin por tamao
Requisitos de la muestra
Limpia
Compuestos inicos
Compuestos Termolbiles
Instrumentacin
Bomba de Gradiente
Fase mvil
alta presin de elucin
Muestra Inyector
Columna
Control de
temperatura
Detector Registrador
Fase mvil
FM
FE
Inyector Detector
Proceso Cromatogrfico
La fase mvil fluye, arrastrando consigo los
solutos
Los solutos se reparten entre ambas fases
Dimensiones
Longitud: 30, 50, 75, 100, 150, 300 mm
Dimetro: 2.1, 3.9, 5, 7.8 mm
Tamao de partcula: 3, 5, 10 m
Forma de la partcula: irregular o esfrica
Dimensiones de la
columna
di
dp
Fase estacionaria
(columna)
Empaque
Slica gel, C8, C18, Ciano, Amino,
Resinas, Polmeros
Carga de Carbn 5-20 % w/w
Intervalo de pH = f (FE)
Lmite de presin de trabajo
Compatible con la fase mvil
Fase estacionaria
Soportes de la FE
Permeacin o exclusin
Cuidados de la columna
Instalacin
Introduccin de muestras limpias
Contaminacin por fase mvil o muestra
Almacenarla y guardarla de forma
adecuada
Lavarla despus de utilizarla con
disoluciones reguladoras de pH
Precauciones
No exceder la presin de trabajo
Cambios bruscos de presin
Intervalo de pH adecuado
No utilizar H+ y OH- concentrados
Filtrar la muestra y la fase mvil
w de la muestra=f (dimensiones de la
columna)
Cromatografa
Fase Normal
FE polar
FM No-polar
Fase Inversa
FE No-polar
FM polar
Cromatografa
de fase inversa
FE
Slica qumicamente modificada con
grupos no-polares: hidrocarburos
saturados: C18 octadecil, C8 octil,
C4 tetrametil, C2 dimetl
FM
Mezclas: agua/disolventes orgnicos
H2O +(CH3OH, THF, CH3CN)
Cromatografa
de fase inversa
NO son Estables
Fases estacionarias
Fases qumicamente unidas (Bonded
phases)
Unidas al soporte por enlaces covalentes
Mayor eficiencia que las Fases impregnadas
Costo elevado
Son estables
Cromatografa
de fase inversa
Ventajas
Reproducibilidad en las separaciones
Estabilidad de la FE (pH 7)
Mezclas: acuosos/orgnicos H2O
+(CH3OH, CH3CH2OH, CH3CN)
Fuerza del eluyente
Viscosidad del eluyente
Polaridad
Polaridad
Detectores
Indice de refraccin
Ultravioleta-Visible
Fluorescencia
Electroqumico
Radioactividad
Infrarrojo
Espectrmetro de masas
Instrumentacin
Bomba de Gradiente
Fase mvil
alta presin de elucin
Muestra Inyector
Columna
Control de
temperatura
Detector Registrador
Elucin
Problema general de
la elucin
Gradiente de elucin
Gradiente de elucin
Elucin con alta presin
Elucin
Equipo con gradiente de
elucin
Proceso Cromatogrfico
Mm m m M
m m M
Proceso Cromatogrfico
Mm
m M M
M M
m m M M
Separacin de los solutos
H = f (v)
Ensanchamiento de
banda
Ensanchamiento de la
banda
Transferencia de masa en la FE
Ensanchamiento de la
banda
Transferencia de masa en la FM
movimiento
Ensanchamiento de la
banda
Transferencia de masa en la FM
estancada
H= f (ensanchamiento de
la banda)
k 2 vt
HL = 2 DM / v HS = 2 a
1+k
HF = 2dp HD = vdp2 / DM
HM = HF + HD
H=L/N
H = HL + HS + HM + HSM
H = HS + HM + HSM
Ventajas
Formacin de derivados
ERE
Derivados
Fuera de lnea
En lnea
Pre-columna
Post-columna
Equipo para la formacin
de derivados
FM
FE
FM
FE
Aplicaciones
ERE
CCF - CLAE
FE = f (dimetro interno)
Diferente
Cambio de
Aplicacin
Aminas
Aplicacin
Fluorescencia
Polar - No polar
Qu sucedi ???
Sensibilidad
Sensibilidad
Peso molecular
Propiedades = f (PM)
Oligosacridos
Oligoglucosa
Ejemplos
Campo Mezclas tpicas
Frmacos Antibiticos, sedantes,
esteroides, analgsicos
Bioqumica Amincidos, protenas,
carbohidratos, lpidos
Alimentos Edulcorantes, antioxidantes,
aflatoxinas, aditivos
Contaminantes Pesticidas, herbicidas, PCB,
fenoles
Qumica Drogas, venenos, alcohol en
forense sangre, narcticos