PONTIFICIA UNIVERSIDAD CATLICA DE VALPARASO

FACULTAD DE INGENIERA
ESCUELA DE INGENIERA BIOQUMICA

ICB 540 Produccin de metabolitos

PROPIEDADES, APLICACIONES Y PRODUCCIN DE
CIDO GLUCNICO

Estudiantes: Alejandra Seplveda

Andrs Suazo
Fidel Tapia

Profesores: Claudia Altamirano

Julio Berros

Ayudante: Mauro Torres

25 de abril 2017
NDICE GENERAL
1. INTRODUCCIN 1

2. ASPECTOS GENERALES 2

2.1 INDUSTRIA ALIMENTARIA 2

2.2 INDUSTRIA DE DETERGENTES 2

2.3 INDUSTRIA FARMACUTICA 3

2.4 INDUSTRIA AGRCOLA 3

2.5 VOLMENES DE PRODUCCIN 4

3. PRODUCCIN ACTUAL DE CIDO GLUCNICO 5

4. PRODUCCIN BIOLGICA 6

4.1 HONGOS FILAMENTOSOS 7

4.2 BACTERIAS 7

4.3 MECANISMOS DE REGULACIN 8

REFERENCIAS 9

NDICE DE FIGURAS
Figura 4.1: Metabolismo del cido glucnico 6
 1

1. INTRODUCCIN

El cido glucnico o pentahidroxicaproico es un azcar cido, es decir, un

monosacrido donde alguno o varios de sus radicales hidroxilo (-OH) han sido
oxidados para dar lugar a un grupo carboxilo. Pertenece a la familia de los cidos
aldnicos y es producto de la oxidacin de -D-glucosa en el C 1. Tiene propiedades
antispticas y quelantes, adems de inhibir el amargor en alimentos (Ramachandan
et al, 2005). Se encuentra abundantemente en frutas, vinos y miel, es producido
comercialmente mediante fermentacin aerobia 1 y es utilizado como aditivo para la
fermentacin de productos farmacuticos, cosmticos y alimentarios (cdigo de
aditivo E-574).

Este cido se caracteriza por ser inoloro, no corrosivo, no voltil y no txico. Es

fcilmente biodegradable y se caracteriza por su baja higroscopicidad, buena
compresibilidad y solubilidad en agua, adems de un bajo punto de fusin y
propiedades tampn. La sal sdica de este cido presenta un alto nivel secuestrante
y propiedades quelantes a pHs alcalinos (Ramachandan et al, 2005), adems de la
capacidad de ablandar o acondicionar el agua y actuar como buen humectante,
emulsionante de grasas, disolvente y dispersante de slidos (Sosa et al, 2010).

En 1986 la FDA reconoci al cido glucnico y sus derivados dentro de la seccin

GRAS, traducida al espaol como Generalmente reconocido como seguro,
autorizando su uso irrestricto como aditivo alimentario (Caete-Rodrguez et al.,
2016).

Este segundo avance tiene como objetivo analizar y describir propiedades,

caractersticas, aplicaciones y mercado del cido glucnico, adems de caracterizar
los procesos de produccin actuales. La importancia de este anlisis, reside en el
creciente inters de aprovechar los residuos o subproductos de las industrias
procesadoras de materias primas, como el caso de azcares degradables mediante

1 cido Glucnico en base de datos PubChem. National Center for Biotechnology Information (NCBI),
Biblioteca Nacional de Medicina de Estados Unidos. Disponible el 28 de Marzo del 2017 en
https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/10690
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fermentacin aerbica. Estos pueden ser reutilizados bajo procesos poco

investigados y explotados, a pesar del gran beneficio que pueden llegar presentar.

2. ASPECTOS GENERALES

2.1 INDUSTRIA ALIMENTARIA

En la industria alimentaria el cido glucnico se utiliza como aditivo acidulante.

Tambin se caracteriza por su capacidad de acomplejamiento con metales,
gelificante y espesante. Refuerza la accin de antioxidantes y estabiliza el color de
alimentos (Elmadfa et al, 2011) y se suele utilizar en productos crnicos, lcteos,
horneados y escabechados (Ramachandan et al, 2005).

La solucin acuosa de cido glucnico contiene su forma de ster cclico, la

glucono--lactona, que presenta una importante actividad secuestrante (Pocker et.
al, 1972) y es utilizada en repostera para reducir la absorcin de compuestos
grasos y como acidificante durante procesos de panificacin con levadura.

Por otro lado, hay estudios que demuestran que en frutos como mangos, duraznos,
uvas, manzanas y naranjas, cantidades excesivas de cido glucnico y sus
derivados sugieren prdida de calidad debido a infeccin por agentes biolgicos.
Especficamente en el caso de la uva, altas concentraciones de este cido son
seales de la presencia de la podredumbre noble producida por el hongo Botrytis
cinerea, que en su forma daina puede destruir la cosecha o tener efectos adversos
en las caractersticas fsicas, sensoriales y estabilidad del vino (Caete-Rodrguez et
al., 2016), por lo que un seguimiento de la concentracin de cido glucnico en
uvas permitira descartar materia prima con alto contenido de ste, disminuyendo
as las prdidas de producto terminado por deterioro fsico y organolptico.

2.2 INDUSTRIA DE DETERGENTES

La sal sdica del cido glucnico se utiliza en la preparacin de soluciones

lavadoras de material de vidrio y soluciones alcalinas de NaOH lavadoras de
botellas retornables. Estas ltimas remueven fcilmente los carbonatos de metales
di y trivalentes (Produccin de cido glucnico y sus derivados, 2005).
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Adicionalmente, la oxidacin de glucosa catalizada por la enzima glucosa oxidasa

forma cido glucnico y perxido de hidrgeno, que seguida de la reaccin Fenton
produce iones de Fierro(III) y Fierro(II) a pH neutro, los que remueven sustancias
cloradas peligrosas como el triclorofenol o el tricloroetano gracias a sus propiedades
quelantes (Ahuja et al., 2007).

2.3 INDUSTRIA FARMACUTICA

Algunas sales o steres del cido glucnico se usan en la preparacin de productos

farmacuticos (Sosa, M. et al, 2010). Por ejemplo, el gluconato de calcio es usado
para el tratamiento de enfermedades que producen dficit de calcio y el gluconato
de hierro suministra este metal en caso de anemia (Produccin de cido glucnico y
sus derivados, 2005). Esto se debe a que soluciona problemas de solubilizacin
aumentando la biodisponibilidad de minerales, al formar complejos con ellos.

2.4 INDUSTRIA AGRCOLA

Despus del nitrgeno, el fsforo es el segundo nutriente inorgnico necesario para

todas las formas de vida ya que es un componente esencial de molculas como
RNA, DNA, ATP y fosfolpidos. En el suelo, ste es fcilmente convertido a complejos
insolubles, por lo que resulta frecuente que sea un limitante (Paredes-Mendoza et
al, 2010). Sin embargo, el fosfato puede ser solubilizado por cidos orgnicos
dependiendo del pH y la composicin del suelo. Esto ocurre por dos fenmenos; por
intercambio de protones de los cidos por el P ligado a la superficie de cristales de
Al(OH)3 o Fe(OH)3 (Andrews, 1990; Halder et al, 1990), y por la produccin
microbiana de cidos que forman complejos con iones metlicos de la roca fosfrica
(Singh et al, 1998).

Lo anterior es importante debido a que el cido glucnico es uno de los agentes

solubilizadores de fosfato ms reportados (Paredes-Mendoza et al, 2010). Sin
embargo, la sntesis qumica de fertilizantes fosforados implica costos de
produccin que aumentan constantemente y adems genera problemas
medioambientales (Valenzuela et al, 2002), por lo que destinar su sntesis
microbiana a la formulacin de estos productos resulta atractivo.

Es por esto que se requiere generar mayor conocimiento para comprender

claramente los mecanismos de solubilizacin del fsforo mineral y la funcin que
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cumplen los cidos orgnicos dentro del ciclo del fsforo del suelo (Paredes-
Mendoza et al, 2010), para as explotar esta rea de manera ms eficiente al
optimizar el uso de microorganismos productores de cido glucnico, ya que si bien
existen fertilizantes con este cido, se enfocan en la prevencin y correccin de
carencias de sodio y calcio principalmente. Este ltimo es relevante en fisiopatas
como el Bitter-pit en manzanas, rajado en ctricos y cerezas, necrosis apical en
tomate y pimiento, tipburn en fresa, corazn negro en remolacha, etc (Sosa et al,
2010). Lo anterior permitira producir cido glucnico para formular fertilizantes que
permiten solubilizar tanto fsforo como sodio y calcio.

2.5 VOLMENES DE PRODUCCIN

La OECD estima la produccin anual de cido glucnico en 40.000-60.000 toneladas

y otros autores estiman alrededor de 100.000 toneladas anuales (Climent, 2010),
que se comercializan en forma de soluciones acuosas al 50% de pH 1.82 y densidad
de 1.23 g/cm3 (Garca et. al, 2004).

El rango de costos de produccin vara desde 1.20 US$/kg para el cido glucnico,
hasta los 8.50 US$/kg para gluconato de calcio y gluconolactona. El gluconato de
sodio es el ms ampliamente producido, abarcando ms de un 80% de la cantidad
estimada anualmente (Caete-Rodrguez et al., 2016).

Chile no registra la salida de este producto actualmente en sus Indicadores de

Comercio Exterior 2016. Sin embargo, figura dentro de las listas arancelarias
actualizadas, por lo que se deduce que la produccin no es lo suficientemente
grande para ser listada individualmente, a diferencia de los cidos algnico y
tartrico, por ejemplo.

Las propiedades del cido glucnico permiten su aplicacin en diversas reas, como
las antes mencionadas. Sin embargo, existen algunas donde su utilizacin podra
aprovecharse de mejor manera, como en el caso de la industria agrcola, donde la
generacin de conocimiento ms profundo sobre el rol de los cidos orgnicos en el
ciclo del fsforo y su solubilizacin permitira optimizar el uso de la ingeniera
metablica en microorganismos productores de este cido.
5
 6

3. PRODUCCIN ACTUAL DE CIDO GLUCNICO

El cido glucnico es producido principalmente mediante tres mecanismos:

oxidacin qumica de glucosa utilizando una solucin de hipoclorito, oxidacin
electroltica de glucosa en presencia de bromuro y fermentacin mediante
microorganismos especficos en un medio con glucosa (Pal, 2016).

A pesar de que la oxidacin qumica es un proceso simple de un slo paso, presenta

selectividad a cido glucnico limitada, alta toxicidad ambiental y riesgos
biolgicos. Por otro lado, el veloz incremento del valor de la energa elctrica
durante los ltimos aos ha vuelto costoso el proceso electroltico y para mitigar los
problemas de las reacciones indeseadas durante la produccin qumica, los
procesos de fermentacin ofrecen tcnicas econmicamente atractivas, por lo que
constituyen el mtodo ms ampliamente utilizado y aceptado (Pal, 2016).

Sin embargo, el proceso de purificacin o downstream del cido glucnico producido

a partir de fermentacin constituye la mayor barrera econmica de este mtodo, ya
que presenta un alto costo. La separacin por membranas suele ser una de las
mejores opciones para separar cidos orgnicos, es una tcnica relativamente
nueva de procesos impulsados por presin y se considera una alternativa viable
frente a procesos de separacin tradicional como la extraccin, el intercambio
inico y la centrifugacin, entre otros (Pal, 2016). De forma general, una membrana
es un sistema que separa dos medios distintos y restringe el transporte de las
especies de manera especfica. El transporte a travs de la membrana depende de
la estructura de esta y puede controlarse en su preparacin (Aguilar, 1983).

Debido a la inhibicin tanto por sustrato como por producto, la fermentacin

convencional es en batch. De esta forma provee una baja produccin y altos costos
asociados a la frecuente intermitencia del proceso. Sin embargo, un sistema de
recirculacin de clulas por membranas integradas puede zanjar ampliamente estos
problemas debido a la alta concentracin de biomasa obtenida y la continua
remocin de productos. Este sistema asegura un bajo consumo de energa ya que
no implica cambios de fase, a excepcin de la evaporacin (Pal, 2016).

De esta manera, se presenta la fermentacin con reciclo celular por sistema de

membranas integradas como el mtodo de produccin de cido glucnico de mayor
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potencial respecto a costos energticos, optimizacin de materias primas y bajo

riesgo medioambiental.

4. PRODUCCIN BIOLGICA

Dentro de los mtodos bioqumicos para la produccin de cido glucnico se

destacan procesos fermentativos con hongos filamentosos, acetobacterias,
pseudomonas y zymomonas, microorganismos que sintetizan este metabolito y lo
degradan mediante la ruta presentada en la figura 4.1.

Figura 4.1: Metabolismo del cido glucnico (Pal, 2016)

La glucosa oxidasa y glucosa deshidrogenasa son las enzimas que transforman la -

D-glucosa en D-glucono--lactona, que se encuentra en equilibrio con el cido
glucnico. En condiciones de ph neutro o alcalino ocurre hidrlisis espontnea,
mientras que a pHs cidos ocurre hidrlisis cataltica mediante la enzima
gluconolactonasa.
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Por otro lado, la glucoquinasa fosfomonoesterasa lleva este cido a la ruta de las
pentosas fosfato, mientras que la gluconato deshidrogenasa permite su conversin
a 2-ceto-3-deoxigluconato, que al ser catalizado por una aldolasa, permite obtener
un gliceraldehido y un piruvato, que pueden ingresar al ciclo de Krebs.

4.1 HONGOS FILAMENTOSOS

La oxidacin de glucosa en cido glucnico, ocurre por fermentacin aerobia con

una alta demanda de oxgeno y se ve favorecida a pH 5,5. A nivel industrial, el
proceso se lleva a cabo en formato batch, pues facilita la recirculacin y manejo de
las clulas (Pal, 2016). Adems se utilizan concentraciones altas de glucosa y bajas
de componentes nitrogenados. De esta forma, se obtienen rendimientos de 1,1 g de
cido glucnico/g de glucosa en Aspergillus niger (Pal, 2016). En este hongo,
gracias a la accin de la glucosa oxidasa extracelular o asociada a la membrana, se
forma D-Gluconato a partir de la D-Glucosa.

El cido glucnico se forma tambin por hidrlisis espontnea o cataltica de la

lactona, como se observa en la figura 4.1. Paralelamente, enzimas en el citosol
participan en la asimilacin de D-Glucosa y D-Gluconato para el posterior ingreso a
la va de las pentosas fosfato (Caete-Rodrguez, et al 2017).

4.2 BACTERIAS

Las Pseudomonas (aerobias estrictas) crecen a pH neutro y consumen cido

glucnico en la va Entner-Doudoroff (Pal, 2016), lo que resulta inconveniente si el
objetivo es producir este metabolito.

Por otro lado, las Zymomonas resultan atractivas para la produccin de cido
glucnico si se provee nicamente de glucosa, fructosa y sacarosa para su
crecimiento. En el caso de Z. mobilis (anaerobia facultativa) se cataboliza el
carbono a travs de la va Entner-Doudoroff, tal como lo hace una bacteria aerobia
estricta (Pal, 2016), presentando el mismo inconveniente que las pseudomonas.

Finalmente, las acetobacterias del gnero Gluconobacter sp. (aerobias estrictas) son
las que generan mayor inters en la produccin biotecnolgica de cido glucnico,
pues poseen alta actividad oxidativa y proliferan fcilmente an en condiciones no
ptimas (Pal, 2016). En general, poseen facilidades para utilizar diferentes
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sustratos, pero tambin la incapacidad de oxidarlos completamente. Acumulan gran

cantidad de metabolitos en el medio y se diferencian de otras acetobacterias al
carecer de enzimas del ciclo de Krebs, por lo que utilizan la va Entner-Doudoroff y
de las fosfato pentosas (Caete-Rodrguez, et al 2017).

Estas bacterias asimilan el sustrato mediante deshidrogenasas unidas a la

membrana NADP dependientes (Caete-Rodrguez, et al 2017), asociadas a la
cadena respiratoria por la coenzima ubiquinona (Q10) ubicada en el citoplasma
(Pocker et al,1972). Adems, cuentan con enzimas solubles que facilitan la
produccin y asimilacin de D-Gluconato (Caete-Rodrguez, et al 2017).

La D-glucono--lactosa puede ser transformada espontneamente en D-gluconato

por medio de la gluconolactona de unin a membrana (Caete-Rodrguez, et al
2017). Para favorecer esta hidrlisis se opera a altas temperaturas y pH (Pocker et
al,1972).

Especficamente, G. oxydans presenta rendimientos entre 75% y 80%, que

dependen principalmente del pH, la concentracin de glucosa y el grado de
aireacin (Pal, 2016).

4.3 MECANISMOS DE REGULACIN

Aunque se mencionaron diferencias entre bacterias y hongos, ambos comparten la

va de las fosfato pentosas como uno de los destinos del cido glucnico. Este se
forma en la fase oxidativa de la ruta, la que comienza con la oxidacin de la -D-
glucosa por la glucosa deshidrogenasa, formando D-glucono-1,5-lactona. Esta
reaccin es irreversible, pues est mediada por la disponibilidad de NADP+ o NAD+
que actan como receptores de electrones y que por consecuencia desplazan el
equilibrio global a la formacin de NADPH limitando el poder reductor.

La conversin a cido glucnico est mediado por la gluconolactonasa que

requiere de agua para su reaccin 2, lo que permite inferir que la gluconolactona es
una molcula inestable que ser rpidamente transformada a su forma cida. Es

2 Va de fosfato pentosas en base de datos KEGG. Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG),
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 10

por esto que se hace necesario mantener un pH cercano a la neutralidad, para

favorecer la formacin exclusiva de este producto.

Por otro lado, la conversin de cido glucnico a 6-fosfo-D-gluconato mediado por la

gluconoquinasa es ATP dependiente3. Adicionalmente, la gluconato deshidrogenasa
al catabolizar el ac. glucnico libera una molcula de agua, lo que refuerza la idea
de mantener el pH de la reaccin neutro para favorecer la formacin del metabolito
de inters.

El resto de las reacciones no oxidativas, no son consideradas dentro de los

mecanismos de regulacin por ser facilmente reversibles y depender de la primera
etapa de la va de las fosfato pentosas.

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http://200.14.68.74/index.php/Bolmicol/article/view/441

Tiene un orden lgico 0.5

Comunica lo relevante 0.3

Integra adecuadamente distintas 0.6

fuentes

Tiene un manejo riguroso de 1.2

conceptos

Se ajusta a los aspectos formales 0.4

Justifica adecuadamente las 1.2

respuestas entregadas

Nota 5.2
13