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Capitulo6 PDF
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METODOS
Primer paso
Segundo paso:
Acondicionar el Cartucho C18
vis-max
lectura a 700 nm, tanto para pH 1 como pH 4.5 Para calcular la concentracin en la
muestra original se sigue la siguiente frmula:
Antocianina monomrica (mg L-1) = (A * Peso molecular * FD * 1000) / ( * 1)
A = Es la absorbancia antes calculada
FD = Es el factor de dilucin
preparar los 6 sistemas. La concentracin del pigmento presente fue 2.4 x 10-5 M. La
concentracin de los copigmentos utilizados fue 100 veces ms concentrada, 2.4 x 10-3
M, por lo que se agregaron 0.6 mL de cada copigmento a 60 mL de pigmento en buffer
pH 3 de citrato-fosfato sin sacarosa. La relacin pigmento-copigmento para la primera
fase fue 1:1. Se prepararan los sistemas de cido vainllico, cido benzoico, cido glico,
cido cafeico y cido ascrbico. Estos sistemas se mantuvieron en frascos de plstico a
una temperatura de 50 C, pH 3 y ausencia de luz.
Los sistemas se evaluaron los das 0, 5, 7, 11, 13, 15 y 19. Para la evaluacin se
utiliz el colormetro Gardner (System/05) con un aditamento de transmitancia, y una
celda con un paso de luz de 0.21 cm se determinaban los valores triestmulo de Hunter
(Lh, ah y bh). Estos valores sirven para poder obtener el Tono, Pureza, Diferencia Neta
de Color y Luminosidad. Para calcular los parmetros antes mencionados se usaron las
siguientes formulas:
Tono = tan-1 (a/b)
Pureza = (a2 + b2 )1/2
Diferencia neta de color = ((a - ao) + (b bo) + (L Lo))1/2
En la obtencin de absorbancia se utiliz un espectrofotmetro Shimadzu UV
160. La absorbancia tomada en el espectrofotmetro sirve para obtener la concentracin
de los sistemas. Es muy importante la concentracin, ya que indica si hubo cambios en
los
sistemas,
por
ejemplo,
desplazamientos
batocrmicos
desplazamientos
Los Sistemas se evaluaron los das 0, 3, 6, 9, 16, 21, 25. Cada Sistema se analiz
utilizando un colormetro para obtener los valores triestmulos de Hunter (Lh, ah y bh) en
base a los cuales se calcul el Tono, la Pureza, la Diferencia Neta de Color y la
Luminosidad. Tambin se analizaron los espectros UV-Visible. Se utiliz el mtodo de
pH diferencial para determinar la concentracin de la antocianina.
En el Laboratorio de Investigacin de Alimentos se llev acabo, por parte de
personal especializado, el anlisis por HPLC de los Sistemas modelos. El equipo
utilizado es un cromatgrafo de lquidos de alta presin (HPLC) Waters 600, con un
detector de arreglo de diodos Waters 996, una bomba Waters 600, un desgasificador
Metachem y una computadora Dell con el software Empower Pro, y una columna
supercosil LC-18-DB, de 25 cm x 4.6 mm de Supelco. Las condiciones cromatogrficas
se indican en la Tabla1.
% de cido fosfrico a 4%
% de acetonitrilo
94
10
94
55
80
20
65
80
20
75
94