Anlisis Qumico

Grado Bioqumica
Curso 2011/12

TEMA 1
INTRODUCCIN AL ANLISIS QUMICO

Este tema aporta una revisin panormica del Anlisis Qumico, sus distintas vertientes y su
terminologa bsica. La importancia de la Qumica Analtica queda plasmada a travs de sus
aplicaciones en todos los campos de la ciencia. Los pasos generales implicados en un anlisis
cuantitativo se revisan de forma exhaustiva mostrando la importancia de la Qumica Analtica
para la resolucin de problemas de diversos mbitos.

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1.
2.
3.
4.

Generalidades
Conceptos bsicos en Anlisis Qumico
Clasificacin de los mtodos de anlisis
El proceso analtico

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1.

GENERALIDADES

Se puede definir la Qumica Analtica como una ciencia de medicin basada

en un conjunto de ideas y mtodos tiles en todos los campos de la ciencia. La Qumica
Analtica se ocupa de separar, identificar y determinar la composicin relativa de
cualquier muestra de materia. Por otro lado, se considera al Anlisis Qumico como
la parte prctica de la Qumica Analtica, que aplica los mtodos desarrollados por la
misma para la resolucin de problemas.
El Anlisis Qumico de una muestra de materia puede abordarse desde dos
puntos de vista: anlisis cualitativo y anlisis cuantitativo. El anlisis cualitativo
establece la identidad qumica de las especies en la muestra. El anlisis cuantitativo
determina en forma numrica la cantidad relativa de las especies que componen la
muestra.
La Qumica Analtica ha jugado un papel fundamental en el desarrollo de la
ciencia. De hecho, su gran importancia ha propiciado que sea cultivada de forma
asidua desde los inicios de la historia de la Qumica. La relacin de la Qumica Analtica
no se reduce simplemente a otras ramas de la qumica, sino a otras muchas ciencias,
por lo que es frecuente que se la califique como Ciencia Central. Asimismo, la
naturaleza interdisciplinaria del anlisis qumico le convierte en una herramienta vital
en laboratorios mdicos, industriales, acadmicos y gubernamentales.

2.

CONCEPTOS BSICOS EN ANLISIS QUMICO

Resulta conveniente antes de adentrarnos en el Anlisis Qumico definir los

trminos ms frecuentemente empleados en este mbito:
Se denomina muestra a una parte representativa de la materia objeto de
anlisis, siendo una alcuota de la muestra una porcin o fraccin de la misma. Se
llama analito a la especie qumica objeto del anlisis. La matriz de la muestra ser el
conjunto de todas aquellas especies qumicas que acompaan al analito en la muestra.
La tcnica analtica es el medio utilizado para llevar a cabo el anlisis qumico,
mientras que el mtodo analtico es un concepto ms amplio pues no slo incluye a la
o las tcnicas analticas empleadas en un anlisis sino tambin todas las operaciones
implicadas hasta la consecucin del resultado final.
Rara vez un mtodo de anlisis es especfico, en el mejor de los casos ser
selectivo. Por esta razn es muy comn la aparicin de especies interferentes durante

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un anlisis, estas especies qumicas influyen en la respuesta del analito, pudiendo

disminuir dicha respuesta (interferencia negativa) o incrementarla (interferencia
positiva). El enmascaramiento es una va comnmente empleada para eliminar
interferencias, mediante la cual la especie interferente es transformada en otra
especie qumica que no altera la respuesta del analito.
La mayor parte de los mtodos analticos son relativos, es decir el contenido de
analito en la muestra se obtiene a travs de un patrn de referencia. Se denomina
disolucin patrn o estndar a una disolucin de concentracin exactamente
conocida. La grfica que representa la respuesta analtica en funcin de la
concentracin del analito correspondiente se llama curva de calibrado o curva
estndar.

3.

CLASIFICACIN DE LOS MTODOS DE ANLISIS

Para llevar a cabo un anlisis cuantitativo hay que llevar a cabo dos mediciones:
-

La primera medida es el peso o volumen de la muestra bajo anlisis.

La segunda medida es una cantidad que es proporcional a la cantidad de
analito presente en la muestra.

Los mtodos analticos se clasifican en funcin de la naturaleza de esta ltima

medida, en este sentido hablamos de:
-

Mtodos Clsicos o Qumicos:

- En los mtodos gravimtricos se determina la masa de analito o de
algn compuesto relacionado qumicamente con l.
- En los mtodos volumtricos se mide el volumen de una disolucin
de concentracin conocida que contiene la cantidad de reactivo
necesaria para reaccionar completamente con el analito.

Mtodos Instrumentales:

Los mtodos electroanalticos conllevan la medida de alguna

propiedad elctrica como potencial, intensidad de corriente,
resistancia o cantidad de electricidad.

Los mtodos espectrofotomtricos se basan en la medida de alguna

propiedad de la radiacin electromagntica tras la interaccin con
los tomos o molculas de analito; o bien la produccin de radiacin

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electromagntica a partir del analito cuando la materia ha sido

sometida a algn tipo de excitacin.
-

Existe un grupo miscelneo de mtodos que implican la medida de la

relacin carga-masa, velocidad de desintegracin radioactiva, calor
de reaccin, conductividad trmica, actividad ptica o ndice de
refraccin.

Mtodos de separacin: cuando se desarrollaron estos mtodos su finalidad inicial era

la eliminacin de interferentes antes de proceder a aplicar la tcnica analtica
seleccionada. En la actualidad, existen mtodos de separacin que son mtodos de
anlisis en s mismos, como por ejemplo la cromatografa.

4.

EL PROCESO ANALITICO

Un anlisis cuantitativo implica una secuencia de etapas que implican desde la

definicin del problema planteado hasta la elaboracin de un informe y sus
conclusiones. En algunos casos, es posible omitir una o ms etapas; por ejemplo, si la
muestra se encuentra en el estado fsico y condiciones adecuadas para ser analizada
mediante la tcnica seleccionada, es posible que no se requiera ningn tratamiento
previo de la misma. A continuacin pasamos a detallar cada uno de las etapas del
proceso analtico:
- DEFINICIN DEL PROBLEMA: En esta primera etapa se plantea el tipo de anlisis
requerido y la escala de trabajo, convirtiendo as las cuestiones generales en
cuestiones especficas que puedan responderse a travs de medidas.
- SELECCIN DEL MTODO DE ANLISIS: Esta etapa resulta fundamental para el xito
del proceso analtico global, en ocasiones puede ser la etapa ms difcil, requiriendo
algo de experiencia e intuicin. La seleccin del mtodo de anlisis generalmente
representa un compromiso entre: exactitud requerida, concentracin prevista del
analito en la muestra, disponibilidad de tiempo, factor econmico, complejidad de la
muestra y nmero de muestras bajo anlisis, entre otros factores.
- El siguiente paso del proceso analtico es la OBTENCIN DE LA MUESTRA, tambin
llamada toma de muestra o muestreo. Para que la informacin obtenida sea
significativa, es necesario que la muestra tenga la misma composicin que el resto del
material del que se obtuvo.

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Cuando este material es de gran tamao y heterogneo, la obtencin de una

muestra representativa requiere gran esfuerzo. Supongamos un vagn cargado con 25
toneladas de arroz, del que se sospecha un contenido de arsnico superior al legislado.
La toma de muestra requiere un plan adecuado con el fin de conseguir una pequea
masa del material cuya composicin represente con exactitud a la totalidad del
material muestreado. La obtencin de muestras de carcter biolgico representa otro
tipo de problema de muestreo. La complejidad de los sistemas biolgicos y la
influencia del modo de toma de muestra sobre los resultados obtenidos han
propiciado el desarrollo de procedimientos estrictos de muestreo y transporte de
muestras a los laboratorios clnicos, con el fin de obtener muestras representativas y
mantener su integridad. En realidad, los problemas de muestreo suelen ser menores
que en estos casos. Sea cual sea la complejidad de la materia a analizar, la muestra ha
de representar la totalidad de dicha materia y ha de presentar carcter homogneo.
- TRATAMIENTO DE LA MUESTRA: Son escasos los problemas que se resuelven sin
necesidad de tratamiento de la muestra antes de proceder a la medida; por ejemplo, la
medida del pH de una muestra de agua de ro puede llevarse a cabo directamente sin
tratamiento alguno de la muestra. Lo habitual, es que la muestra necesite algn tipo
de tratamiento, con el fin de: preparar la forma y el tamao de la muestra, as como la
concentracin del analito o los analitos en la forma qumica y concentracin,
adecuadas para la tcnica analtica seleccionada y/o eliminar interferentes de la matriz
de la muestra.
La etapa de tratamiento de la muestra ha de llevarse a cabo teniendo en cuenta
las siguientes consideraciones:
-

Han de evitarse tanto las prdidas de analito como las posibles

contaminaciones introducidas en la muestra.
El analito ser transformado a la forma qumica ms adecuada para
el mtodo analtico seleccionado. Por ejemplo, la determinacin de
manganeso mediante espectrofotometra de absorcin molecular en
el visible requerir su transformacin a MnO4-.
Si es necesario, se eliminarn las interferencias de la matriz, con el
fin de incrementar la selectividad del mtodo.
Por supuesto, resulta totalmente inadmisible la introduccin de
nuevas interferencias.
Debe considerarse la dilucin o preconcentracin del analito, de
manera que ste se encuentre en el intervalo de linealidad del
mtodo seleccionado.

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La mayora de los anlisis, aunque por supuesto no todos, se llevan a cabo en

disoluciones de la muestra preparada en un disolvente adecuado. Si la muestra es
slida, lo ms habitual es proceder a su trituracin para disminuir el tamao de
partcula, mezclarla de forma efectiva para garantizar su homogeneidad y almacenarla
en condiciones adecuadas, si el anlisis no se va a llevar a cabo de inmediato. En el
caso en que la muestra ya se encuentre en estado lquido pero no vaya a analizarse
tras su recogida, por supuesto las condiciones de almacenamiento han de tenerse en
consideracin; por ejemplo, si una muestra lquida se mantiene en un recipiente
abierto, el disolvente podra evaporarse modificando as la concentracin del analito.
En el caso de que el analito fuese un gas disuelto, el recipiente de la muestra debe
mantenerse en un segundo recipiente sellado para impedir contaminacin por gases
atmosfricos.
Si el analito no se encuentra disuelto, ser necesaria su disolucin en el
disolvente adecuado. En determinadas ocasiones es suficiente con mantener en
contacto el disolvente (agua, disolucin reguladora, etanol) con la muestra slida
durante un corto periodo de tiempo y, tras la centrifugacin de la mezcla, recoger el
lquido sobrenadante conteniendo el analito. Como ejemplo de esos casos en que la
transferencia del analito a la fase lquida resulta sencilla, podemos citar el caso de la
determinacin de cido acetilsaliclico en un preparado farmacutico llevada a cabo
mediante un mtodo volumtrico. En este ejemplo, en primer lugar se tritura la
muestra slida y seguidamente se procede a su disolucin en etanol, lo que permite la
transferencia del analito a la fase acuosa. Sin embargo, en muchas ocasiones esta
etapa de disolucin no resulta tan sencilla y es necesario emplear disolventes ms
fuertes (cidos, bases, agentes oxidantes) e incluso la aplicacin de energa externa a
travs de sistemas de microondas, ultrasonidos, etc.
Una vez que el analito se encuentra en fase lquida, la siguiente cuestin es
conocer si se encuentra en la forma qumica adecuada para llevar a cabo la medida de
la propiedad analtica. Por ejemplo, si se pretende determinar sulfonamidas mediante
una tcnica espectrofluorimtrica, dado que las sulfonamidas no son especies
fluorescentes, es obvio que ser necesario someterlas a una reaccin qumica para su
transformacin en especies fluorescentes.
La eliminacin de interferencias se considera como parte de la preparacin de
la muestra y resulta indispensable antes de proceder a la etapa de medida, para ello se
recurrir al mtodo de separacin ms adecuado. No se cuentan con reglas generales
para la eliminacin de interferencias.
La mayora de los anlisis qumicos se llevan o deben llevarse a cabo sobre
varias rplicas de la muestra, cuyas masas o volmenes se determinan con mediciones

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cuidadosas a travs de balanzas analticas o material volumtrico de precisin. La

realizacin de rplicas mejora la calidad de los resultados e informa acerca de la
fiabilidad del anlisis. Las medidas cuantitativas de rplicas de muestras se suelen
promediar y luego se aplican diversas pruebas estadsticas a los resultados para
establecer la fiabilidad y descartar datos atpicos, si los hubiera.
- PROCESO DE MEDIDA: Todos los resultados analticos dependen de la medida final
de una propiedad fsica o qumica del analito. Las valoraciones o titulaciones se
encuentran entre los mtodos analticos ms precisos. En una valoracin, el analito
reacciona con un reactivo estandarizado mediante una reaccin de estequiometria
conocida. La cantidad de reactivo estandarizado necesario para alcanzar la condicin
de equivalencia se relaciona con la cantidad de analito presente. Por tanto, la
valoracin es un tipo de comparacin qumica.
En la calibracin con un estndar externo, la muestra se prepara por separado
del estndar. La propiedad analtica medida (S) depende de manera conocida y
reproducible de la concentracin del analito (CA). En teora, la medida de la propiedad
es directamente proporcional a la concentracin segn la siguiente ecuacin S = K x CA.
Salvo dos excepciones, los mtodos analticos instrumentales requieren la
determinacin emprica de K con estndares o patrones del analito. La determinacin
del valor de K se denomina calibracin. En una primera aproximacin es posible
obtener el valor de K con el uso de un nico estndar externo y seguidamente calcular
el contenido de analito en la muestra problema.
Los estndares externos se usan para calibrar instrumentos y procedimientos
cuando no hay efectos de interferencias de los componentes de la matriz en la
disolucin del analito. Se preparan una serie de estndares externos de distintas
concentraciones conocidas del analito. Idealmente se utilizan tres o ms disoluciones
en el proceso de calibracin. La calibracin con un nico patrn, que sera la propuesta
en la diapositiva anterior, no es recomendable pues conlleva un alto riesgo de error.
La calibracin se lleva a cabo al obtener la seal de respuesta (altura o rea de
pico, absorbancia, voltaje, etc.) como funcin de la concentracin conocida del analito.
Al representar grficamente los datos y ajustarlos a una ecuacin matemtica se
obtiene la curva de calibrado. El mtodo de mnimos cuadrados es el mtodo de
anlisis de regresin ms empleado para datos bidimensionales. La constante de
proporcionalidad (K) corresponde a la pendiente de calibracin. Seguidamente la seal
analtica obtenida para la muestra analizada se sustituye en la ecuacin de calibracin
obtenindose la concentracin del analito. Los factores de dilucin o precocentracin a
los que hubiese sido sometida la muestra antes del proceso de medida, habrn de ser
considerados para la obtencin del resultado final.

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Cuando se emplean estndares externos, se supone que cuando en la muestra

y el estndar est presente la misma concentracin de analito, se obtendr la misma
respuesta. Sin embargo, esto no siempre ocurre as y en esos casos es necesario
recurrir a otros mtodos de calibracin como el del estndar interno o el de adiciones
estndar a las muestras.
En el mtodo del estndar interno se agrega a las muestras, estndares y
blancos una cantidad conocida de una especie de referencia, que ser seleccionada de
forma que tenga propiedades fsicas y qumicas semejantes a las del analito. La seal
de respuesta es la relacin entre la seal del analito y la de la especie de referencia
(representada en el eje de ordenadas). En el eje de abcisas se representa la
concentracin del analito en las disoluciones estndar. Este mtodo puede compensar
cierto tipo de errores si stos influyen en el analito y la especie de referencia en la
misma proporcin.
El mtodo de adiciones estndar a las muestras se usa cuando es difcil o
imposible duplicar la matriz de la muestra. Se adiciona a la muestra una cantidad o
cantidades conocidas de una disolucin estndar del analito. En el mtodo de un solo
punto, se toman dos porciones de muestra: una se mide como de costumbre, y a la
otra se le agrega una cantidad conocida del analito. Ambas respuestas se utilizan para
calcular la concentracin de analito en la muestra. En el mtodo de adiciones
mltiples, a varias alcuotas de muestra se le agregan cantidades conocidas de la
disolucin estndar del analito y se obtiene la curva de calibracin de adiciones
mltiples.
- EVALUACIN DE LOS RESULTADOS, INFORME Y CONCLUSIONES: Los resultados
analticos estn incompletos sin una estimacin de su fiabilidad. Por tanto, si
pretendemos que los resultados tengan valor, debe proporcionarse alguna medicin
de la incertidumbre relacionada con los clculos obtenidos. Adems, el informe final no
slo debe plasmar los resultados obtenidos sino tambin las limitaciones concretas del mtodo
de anlisis empleado. En cualquier caso, ste puede ir dirigido a un especialista o para el
pblico en general, de modo que ser necesario asegurarse de que es apropiado para el
destinatario previsto.
Una vez escrito el informe, el analista puede o no estar implicado en el uso de su
informacin. Como mnimo el analista tiene la responsabilidad de asegurar que las
conclusiones que se extraigan de sus datos sean coherentes con los mismos.