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Leonor Thomson
Facultad de Ciencias
1
Forma parte de los lquidos extracelulares
Sangre
Linfa
Lquido intersticial
Su funcin es la de transporte de nutrientes y
oxgeno a los tejidos y de productos de
desecho hacia los sitios de eliminacin.
La sangre es el 7% del peso corporal total
El volumen de sangre circulante en un adulto
normal es de unos 5 L.
2
En los vertebrados la sangre est compuesta por:
Elementos formes (clulas)
Glbulos rojos
Plaquetas
Glbulos blancos
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Mantienen la presin osmtica del plasma
Transporte de molculas: iones, hormonas,
nutrientes, etc. (asociados a las protenas)
Coagulacin
Respuesta inmune
4
5
Protena Conc. Porcentaje Funcin
(g/L)
Albmina 39-55 60% Transporte de molculas.
Presin osmtica
Inmunoglob. 10-22 20% Inmunidad
6
Funcin Protena
antiquimotripsina
Antiproteasas 1-antitripsina
2-macroglobulina
antitrombina
Factores de la coagulacin II-XIII
Coagulacin Fibringeno
Provenientes de tejidos (LDH, TGO,
Enzimas TGP, ...)
Eritropoyetina, insulina, glucagn, ADH,
Hormonas GH,
Defensa inmune Inmunoglobulinas y complemento
Respuesta inflamatoria PCR
Albmina, ceruloplasmina, transferrina
transcortina, TBG, transtiretina
Protenas de transporte haptoglobina, hemopexina
apoipoprotenas
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ALBMINA SRICA
HUMANA
Luca Turell
Laboratorios de Enzimologa y Fisicoqumica
Biolgica
Bioqumica II
2010
1. Algo de historia
2. La molcula de albmina
IA
IIIA
IIA
IIB
Cromosoma 4
transcripcin
ARNm
traduccin
Preproalbmina
Retculo endoplsmico
Peptidasa
Proalbmina
Golgi o vesculas de secrecin
Convertasa
Vesculas de secrecin
(10 -15 g por da) Plasma
4. Distribucin
Cys34
FA2
FA7
FA4 Sudlows site I
Sudlows
site II FA3
FA6
Acidos grasos
Cationes metlicos
Drogas:
Aurotiomalato (agente antirreumtico)
D-penicilamina (detoxificacin de oro y metales pesados)
Captopril (antihipertensivo)
xido nitroso, N2O (anestsico, gas hilarante)
Lipodistrofia
Trastornos hormonales
La longevidad no se ve afectada
1-antitripsina
30
1-antitripsina pertenece a la superfamilia de
serpinas, inhibidoras de proteasas de Ser.
Tambin se conoce como inhibidor de
peptidasas -1 porque inhibe una amplia
variedad de estas enzimas.
Protege los tejidos de las enzimas generadas
por las clulas inflamatorias, especialmente
de la elastasa
Su concentracin en plasma aumenta en la
inflamacin aguda.
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En su ausencia, la elastasa es libre de romper
la elastina, destruyendo el tejido conjuntivo,
lo que resulta en:
Enfermedades respiratorias adquiridas como la
enfermedad pulmonar obstructiva crnica (EPOC) de
los fumadores, por oxidacin de la Met-358,
necesaria para la unin a elastina
La deficiencia enzimtica hereditaria causa
enfisema y cirrosis.
Tomografa de pulmn mostrando enfisema y burbujas en
los lbulos inferiores de un sujeto con deficiencia de 1-
antitripsina ZZ. Se observan reas con mayor densidad
por compresin de tejido pulmonar
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Alanina amino transferasa (TGP): 0-35 U/L
Aspartato amino transferasa (TGO): 0-35 U/L
Lactato deshidrogenasa (LDH): 100-190 U/L
Creatina quinasa (CPK-MB):
Mujeres< 40-150 U/L
Hombres: 60-400 U/L
Fosfatasa alcalina: 30-120 U/L
Fosfatasa cida: 0-5.5 U/L
La concentracin plasmtica de varias de estas
enzimas se emplea en la clnica para el diagnstico de
enfermedad heptica, cardaca, sea, prosttica.
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35
Se denominan as porque aumentan durante
procesos agudos: infecciones y procesos
inflamatorios de diferente naturaleza
Entre ellas se encuentran:
Fibringeno
1-antitripsina
Haptoglobina
Protena C reactiva
otras
El aumento puede ir desde 50% a varios miles
de veces
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PCR o CRP
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La Protena C reactiva (PCR CRP por su
sigla en ingls) es una protena plasmtica
de fase aguda producida por el hgado y por
los adipocitos.
Es miembro de la familia de las pentraxinas.
Protenas constituidas por pentmeros unidos
formando un anillo
Circula como un dmero de pentmeros
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La PCR fue descripta en 1930 por Tillett y
Francis como una sustancia presente en el
suero de pacientes con inflamacin aguda y
que reaccionaba con el polisacrido C de
pneumococo.
Se une a la fosfatidilcolina de la membrana,
iniciando el reconocimiento y la fagocitosis de
clulas daadas y microorganismos.
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La PCR es miembro de la clase de reactivos de
fase aguda y su nivel aumenta
dramticamente durante los procesos
inflamatorios.
Este incremento se debe a un aumento en la
concentracin plasmtica de IL-6, que es
producida por macrfagos, clulas
endoteliales y linfocitos T, como tambin por
los adipocitos.
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Colabora con el complemento ligndose a
clulas extraas y daadas.
Estimula la fagocitosis de macrfagos, los
cuales expresan un receptor para PCR.
Desempeando un papel importante en la
inmunidad innata, que es el sistema de
defensa temprano contra infecciones.
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Sus niveles se incrementan en los episodios agudos
coronarios, significando un mal pronstico tanto a
corto como a largo plazo.
Normalmente es menor a 10 mg/L y vara
segn el laboratorio en el cual se realice.
Examen de Alta Sensibilidad de PCR (hs-CRP),
sirve para diagnosticar el riesgo de una
cardiopata .
Bajo riesgo: niveles menores a 1 mg/L
Riesgo moderado: 1-3 mg/L
Alto riesgo: niveles mayores a 3 mg/L
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Estudio prospectivo de PCR
como factor de riesgo
futuro para enfermedad
cardiovascular en
poblaciones
aparentemente sanas de
hombres y mujeres. La
figura muestra el RR y
95% IC (lneas)
comparando los
individuos en el cuartil
Clinical Chem 47: 403-411, 2001 superior con el inferior
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RRs para eventos
cardiovasculares futuros entre
mujeres aparentemente sanas
en el estudio WHS. Se muestran
el RR y 95% ICs (lneas) para el
cuartil superior comparado con
el inferior para cada marcador.
Lp(a), lipoprotena (a); tHCY,
total homocistena; IL-6,
interleucina-6; sICAM-1,
molcula de adhesin
intercelular soluble-1; LDLC,
LDL-C; SAA, amiloide serico A;
Apo B, apolipoproteina B;
HDLC, HDL-C.
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46
Es una cascada bioqumica que "colabora en
la destruccin de organismos patgenos.
Es parte del sistema inmunitario innato.
Representan aproximadamente el 5% de la
fraccin de globulina de suero sanguneo.
Se compone de una serie de protenas
pequeas que se encuentran en la sangre,
por lo general sintetizada por el hgado y
normalmente circulando como precursores
inactivos.
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Cuando es estimulado, las proteasas inician
una cascada de activaciones.
El resultado final de la cascada de activacin
es la amplificacin masiva de la respuesta y la
activacin del complejo de ataque de
membrana (MAC) constituido por C5b, C6,
C7, C8, y C9 polimrica.
Abre poros en la membrana que llevan a la
lisis celular.
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Eritropoyetina (EPO)
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Es una glucoprotena de 166 aminocidos
Con un peso molecular de unos 34 kDa
Es el principal regulador de la eritropoyesis
La eritropoyetina pertenece
filogenticamente a la familia de las
citoquinas.
Su funcin es estimular la produccin de
glbulos rojos por la mdula sea.
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En humanos, la EPO se forma en un 85-90% en el
rin y en un 10-15% en los hepatocitos.
Adems, podra sintetizarse tambin en el cerebro, los
testculos y el bazo.
Su sntesis es estimulada por la disminucin en la
saturacin de oxgeno (hipoxia) de la sangre.
Esto lleva a la translocacin de la subunidad alfa
del Factor Inducido por Hipoxia (HIF) desde el
citoplasma al ncleo.
Este estimula al factor de transcripcin: protena de
unin al elemento de respuesta a AMPc (CREB) y
al p300 activndose la transcripcin del gen que
codifica para EPO.
51
Annu. Rev. Pathol. Mech. Dis. 2011. 6:16592
VHL es una E3
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En la mdula durante la eritropoyesis la EPO se
une al receptor de eritropoyetina (EPO-R) en las
clulas precursoras de los glbulos rojos,
promoviendo su multiplicacin y diferenciacin.
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Annu. Rev. Pathol. Mech. Dis. 2011. 6:16592
Cada da se generan aproximadamente
doscientos mil millones de eritrocitos.
La insuficiencia renal lleva a disminucin en la
formacin de EPO, producindose anemia de
causa renal.
Adems la EPO acta en la diferenciacin de
diferentes tipos de clulas y estimula en
pequea medida la formacin de
megacariocitos.
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Cuando un deportista recibe inyecciones de EPO
sinttica, incrementa la concentracin de hemates
hasta en un 70%.
As, los msculos pueden recibir ms oxgeno a partir de la
misma cantidad de sangre.
Como resultado hay un trabajo muscular ms eficaz
y mayor rendimiento con retraso de la aparicin de
cansancio.
Su uso en el deporte est prohibido, igual que las
autotransfusiones, puede acarrear peligrosos
problemas de salud.
Al provocar mayor viscosidad de la sangre, es fcil que
aparezcan trombos, que se traducen en fallo cardaco, infarto
de miocardio, trombosis pulmonares o cerebrales, dao
renal, sobrecargas circulatorias y shock metablico
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Haptoglobina
Transferrina
Ceruloplasmina
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Es una glicoprotena de ~ 91kDa,
Concentracin normal 40-180 mg/dL
Transporta hemoglobina (Hb)
extracorpuscular, previniendo la filtracin
glomerular de la Hb libre.
Previene la prdida de hierro
Previene la precipitacin de Hb en la va urinaria
10% de la Hb degradada por da aparece en la
circulacin como extracorpuscular.
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t de la haptoglobina es de 5 das
t del complejo HG-Hb es 90 min.
El complejo es degradado a nivel heptico donde el
Fe pasa a formar parte del pool de hierro.
Si existe anemia hemoltica la concentracin de
haptoglobina libre disminuye y la de hemoglobina
libre aumenta
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Protena de transporte de hierro
(Fe3+)
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Transferrina 3-4 mg
Hemoglobina en los glbulos rojos 2.5-3 g
Mioglobina y varias enzimas 0.3 g
Reservas (ferritina y hemosiderina) 1g
Absorcin 1 mg/da
Prdidas 1 mg/da
60
En el plasma el Fe3+ se une a transferrina que es
la protena transportadora especfica de hierro.
Es una -1 globulina, de forma elipsoidal, de 679
aminocidos (~ 80kDa).
Es una glucoprotena formada por una cadena
simple de polipptidos que tiene dos sitios activos
de unin al hierro
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De los 3-4 gramos de hierro corporal de un
hombre adulto, un 0.1% (3-4 mg) circula en el
plasma como pool intercambiable, unido a
transferrina.
La asociacin con la transferrina cumple tres
propsitos fundamentales:
Solubiliza el hierro bajo condiciones fisiolgicas
Previene reacciones oxidativas mediadas por hierro
Es la fuente ms importante de Fe para las clulas
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La funcin principal de la transferrina, es la de unir
con alta afinidad el hierro (1023 M-1 s-1 a pH 7.4).
El Fe se une a la transferrina en forma frrica,
Siempre que la protena no est saturada no hay Fe3+ libre
en presencia de transferrina
La transferrina no une Fe2+
Adems puede unir a otros metales con menor
afinidad
La afinidad por el Fe3+ disminuye al disminuir el pH
La transferrina tiene una vida media de 8-10 das y
se encuentra en el plasma saturada con hierro en
una tercera parte normalmente.
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La asociacin transferrina-Fe3+ requiere de la
presencia de aniones carbonato
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El hgado es la fuente principal de
transferrina
Su rol principal es el transporte de
Fe3+ desde el intestino y de los
glbulos rojos degradados
El hierro es transportado hacia los
tejidos que lo requieren,
fundamentalmente:
tejido hematopoytico
los que presentan divisin celular activa.
Fp = Ferroportina
Cp = Ceruloplasmina
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Para que el hierro se transporte al interior
celular se requiere de una protena de
membrana, el receptor de transferrina.
El receptor de transferrina ayuda a mantener la
homeostasis de hierro en las clulas,
controlando la concentracin de hierro.
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1ero se produce la unin del complejo transferrina-hierro
a sus receptores en la superficie de las clulas.
El complejo es internalizado por endocitosis
(endocitosis mediada por receptor).
El pH bajo lisosomal (debido a la ATPasa de H+),
disminuye la afinidad de la transferrina por el hierro.
El hierro libre es transferido al citosol por el
transportador DMT-1
El hierro se asocia a protenas
Ferritina (almacenamiento)
Hb, Mb, citocromos, protenas no hemicas, etc.
El complejo receptor-transferrina es devuelto a la
membrana celular donde se libera la transferrina que
retorna al plasma.
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La capacidad ligadora de hierro refleja la cantidad
total de transferrina activa y disponible en la
sangre, que normalmente es 200-450 g/dL.
En la deficiencia del hierro a menudo se identifica
un incremento en la capacidad de unin con el
mineral.
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La expresin de ferritina y del receptor de
transferrina depende de regulacin a nivel
traduccional.
Existen 2 protenas IRE-BPs que modulan la
traduccin de los ARNm que codifican para
ferritina y el receptor al unirse a regiones no
codificantes de los ARNm llamadas IRE
(elementos de respuesta a Fe)
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Macrfagos
Eritrocitos de hgado y bazo Absorcin
circulantes intestinal de Fe
Fe3+-Transferrina
Medula sea en plasma
(Hb)
Utilizacin y
almacenamiento Utilizacin
heptico por el
musculo (Mb)
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VALOR NORMAL DE CERULOPLASMINA EN
SANGRE:20-40 mg / 100ml
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La ceruloplasmina (Cp) es una protena
plasmtica de 151 kDa.
Con actividad ferroxidasa.
Se sintetiza principalmente en hgado
aunque tambin es producida por otros tipos celulares
como monocitos y astrocitos
Consta de una cadena polipeptdica simple y se
secreta como una -2 glicoprotena a nivel
plasmtico.
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Transporta el 90% del Cu plasmtico
Une 6 tomos de Cu por molcula con alta
afinidad
Slo el 10% de Cu plasmtico que se
encuentra asociado a albmina es
fcilmente intercambiable.
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Se caracteriza desde el punto de vista
estructural por presentar tres tipos de sitios de
unin para el cobre
3 sitios con Cu tipo I
1 solo Cu tipo II coordina con 4 nitrgeno de imidazol,
prximos a 2 Cu tipo III que absorben a 330 nm.
Los Cu tipo II y III forman un cluster trinuclear de
Cu que es el sitio de unin al oxgeno durante el
ciclo cataltico .
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El hgado es la mayor fuente de Cp srica y
un aumento en el pool heptico de cobre
resulta en un aumento sostenido en la
concentracin de Cp,
En personas que presentan deficiencia
nutricional de Cu, se observa una
disminucin en la concentracin de Cp
circulante.
La Cp es una protena multifuncional. La
funcin que la misma cumpla depender de
los cambios en las condiciones fisiolgicas
y patolgicas presentes en el organismo.
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La absorcin del cobre tiene lugar en el intestino
delgado, entrando en la superficie mucosa de las
clulas por difusin facilitada.
En el interior de las clulas intestinales capaces de
absorber el cobre, los iones Cu+2 se encuentran unidos
a la metalotionena.
Se piensa que la cantidad de cobre que se absorbe
depende de la cantidad de metalotionena en las clulas
mucosas.
En total, se absorbe entre el 25% y el 60% del cobre
aportado.
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El 90% del cobre absorbido se incorpora a la
ceruloplasmina plasmtica. El resto se une a la
albmina, transcuprena y otras protenas
plasmticas.
El cobre es transportado al hgado a travs de la
vena porta.
En los hepatocitos, el cobre es captado por las
metalotionenas para su almacenamiento o se
incorpora a varias cuproenzimas.
Las metalotioneinas cargadas de cobre son
almacenadas en los lisosomas de los hepatocitos,
evitando de esta manera la toxicidad propia del
metal libre ionizado.
Cuando se necesita, el cobre es incorporado de
nuevo a la ceruloplasmina y excretado al plasma.
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Transcortina
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La transcortina o globulina fijadora de
corticoesteriodes (CBG), es una alfa globulina de la
superfamilia de las serpinas de estructura muy similar a
la de la -1 antitripsina.
Las hormonas esteroideas por ser liposolubles
requieren de un transportador proteico a nivel
plasmtico
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La CBG se une y transporta a varias hormonas
esteroideas:
Aproximadamente 75% del cortisol circulante est
unida a esta protena plasmticael resto est unida
a la albmina.
Slo el cortisol no unido a CBG es activo
Un 60% de la aldosterona sangunea est unida a
protenas sanguneas: 20% a la CBG y 40% a otras
protenas como la albmina.
Tambin transporta progesterona.
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t de los esteroides depende de la afinidad de
estos por CBG
Cortisol (Kd 3 x 10-9 M) t 1.5-2 h
Corticosterona (Kd 5 x 10-9 M) t <1 h
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Es producida por el hgado.
Su produccin es regulada por los estrgenos, por
lo tanto, los niveles de CGB aumentan
normalmente durante el embarazo, en mujeres
obesas (en especial en la menopausia)
Por su produccin en hgadosu concentracin
disminuye en la cirrosis.
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Tnica
Guantes
Cuaderno de practico
Lean el/los protocolos
No comer ni beber
Nunca pipetear con la boca
Asuman que todos los reactivos son txicos y que todo
el material esta contaminado
Pregunten ante la menor duda, principalmente en cuento
a toxicidad y uso del equipamiento.
Por favor cuidar el material, dejar todo limpio y en las
mismas condiciones que lo encontraron
Se exigir puntualidad
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