DESCRIPCIN DE LOS SMBOLOS CONTROL NO REACTIVO 1 vial ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES 9. Limpie de inmediato los ver tidos de material 13.

al ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES 9. Limpie de inmediato los ver tidos de material 13. No exponga los reactivos ni realice el anlisis en un rea
Suero humano normal (80 l) potencialmente peligroso con un papel absorbente y lave en la que exista un nivel elevado de vapores de
A continuacin figuran los signos grficos que aparecen en 1. Para uso diagnstico in vitro nicamente. la zona contaminada con una solucin de hipoclorito desinfectantes qumicos (p. ej., vapores de hipoclorito)
inactivado, no reactivo para el
los envases y productos de MP Diagnostics, y que son los antgeno de superficie de la 2. Para uso exclusivo por profesionales. sdico al 1% antes de reanudar el trabajo. El hipoclorito durante las etapas de almacenamiento y de incubacin:
que se incluyen con ms frecuencia en los dispositivos mdicos hepatitis B (HBsAg) y sin 3. Consulte el prospecto del producto para obtener sdico no debe utilizarse para vertidos que contengan el contacto inhibe la reaccin de color. Los reactivos
y sus envases. Se explican con mayor detalle en la Norma anticuerpos frente al VIH-1/2 informacin sobre los componentes potencialmente cido, a menos que se seque la zona previamente con un tampoco deben exponerse a la luz intensa.
europea EN 980:2008 y la Norma Internacional ISO 15223- y VHC. Contiene azida sdica peligrosos. papel absorbente. Para su eliminacin, el material utilizado 14. Es preferible efectuar el ensayo a temperatura ambiente
1:2007. y timerosal como (incluidos los guantes desechables) debe tratarse como (25 C 3 C).
INFORMACIN SANITARIA Y DE SEGURIDAD 15. Asegrese de colocar las tiras con los nmeros hacia
conservantes. material potencialmente biopeligroso. No utilice el
Fecha de caducidad Producto sanitario arriba.
PRECAUCIONES: Este kit contiene productos de autoclave para el material que contenga hipoclorito sdico.
Sinnimos: para diagnstico in CONTROL REACTIVO 1 vial 16. En los ensayos de Western blot es importante utilizar un
origen humano. Ningn mtodo de anlisis permite 10. Esterilice en autoclave todos los materiales usados y
HIV BLOT 2.2 Usar antes de vitro

Nmero de
FUERTE
Suero humano inactivado con
(80 l) ofrecer una garanta absoluta de que los
hemoderivados humanos no transmitan una
contaminados a 121 C y 15 psi durante 30 minutos antes
de desecharlos. Otra opcin consiste en descontaminar
agitador con plato basculante; el uso de un agitador
rotativo podra poner en peligro el rendimiento del kit. La
Cdigo de lote una concentracin elevada de velocidad de agitacin y el ngulo de inclinacin
ENSAYO DE TRANSFERENCIA Sinnimos: catlogo
anticuerpos frente al VIH-1 y
infeccin. los materiales con una solucin de hipoclorito sdico al recomendados son, respectivamente, de 12 a 16 ciclos
Nmero de lote Sinnimos: 5% durante 30-60 minutos antes de desecharlos en una
WESTERN PARA VIH Nmero de serie Nmero de VIH-2, no reactivo para el MANIPULE LAS MUESTRAS, LOS CONTROLES bolsa para residuos biopeligrosos.
por minuto y de 5 a 10 grados.steps. Contact inhibits col-
HBsAg y sin anticuerpos frente our reaction. Also do not expose reagents to strong light.
Instrucciones de Uso referencia REACTIVOS FUERTES Y DBILES Y LOS CONTROLES NO 11. Descontamine todos los productos qumicos y reactivos 17. Si se utiliza equipo automatizado, debe verificarse que
Nmero para al VHC. Contiene azida sdica
Lmite de REACTIVOS COMO SI FUERAN POTENCIALMENTE usados aadindoles un volumen de hipoclorito sdico haya sido validado antes de su uso.
temperatura pedido y timerosal como
INFECCIOSOS. Se recomienda manipular los componentes suficiente como para conseguir una concentracin final 18. Asegrese de aadir las muestras sin que toquen la tira.
conservantes.
del ensayo y las muestras de conformidad con las prcticas de al menos el 1%. Djelos en reposo durante 30 minutos Para ello, puede inclinar la bandeja y aadir la muestra
0123 Precaucin
1 vial correctas de laboratorio. Asimismo, deben desecharse para lograr una descontaminacin eficaz. en la parte baja donde se acumula el tampn. De este
Nota: Cambios resaltados. Fabricante CONTROL REACTIVO
FECHA DE REVISIN: 07/09 Representante DBIL (80 l) siguiendo los procedimientos de seguridad establecidos. 12. No recomendamos la reutilizacin de las bandejas de modo se evitar la formacin de puntos negros debidos a
MAE 0011-SPN-2 autorizado en la Suero humano inactivado con incubacin. la adicin de muestra a la tira.
Contenido suficiente Comunidad una concentracin baja de El control reactivo fuerte, el control reactivo dbil y el 19. No utilice congeladores con funcin de descongelacin
para <n> ensayos Europea anticuerpos frente al VIH-1 control no reactivo contienen timerosal y azida sdica; el PRECAUCIONES ANALTICAS automtica para conservar los reactivos y las muestras.
(kit de 18 anlisis): 11030-018 20. No recomendamos la utilizacin de muestras diluidas o
EXCLUSIVAMENTE, no tampn de blotting concentrado y el tampn de lavado
(kit de 36 anlisis): 11030-036 Consulte las 1. Para obtener un rendimiento ptimo del ensayo es liofilizadas, ya que pueden producir falsos resultados. Si
No reutilizar reactivo para el HBsAg y sin concentrado contienen timerosal; el conjugado contiene azida
instrucciones de sdica. La azida sdica puede reaccionar con el cobre y el necesario un CUMPLIMIENTO ESTRICTO del forman parte o constituyen la totalidad de un panel de
anticuerpos frente al VIH-2 y
NOMBRE Y USO PREVISTO uso plomo que se utilizan en ciertas tuberas y formar sales procedimiento descrito en el presente Instrucciones de control de calidad, debern estar validadas.
el VHC. Contiene azida sdica
Indice y timerosal como explosivas. Aunque las cantidades que se usan en este kit son Uso. Cualquier modificacin del procedimiento puede
El ensayo HIV BLOT 2.2 de MP Diagnostics (MPD) es un Nocivo/Irritante provocar resultados anmalos.
conservantes. pequeas, los materiales que contienen azida deben eliminarse
enzimoinmunoensayo cualitativo para la deteccin in vitro de con volmenes relativamente grandes de agua para evitar la 2. NO CAMBIE NI SUSTITUYA LOS REACTIVOS DE UN CONSERVACIN
anticuerpos frente a los virus de la inmunodeficiencia humana TAMPN DE BLOTTING 1 frasco acumulacin de azidas metlicas en las tuberas. A continuacin LOTE DEL KIT POR LOS DE OTRO. Los controles, el
tipo 1 (VIH-1) y tipo 2 (VIH-2) en suero o plasma humanos. Su CONCENTRADO (10x) (20 ml) figuran las frases relativas a los riesgos (R) correspondientes. conjugado y las tiras de Western blot estn ajustados para 1. Conserve el kit HIV BLOT 2.2 de MPD y sus componentes
uso previsto es como anlisis complementario ms especfico PRINCIPIOS QUMICOS Y BIOLGICOS DEL a 2 C - 8 C cuando no se estn utilizando.
Tampn Tris con suero de un funcionamiento ptimo. Use slo los reactivos que se
para muestras de suero o plasma humanos que presentan PROCEDIMIENTO R22 Nocivo por ingestin. 2. Todos los reactivos y tiras de anlisis, si se conservan a
cabra normal termoinactivado. suministran con el kit.
reactividad repetida utilizando procedimientos de deteccin Mediante transferencia por electroforesis se adhieren a las tiras Contiene timerosal como El sustrato contiene 5-bromo-4-cloro-3-indolil fosfato y nitroazul 3. No utilice los componentes del kit despus de la fecha de 2 C - 8 C, son estables hasta la fecha de caducidad que
selectiva como el ensayo de inmunoabsorcin ligada a enzimas de nitrocelulosa protenas antignicas ligadas separadas de conservante. de tetrazolio, clasificados como nocivos (Xn) por las directivas caducidad que figura en la caja. figura en el kit. No congele los reactivos.
(ELISA). VIH-1 inactivado y parcialmente purificado, ms un pptido de la Comunidad Econmica Europea (CEE) que son de 4. Evite la contaminacin microbiana de los reactivos al
sinttico especfico del VIH-2. Las tiras de nitrocelulosa TAMPN DE LAVADO 1 frasco aplicacin. A continuacin figuran las frases relativas a los abrirlos y al extraer partes alcuotas de los viales o frascos A. Tiras de antgenos
CONCENTRADO (20x) (70 ml) riesgos (R) correspondientes. originales, ya que ello reducira de forma prematura el Evite las exposiciones innecesarias de las tiras de
individuales se incuban con suero o plasma diluidos y controles.
INTRODUCCIN Tris con Tween-20. Contiene periodo de validez de los kits y dara lugar a resultados antgenos a la luz.
Si la muestra contiene anticuerpos especficos frente al VIH-1 R20/21/22 Nocivo por inhalacin, por ingestin y en contacto
y VIH-2, dichos anticuerpos se unirn a las protenas del VIH- timerosal como conservante. errneos. Al extraer partes alcuotas de los viales utilice
con la piel. B. Reactivos
Existe actualmente una amplia disponibilidad de anlisis de 1 y al pptido del VIH-2 de las tiras. A continuacin se lavan las tcnicas aspticas, como pipetas o puntas de pipeta
deteccin selectiva para determinar la presencia de anticuerpos CONJUGADO 1 vial 1. Evite la contaminacin microbiana de los reactivos al Conserve los reactivos en sus viales o frascos originales,
tiras para eliminar los productos no ligados. Los anticuerpos desechables.
frente al VIH-1 y VIH-2, los agentes causales del sndrome de Anticuerpo de cabra anti-IgG (160 l) abrirlos y al extraer partes alcuotas de los viales o frascos que deben permanecer tapados.
que se unen especficamente a las protenas del VIH se pueden 5. Los controles del kit deben analizarse al mismo tiempo Dispense todos los reactivos cuando an estn fros y
inmunodeficiencia adquirida (SIDA). Dichos anlisis pueden ser visualizar mediante una serie de reacciones con anticuerpos humana conjugado con originales. que las muestras clnicas en cada serie de anlisis.
fosfatasa alcalina. Contiene 2. No pipetee con la boca. vulvalos a guardar a 2 C - 8 C lo antes posible.
muy sensibles, pero existe la posibilidad de que sean menos de cabra anti-IgG humana conjugados con fosfatasa alcalina y 6. Para evitar la contaminacin cruzada, use una punta de
azida sdica como 3. Manipule las muestras, las tiras de nitrocelulosa, el Cuando el sustrato se conserva a 2 C - 8 C puede
especficos, con lo que pueden dar lugar a falsos positivos. el sustrato BCIP/NBT. La sensibilidad de este mtodo permite pipeta nueva para cada alcuota de la muestra.
conservante. precipitar, sin que ello afecte al funcionamiento del kit.
Ello explica la necesidad de disponer de anlisis detectar en el suero o el plasma cantidades nfimas de reactivo, los controles reactivos fuerte y dbil y los 7. Para obtener resultados ptimos, dispense todos los
complementarios independientes de elevada especificidad para anticuerpos especficos frente al VIH. controles no reactivos como si fueran potencialmente reactivos mientras todava estn fros y vulvalos a
SUSTRATO 1 frasco Precaucin: Evite las exposiciones innecesarias
confirmar la presencia de anticuerpos frente al VIH-1, el VIH-2 infecciosos. guardar a 2 C - 8 C lo antes posible.
Solucin de 5-bromo-4-cloro- (100 ml) del sustrato a la luz.
o ambos. 4. Use bata de laboratorio y guantes desechables mientras 8. Se aconseja lavar el material de vidrio que se vaya a utilizar
3-indolil fosfato (BCIP) y realiza el ensayo. Deseche los guantes en bolsas para
COMPONENTES DEL KIT nitroazul de tetrazolio (NBT). para los reactivos con cido clorhdrico 2 M y aclararlo
Los kits HIV BLOT 2.2 de MP Diagnostics se disearon como residuos biopeligrosos. Lvese bien las manos al finalizar. bien con agua destilada o desionizada antes de usarlo. RECOGIDA, TRANSPORTE Y CONSERVACIN DE LAS
anlisis complementario ms especfico para muestras de Descripcin del componente Cantidad 5. Es muy recomendable que este ensayo se lleve a cabo 9. Utilice slo agua destilada o desionizada de calidad MUESTRAS
POLVO DE BLOTTING 10 paquetes
suero o plasma humanos que presentan reactividad repetida suministrada en una cmara de bioseguridad. reactivo para diluir los reactivos.
Leche desnatada (1 g cada uno)
utilizando el ensayo ELISA. Los antgenos vricos especficos 6. Mantenga el material alejado de bebidas y alimentos. 10. Todos los reactivos deben mezclarse bien antes de su Se pueden utilizar muestras de suero o plasma con EDTA,
separados del VIH-1, que se adhieren a las tiras mediante TIRAS DE Disponible 7. En caso de accidente o contacto con los ojos, lvese uso. heparina o citrato sdico. Antes de guardar las muestras,
Bandeja de incubacin 2 4 bandejas
procedimientos de electroforesis y electrotransferencia, se NITROCELULOSA en 18 36 inmediata y abundantemente con agua y acdase a un 11. La solucin del conjugado de trabajo, el tampn de lavado verifique que se hayan separado por centrifugacin los cogulos
de 9 pocillos
combinan en la misma tira con un pptido sinttico especfico Con lisado de VIH-1, pptido tiras mdico. diluido y el tampn de transferencia deben estar recin o las clulas sanguneas.
del VIH-2, lo cual permite delimitar con mayor exactitud las especfico de la envoltura del Instrucciones de Uso 1 copia 8. Acdase a un mdico de inmediato si se ingiere material preparados.
respuestas de anticuerpos ante protenas vricas especficas. VIH-2 y una banda de control contaminado o si ste entra en contacto con heridas 12. La solucin del conjugado de trabajo debe prepararse en Las muestras deben conservarse a 2 C - 8 C si el anlisis se
Cada tira incluye tambin un control interno de adicin de para la adicin de suero. Pinzas 1 par abiertas u otras lesiones de la piel. un recipiente o vaso de precipitado de polipropileno. va a llevar a cabo en los 7 das posteriores a la extraccin, o
muestras para reducir al mnimo el riesgo de falsos negativos Mantngalas secas y alejadas congelarse a una temperatura de al menos -20 C si el anlisis
debidos a errores operativos y para garantizar la adicin de las se va a retrasar ms de 7 das. Es preferible utilizar muestras
de la luz.
muestras. Nota: se suministra un volumen de reactivos suficiente para 4 transparentes y no hemolizadas. Las muestras lipmicas,
series de anlisis. ictricas o contaminadas (por partculas) deben filtrarse
(0,45 m) o centrifugarse antes del anlisis.

1 2 3

Las muestras pueden estar inactivadas, pero esto no es un CANTIDADES DE REACTIVOS NECESARIAS 5. Aada 20 l de suero de los pacientes o 20 l por minuto). Extraiga el tampn por Muestra 20 l 60 min Toda la noche TENGA EN CUENTA QUE el extremo numerado de las tiras
requisito para el rendimiento ptimo del anlisis. PARA DIVERSOS NMEROS DE TIRAS de controles, segn corresponda, en cada aspiracin. debe situarse hacia el fondo, tal y como se muestra en la figura;
(16 - 20 horas) es decir, las bandas gp120/gp160 son las ms alejadas del
uno de los pocillos. Debe tomar (Nota: No permita que las tiras sequen
Reactivos NMERO DE TIRAS A UTILIZAR falta puede dar lugar a marcas acuosas Tampn de 3 x 2 ml 3 x 5 min 3 x 5 min extremo numerado.
Para llevar a cabo la inactivacin proceda como se explica a precauciones para evitar aadir las
en las tiras desarrolladas para algunos lavado
continuacin: 3 6 9 15 20 27 36 muestras directamente en las tiras.
especmenes.) Conjugado 2 ml 60 min 30 min PESO GEN ANTGENO DESCRIPCIN
1. Afloje la tapa del recipiente que contiene la muestra. Tampn de lavado 60 100 140 240 300 400 600 6. Cubra la bandeja con la tapa suministrada 60 minutos
4. Aada 2 ml de TAMPN BLOTTING DE 2 ml Tampn de 3 x 2 ml 3 x 5 min 3 x 5 min MOLECULAR
2. Desactive la muestra calentndola a 56 C durante 30 diluido (ml) e incube durante 1 hora a temperatura
minutos al bao Mara. ambiente (25 3 C) en la plataforma TRABAJO a cada pocillo. lavado gp 160 ENV Forma polimrica Ancha y difusa
Tampn blotting de 20 40 60 80 100 120 160 5. Aada 20 l de suero de los pacientes o 20 l Sustrato 2 ml 15 min 15 min de la gp41 de glucoprotena
3. Deje enfriar la muestra antes de volver a ajustar la tapa. basculante.
trabajo (ml) de controles, segn corresponda, en cada (listo para su uso) (o menos) (o menos) gp 120 ENV Membrana externa Difusa de glucoprotena
4. La muestra puede conservarse congelada hasta el anlisis. 7. Destape la bandeja con cuidado para
Polvo de blotting (g) 1 2 3 4 5 6 8 evitar salpicaduras y el mezclado de las uno de los pocillos.
toda la Agua destilada 3 x 2 ml - - p66 POL Transcriptasa Banda discreta
Solucin del Conjugado 7 13 19 31 41 55 73 6. Cubra la bandeja con la tapa suministrada
Se recomienda no someter la muestra a ciclos repetidos de muestras. Incline la bandeja para aspirar inversa
de Trabajo (ml) e incube durante toda la noche (16 - 20 noche
congelacin y descongelacin. la mezcla de los pocillos. Cambie las p55 GAG Protena precursora Banda discreta
Conjugado (l), 14 26 38 62 82 110 146 horas) a temperatura ambiente (25 3 C)
puntas del aspirador entre muestras para CONTROL DE CALIDAD
Ensayo Rpido en la plataforma basculante. p51 POL Transcriptasa Banda discreta justo
MATERIAL ADICIONAL NECESARIO NO evitar la contaminacin cruzada. 7. Destape la bandeja con cuidado para inversa por debajo de p55
SUMINISTRADO Conjugado (l), 7 13 19 31 41 55 73 8. Lave 3 veces cada tira con 2 ml de 3 x 2 ml evitar salpicaduras y el mezclado de las Recomendamos que se analicen en todos los ensayos los
Ensayo Nocturno TAMPN DE LAVADO DILUIDO, dejando controles no reactivo, reactivo fuerte y reactivo dbil, p39 GAG Fragmento de p55 Banda discreta
muestras. Incline la bandeja para aspirar
Agua destilada o desionizada. Solucin Sustrato (ml) 7 13 19 31 41 55 73 que se empapen durante 5 minutos en la la mezcla de los pocillos. Cambie las independientemente del nmero de muestras que se analicen. gp41 ENV Transmembrana Difusa de glucoprotena
Guantes desechables. plataforma basculante entre los lavados.to puntas del aspirador entre muestras para Para que los resultados obtenidos en cualquier ensayo se p31 POL Endonucleasa Doblete
Plataforma basculante (con velocidad de balanceo de ensure specimens are not added directly evitar la contaminacin cruzada. consideren vlidos se deben cumplir las siguientes condiciones:
PROCEDIMIENTO DEL ENSAYO: ENSAYO RPIDO on the strips. p24 GAG Protena central Banda ancha
12 - 16 oscilaciones por minuto e inclinacin de 5 - 10 8. Lave 3 veces cada tira con 2 ml de 3 x 2 ml (core)
9. Aada 2 ml de SOLUCIN DEL 2 ml 1. CONTROL NO REACTIVO
para lavar las membranas uniformemente). Notas: a) Los usuarios pueden utilizar el anlisis rpido o de TAMPN DE LAVADO DILUIDO, dejando
CONJUGADO DE TRABAJO a cada No deben observarse bandas especficas del VIH-1 ni del p17 GAG Protena central Banda ancha
Pipetas y puntas del volumen adecuado. noche para funcionar las pruebas. Las vendas del que se empapen durante 5 minutos en la VIH-2 en las tiras de control no reactivo. La banda del control
Aspirador con depsito de hipoclorito sdico. pocillo. (core)
VIH son convertidas y ms vendas pueden aparecer plataforma basculante entre los lavados. de suero debe ser visible (Fig. 1c).
Bao Mara de 56 C (optativo). 10. Cubra la bandeja e incube durante 1 hora 60 minutos 9. Aada 2 ml de SOLUCIN DEL 2 ml
con el anlisis de noche, pero el funcionamiento total
Hipoclorito sdico para la descontaminacin. a temperatura ambiente (25 3 C) en la CONJUGADO DE TRABAJO a cada 2. CONTROL REACTIVO FUERTE
Algunos de los antgenos mencionados en la tabla anterior
de los dos anlisis es igual. plataforma basculante. derivan de la misma protena precursora y pueden tener
pocillo. Todas las bandas del peso molecular que corresponda eptopos superpuestos. Este hecho debe tenerse en cuenta al
b) Aspire todos los productos qumicos y reactivos 11. Aspire el CONJUGADO de los pocillos. 3 x 2 ml 10. Cubra la bandeja e incube durante 30 minutos deben ser evidentes. En la Figura 1a se muestra una gua
PREPARACIN DE LOS REACTIVOS Lave como en el paso 8. interpretar el patrn. Por ejemplo:
utilizados con un aspirador provisto de depsito con 30 minutos a temperatura ambiente de las posiciones relativas de las bandas visualizadas con
hipoclorito sdico. 12. Aada 2 ml de SOLUCIN SUSTRATO 2 ml (25 3 C) en la plataforma basculante. el ensayo HIV BLOT 2.2 de MPD que permite identificar 1. Resulta improbable detectar gp41 si no hay gp160 porque
1. TAMPN DE LAVADO DILUIDO a cada pocillo. 11. Aspire el CONJUGADO de los pocillos. 3 x 2 ml las bandas que se observan para el CONTROL REACTIVO la gp160 es la forma polimrica de la gp41, y en el ensayo
(a) El TAMPN DE LAVADO DILUIDO debe estar recin c) Todas las incubaciones deben efectuarse en una 13. Cubra la bandeja e incube durante 15 minutos HIV BLOT 2.2 de MPD la concentracin de gp160 es mayor
Lave como en el paso 8. FUERTE. Las bandas son p17, p24, p31, gp41, p51, p55,
preparado. plataforma basculante. 15 minutos en la plataforma basculante. 2 ml que la de gp41. La gp41 aparece como una banda difusa.
12. Aada 2 ml de SOLUCIN SUSTRATO p66, gp120/gp160. Pueden ser visibles tambin otras
(b) Diluya 1 volumen de TAMPN DE LAVADO (Nota: La reaccin se puede parar antes a cada pocillo. bandas asociadas a los antgenos centrales [del core] (p39, Las bandas ntidas y discretas en la regin de la gp41 no
Precaucin:
CONCENTRADO (20X) con 19 volmenes de agua de de 15 minutos si todas las vendas son 13. Cubra la bandeja e incube durante 15 minutos p42). Tenga cuidado de no interpretarlas errneamente deben interpretarse como banda gp41. Muchas muestras
Algunas muestras pueden causar manchas oscuras en el punto
visibles.) normales y no infectadas por el VIH resultan reactivas frente
calidad reactivo. Mezcle bien. de la tira en el que se aadieron. Para evitar este problema, 15 minutos en la plataforma basculante. como gp41. Los antgenos de la envoltura, gp41 y gp120/
14. Aspire el SUSTRATO y aclare las tiras un 3 x 2 ml a este antgeno no asociado al VIH, que probablemente
proceda de la forma siguiente: (Nota: La reaccin se puede parar antes gp160, aparecen como las bandas difusas tpicas de las tenga su origen en la lnea celular humana utilizada para
mnimo de tres veces con agua de calidad de 15 minutos si todas las vendas son glucoprotenas; la banda viral p55 puede aparecer muy dbil
2. TAMPN DE BLOTTING DE TRABAJO cultivar el virus.
i. Aada siempre la muestra despus de haber dispensado reactivo para detener la reaccin (el visibles.) en la tira real de control reactivo fuerte debido a un ttulo
(a) El TAMPN BLOTTING DE TRABAJO debe estar
el TAMPN BLOTTING DE TRABAJO. lavado insuficiente durante esta etapa 14. Aspire el SUSTRATO y aclare las tiras un 3 x 2 ml bajo de anti-p55 en el control reactivo fuerte que se 2. p55 es la precursora de p24 y p17. La banda p55 se detecta
recin preparado.
ii. Incline ligeramente la bandeja elevando su extremo superior puede provocar la aparicin de un fondo mnimo de tres veces con agua de calidad suministra. La banda del control de suero debe ser visible. generalmente cuando hay una fuerte reactividad ante p24
(b) Diluya 1 volumen de TAMPN BLOTTING oscuro).
o su fondo. El tampn de transferencia se desplazar hacia reactivo para detener la reaccin (el La banda especfica del VIH-2 tambin debe ser visible, tal y/o p17, que normalmente aparece como una banda
CONCENTRADO (10X) con 9 volmenes de agua de 15. Utilizando unas pinzas, coloque las tiras
la zona ms baja de la bandeja. Aada la muestra en la lavado insuficiente durante esta etapa y como se muestra en la Figura 1a. estrecha inmediatamente por encima de la banda p51,
calidad reactivo. Mezcle bien. con suavidad sobre paos de papel. siendo a veces indistinguibles ambas bandas y pudiendo
(c) Aada 1 g de POLVO DE BLOTTING por cada 20 ml zona en la que se haya acumulado el tampn de puede provocar la aparicin de un fondo
transferencia. Cuando haya dispensado todas las muestras, Cbralas con los paos de papel y oscuro). 3. CONTROL REACTIVO DBIL aparecer como una sola banda. Las bandas que aparecen
del TAMPN DE BLOTTING diluido preparado en la squelas. Otra posibilidad es dejar que El control reactivo dbil proporciona una medida de la como p42 y p39 son fragmentos GAG y no deben
etapa anterior (2 b). Revuelva hasta que el polvo se devuelva la bandeja a su posicin plana inicial. Asegrese 15. Utilizando unas pinzas, coloque las tiras
las tiras se sequen en los pocillos de la sensibilidad del kit. Deben aparecer bandas dbiles en p24 interpretarse como gp41 (ENV).
siempre de que las tiras se mantengan hmedas durante con suavidad sobre paos de papel.
disuelva por completo. bandeja. y/o gp41 y en gp120/gp160. Puede haber o no algunas
el proceso. Cbralas con los paos de papel y 3. La protena p24 es abundante en la tira HIV Blot 2.2. Para
(d) Revuelva de nuevo antes de dispensar la mezcla. 16. Coloque las tiras en una hoja de trabajo bandas dbiles adicionales. La banda del control de suero
iii. Otra opcin, si no desea inclinar la bandeja, es dispensar squelas. Otra posibilidad es dejar que las muestras de seroconversin, ha quedado bien
(papel blanco no absorbente). No aplique las tiras se sequen en los pocillos de la debe ser visible (Fig. 1b). establecido que el anti-p24 es el primero que aparece en
3. SOLUCIN DEL CONJUGADO DE TRABAJO las muestras en el extremo superior o en el fondo del pocillo. cinta adhesiva sobre las bandas
De esta forma, si aparecen manchas oscuras, la lectura bandeja. las pruebas de Western Blot. La aparicin de la banda p24
Nota: prepare la solucin en un recipiente o vaso de reveladas. Observe las bandas (vase 16. Coloque las tiras en una hoja de trabajo INTERPRETACIN DE LOS RESULTADOS en pacientes infectados por VIH cumplira los criterios de
precipitado de polipropileno. de los resultados de la tira no se ver afectada. Interpretacin de los resultados) y (papel blanco no absorbente). No aplique interpretacin positiva para la protena GAG segn la OMS,
(a) LA SOLUCIN DEL CONJUGADO DE TRABAJO Procedimiento: califique los resultados. Para el cinta adhesiva sobre las bandas NOTA: para evitar errores en las interpretaciones, las tiras los CDC y dems criterios internacionales.
debe estar recin preparada. almacenamiento, mantenga las tiras en reveladas. Observe las bandas (vase reveladas deben estar completamente secas.
1. Aada 2 ml de TAMPN DE LAVADO 2 ml la oscuridad. 4. Las bandas POL p66, p51 y p31 suelen detectarse de forma
(b) PROCEDIMIENTO ENSAYO RPIDO: Prepare la Interpretacin de los resultados) y
DILUIDO a cada pocillo. simultnea. Sin embargo, la sensibilidad del p66 y del p31
SOLUCIN DEL CONJUGADO DE TRABAJO califique los resultados. Para el La presencia o ausencia de anticuerpos frente al VIH-1 en la
es mayor que la del p51.
diluyendo CONJUGADO en TAMPN DE BLOTTING 2. Utilizando unas pinzas, extraiga con almacenamiento, mantenga las tiras en muestra se determina comparando cada tira de nitrocelulosa
DE TRABAJO en proporcin de 1:500; p. ej., cuidado del tubo la cantidad de TIRAS PROCEDIMIENTO ALTERNATIVO: ENSAYO NOCTURNO la oscuridad. con las tiras de control del ensayo con los controles NO 5. La reactividad cruzada con el VIH-2 es variable, pero resulta
10 l de CONJUGADO en 5 ml de TAMPN DE necesaria y coloque cada tira en su pocillo REACTIVO, REACTIVO FUERTE Y REACTIVO DBIL. tpica la reactividad con antgenos GAG, POL o ambos. Sin
BLOTTING DE TRABAJO. con el nmero hacia arriba. Incluya tiras Procedimiento: embargo, en algunos casos puede haber reactividad cruzada
(c) PROCEDIMIENTO ENSAYO NOCTURNO: Prepare la para los controles reactivo fuerte, reactivo La Figura 1a puede servir de ayuda para la identificacin de con la banda gp160, pero raramente con la gp41.
RESUMEN DE LOS PROTOCOLOS DE ENSAYO las diversas bandas que aparecen en la tira que se ha hecho
dbil y no reactivo. 1. Aada 2 ml de TAMPN DE LAVADO 2 ml
SOLUCIN DEL CONJUGADO DE TRABAJO reaccionar con el control REACTIVO FUERTE. El control
3. Incube las tiras durante 1 2 minutos a 2 minutos DILUIDO a cada pocillo. Reactivos Cant. Temp. amb. Temp. amb. 6. Existe tambin una banda de elevado peso molecular
diluyendo CONJUGADO en TAMPN DE BLOTTING reactivo fuerte que se incluye en el kit puede contener un ttulo
temperatura ambiente (25 3 C) en un 2. Utilizando unas pinzas, extraiga con Ensayo rpido Ensayo nocturno (aproximadamente 160 kD) que se cree que es una protena
DE TRABAJO en proporcin de 1:1000; p. ej., 5 l de relativamente bajo de anti-p55 y anti-p39; en consecuencia, la
plato basculante (velocidad 12-16 ciclos cuidado del tubo la cantidad de TIRAS precursora GAG-POL. Esta banda se observa en ciertos
CONJUGADO en 5 ml de TAMPN DE BLOTTING DE Tira de 1 - - banda correspondiente a p55 y p39 del control reactivo fuerte
por minuto). Extraiga el tampn por necesaria y coloque cada tira en su pocillo sueros con ttulos elevados de VIH-2 o sueros dudosos
TRABAJO. con el nmero hacia arriba. Incluya tiras nitrocelulosa puede aparecer dbil en las tiras analizadas. Esto no afecta en
aspiracin. absoluto a la capacidad de las tiras HIV Blot 2.2 para detectar (reactivos slo para GAG), pero el patrn de banda es el de
para los controles reactivo fuerte, reactivo Tampn de 2 ml 1-2 min 1-2 min una banda ntida y discreta diferente de la banda difusa de
4. SOLUCIN SUSTRATO (lista para su uso) (Nota: No permita que las tiras sequen la presencia de anti-p55 y anti-p39 en las muestras, ya que
dbil y no reactivo. lavado cada lote de tiras contiene una cantidad suficiente de antgeno la gp160 de ENV.
(a) Dispense el volumen necesario directamente del falta puede dar lugar a marcas acuosas
3. Incube las tiras durante 1 2 minutos a 2 minutos Tampn blotting 2 ml - - p55 y p39.
frasco. en las tiras desarrolladas para algunos
temperatura ambiente (25 3 C) en un de trabajo
Use una pipeta limpia. Cierre bien el frasco despus especmenes.) plato basculante (velocidad 12-16 ciclos
de usarlo. 4. Aada 2 ml de tampn BLOTTING DE 2 ml
4 TRABAJO a cada pocillo. 5 6
El proceso de interpretacin consta de los siguientes elementos: Cualquier banda vrica especfica DUDOSO2 DUDOSOS en la transferencia Western. No obstante, los CDC Tabla 2: Estudio de especificidad de la reactividad del 12. Fiebig, E. W., D. J. Wright, B. D. Rawal, P. E. Garrett, R. T.
CLUSULA DE EXENCIN DE RESPONSABILIDAD
presente, pero el patrn no cumple los con de los EE. UU. reconocieron en 2001 al consultar con antgeno vrico del VIH-1 en muestras de donante Schumacher, L. Peddada, C. Heldebrant, R. Smith, A.
1. Verificacin de que la banda del control de suero es visible. criterios para POSITIVO con una VIH-2 SEALADO sano y suero con otras infecciones vricas El fabricante garantiza exclusivamente que el kit de anlisis Conrad, S. H. Kleinman, and M. P. Busch. 2003. Dynamics
especialistas clnicos y de laboratorio que la NAT podra ser
banda especfica del VIH-2 visible. funcionar como ensayo diagnstico in vitro, de acuerdo con of HIV viremia and antibody seroconversion in plasma
Si el control es negativo, los resultados deben considerarse til para determinar la presencia o ausencia de infeccin en
TIPO DE NMERO POSITIVO REACTIVIDAD al VIH-1 las especificaciones y limitaciones descritas en el Instrucciones donors: implications for diagnosis and staging of primary
no vlidos, ya que ello indica un error tcnico, como por personas con una una transferencia Western inicial DUDOSA. de Uso del producto, cuando se use de conformidad con las
MUESTRA HIV infection. AIDS. 17:1871-1879.
ejemplo la falta de adicin de muestra, de conjugado o de 2
DUDOSO* NEGATIVO instrucciones citadas en el mismo. El fabricante rehusa
sustrato. INTERPRETACIN DE LOS RESULTADOS COMO 13. Ly, T. D., C. Edlinger, and A. Vabret. 2000. Contribution of
Donantes cualquier garanta, explcita o implcita, incluida la garanta
DUDOSOS LIMITACIONES DEL MTODO explcita o implcita relativa a la comercializacin, adecuacin combined detection assays of p24 antigen and anti-human
2. Identificacin del peso molecular de cada banda de la tira sanos 208 0 11 197
de anlisis utilizando como gua las tiras de control para el uso o supuesta utilidad para cualquier fin. El fabricante immunodeficiency virus (HIV) antibodies in diagnosis of
Los resultados DUDOSOS no deben utilizarse como base para La deteccin de anticuerpos frente al VIH-1 no implica que se HTLV-1 5 0 0 5 primary HIV infection by routine testing. J Clin Microbiol.
REACTIVO FUERTE, de control REACTIVO DBIL o de slo se obliga a la sustitucin del producto o al reembolso del
el diagnstico de infeccin por VIH-1. Teniendo en cuenta que haya establecido un diagnstico de sndrome de CMV 5 0 1 4 precio de compra del mismo. El fabricante no ser responsable 38:2459-2461.
ambos. la mayora de las personas con un resultado inicial DUDOSO inmunodeficiencia adquirida (SIDA). Una TRANSFERENCIA VEB (IgM) 5 0 1 4 ante el comprador ni ante terceros, de cualesquiera daos,
3. La interpretacin posterior de la tira de anlisis se basa en que estn infectadas con el VIH-1 desarrollarn anticuerpos NEGATIVA no constituye una garanta de la ausencia del agente perjuicios o prdidas econmicas provocados por la utilizacin 14. Sethoe, S. Y., A. E. Ling, E. H. Sng, E. H. Monteiro, R. K.
causal del SIDA. Aunque una transferencia POSITIVA para V. zster (IgG) 5 0 1 4 Chan. 1995. PCR as a confirmatory test for human
la deteccin de patrones especficos en las bandas segn detectables frente al VIH en el plazo de 1 mes, los CDC de los o la aplicacin del producto.
EE. UU. recomendaron en 2001 la repeticin del anlisis en anticuerpos frente al VIH-1 indica infeccin por el virus, el Sarampin 6 0 2 4 immunodeficiency virus type 1 infection in individuals with
las recomendaciones de las autoridades pertinentes
dichas personas al cabo de 1 mes. Resulta improbable que diagnstico clnico de SIDA slo se puede establecer si la per- Rubola 5 0 1 4 indeterminate western blot (immunoblot) profiles. J Clin
(Ministerio de Sanidad, Organizacin Mundial de la Salud, PROBLEMAS TCNICOS Y RECLAMACIONES
las personas cuyos resultados sigan siendo DUDOSOS sona cumple los criterios definitorios de SIDA establecidos por Paperas 4 0 1 3 Microbiol. 33:3034-3036.
etc.).
transcurrido un mes estn infectadas por el VIH, a menos que los Centers for Disease Control de EE. UU., la Organizacin Adenovirus 5 0 2 3 En caso de problemas tcnicos o si desea presentar una 15. Constantine, N. T. and H. Zink. 2005. HIV testing
se sospeche exposicin reciente al virus. Mundial de la Salud u otra autoridad competente. reclamacin, proceda de la siguiente manera:
Las directrices especficas para la interpretacin pueden variar HSV 5 0 0 5 technologies after two decades of evolution. Indian J Med
1. Anote el nmero de lote del kit y su fecha de caducidad y Res. 121:519-538.
segn los criterios locales. MPD recomienda seguir el criterio Es un hecho conocido que las personas que han experimentado Dengue 5 0 1 4
A tenor de un estudio realizado recientemente por Fiebig et al el nmero de lote de la tira.
aceptado de conformidad con las normativas locales. En la una seroconversin reciente pueden presentar un patrn Total 258 0 21 237
(2003), aunque el periodo de ventana para la transferencia 2. Conserve los kits y los resultados obtenidos. 16. World Health Organization. 2004. Guidelines for HIV
tabla que aparece a continuacin figuran algunas de las
Western en una primoinfeccin por el VIH-1 poda ser de hasta incompleto, pero se produce un aumento de la reactividad (tanto 3. Pngase en contacto con la oficina de MP Biomedicals Diagnosis and monitoring of antiretroviral therapy. Regional
directrices recomendadas por diferentes organizaciones
22 das, la evolucin de una transferencia DUDOSA a un perfil en el nmero como en la intensidad de las bandas) si se hace * Todos visibles como una banda de p24 o p17 nicamente. ms cercana o con su distribuidor local. Office for South-East Asia, New Delhi, India.
internacionales.
claramente POSITIVO se produjo en un mximo de 8 das. un seguimiento durante un periodo de dos a seis meses. La
Adems, la etapa con valores de laboratorio DUDOSOS para mayora de las transferencias con resultados POSITIVOS Tabla 3: Estudio de sensibilidad de la banda del pptido del 17. Ming Guan, Frequency, causes and new challenges of
ORGANIZACIN CRITERIOS PARA BIBLIOGRAFA indeterminate results in Western Blot Confirmatory Testing
INTERPRETAR COMO la transferencia Western siempre se acompaaba de ARN del presenta otras bandas vricas especficas. VIH-2 con muestras seropositivas para el VIH-2
VIH-1 detectable en los casos verdaderos de infeccin. En (Nmero de muestras = 178) for Antibodies to Human Immunodeficiency Virus. Clinical
POSITIVO EL RESULTADO
DE UNA TRANSFERENCIA cambio, no se evidenci seroconversin durante los estudios Los resultados DUDOSOS no deben utilizarse como base para 1. V.C.W.Tsang, K.Hancock, M.Wilson.D.F.Palmer, S.Whaley, and Vaccine Immunology, June 2007, Vol.14, No.6, p649-
WESTERN de seguimiento en las personas con anlisis de deteccin el diagnstico de infeccin por VIH-1. Se recomienda repetir J.S.Mc Dougal, and S.Kennedy. March 1985. 659.
Transferencia Western de Reactividad al pptido del VIH-2
Asociacin de Directores de Dos bandas p24, gp41, gp120/gp160 positivos y resultados DUDOSOS en la transferencia Western todas las transferencias con resultado DUDOSO utilizando la Developental Procedure: Enzyme-linked
VIH-2 Perfil serolgico@ Positiva Negativa Immunoelectrotransfer Blot technique for HTLV-III/LAV
Laboratorios de Salud Pblica cualesquiera una vez confirmada la negatividad mediante PCR (Sethoe et muestra original y muestras seriadas. En los donantes de
Estatales y Territoriales / Centros al, 1995). Por tanto, resulta sensato considerar que las perso- sangre con transferencia DUDOSA debe repetirse el anlisis GAG, POL y 2 ENV 160 0 antibodies;CDC, Altanta. MP Biomedicals Asia Pacific Pte Ltd.
para el Control de las nas con resultados DUDOSOS en la transferencia Western en con una muestra nueva al cabo de un mes (CDC de los EE. GAG, POL y 1 ENV 18 0 2. H.Towbin, T.Staehlin, and J.Gordon. 1979. Electrophoretic 2 Pioneer Place
Enfermedades (ASTPHLD1/CDC), los que, adems, los resultados de la determinacin del ARN UU., 2001). Adems, los anticuerpos frente a p24 y a p31 Singapore 627885
1989 EE. UU. transfer of proteins from polyacr ylamide gels to
son negativos, es improbable que estn infectadas con el VIH, disminuyen durante el curso del SIDA, lo que provoca un @
Sueros clasificados como positivos por los resultados del nitrocellulose sheets: procedure and some Tel.: + 65 6775 0008
Centre Nationale de Dos bandas de ENV con GAG sobre todo si no presentan ningn factor de riesgo conocido desplazamiento de la interpretacin de la transferencia de ensayo Pasteur New LAV Blot 2. Datos aportados por el Dr. applications.Proc.Natl. Acad.Sci..USA 76:4350-4354 Fax: + 65 6774 6146
Transfusion Sanguine o POL asociado con la exposicin. POSITIVA a DUDOSA. Por consiguiente, en tales Oliviero E. Varnier y la Dra. Flavia Lillo. Laboratorio de retrovirus
circunstancias, la interpretacin de los resultados debe basarse humanos. Universidad de Gnova. Correo electrnico: enquiry_ap@mpbio.com
Organizacin Mundial Dos bandas de ENV con o sin GAG 3. J.Schupbach, M.Popovic, R.V.Gilden, M.A.Gonds,
de la Salud (OMS), 1990 o POL En concreto, en las personas con resultados DUDOSOS en la en las transferencias posteriores y en las evaluaciones clnicas. M.G.Sarngadharan and .C.Gallo.1984. Serological Analysis
Consorcio para la Normalizacin de Una banda de ENV con p24 o p31 transferencia Western realizada como parte de un algoritmo Tabla 4: Estudio de especificidad de la banda del pptido of subgroup of Human T-Lymphotropic retroviruses(HTLV-
las Serologas de Retrovirus de pruebas en el que se usen los ELISA de cuarta generacin Dada su elevada especificidad, la AUSENCIA DE del VIH-2 con muestras seropositivas para el VIH- III) associated with AIDS.Science 224, 503-505
(CRSS), 1988 USA como anlisis de deteccin principales deber estudiarse REACTIVIDAD de las muestras con el pptido especfico de la 1, muestras de donantes sanos y suero con otras Medical Technology Promedt
tambin el ARN vrico con una prueba molecular como la PCR envoltura del VIH-2 en una transferencia vrica dudosa no infecciones vricas 4. M.G.Sarngadharan, M.Popovic, L, Bruch, J. Schupbach and
Cruz Roja Estadounidense (ARC), Una banda de GAG, otra de Consulting GmbH
1988 USA POL y otra de ENV con transcripcin inversa con grupos de cebadores que cubran excluye la posibilidad de infeccin con otras cepas del VIH-2. R.C.Gallo.1984.Antibodies reactive with human T-
Lymphotropic retroviruses (HTLV-III) in the serum of Altenhofstrasse 80
Centro Chino para el Control y la Dos bandas de ENV O una banda de el VIH-1/2/O. Si es necesario, deber plantearse la posibilidad D-66386 St. Ingbert
patients with AIDS. Science 224, 506-608.
Prevencin de las Enfermedades ENV con p24 de realizar anlisis complementarios de seguimiento al cabo Las muestras sealadas como infeccin por VIH-2 deben TIPO DE MUESTRA NMERO REACTIVIDAD al PPTIDO del VIH-2 Alemania
(CCDCP), 2004 RPC de un mes. El diseo nico de los ELISA de cuarta generacin volverse a analizar con un kit de Western blot para VIH-2. 5. Centre for Disease Control.1985. Provisional public health
POSITIVA NEGATIVA Tel.: + 49 68 94 58 1020
Laboratorios de Referencia Una banda de ENV con tres bandas de sirve para la deteccin simultnea del antgeno y el anticuerpo. service inter-agency recommendations for screening
Nacionales y Estatales (NRL) 1987, GAG o POL cualesquiera Por consiguiente, las muestras identificadas como positivas por Seropositiva para 197 16a 181 Fax: + 49 68 94 58 1021
donated blood and plasma for antibody to the virus causing
Australia un ELISA de cuarta generacin contendrn el anticuerpo, el CARACTERSTICAS ESPECFICAS DEL ENSAYO VIH-1 Acquired Immune Deficiency Syndrome. United States Correo electrnico: info@mt-procons.com
Asociacin Alemana para el Control Una banda de ENV con al menos una antgeno o ambos. Aunque en ms del 95% de los casos de Donantes sanos 208 0 208 Morbidity and Mortality Weekly Report 34(1):1-5
de las Enfermedades Vricas banda de GAG o de POL; vase positivos verdaderos identificados mediante un ELISA de cuarta Se evalu mediante estudios clnicos el rendimiento del ensayo Seropositiva para 5 0 5
tambin el DIN 58 969-41 generacin haba anticuerpos frente al VIH y los resultados se HIV BLOT 2.2 de MPD para la deteccin de anticuerpos frente HTLV-1 6. Proposed WHO criteria for interpreting results from Western
podan verificar (confirmar) mediante transferencia Western (Ly al VIH-1 y el VIH-2 . blot assays for HIV-1, HIV-2, and HTLV-I/HTLV-II, 1990,
CMV 5 0 5 Oficinas regionales:
Recomendamos las siguientes directrices para la interpretacin et al., 2000), resultaba imprescindible realizar un anlisis WHO Weekly Epidemiological Record No 37, p282-283.
del MPD HIV BLOT 2.2 de MPD. Deben registrarse los complementario por PCR con transcripcin inversa para el Tabla 1: Estudio de sensibilidad de la reactividad del antgeno VEB (IgM) 5 0 5
vrico del VIH-1 en muestras seropositivas para el V. zster (IgG) 5 0 5 7. F.Clavel, D. Guetard., F.Brun-Vezinet, etal, 1986 Isolation MP Biomedicals SAS
resultados de todas las bandas detectadas, e interpretarse pequeo porcentaje de reactividad relacionada con el antgeno
como NEGATIVO, POSITIVO o DUDOSO. VIH-1 (Nmero de muestras = 201) of a new human retrovirus from West African patients with Parc dInnovation, BP 50067
p24. Tambin en este caso, es improbable que las personas Sarampin 6 0 6 AIDS. Science; 233:343-346.
sin riesgo de exposicin alguno estn infectadas por el VIH, si 67402 IIIkirch Cedex
Rubola 5 0 5
PATRN INTERPRETACIN el resultado se determin como positivo mediante un ELISA 8. F.Clavel., 1987.HIV-2, the West African AIDS virus.AIDS France
PERFIL HIV BLOT 2.2 HIV-1 WB de Paperas 4 0 4 Tel. : (33) 388 67 4607
Ninguna banda vrica especfica presente NEGATIVO de cuarta generacin junto con una transferencia Western 1:135-140.
SEROLGICO DUPONT/ORTHO Adenovirus 5 0 5
Deteccin de anticuerpos p17 NEGATIVO DUDOSA, pero la duda se resuelve con un resultado POSITIVO Fax : (33) 388 67 5420
en un anlisis del ARN con grupos de cebadores que cubran HSV 5 0 5 9. R.S.Tedder, A. Hughes, T.Corrah et al 1988. Envelope cross-
NICAMENTE, sin ninguna otra banda Correo electrnico: custserv.eur@mpbio.com
el VIH-1/2/O. GAG, POL y reactivity in Western Blot for HIV-1 and HIV-2 may not
Dengue 5 0 5 indicate dual infection. Lancet 11:927-930.
Deteccin de 2 ENV (gp160/gp41y gp120) VIH-1 POSITIVO ENV 97,5% 95,4%
y GAG (p17, p24, p55) o POL Sin embargo, las pruebas del cido nucleico (NAT) del ADN o p24, p31, gp41 Total 455 16 439
(p31, p51, p66) 10. Bottinger B., A.Karisson, F. Andreasson et al.1990.Envelope * Patente 5,721,095 de EE. UU.
el ARN del VIH no han sido autorizadas para fines diagnsticos y/o 94,9% 90,9% a cross-reactivity between Human Immunodeficiency Virus
Deteccin de 2 ENV (gp160/gp41 y gp120) VIH-1 POSITIVO por las autoridades competentes (los CDC de los EE. UU., 2001; gp120/gp160 Al analizarlas mediante Western Blot para HIV-2 de MPD, 6
de estas muestras presentaron reactividad con ENV y GAG o Type 1 and 2 detected by different serological methods:
y GAG (p17, p24, p55) o POL (p31, p51, con Constantine y Zink, 2005) hasta hace muy poco tiempo. Hasta ENV y GAG Correlation between cross-neutralization and reactivity
p66) y banda especfica del VIH-2 visible VIH-2 SEALADO POL, otras 9 fueron reactivas slo a GAG y/o POL y 1 muestra
ahora, la FDA estadounidense slo ha dado su aprobacin para o POL 100,0% 100,0% against the main neutralizing site. J. Virol.64(7):3492-3499.
result negativa.
Cualquier banda vrica especfica DUDOSO2 el anlisis cualitativo del ARN en el diagnstico de la infeccin
presente, pero el patrn no cumple primaria y la infeccin aguda por VIH-1. Por tanto, los algoritmos 11. Centers for Disease Control. 2001. Revised Guidelines for
Se analiz con el ensayo HIV Blot 2.2 de MPD un total de 15 HIV Counseling Testing, and Referral and Revised
los criterios para POSITIVO de pruebas recomendados por los CDC de los EE. UU. (2001) paneles de seroconversin para VIH-1 comercializados, y los
y la OMS (2004) an no se han actualizado, y todava falta Recommendations for HIV Screening of Pregnant Women
resultados mostraron que el ensayo HIV Blot 2.2 de MPD logr --- United States, Morbid. Mortal. Weekly Rep. 50: RR-19.
incluir la NAT como mtodo para resolver los resultados detectar anticuerpos frente al VIH antes o en la misma muestra
en todos los paneles.

7 8 9

DIAGRAMA PARA RESOLUCIN DE PROBLEMAS

FIGURA 1

a b c d
Aparecen bandas no
especficas y no indican Aparecen bandas que Las tiras estn
VIH-2 no son las del control defectuosas
No aparecen las bandas
esperadas o muestran de suero en controles
gp 160 Aparecen puntos una intensidad dbil. negativos Banda ntida y discreta
Aparece un fondo fuerte en la
gp 120 negros en las tiras en la regin de la gp41
tira con ausencia o presencia
de bandas positivas. Aparecen bandas
Manchas blancas en
no especficas o
las tiras
Comprobar control positivo fondos oscuros en Marcas de agua en
p 66
las tiras las tiras reveladas
p 55
p 51 1.La muestra es muy fuerte y
Ausencia de banda
reacciona con pequeas
gp 41 del control de suero
cantidades de intermediarios. 1.Estn agrietadas.
p 39 1.Se ha dado la vuelta a 2.Las muestras reaccionan de 2.Contienen burbujas de aire
las tiras durante el forma cruzada con protenas que provocan la aparicin de
ensayo. H-9 presentes en la puntos blancos en zonas de 1.Las tiras se dejaron
2.Las bandejas no se han preparacin viral (por ejemplo reaccin lo bastante grandes secar despus del
p 31
lavado adecuadamente HLA, ABC, DR) como para evitar la deteccin. paso de pre-
antes de su utilizacin. Los pocillos de la
3.Se han identificado bandas 3.Muestran puntos negros empapado antes de
3.Disolucin deficiente del bandeja o el control han
legtimas (antgeno de debido al crecimiento mictico aadir el tampn de
polvo de transferencia. podido sufrir una
p 24 envoltura desglicosilado) de que se origin a partir de la transferencia.
4.Interferencia en la contaminacin cruzada.
alrededor de 80 y 90 kD en apertura inicial de los tubos de
electrotransferencia algunas muestras de anlisis. las tiras. Sin embargo, si los
durante su fabricacin. puntos negros aparecen un
tiempo despus de la apertura
p 17 1. Tiras sobrerreveladas inicial del tubo, este problema
1.Contaminacin (parar reaccin antes). es debido a unas condiciones
bacteriana o mictica 2. Lavado incompleto. inadecuadas de conservacin
de la muestra del de la tira en el emplazamiento
anlisis. Control positivo dbil Control positivo OK del usuario.
Suero de 2.Precipitacin de
complejos inmunes 1.No se aadi suero.
control
en muestras de 2.Se ha dado la vuelta a las
VIH-2 anlisis envejecidas. tiras durante el ensayo.
3.Contaminacin 3.No se aadi e conjugado.
1.No es la banda gp41, ya
bacteriana o mictica Puede que el problema Puede que el problema 4.No se aadi el sustrato.
que la gp41 es una banda
en tiras por una est provocado por los est provocado por la
difusa.
conservacin reactivos. muestra del anlisis.
2.No interpretar como gp41.
inadecuada. 3.Posiblemente se trate de
4.Tiras fsicamente 1.Los reactivos no estn 1.Dilucin errnea de la
una protena de lnea
daadas, agrietadas preparados muestra del anlisis.
1.Dilucin errnea de la celular, p42.
o rayadas. adecuadamente. 2.Muestra del anlisis
muestra del anlisis o del
5.No se han lavado 2.Dilucin errnea del contaminada con el
conjugado.
adecuadamente las conjugado. conjugado.
2.Incubacin demasiado
tiras entre los 3.Reactivos inestables por 3.Las muestras del anlisis
a. Control reactivo fuerte (reactivo larga de la muestra del
distintos pasos del exposicin a temperatura muestran fuertes
para el VIH-1 y el VIH-2) anlisis o del reactivo.
ensayo. inadecuada. complejos inmunes.
3.Lavado incompleto durante
b. Control reactivo dbil (reactivo 4.Conjugado contaminado 4.La IgG de la muestra del
el ensayo.
slo para el VIH-1) con IgG humana. anlisis est deteriorada
4.Temperatura de incubacin
c. Control no reactivo 5.pH del sustrato incorrecto o desnaturalizada por
superior a 30 C.
d. Un ejemplo tpico de suero por exposicin a una ciclos repetidos de
5.Reaccin de la muestra del
positivo para el VIH-2 intensa luz ultravioleta o congelacin o por una
anlisis con protenas no
a un agente reductor. conservacin
vricas.
6.Alta concentracin de inadecuada.
fosfato en bandejas, 5.Se ha utilizado un
reactivos o agua. agitador rotativo en lugar
7.Se ha utilizado un plato de un plato basculante.
rotativo en lugar de un 6.La muestra del anlisis
plato basculante. puede ser un falso
positivo de ELISA.
10 11 12