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Desarrollo de las cepas y tcnicas de cultivo

La mejora del cultivo inicial se produjo en 1943 con el aislamiento de la cepa


Penicilliumchrysogenum NRRL1951. Este microorganismo era ms adecuado para
la produccin en cultivosumergido que la cepa original, Penicillium notatum.
P. Chrysogenum permiti trabajar en cultivo sumergido empleando lactosa como
fuente de carbono y energa, y agua de macerado de maz (corn-steep liquor)
como fuente de nitrgeno.
Mediante posterior mutagnesis fue aislada la cepa WisQ176, la cepa original de
la lnea de cultivos Wisconsin. WisQ176 fue adoptada por la mayor parte de los
fabricantes de penicilina y fue utilizada como cepa original en los distintos
programas comerciales de mejora de cepas, acerca de los que se ha publicado
poco (secreto industrial). Si bien los aumentos de rendimiento han sido el objetivo
principal del desarrollo de las cepas, tambin han sido optimizados otros
Factores que tienen un efecto sobre la fermentacin y la eficiencia de
recuperacin del producto.

Los principales avances en el procesamiento han sido obtenidos a travs del


screening emprico de mutantes. Hasta mitad de los aos 60 los mutgenos
utilizados ms frecuentemente eran los rayos X, mostaza nitrogenada y
radiaciones de longitud de onda corta. Ms recientemente han sido utilizados
como mutgenos la nitrosoguanidina, los agentes alquilantes y los nitritos. A
principios de los 70 la mejora de cepas por el mero uso de la mutacin haba
alcanzado su lmite.
El descubrimiento de un ciclo parasexual en Penicillium chrysogenum
proporcion una forma de utilizar la recombinacin gentica para el desarrollo de
cepas. Se describieron diploides heterozigticos que tenan ttulos de penicilina
superiores a los de las cepas haploides parentales.
Sin embargo, el mayor porcentaje de cepas con produccin superior de penicilina
se produjo a partir de los haploides segregantes de los cruces entre mutantes de
diferentes lneas. La tcnica de fusin de protoplastos abri un nuevo enfoque
en el desarrollo de cepas de alta produccin obtenindose rendimientos del 8%
superiores a los obtenidos por mutacin y seleccin. Adems, algunas de las
cepas resultantes han tenido mejores caractersticas de crecimiento, como
esporulacin ms estable y mejor crecimiento para la produccin del inculo.
El uso de la
ingeniera gentica para aumentar la sntesis de enzimas que catalizan pasos
limitantes, mediante la amplificacin gnica o mejora de la transcripcin, no ha
sido todava posible en Penicillium chrysogenum debido a la ausencia de datos

biosintticos precisos y a la ausencia de buenos sistemas vector-hospedador. Sin


embargo, se ha construido un banco de genes para Penicillium chrysogenum y se
ha desarrollado un sistema de transformacin

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