ESPECTROFOTOMETRIA DEL VISIBLE 

ANALISIS DE FOSFORO
I  OBJETIVOS 
 Construir una curva de absorción y de calibrado
 Seleccionar la longitud de onda de trabajo
 Determinar la concentración de fosfatos disueltos en bebidas gasificadas disponibles
en el mercado.

II  GENERALIDADES 
Son bebidas saborizantes, efervescentes, sin contenido de alcohol. Contienen agua, azúcar,
edulcorantes artificiales, ácidos como fosfórico, cítrico, málico, tartárico, cafeína,
colorantes, saborizantes y conservantes.

El pH promedio es 2.4 y el ácido fosfórico crea un medio ácido que mejora la absorción de
CO2, reduciendo la presión que genera CO2 y permitiendo así el embotellamiento, el ácido
fosfórico tiene un sabor amargo que es compensado con el agregado de azúcar, se asocia a
pérdida de calcio.

El H3PO4 es una sustancia que contienen los refrescos de cola, es un aditivo, que se
emplea como antioxidante, cantidades elevadas de fósforo en la dieta, tienen un efecto
desmineralizantes del hueso, ya que el fósforo es un ácido que precipita con el calcio,
reduciendo su absorción por parte de nuestro cuerpo. Por ello, no se recomienda abusar del
consumo de estas bebidas dados la importancia del calcio, en el correcto desarrollo y
mantenimiento de la masa ósea. El H3PO4 que se encuentra muy diluido no es tóxico,
inodoro, y se emplea para dar sabor ácido a muchos refrescos, como la coca cola, a la cual
se le agrega aproximadamente 0.95 % de H3PO4.
III  FUNDAMENTO 
El método radica en que en disolución ácida se tiene una reacción de los fosfatos con
molibdato de amonio para formar el compuesto de molibdato de fósforo como fosfo-
molibdato de amonio. La reacción es la siguiente:
+ ¿¿
4−¿+12 {( N H 4)6 M o 7 O24} +36 H 2 O →7 {( N H 3)3 P O 4 .12 Mo O3 }+51 N H 4 ¿
7 P O3
Por reducción exclusiva de los molibdofosfatos con ácido ascórbico, el molibdeno se reduce
a azul de molibdeno. El color azul formado está en proporción directa con el fosfato
presente y se mide espectrofométrica a una longitud de onda de 830 nm.
El azul de molibdeno es una solución coloidal de color azul oscuro de óxidos mixtos de
molibdeno (VI) y (IV) (VI) y (IV). El compuesto azul soluble cuya absorbancia es medida
espectrofotométricamente es proporcional a la cantidad de fósforo presente en la muestra
IV  ARREGLO EXPERIMENTAL 
El circuito básico del equipo instrumental es el siguiente:
V   APARATOS 
 Espectrofotómetro   : HACH DR 2800

 Cubeta     : 2.5 Cm. De trayecto óptico                         

 Región de trabajo: Espectro visible              
 Longitud de onda   : 830 nm            
 Blanco    : Solución de reactivos y disolvente menos fósforo
                          
VI  REACTIVOS  
 Solución de Heptamolibdato de amonio (NH4)6Mo7O24.4H2O. Disolver 2 gramos de
reactivo en 60 ml de agua destilada calentando a unos 60 C y se enrasa hasta 100
ml
 Solución de ácido ascórbico (0.02 M). Disolver 0.353 gramos de ácido ascórbico
hasta un volumen final de 100 ml de agua destilada, (debe prepararse ser fresca).
 Solución STOCK de fosfato disódico de 100 ppm de P (Na HPO .12H O = 357.98
g/mol)). La solución se prepara a partir del Na HPO4.12H2O. Para ello se disuelve
0.28888 gramos del reactivo, calidad analítica, en 50 ml de agua destilada y,
pasar a una fiola de 250 ml, diluir exactamente hasta el enrase y homogenice. La
concentración de la solución es de 100 ppm de fósforo.

VIII TECNICA
1.- Preparación de soluciones estándares o patrones

Estas soluciones se deben preparar instantes antes del análisis porque son inestables.
Disponer de 4 matraces aforados de 100 ml y rotular del uno a tres; agregar a la fiola
número 1, 0.5 ml, agregar a la segunda fiola, 1.0 ml, a la tercera 1.5 ml, y a la cuarta fiola
2.0 ml de la solución Stock.

Se agrega a cada fiola, 50 ml de agua destilada, 20 ml de solución de ácido sulfúrico 1 M, 4

ml de solución de Heptamolibdato de amonio y 2 de solución de ácido ascórbico; y colocar a
baño maría durante 15 minutos, enfriar y enrasar con agua destilada.

CUADRO DE SOLUCIONES
N° Estándar Volumen del STOCK
Agua Destilada
Ácido Sulfúrico Molibdato Ácido AscórbicoVolumen Final
(ml) (1M) (ml) (ml) (ml) (ml)

1 0.5 50 20 4.0 2.0 100.0

2 1.0 50 20 4.0 2.0 100.0

3 1.5 50 20 4.0 2.0 100.0

4 2.0 50 20 4.0 2.0 100.0

2.- SELECCIÓN DE MODO  BÁSICO DE TRABAJO 
 (a) ENCENDIDO Y APAGADO 

 Conecte la toma de alimentación externa en un enchufe de la red eléctrica.

 Pulse el interruptor de encendido/apagado durante aproximadamente un segundo

para encender el instrumento.

 Pulse el interruptor de encendido/apagado durante 3 a 5 segundos para apagar el

instrumento. Una señal acústica confirma que el instrumento se ha apagado (no
prender el instrumento rápidamente después de apagarlo, espere unos 20
segundos antes de volver a encenderlo, para no dañar los sistemas electrónico y
mecánico).

   (b) DIAGNOSTICO 

 Cada vez que se enciende el instrumento, se ejecuta automáticamente una serie de

pruebas de autodiagnóstico para asegurar el correcto funcionamiento de los
principales componentes del sistema.

 Este procedimiento que dura unos dos minutos, autocomprueba el normal

funcionamiento del sistema, pruebas de lámpara, ajustes de filtros, la calibración de
las longitudes de onda y el voltaje. Los distintos test que funcionan
correctamente se confirman con una marca de verificación. Una vez completados los
diagnósticos de puesta en marcha, aparece el MENU PRINCIPAL

 Si el instrumento detecta alguna desviación relativa a la última calibración, es

recomendable llevar a cabo una verificación del sistema.(pulsar la tecla INICIO, esta
verificación dura aproximadamente 6 minutos).
(C) MENU PRINCIPAL 
En el menú principal se pueden seleccionar diversos modos de trabajo
MENU DE MODO PRINCIPAL
Modo No “ “
1.- PROGRAMAS ALMACENADOS /PROGRAMAS DE CODIGOS DE BARRAS
2.- PROGRAMAS DEL USUARIO
3.- PROGRAMAS FAVORITOS
4.- LONGITUD DE ONDA UNICA
5.- LONGITUD DE ONDA MULTIPLE
6.- LAPSO DE TIEMPO
7.- VERIFICACIONES DEL SISTEMA
8.- RECUPERAR DATOS
9.- CONFIGURACION DEL INSTRUMENTO
(D) MODO LONGITUD DE ONDA UNICA 
El modo “longitud de onda única” se puede utilizar de tres maneras. Para mediciones
de la muestra a una longitud, se puede programar el instrumento para medir la
absorbancia, el % de transmitancia o la concentración del analito.

 En el menú principal pulse LONGITUD DE ONDA UNICA.
 Pulse OPCIONES para configurar los parámetros. 

AJUSTE DE PARÁMETROS ANALÍTICOS

Luego que el modo longitud de onda única es seleccionado, aparecen las opciones
de configuración de longitud de onda única. Estos parámetros son los siguientes:
OPCIONES DE CONFIGURACIÓN DE LONGITUD DE ONDA ÚNICA

OPCION
28. MEMORIZAR APAGADO/ENCENDIDO los datos de medición se memorizan
automáticamente)
29. % TRANS/ABS/CONC cambia entre % de Transmitancia, lecturas de absorbancia
o concentración)
30. LONGITUD DE ONDA ( ) introduce la longitud de onda de la medición, utilice el
teclado alfanumérico para introducir la longitud de onda de medición (rango entre 340-
900 nm)
31. ICONO TEMPORIZADOR (funciona a modo de cronometro)
32. FACTOR DE CONCENTRACION (factor de multiplicación para convertir los
valores
de ABS en valores de concentración)
33. RESOLUCION DE LA CONCENTRACION (seleccione la posición de la coma
decimal en las lecturas de concentración calculadas)
34. GUARDAR COMO PROGRAMA DEL USUARIO (memoriza los parámetros
seleccionados como programa de usuario)
35. RECUPERAR DATOS (recupera datos de medición escaneados de longitudes de
onda o lapsos de tiempo guardados)

4 - MEDICIÓN DE ESTÁNDARES A LA LONGITUD DE ONDA UNICA.

 Coloque la cubeta de blanco (agua destilada) completamente limpia y seca EN
EL
SOPORTE PORTACUBETAS.
 Seleccionar en opciones la tecla longitud de onda e Introducir la longitud de
onda de la medición utilizando el teclado alfanumérico (450 nm).
 Pulse CERO (La tecla medición sólo se activará cuando se haya realizado la
medición del cero).
 Coloque la cubeta de muestra en el soporte portacubetas. Pulse medición y
tome nota del valor de absorbancia.
 Realizar mediciones de absorbancia entre 450 a 600 nm a intervalos de 10 nm,
calibrando el instrumento (blanco) a cada cambio de la longitud de onda.
3.- Preparación de la muestra

Medir 2.0 ml exactamente de la muestra completamente desgasificada, y llevar a un

volumen de 50 ml en matraz aforado.

Medir una alícuota de 1.0 ml, colocarla en una fiola de 100.0 ml y darle el mismo tratamiento
que las soluciones estándar, agregando 50 ml de H O destilada, 20 ml de HCl 1 M, 4 ml de
molibdato, 2 ml de ácido ascórbico, calentar por espacio de 15 minutos hasta de desarrollo
de color (fiola sin tapa) y enrasar con agua destilada, enrasar y homogenizar.

4.- Medición de la Muestra

 Medir las absorbancias de cada muestra problema a la longitud de onda de trabajo de 830
nm

IX CALCULOS
1.- Método Gráfico
Obtener la curva de calibrado y en él se plotea el valor de absorbancia de la muestra
en la curva para determinar su concentración. Calcular la concentración final de la
muestra teniendo en cuenta las diluciones efectuadas.
2.- Método Analítico
Seguir los procedimientos de acuerdo a los pasos señalados:

a) Cálculo de las absortividades de las soluciones estándar:

Emplear la ecuación base de las leyes fotométricas:
A = a.b.c
Calcular las absortividades de las soluciones estándar.

a 1=A 1 /C1
a 2=A 2 /C2
a 3=A 3 /C3
a 4= A 4 /C 4
Luego calcular la absortividad media:
a1 +a2 +a 3+ a4
a m=
4
b) Cálculo de la concentración de la muestra:
En la ecuación: A=a.b.c
Se despeja C que corresponde a la concentración de la muestra
A
c=
a.b
c) Cálculo de la concentración de la muestra teniendo en consideración las
diluciones efectuadas
Calcular la concentración de la muestra tomando en cuenta las diluciones re
d) Expresión del resultado
1.- En miligramos de hierro por mililitro analizado a la solución problema.
X CUESTIONARIO
1.- Señale que otros métodos conoce para determinar fósforo

 Determinación por el método espectrométrico con molibdato amónico.

 Determinación por espectrofotometría de absorción molecular (previa
mineralización).
 Fósforo disuelto por espectrofotometría UV-VIS.
 Determinación de ortofosfato disuelto por cromatografía iónica en fase líquida.
 Fósforo total por espectrofotometría UV-VIS, (método del ácido
vanadomolibdofosfórico)

2.- Formule la reacción de formación del azul de molibdeno

( ( N H 4 )6 M o 7 O24 ) + ( K ( SbO ) C H O . 12 H O )+ P O
4 4 6 2
3−¿→ ¿¿
4

¿
3.- Qué papel desempeña en el análisis el HCl

El ácido clorhídrico tiene la función de acidificar la solución de muestra.

4.- Que otros reactivos químicos pueden utilizar en la preparación de la solución stock
de fósforo.

Cualquier otro compuesto que contenga Fosforo, además de que sea compatible con las
soluciones de Heptamolibdato de amonio y el ácido ascórbico.

5.- Que efectos genera la presencia de H3PO4 en las bebidas de cola

El ácido fosfórico crea un medio ácido que mejora la absorción del dióxido de carbono,
reduciendo la presión que genera el dióxido de carbono y permitiendo así el
embotellamiento. El ácido fosfórico tiene un sabor amargo que es compensado con el
agregado de azúcar. Está relacionado con la pérdida de calcio.
 Informe de laboratorio No 6
Determinación de Fósforo

Fecha: ___________                                                                   No GRUPO: _________ 

Análisis: ____________________________________________________________________________  

Método: ____________________________________________________________________________

Muestra: ___________________________________________________________________________

DATOS:

 Volumen de muestra = ------------------

 Volumen inicial = ------------------
 Volumen alícuota = -----------------
 Volumen final = -----------------

DETERMINACIÓN DE LA LONGITUD DE ONDA DE TRABAJO 

ABSORCIO TABLA DE RESULTADOS DE LOS PATRONES:
 N
600 0.132 N° Patrón Concentración (ppm) Absorbancia.
610 0.144 1 0.400 0.420
2 0.800 0.935
620 0.142 3 1.200 1.270
630 0.138 4 1.600 1.900
640 0.148
650 0.155
660 0.163 TABLA DE MEDICIÓN DE LA MUESTRA:
670 0.162
680 0.156 N° Muestra Absorbancia
690 0.169 1 0.532
700 0.165 2 0.530
710 0.188
3 0.562
720 0.193
730 0.21 4 0.522
740 0.227 5 0.512
750 0.245 6 0.490
760 0.272
770 0.282
780 0.332
790 0.344
800 0.366
810 0.396
820 0.412
830 0.42
840 0.404
850 0.388
CÁLCULOS:
1.- MÉTODO GRÁFICO (Curva de calibración)

2.- MÉTODO ANALÍTICO

a) Absortividades:
0.420 1.270
a 1= =1.05 a 3= =1.06
(1)( 0.400) (1)( 1.200)
0.935 1.900
a 2= =1.17 a 4= =1.19
(1)( 0.800) (1)(1.900)
a m=1.12

b) Concentración de analito:

0.532 mg 0.522 mg
C 1= =0.475 C 4= =0.466
(1)(1.12) L (1)(1.12) L
0.530 mg 0.512 mg
C 2= =0.473 C 5= =0.457
(1)(1.12) L (1)(1.12) L
0.562 mg 0.490 mg
C 3= =0.502 C 6= =0.437
(1)(1.12) L (1)(1.12) L

c) Calculo de la concentración para las diluciones:

 0.475 mg mg
 C 2= ×10=4.75 ×10−3 ×50 ml=0.2375 mg
1000 ml ml
0.473 mg mg
 C 2= ×10=4.73 ×10−3 ×50 ml=0.236 5 mg
1000 ml ml
0.562mg mg
 C 2= × 10=5. 62× 10−3 ×50 ml=0.28 10 mg
1000 ml ml
0.522mg mg
 C 2= × 10=5.22 ×10−3 ×50 ml=0.2610 mg
1000 ml ml
0.512mg mg
 C 2= × 10=5.12 ×10−3 ×50 ml=0.2560 mg
1000 ml ml
0.490 mg mg
 C 2= ×10=4.90 ×10−3 ×50 ml=0.2450 mg
1000 ml ml

d) Cálculo del peso de fósforo en miligramos por ciento

0.2375
 Muestra 1: ×250 ml=5.9375 mg
10 ml
0.236 5
 Muestra 2 : ×250 ml=5.9125 mg
10 ml
0.2810
 Muestra 3 : ×250 ml=7.025 mg
10 ml
0.2610
 Muestra 4 : ×250 ml=6.525 mg
10 ml
0.2560
 Muestra 5 : ×250 ml=6.400 mg
10 ml
0.2450
 Muestra 6 : ×250 ml=6.125 mg
10 ml

TABLA DE RESULTADOS DEL ANÁLISIS

N° Muestra Mg %P
1 5.9375
2 5.9125
3 7.025
4 6.525
5 6.400
6 6.125

DISCUSIÓN DE RESULTADOS:
Apellidos y nombres: _______________________________________________

Firma del alumno: ____________________

CUESTIONARIO