Agrobiotecnologa

Curso 2011

Fitorremediacin
Alejandro Mentaberry

Departamento de Fisiologa, Biologa Molecular y Celular

Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
Universidad de Buenos Aires
Sumario
Alternativas actuales para eliminar contaminaciones
de metales pesados
Fitorremediacin
- Ventajas
- Limitaciones
- Tipos de plantas ms utilizadas

Tipos de fitorremediacin
- Fitoextraccin
- Rizofiltracin
- Fitotransformacin
- Fitodegradacin de compuestos orgnicos
- Fitoestimulacin
- Fitoestabilizacin
Agrobiotecnologa
Plantas transgnicas para detectar compuestos
Fitorremediacin inorgnicos txicos en el medio ambiente
Referencias
 Alternativas actuales para eliminar
contaminaciones de metales pesados

Agrobiotecnologa

Fitorremediacin
Rangos de
concentracin Elemento Rango de concentracin Lmite regulatorio

comnmente Metales g/Kg)a

( (mg/Kg) b

hallados y lmites Plomo 1.000-6.900.000 600

permitidos para Cadmio 100-345.000 100

Arsnico 100-102.000 20
los contaminantes
Cromo 5,1-3.950.000 100
metlicos y los
Mercurio 0,1-1.800.000 270
radionucletidos Cobre 30-550.000 600
ms importantes Zinc 150-5.000.000 1.500

Radionucletidos Unidades pCi . g-1

Uranio 0,2-16.000 c -------
0,06-18.700 d 250 f
Estronio 0,03-540.000 e -------

Cesio 0,02-46.900 e -------

Plutonio 0,00011-3.500.000 e -------

Tomado de: Salt et al., Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Mol. Biol., 1998.
Agrobiotecnologa a Riley et al.
b Clean up Standards for contaminated sites. New Jersey, Department of Environmental Protection

(1996)
Fitorremediacin c Microgramos por gramo
d Picocuries por gramo
e Picocuries por kilogramo
f Stern et al.
Alternativas
actuales para
eliminar
contaminaciones Suelos
- Rellenado de terrenos
de metales
- Fijacin qumica e impermeabilizacin
pesados superficial
- Lixiviacin y reposicin del suelo

Aguas
- Precipitacin o floculacin
- Intercambio inico
Agrobiotecnologa - Osmosis inversa
Fitorremediacin
- Microfiltracin
Mercado potencial
En los ltimos 10 aos se ha desarrollado un mercado
para la . importante para la biorremediacin, principalmente en
descontaminacin . Estados Unidos.
ambiental Productos txicos: ~ U$S 400.000 M
en Estados Unidos Metales pesados: ~ U$S 7.100 M
Metales pesados y txicos: ~ U$S 35.400 M
mediante las
tecnologas El costo estimado para remediar los sitios utilizados
actuales . por el Departamento de Energa Atmica por mtodos
. convencionales se calcul en U$S 142.000 M

En 2005, el mercado norteamericano de remediacin

. ambiental era de U$S 6.000 a 8.000 M por ao.

El mercado norteamericano de fitorremediacin era de

. U$S 100-150 M anuales (0.5% del total de remediacin).

El mercado comercial de fitorremediacin comprende

Agrobiotecnologa . 80% de contaminantes orgnicos y 20% de inorgnicos.
Fitorremediacin
El mercado de fitorremediacin creci de 3 y 5 veces
. entre 1999 y 2005.
La fitorremediacin es econmicamente competitiva
respecto de otras alternativas de remediacin

Adaptado de Chappell, US Environmental Protection Agency,1998.

 Fitorremediacin

Agrobiotecnologa

Fitorremediacin
Fitorremediacin
Conjunto de mtodos para degradar,
asimilar, metabolizar o detoxificar metales
pesados y compuestos orgnicos por
medio de la utilizacin de plantas.

Es el empleo de vegetacin para

el tratamiento in situ de suelos,
sedimentos y aguas contaminadas.

Se basa en los procesos que ocurren

naturalmente por los cuales las plantas
y los microorganismos rizosfricos
Agrobiotecnologa
degradan y secuestran contaminantes
Fitorremediacin orgnicos e inorgnicos
La fitorremediacin permite detoxificar distintos sustratos

Sustratos slidos (suelos y sedimentos):

- sitios militares (TNT, metales, orgnicos)
- campos agrcolas (herbicidas, pesticidas, metales, selenio)
- sitios industriales (orgnicos, metales, arsnico)
- minas (metales)
- sitios de tratamiento de maderas (hidrocarburos aromticos policclicos; PAHs)

Sustratos lquidos
- aguas residuales (nutrientes, metales)
- drenajes de agricultura (nutrientes, fertilizantes, metales,
arsnico, selenio, boro, pesticidas orgnicos y herbicidas)
- efluentes industriales (metales, selenio)
- efluentes de minera (metales)
- plumas subterrneas (metales, compuestos orgnicos)

Sustratos gaseosos
- aire libre e interior (xidos de nitrgeno, SO2, ozono, CO2, gases
neurotxicos, partculas de holln, e hidrocarburos halogenados voltiles)
Contaminantes orgnicos

Son consecuencia de las actividades humanas:

- industria petroqumica (derrames de combustibles y solventes)
- actividades militares (explosivos y armas qumicas)
- agricultura (pesticidas, herbicidas)
- industria qumica (efluentes)
- industria forestal y maderera (efluentes)

Dependiendo de sus propiedades, pueden ser:

- degradados en la zona radicular

- incorporados a la planta degradacin

secuestro
volatilizacin

Ejemplos de descontaminaciones exitosas por fitorremediacin:

Solventes orgnicos, herbicidas, explosivos, hidrocarburos
derivados del petrleo, bifenilos policlorinados (PCBs),
tricloroetileno (TCE), hidrocarburos aromticos policclicos (PAHs).
Contaminantes inorgnicos

Pueden ser consecuencia de elementos naturales presentes en la corteza

. terrestre y/o en la atmsfera, o resultado de actividades humanas:
- minera
- industria
- transporte
- agricultura
- actividades militares

No pueden ser degradados, pero pueden fitorremediarse mediante

. estabilizacin o secuestro en la parte cosechable de la planta.

Ejemplos de descontaminaciones exitosas por fitorremediacin:

Macronutrientes vegetales (nitrato y fosfato), elementos traza (Cr, Cu, Fe,

. Mn, Mo, Zn), elementos no esenciales (Cd, Co, F, Hg, Se, Pb, V y W), e
. istopos radioactivos (238U, 137Cs y 90Sr), entre otros.
Fitorremediacin
Ventajas

Las plantas pueden ser utilizadas como bombas

extractoras de bajo costo para depurar suelos y aguas
contaminadas (costo 7-10 veces menor respecto de los
. mtodos tradicionales).

- Las plantas emplean energa solar.

- El tratamiento es in situ.

Algunos procesos degradativos ocurren en forma ms rpida

con plantas que con microorganismos.

Es un mtodo apropiado para descontaminar superficies

grandes o para finalizar la descontaminacin de reas
restringidas en plazos largos.
Agrobiotecnologa
Es una metodologa con buena aceptacin pblica.
Fitorremediacin

Se generan menos residuos secundarios.

Fitorremediacin Limitaciones

El proceso se limita a la profundidad de penetracin

de las races o a aguas poco profundas.

La fitotoxicidad es un limitante en reas fuertemente

contaminadas.

Los tiempos del proceso pueden ser muy prolongados.

La biodisponibilidad de los compuestos o metales

es un factor limitante de la captacin.

Deben considerarse contaminaciones potenciales

de la cadena alimentaria y napas de agua.

Agrobiotecnologa Se requiere comprender mejor la naturaleza

de los productos de degradacin (fitodegradacin).
Fitorremediacin

Falta elaborar el marco regulatorio detallado.

Biologa de la Captacin por las races:
acumulacin - Movilizacin de los metales
Quelacin mediante fitosiderforos
de metales Unin a protenas quelantes (fitoquelatinas)
en plantas Acidificacin por exudado de H+
- Captacin por la raz
Via apoplstica
Va simplstica
Transporte:
- Almacenamiento en raz o exportacin al tallo por xilema
- Transporte por xilema o redistribucin por floema
- Almacenamiento en vacuolas
Mecanismos de evasin o tolerancia:
- Captacin celular limitada (evasin)
- Metabolismo tolerante a metales pesados
- Detoxificacin por quelacin, compartimentalizacin
Agrobiotecnologa o precipitacin
Mecanismos ms probables:
Fitorremediacin
- Compartimentalizacin en vacuolas y quelacin con
fitoquelatinas (Cd2+, Zn2+, Cu2+ )
- Precipitacin como fitatos (Zn2+)
Mecanismos pared celular
involucrados en
citoplasma
la quelacin y
Contaminante
compartimentali- inorgnico
zacin
secuestro
conjugacin

adsorcin vacuola
degradacin
enzimtica

Contaminante
orgnico
modificacin
enzimtica

Agrobiotecnologa
secuestro
Adaptado de: Pilon-Smits, Annual Review in Plant Biollogy, 2005.
Fitorremediacin
Mecanismos de tolerancia para contaminantes orgnicos e inorgnicos en plantas.
La detoxificacin generalmente involucra la conjugacin seguida del secuestro activo en la
vacuola y el apoplasto, donde el contaminante hace el menor dao. Los quelantes son:
glutatin (GSH), glucosa (Glu), metalotionenas (MT), nicotinamina (NA), cidos orgnicos (OA,
fitoquelatinas (PC). Los transportadores se representan por cajas con flechas.
Estrategias de
fitorremediacin
utilizadas para
remediar agua,
suelo o aire hidroponia humedal artificial
(rizofiltracin)
contaminados.
Plantas usadas como filtros

Plantas usadas como

barrera hidrulica
para prevenir la
contaminacin de
napas y la dispersin
horizontal de plumas.
Agrobiotecnologa

Fitorremediacin

barrera hidrulica fitoextraccin y filtracin

fitoestabilizacion de aire
Adaptado de: Pilon-Smits, Annual Review in Plant Biology, 2005.
Diseo de
Seleccin de la especie vegetal
sistemas de
fitorremediacin
Datos de toxicidad y de degradacin de contaminantes

Tasa de captacin del contaminante y tiempo

de limpieza requerido

Esquema y densidad de las plantaciones

Costos de Irrigacin, insumos agronmicos,

. mantenimiento y gastos de cosecha.

Agrobiotecnologa Zona de captura de agua y tasa de transpiracin

Fitorremediacin

Anlisis de riesgos contingentes (plagas, sequas, etc.)

Tipos de plantas Freatfitas
ms utilizadas - Plantas de races profundas
(lamo, sauce, algodonero).
Pasturas
- Por su tipo de raz retienen el suelo.
Legumimosas
- Permiten enriquecer el suelo en N2.
Acuticas
- Permiten la degradacin de contaminantes
en humedales artificiales.

Agrobiotecnologa

Fitorremediacin
Algunas especies propuestas para fitorremediacin

Brassica juncea Lotus corniculatus Hibiscus cannabinus

Thlapsi caerulescens Silene vulgaris Alyssum lesbiacum Festuca arundinacea

Ejemplos
Metal Planta Ubicacin Mtodoa Comentarios
de pruebas Pb Brassica juncea Trenton, N.J. FE-FEAQ La incorporacin de
Pb2+ aplicando EDTA
de campo para result en la reduccin del
28% en la contaminacin
fitorremediacin en el rea en una
temporada de cosecha.

de metales Cd Thlapsi caerulescens Beltsville, Md. FE-FEC Fitoextraccin de suelos

Zn Silene vulgaris enmendados con barros
sedimentarios.
La acumulacin de Zn2+
en T. caerulescensfue
10 veces mayor que
en otras plantas.

Zn Brassica oleracea Rothamstead, FE-FEC Suelos enmendados con

Cd Raphanus sativus U.K. sedimentos.
Ni Thlapsi caerulescens
Cu Alyssum lesbiacum
Pb Alyssum murale
Cr Arabidopsis thaliana
Se Brassica juncea FE-FEC El contenido de B extraible
B Festuca arundinacea Los Baos, FV por agua se redujo entre
California 24% y 52%, y el de Se se
Hibiscus cannabinus
redujo entre 13% y 48%
Agrobiotecnologa Lotus corniculatus por todas las especies.

U Helianthus annus Asthabula, Ohio RF Remocin de U de aguas

Fitorremediacin subterrneas
Tomado de: Salt et al., Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Mol. Biol. 1998.
a:Mtodos de fitorremediacin. FE: fitoextraccin; FV: fitovolatilizacin; RF: rizofiltracin;
FEAQ: fitoextraccin asistida por quelantes; FEC: fitoextraccin continua
Caractersticas
del contaminante Contaminantes orgnicos:
que afectan No existen generalmente transportadores especficos en la planta. Se
mueven por difusin en los tejidos vegetales, segn sus propiedades
la captacin por qumicas. La hidrofobicidad les permite atravesar fcilmente la bicapa
la planta lipdica pero se mueven con dificultad por los fluidos celulares.

Contaminantes inorgnicos:
Incorporados por procesos biolgicos mediante transportadores de
membrana, preexistentes porque son nutrientes o similares a ellos
(arsenato y selenato son incorporados por transportadores de fosfato).
Por ello, su captacin es saturable.

Los contaminantes inorgnicos causan en general toxicidad

. por daos en la estructura celular (estrs oxidativo por su
. actividad redox) y reemplazan a otros nutrientes esenciales.

Los contaminantes orgnicos suelen ser menos txicos: no

. tienden a acumularse a altos niveles y son menos reactivos.
Agrobiotecnologa
En los suelos con mezcla de ambos contaminantes, el
Fitorremediacin . crecimiento vegetal y la posibilidad de fitorremediacin son
. ms limitados
Factores fsicos
y qumicos que La biodisponibilidad depende de:
afectan la Las propiedades qumicas del contaminante (hidrofobicidad
biodisponibilidad . y volatilidad):
del contaminante Las molculas con extrema hidrofobicidad (PCBs, PAHs, hidrocarburos) se
unen fuertemente a la materia orgnica y no se disuelven en el agua
(contaminantes recalcitrantes).

Los contaminantes no voltiles son fitodegradados o secuestrados, mientras

que los voltiles pueden liberarse a la atmsfera sin transformaciones.

Las propiedades del suelo:

Los arcillosos (partculas pequeas) retienen ms agua que los arenosos y
tienen ms sitios de unin para iones (cationes), al igual que los de mayor
concentracin de materia orgnica (humus). stos pueden unir mayor
cantidad de contaminantes hidrofbicos. La biodisponibilidad de los
contaminantes inicos est afectada por el pH del suelo (pH cido, aumenta
la biodisponibilidad de cationes)
Agrobiotecnologa
Las condiciones medioambientales:
Fitorremediacin
La temperatura y la humedad afectan la biodisponibilidad (por ejemplo,
aumentando la migracin de contaminantes disueltos en agua)
Factores
biolgicos que Interacciones planta-microorganismo:
afectan la - La liberacin de fotosintatos por la planta aumenta la poblacin
biodisponibilidad . microbiana capaz de remediar.
del contaminante
- La liberacin de metabolitos secundarios de la planta puede activar
. la expresin de genes relacionados a la degradacin de
. contaminantes en los microorganismos o actuar como co-metabolitos
. para la degradacin por los microorganismos.

La biodisponibilidad es modificada por liberacin de:

Biosurfactantes (ramnolpidos) liberados por bacterias que aumentan
. disponibilidad de compuestos hidrofbicos
Exhudados vegetales con compuestos que pueden promover la sntesis
. de biosurfactantes por las bacterias
Enzimas (vegetales y bacterianas) que modifican las cadenas laterales de
. algunos compuestos orgnicos aumentando su biodisponibilidad.
Agrobiotecnologa Quelantes por plantas y bacterias (siderforos, cidos orgnicos y
. fenlicos) que aumentan disponibilidad de metales.
Fitorremediacin Secrecin de H+ por las plantas que acidifican el suelo.
.
Enzimas que convierten los metales a formas menos txicas o ms
. biodisponibles (por ejemplo, Cr VI a Cr III)
Aspectos que
requieren Procesos que requieren aumentar los conocimientos
para aumentar la eficiencia de la fitorremediacin:
de mayor
investigacin
Interacciones planta-microorganismo y otros procesos
. rizosfricos

Captacin por la planta

Mecanismos de traslocacin

Mecanismos de tolerancia (compartimentalizacin,

. degradacin)

Quelantes vegetales involucrados en transporte y

. almacenamiento

Agrobiotecnologa Movimiento de los contaminantes en los ecosistemas

. va el sistema suelo-agua-planta hacia niveles trficos
Fitorremediacin . superiores
 Tipos de fitorremediacin

Agrobiotecnologa

Fitorremediacin
Las bases
conceptuales de Fitorremediacin Fitovolatilizacin
Acumulacin o degradacin
la fitorremediacin en el tejido cosechable

se apoyan en
los mecanismos
presentes en
plantas que
Fitoestimulacin
hiperacumulan Microorganismo
que degrada
Fitodegradacin

metales toxinas

Toxina

Fitoextraccin
Fitoestabilizacin

Agrobiotecnologa

Fitorremediacin

Adaptado de: Buchanan et al., Biochemisty and Molecular Biology of Plants, 2000.
Tipos de
Fitoextraccin
fitorremediacin Las plantas se usan para concentrar metales en las partes
cosechables (principalmente, la parte area).
Rizofiltracin
Las races de las plantas se usan para adsorber, precipitar
y concentrar metales pesados a partir de efluentes lquidos
contaminados.
Fitoestimulacin
Se usan los exudados radiculares para promover el desarrollo
de microorganismos degradativos (bacterias y hongos).
Fitoestabilizacin
Las plantas tolerantes a metales se usan para reducir la
movilidad de los mismos y evitar el pasaje a napas subterrneas
o al aire.
Fitotransformacin
- Fitodegradacin: Las plantas acuticas y terrestres captan,
Agrobiotecnologa almacenan y degradan compuestos orgnicos para dar
subproductos no txicos o menos txicos.
Fitorremediacin - Fitovolatilizacin: Las plantas captan y modifican metales
pesados o compuestos orgnicos y los liberan a la atmsfera
mediante la transpiracin.
Las diferentes estrategias de fitorremediacin
son adecuadas para distintos contaminantes

Fitoextraccin:
Usada principalmente para remediar metales y otros txicos inorgnicos .
. (Se, As, radionucletidos).

Rizofiltracin:
Tcnica relativamente cara de implementar, siendo til para cantidades
. pequeas de aguas residuales conteniendo compuestos inorgnicos
. peligrosos (radionucletidos). Los humedales artificiales se utilizan para
. una amplia gama de contaminantes inorgnicos (metales, percloratos, cianuro,
. nitratos y fosfatos) y contaminantes orgnicos (explosivos y herbicidas).

Fitoestimulacin:
Es usado para remediar contaminantes orgnicos hidrofbicos que no pueden
. ser incorporados por la planta pero que pueden ser degradados por los
. microorganismos (PCBs, PAHs e hidrocarburos derivados del petrleo).
Las diferentes estrategias de fitorremediacin
son adecuadas para distintos contaminantes

Fitoestabilizacin:
Este tcnica es usada cuando se plantan coberturas vegetales en sitios
. conteniendo contaminantes orgnicos o inorgnicos; o cuando se usan
. rboles como barreras hidrulicas para permitir el filtrado de contaminantes
. orgnicos e inorgnicos.

Fitodegradacin:
Es til para compuestos orgnicos que se movilizan dentro de la planta,
. (herbicidas, TNT, MTBE y TCE).

Fitovolatilizacin:
Puede utilizarse para compuestos orgnicos con formas voltiles (TCE y
. MTBE) y para algunos compuestos inorgnicos que pueden existir en forma
. voltil (Se y Hg).
Fitoextraccin Se utiliza para el tratamiento de contaminaciones con
metales (Cd2+, Co2+, Cr2+, Ni2+, Hg2+, Pb2+, Se2+, Zn2+).
Caractersticas deseables en la planta:
- Debe tolerar y acumular altas concentraciones de metales
en las partes cosechables
- Debe tener una alta tasa de crecimiento
- Debe producir un gran volumen de biomasa

Coeficiente de bioacumulacin DE

Tallos Races
Metal Brassica Thlapsi Brassica Thlapsi
Cd2+ (5)1 175 16 59 12 20.574 4295 4258 168
Cu2+ (1) 159 32 623 265 55.809 9221 60.716 21510
Cr2+ (0,4) 80 8 89 15 5.486 393 8.545 4220
Ni2+ (1) 587 115 2.739 383 11.475 125 8.425 4220

Agrobiotecnologa Pb2+ (5) 31 29 23 1.432 1409 7.011 3616

Zn2+ (3) 49 31 770 320 1.816 1739 2.990 1424
1 Concentracin inicial del metal en solucin (mg/L) Tomado de: Salt et al., Biotechnology 1995.
Fitorremediacin

Coeficiente de bioacumulacin: relacin entre la acumulacin en el

tejido (g/g de peso seco) y concentracin en solucin (mg/L) o en suelo.
Fitoextraccin Plantas tpicas empleadas en fitoextraccin:

- Girasol (Helianthus annuus)

- Mostaza de la India (Brassica juncea)
- Nabos (Brassica napus; B. rapa)
- Cebada (Hordeum vulgare)
- Lpulo (Humulus lupulus)
- Ortigas (Urtica dioica; U. urens),
- Diente de Len (Taraxacum officinale)

Hiperacumuladores:

Agrobiotecnologa - Thlapsi caerulescens

- Brassica juncea
Fitorremediacin
- Pelargonium spp.
- Allysum lesbiacum
Fitoextraccin Los metales en el suelo pueden estar
en distintas formas:

Como iones o complejos insolubles

Adsorbidos a constituyentes inorgnicos del suelo o unidos
a sitios de intercambio
Unidos a molculas orgnicas
Como compuestos o precipitados insolubles
(xidos, carbonatos, hidrxidos)
Integrados a la estructura de los silicatos

Formas de incrementar la biodisponibilidad:

Agregado de quelantes de metales

Agrobiotecnologa
Establecimiento de un pH moderadamente cido
Fitorremediacin Disolucin de surfactantes para contaminantes hidrofbicos
Agregado de microorganismos
Esquema de La lnea slida naranja ( ) representa la concentracin de metal en
la biomasa, la lnea discontinua ( ) representa la biomasa de tallo.
fitoextraccin
Fitoextraccin Fitoextraccin Aplicacin
continua y continua asistida por
quelantes
del quelante

asistida por
Fase de captacin

quelantes de metal

Fase de
captacin
de metal

Fase de crecimiento Cosecha Fase de crecimiento Cosecha

Adaptado de: D. E. Salt et al., Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Mol. Biol. 1998.

Concentracin de Pb2+ en tallos de Brassica juncea en un suelo

contaminado con plomo (600 mg/kg de suelo) tratado con EDTA.
Concentracin de Pb2+ en tallos (g/g)

Agrobiotecnologa

Fitorremediacin

EDTA aplicado (mmol/kg suelo)

Tomado de: McCutcheon, PBI Bulletin 1998.

Acumulacin El transporte de metales desde el citosol a la vacuola es un componente
de metales importante para la tolerancia a metales en las plantas.
El intercambiador de Ca2+ CAX2 (Calcium Exchanger 2) de Arabidopsis
y tolerancia es un regulador clave de este proceso.
a manganeso La expresin del gen cax2 en clulas de Saccharomyces cereviciae
suprime defectos en el crecimiento debidos a excesos de Ca2+ y Mn2+.
en plantas Se transformaron plantas de tabaco con el gen cax2 dirigido por el
de tabaco promotor de 35S de CaMV. La secuencia se introdujo tambin en
antisentido para usar esta construccin como un control interno.
que expresan
el gen cax2
Vector Control
de Arabidopsis CAX2 Control
Vector cnb
CAX2 cnb
Ensayo de
tolerancia a Mn2+
en cepas de
Saccharomyces
cereviciae que
expresan el
intercambiador
Agrobiotecnologa CAX2.

Fitorremediacin
Control: cepa salvaje de S. cereviciae Tomado de: Hirschi et al., Plant Physiol. 2000.
cnb: cepa de S. cereviciae mutada en el gen de calcineurina (suceptibilidad a Mn2+)
Vector: cepas transformadas con el vector vaco
CAX2: cepas transformadas con el gen cax2
Acumulacin Las plantas de tabaco que expresan CAX2 acumularon ms Ca2+,
Cd2+ y Mn2+ y fueron ms tolerantes a niveles elevados de Mn2+.
de metales
Vector CAX2

y tolerancia

g/g peso seco

g/g peso seco

g/g peso seco

g/g peso seco
a manganeso
en plantas
de tabaco Tomado de: Hirschi et al., Plant Physiol., 2000.
Concentracin de iones en las races (izquierda) y en los tallos (derecha) de plantas transgnicas.
Tomado de: Hirschi et al., Plant Physiol., 2000.

que expresan Vector: controles transformados con el vector vaco. C-14: lnea transformada con el gen cax2. Los
ensayos se realizaron complementando el medio con 10 mM Cl2Ca, 0,1 M Cl2Cd 0,1 mM Cl2Mn.

el gen cax2 A B

(nmoles/mg de protena)
(nmoles/mg de protena)

Transporte de iones
Transporte de iones

de Arabidopsis
Control
C-21
C-14

Tiempo (min) Tiempo (min)

Tomado de: Hirschi et al., Plant Physiol., 2000. Tomado de: Hirschi et al., Plant Physiol., 2000.

C
(nmoles/mg de protena)
Transporte de iones

Agrobiotecnologa

Fitorremediacin Captacin de iones en vacuola de clulas de

races de plantas que expresan el gen cax2.
A: transporte de Cd2+; 10 M total Cd2+.
B: transporte de Mn2+; 100 M total Mn2+.
Tiempo (min)
Tomado de: Hirschi et al., Plant Physiol., 2000. C: transporte de Ca2+; 10 M total Ca2+.
Remocin
Las plantas acuticas emplean dos mecanismos para
de metales separar metales y otros contaminantes (incluyendo
utilizando radioistopos) de aguas polucionadas:
algas y plantas - Reaccin superficial rpida independiente del metabolismo:
acuticas proceso de difusin que finaliza cuando los iones metlicos
solubles se unen o adsorben a la pared celular. Puede remover
cantidades significativas en minutos.

- Reaccin de incorporacin intracelular lenta dependiente

del metabolismo: proceso de transferencia desde la pared
celular al interior de la clula. Demanda horas o das.

Agrobiotecnologa

Fitorremediacin

Lemna minor Microspora

Remocin
Modelo
de metales

Concentracin de Ni 2+ (mg/L)
0,0 mg/L Pb 2+
Concentracin inicial
utilizando de Ni2+ : 5 mg/L
5,0 mg/L Pb 2+

10,0 mg/L Pb 2+
Lemna minor

Tiempo (h)

Modelo

0,0 mg/L Ni2+

Concentracin Pb2+ (mg/L)
Concentracin inicial
2,5 mg/L Ni2+
de Pb2+ : 10 mg/L
5,0 mg/L Ni2+

Agrobiotecnologa

Fitorremediacin
Tiempo (h)
Tomado de: Axtell et al., Bioresource Technology, 2003.
Rizofiltracin
Se emplea en el tratamiento de contaminaciones por:

- Metales (Pb2+, Cd2+, Zn2+, Ni2+, Cu2+)

- Radioistopos (137Cd, 90Sr, U)
- Compuestos orgnicos hidroflicos

Caractersticas deseables en la planta:

- Debe tener races de crecimiento rpido y ramificacin abundante.

- Debe poder remover metales txicos por perodos prolongados.
- No debe ser un translocador eficiente al tallo.

La remocin tiene distintos componentes:

- Componente rpido: combinacin de procesos fsicos y qumicos

(quelacin, intercambio inico, adsorcin); puede ocurrir en races
muertas.

Agrobiotecnologa - Componentes intermedios: Incluyen captura intracelular,

deposicin en la vacuola y translocacin a los tallos.
Fitorremediacin
- Componente lento: precipitacin mediada por la raz; involucra
exudados de la raz.
Rizofiltracin
Las plantas -acuticas son buenos candidatos
para encarar procesos de rizofiltracin

Plantas acuticas sumergentes: Plantas acuticas emergentes:

- Algas - Scirpus validus
- Chara vulgaris - Typha latifolia
- Myriophyllum aquaticum - Ceratophyllum demersum
- Myriophyllum spicatum - Potamogeton pectinatus
- Hydrilla verticillata - Maranta arundinaceae
- Lemna spp

Flujo
vertical
Scirpus
validus

Agrobiotecnologa
Capas
de
arena Esquema de
Fitorremediacin
y rizofiltracin
grava Eflujo basado en
Scirpus validus
Rizofiltracin Agrobacterium rhizogenes es capaz de transformar races
de uranio y provocar el sobrecrecimiento de las mismas.

usando cultivos
de races de Tejido radicular de
Brassica juncea y
Brassica juncea de Chenopodium
amaranticolor.
y Chenopodium B. juncea C. amaranticolor

amaranticolor Se utilizaron races transformadas de ambas especies

para remover U de soluciones con baja concentracin.
B. juncea C. amaranticolor

Tasa de
acumulacin de
g U/g tejido seco

g U/g tejido seco

U en races de
Brassica juncea y
de Chenopodium
amaranticolor. Los
Agrobiotecnologa valores se expresan
como g U/g tejido
seco.
Fitorremediacin

Concentracin de U (M) Concentracin de U (M)

Tomado de: Eapen et al., Environmental Research, 2003.

Rizofiltracin Se utilizaron races transformadas de ambas especies
de uranio para remover U de soluciones con alta concentracin.

usando cultivos Para todas las concentraciones utilizadas, el 90%

del U fue absorbido por las races dentro de las 10 h
de races de de tratamiento.
Brassica juncea
B. juncea
y Chenopodium C. amaranticolor

amaranticolor

g U/g D.w.t. ( X10 3)

Tasa de acumulacin
de U en races de
Brassica juncea y de
Chenopodium amaranticolor.
Los valores se expresan
como g U/g tejido seco.

Agrobiotecnologa Concentracin de U (M)

Tomado de: Eapen et al., Environmental Research, 2003.

Fitorremediacin
Las races transformadas de ambas especies podran
usarse como bioabsorbentes de uranio, para lo cual
podran producirse a gran escala en biorreactores.
Fitotransformacin
La fitotransformacin comprende los procesos
de fitodegradacin y fitovolatilizacin
Empleada en tratamientos de contaminacin por:
Herbicidas (atrazina, alaclor)
Aromticos (BTEX: benceno, tolueno, etilbenceno y xilenos)
Alifticos clorinados (TCE: tricloroetileno; tetracloroetileno)
Deshechos de nutrientes (NO3-, NH4+, PO43-)
Deshechos explosivos (TNT; RDX: hexahidrotrinitrotriazina)

Depende de:
Concentracin del compuesto disuelto en el suelo

Eficiencia de captura, que depende de:

Tasa de transpiracin, que depende de:
Agrobiotecnologa
Fitorremediacin
- las propiedades fsico-qumicas del compuesto
- especie qumica
- propiedades de la especie vegetal
- el tipo de planta
- rea foliar
- nutrientes
- humedad del suelo
- temperatura
- viento
- humedad relativa
Fitotransformacin Una vez translocado, el compuesto puede tener
los siguientes destinos:
- Almacenamiento del producto (o de sus productos de
.degradacin) va conjugacin o lignificacin
- Metabolizacin a distintos productos de degradacin
- Volatilizacin por la transpiracin
- Mineralizacin (CO2 + H2O)

Plantas tpicas empleadas en fitotransformacin:

- Arboles freatfitos (lamo, sauce, lamo americano)
- Pasturas (centeno, sorgo, festuca)
- Leguminosas (trbol, alfalfa, caup)

Agrobiotecnologa

Fitorremediacin
Fitodegradacin de compuestos orgnicos
Las plantas pueden desarrollar una serie de reacciones
para metabolizar o mineralizar compuestos orgnicos
Enzimas Rol natural
Nitroreductasas Su funcin es la reduccin de nitrato para
obtener nitrgeno destinado al crecimiento
celular
Deshalogenasas Estn vinculadas a la degradacin de
subproductos de etileno durante la
senescencia
Nitrilasas Detoxifican compuestos aromticos
cianamidados naturales
Fosfatasas Su rol es el procesamiento de fosfato
durante el desarrollo
Lacasas Intervienen en la lignificacin y
delignificacin por adicin de oxgeno
Peroxidasas Degradan en forma no especfica
compuestos fenlicos, lignina, y otros
Aplicaciones en fitorremediacin
Reducen grupos nitrato en explosivos
y otros compuestos nitroaromticos y
remueven el nitrgeno del anillo
aromtico
Deshalogenan solventes clorinados
Procesan grupos cianidados de los
anillos aromticos en herbicidas y
otros compuestos cianidados
Procesan grupos fosfato de pesticidas
organofosfatados y de compuestos
que afectan el sistema nervioso
Completan la degradacin del TNT.
Aparentemente involucradas en la
incorporacin de fragmentos de anillos
aromticos en la biomasa vegetal
Empleadas en el tratamiento de aguas
residuales para degradar fenoles
Tomado de: McCutcheon, PBI Bulletin, 1998.
Contaminacin
Las tcnicas tradicionales se basan en la
con explosivos . incineracin o en utilizacin de microorganismos
. e implican remocin del suelo

La alternativa frente a las tcnicas tradicionales fue

. usar sistemas de fitorremediacin:

- Cultivos celulares de remolacha que degradan

nitroglicerina (GNT)
- Plantas acuticas y cultivos de races que biotransforman
. trinitroglicerina (TNT)

El xito fue limitado, ya que la GNT slo pudo ser

. denitrificado a di- y mononitroglicerol; la remocin
. completa de grupos nitratos no se logr nunca.

Adems, la degradacin de TNT produjo la

Agrobiotecnologa . acumulacin de otra toxina: aminodinitrotolueno.

Fitorremediacin Otra desventaja es que las plantas captan y

. metabolizan los compuestos nitrogenados 10 veces
. ms lentamente que los microorganismos.
Rutas de
degradacin
del TNT
mediante
nitroreductasas
y lacasas
vegetales

Tomado de: McCutcheon, PBI Bulletin 1998.

Agrobiotecnologa ADNT: aminodinitrotolueno;
DANT: diaminonitrotolueno;
Fitorremediacin TAT: triaminotolueno;
TNT: trinitrotolueno
Detoxificacin Crecimiento brotes de tabaco no transformado y transgnico
(NR 3-2) en medio lquido.
de TNT por Sin TNT TNT 0,25 mM

plantas de
tabaco
transformadas
con el gen de
nitroreductasa
de Enterobacter NT NR 3-2 NT NR 3-2

cloacae Crecimiento de plantas de tabaco no transformado y transgnicas (NR 3-2)

luego de la germinacin en medio conteniendo explosivos.
Sin TNT TNT 0,05 mM TNT 0,1 mM

Agrobiotecnologa

Fitorremediacin

NT
NT NR
NR 3-2
3-2 NT
NT NR
NR 3-2
3-2 NT
NT NR
NR 3-2
3-2
Tomado de: Hannik et al., Nature Biotechnology, 2001.
Detoxificacin de TNT por plantas de tabaco que expresan
el gen de nitroreductasa de Enterobacter cloacae

Crecimiento de races para brotes de plantas no transformadas (NT)

y transgnicas (NR 3-2) luego de 21 das de exposicin a TNT

NT NR 3-2

TNT Longitud de las Indice de tolerancia Longitud de las Indice de tolerancia

(mM) races (cm e.s.) de las races (%) races (cm e.s.) de las races (%)

0 8,1 0,1 100 8,1 0,1 100

0,05 5,5 0,6 68 6,2 0,9 77

0,1 0,2 3 5,5 0,9 68

Tomado de: Hannik et al., Nature Biotechnology, 2001.

e.s.= Error estndar
Indice de tolerancia = longitud de las races de brotes tratados con TNT/longitud de las races de brotes control x 100
Detoxificacin de TNT por plantas de tabaco que expresan
el gen de nitroreductasa de Enterobacter cloacae

Estudios de toxicidad de TNT en plantas

no transformadas (NT) y transgnicas (NR 3-2)
NT NR 3-2

Peso Peso Ganancia / Peso Peso Ganancia /

TNT antes del despus del prdida de antes del despus del prdida de
(mM) TNT (g) TNT (g) peso (g) TNT (g) TNT (g) peso (g)

0 11,37 0,17 16,9 0,28 +5,52 0,45 11,08 0,05 16,88 0,18 +5,79 0,23

0,1 11,2 0,14 11,3 0,02 +0,13 0,15 11,4 0,95 14,65 0,07 +3,24 0,88

0,25 11,59 0,01 7,59 0,19 -4,00 0,21 11,93 0,18 13,95 1,20 -2,02 1,01

Tomado de: Hannik et al., Nature Biotechnology, 2001.

Detoxificacin de RDX por plantas de Arabidopsis que
expresan el gen XlpA de Rhodococcus rhodocochrous

El explosivo hexahidro 1,3,5-trinitro-1,3,5-triazina (RDX) es txico para todo tipo

. de organismos y un posible carcingeno. Su degradacin ambiental es muy lenta
. y su presencia en suelos y napas de agua constituye un problema grave.
El RDX es txico para las plantas. El hongo Phanerochaete chrysosporium y las
. bacterias del gnero Rhodococcus son capaces de degradar RDX, pero no
. desarrollan suficiente biomasa para ser utilizados en procesos de biodegradacin.
La molcula responsable de la degradacin es un citocromo P450. Como prueba
. de concepto, se aisl el gen de citocromo P450 XplA de Rhodococcus
. rhodocochrous y se lo expres en plantas de Arabidopsis thaliana. Las plantas .
. fueron utilizadas en ensayos de detoxificacin de suelos contaminados con RDX.

Tomado de: Rylott et al., Nature Biotechnology, 2006.

4-nitro-2,4-diazabutanal
Ruta de degradacin de RDX por el citocromo P450 codificado por el gen XplA de R.
rhodocochrous y ensayos de actividad realizados con protena expresada en E. coli.
Los controles fueron realizados con protena sometida a 100oC.
Detoxificacin de RDX por plantas de Arabidopsis que
expresan el gen XlpA de Rhodococcus rhodocochrous
Caracterizacin de plantas transgnicas que expresan el gen XplA

Tomado de: Rylott et al., Nature Biotechnology, 2006.

a) Anlisis de Northern y Western blot de lneas de A. thaliana que expresan

el gen XplA en forma constitutiva.
b) Captacin de RDX de medio acuoso por plntulas de A. thaliana. Los
resultados son el promedio de repeticiones de cinco experimentos.
Detoxificacin de RDX por plantas de Arabidopsis que
expresan el gen XlpA de Rhodococcus rhodocochrous
Tomado de: Rylott et al., Nature Biotechnology, 2006.

Estudios en suelos contaminados con RDX empleando plantas wild type y transformadas
con 35S::XPLA. Se cultivaron plantas de A. thaliana de 8 semanas de edad en suelo conteniendo
50, 250, 500 y 2000 mg de RDX/Kg de suelo. Se muestran las mediciones de biomasa (tallos y
races) obtenidos en las diferentes condiciones experimentales (promedio de cinco ensayos).
El ciclo Principales interconversiones del mercurio en el medio ambiente

biogeoqumico
del mercurio
y de la
biomagnificacin
de metilmercurio

Agrobiotecnologa

Fitorremediacin
Hg(0): mercurio elemental
Hg(II): mercurio inico libre
RSHg: mercurio unido a azufre
MeHg: metilmercurio
Expresin
No se conocen plantas capaces de detoxificar Hg.
de los genes
merA y mer B En cambio, existen microorganismos presentes en los sitios
contaminados que poseen dos enzimas (organomercrico
de Desulfovibrio liasa, gen merB, y mercrico reductasa, gen merA) que
desulfuricans permiten convertir metilmercurio en Hg elemental,
en plantas detoxificado este metal.

transgnicas Se transformaron plantas de Arabidopsis thaliana con los dos

de Arabidopsis genes mencionados aislados de Desulfovibrio desulfuricans.

thaliana
R-CH2-Hg+ + H+ R-CH3 + Hg(II)
MerB

Hg(II) + NADPH Hg(0) + NAD+ + H+

MerA
Agrobiotecnologa
MerB: organomercrico liasa
MerA: mercrico reductasa
Fitorremediacin
Expresin merB merA/B-1 merA NT merB merA/B-1 merA NT merB merA/B-1 merA NT merB merA/B-1 merA NT

de los genes
merA y mer B
0 M 1 M 5 M 10 M
de Desulfovibrio Plantas NT y transgnicas creciendo en medios con mercurio orgnico.
desulfuricans NT A/B-1 A/B-2 A/B-3 NT A/B-1 A/B-2 A/B-3

en plantas
transgnicas Fenotipos de resistencia a mercurio
orgnico de plantas control y de 3 lneas
de Arabidopsis transgnicas para merA/merB

thaliana 0 M PMA 5 M PMA

A/B-4 A/B-5 A/B-6 A/B-4 A/B-5 A/B-6
pg Hg(0).min-1/mg de

Tasas de volatilizacin de Hg(0)

Agrobiotecnologa en plantas control y en 6 lneas
transgnicas de A. thaliana
tejido

Fitorremediacin

Lneas de plantas
Tomado de: Bizily et al., Nature Biotechnology, 2000.
Fitorremediacin de
Se transformaron cloroplastos de tabaco con dos versiones de esta construccin
organomercuriales con y sin regin 3 no traductible (3 UTR) portando el opern MerAB
va transformacin
de cloroplastos
16S
trnI aadA merB merA
trnA

(genes merA P 3UTR

y mer B de
Desulfovibrio
Efecto de la concentracin de acetato de fenilmercurio en el crecimiento
desulfuricans) de plantas de tabaco controles (NT) y transgnicas (5A y 9)
NT 5A 9

Concentracin de PMA
Agrobiotecnologa

Fitorremediacin

Tomado de: Ruiz et al., Plant Physiol., 2003.

Aumento de la
acumulacin
y tolerancia a selenio
La toxicidad del selenio (Se) se debe a la
en plantas
. incorporacin inespecfica de selenocistena
transgnicas
. (Se-Cys) a las protenas.
de Arabidopsis
que expresan
la enzima
selenocistena liasa I Estrategia:
de ratn Expresar el gen de la selonocistena liasa de ratn
en citoplasma y cloroplastos de Arabidopsis thaliana

Agrobiotecnologa Se-Cys Se elemental + alanina

Se-Cys liasa

Fitorremediacin
Aumento de la Incorporacin de Se a protenas
en brotes de Arabidopsis thaliana
acumulacin

g Se g protein -
no transgnicas (NT) y transgnicas
y tolerancia (citoslicas y plastdicas) Control

1
a selenio en
plantas NT

cit SL cp SL
transgnicas
de Arabidopsis Control

50 M Se-Cys
thaliana Tolerancia

Largo de races (mm)

a Se-Cys
selenato y
selenito de 50 M Se-Cys
brotes de 25 M SeO2-3
Arabidopsis
no transgnicos
y transgnicos.
25 M SeO2-3
Agrobiotecnologa
50 M SeO2-4

Fitorremediacin

50 M SeO2-4

Tomado de: Pilon et al., Plant Physiol., 2003. NT

cyt SL cp SL
Fitoestimulacin
Las plantas proveen el hbitat para el incremento
en el tamao y actividad de poblaciones
microbianas.

Los exudados vegetales estimulan las

transformaciones efectuadas por las bacterias
(induccin enzimtica).

La sntesis de carbn orgnico aumenta la tasa

de mineralizacin microbiana (enriquecimiento
de sustrato).

El oxgeno que difunde con las races asegura

un medio adecuado para las transformaciones
. aerbicas.
Agrobiotecnologa
Los hongos micorrticos asociados a las races
Fitorremediacin vegetales metabolizan contaminantes orgnicos.
Fitoestimulacin
Empleado en el tratamiento de contaminacin orgnica
causada por pesticidas (atrazina), compuestos
. aromticos, e hidrocarburos aromticos policclicos
. (PAHs)

Se basa en la liberacin por la planta de exudados entre

los que se incluyen:
- cidos orgnicos de cadena corta
- compuestos fenlicos
- bajas concentraciones de enzimas y pptidos

Plantas tpicas empleadas en fitoestimulacin:

- Liberadoras de compuestos fenlicos (mora,

manzano, Maclura pomfera)
- Pastos con races fibrosas (centeno, festuca)
Agrobiotecnologa para contaminantes hasta 1 metro de profundidad
- Arboles freatfitos para contaminantes hasta 3
Fitorremediacin
metros de profundidad
- Plantas acuticas para sedimentos
Fitoestabilizacin Empleada en el tratamiento de contaminacin por:

- Metales (Pb2+, Cd2+, Zn2+, As2+, Cu2+, Se2+, U)

- Compuestos orgnicos hidrofbicos: hidrocarbonos
aromticos policiclcos (PAHs), bifenilos
policlorados (PCBs), dioxinas, furanos,
pentaclorofenol, DDT, dieldrina

Caractersticas deseables en la planta:

- Debe tolerar altos niveles de metales txicos
- Debe inmovilizar los metales va captura
y posterior precipitacin y reduccin
- Debe acumular bajas concentraciones en las
races

Plantas tpicas empleadas en fitoestabilizacin:

- Arboles freatrfitos que transpiren grandes
Agrobiotecnologa volmenes de H2O
- Pastos con races fibrosas que estabilicen
Fitorremediacin la erosin del suelo
- Plantas con sistemas radiculares robustos
capaces de absorber/unir contaminantes
Referencias 1. Pilon-Smits. Phytorremediation. Annual Review of Plant
Biology, 56:15-39. 2005.
2. Eapen and DSouza. Prospects of genetic engineering of
plants for phytoremediation of toxic metals. Advances in
Biotechnology, 23:97-114, 2005.
3. Mejre, M. and Bulow, L. Metal binding proteins and
peptides in bioremediation and phytoremediation of heavy
metals. Trends in Biotechnology, 19:67-73, 2001.
4. Kovalchuk, O., Titov, V. Hohn, B. and Kovalchuk, I. A
sensitive trangenic plant system to detect toxic inorganic
compounds in the environment. Nature Biotechnology,
19:568-572, 2001.
5. Salt, D. E., Smith, R.D., and Raskin I. Phytoremediation.
Annual Review of Plant Physiology and Plant Molecular
Biology, 49:643-668, 1998.
Agrobiotecnologa
6. http://www.hawaii.edu/abrp/Technologies
Fitorremediacin
7. http://www.envirotools.org/factsheets/phytoremediation.shtml