PRCTICA No.

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DETERMINACIN DE HIERRO SRICO.
FUNDAMENTO:
En el suero, el hierro est unido a la protena transferrina, para determinarlo se disocia el
Fe(III) de estas protenas mediante un buffer cido que contiene como reductor clorhidrato
de hidroxilamina. El Fe(II) producto de esta etapa reacciona con el agente cromognico
generando un complejo coloreado que se mide fotomtricamente a 560 nm.
El hierro es un mineral necesario para el transporte del oxgeno en la hemoglobina de los
glbulos rojos, la produccin de energa en el organismo y numerosas otras funciones en
los rganos del cuerpo humano.

Un hierro srico bajo puede deberse a una ingesta insuficiente de hierro, problemas de
mala absorcin intestinal y hemorragias (por ejemplo durante la menstruacin o lceras
sangrantes en el aparato digestivo). (1) La deficiencia de hierro puede provocar anemia.
Por el contrario, un hierro srico aumentado puede deberse a enfermedades como la
hemocromatosis (sobrecarga de hierro en el organismo) o intoxicaciones con este
mineral. El exceso de hierro tiende a depositarse en rganos como el hgado o el cerebro
causando serios trastornos eventualmente.

La principal fuente de hierro son alimentos como el hgado, las carnes (especialmente la
roja), el pescado y vegetales verdes como las espinacas, las legumbres y el pltano. Las
mujeres tienen un mayor riesgo de presentar deficiencias de hierro debido a las prdidas
de este mineral que sufren durante los sangrados menstruales, el embarazo y la
lactancia.

CUESTIONARIO:
1. Cmo obtiene el ser humano el hierro necesario para su organismo?
Un adulto sao absorbe aproximadamente entre 10% y 15% del hierro de la dieta, pero
dicha absorcin se ve influenciada por diferentes factores que pueden favorecerla o
disminuirla.

2. En qu parte de nuestro organismo se encuentra la mayor proporcin de hierro?

El hierro en el cuerpo humano est distribuido de la siguiente manera:
2.72 g en la sangre, 0.12g en los musculo, 1g almacenado en hgado y el bazo y 0.10 e
otros lugares aproximadamente.
3. Qu importancia tiene el efectuar a un paciente la determinacin de hierro srico?
Es una herramienta diagnostico til para la determinacin de varios trastornos
relacionados con el hierro.
4. Cules pueden ser las causas y los sntomas de la deficiencia de hierro?
La falta de hierro en el organismo se puede deber a la falta de este en la dieta, una
alteracin en la absorcin, un aumento en su consumo o por perdidas como hemorragias
o menstruacin.
Algunos sntomas tempranos incluyen: Sentirse dbil o cansado con ms frecuencia de lo
normal, o con el ejercicio, Dolores de cabeza, Problemas para concentrarse o pensar
5. Qu trastornos ocasiona la deficiencia de hierro?
En un principio se da un estado de balance negativo debido a que no hay metabolismo del
hierro y no se satisfacen las necesidades diarias.
La anemia por deficiencia de hierro es un estado avanzado de la deficiencia de hierro.
6. Qu trastornos ocasiona el exceso de hierro?
Hemoeritrocitosis o hemocromatoitosis, se puede producir una sobredosis en nios
menores de 6 aos, puede haber complicaciones gastrointestinales como la constipacin.
Nauseas, vmitos o pueden haber acmulos en tejidos y rganos.
Determinacin de la capacidad de fijacin de hierro

MATERIAL
Material necesario para la extraccin de sangre
3 tubos de ensaye de 13 X 100
1 Pipeta Pasteur con bulbo de hule
2 Pipetas graduadas de 2 ml
1 micropipeta automtica de 20 a 50 microlitros.

Reactivos
Buffer cido (buffer acetato pH 4.0 200 mM, hidroxilamina clorhidrato 100 mM,
surfactantes y estabilizantes c.s.)
Reactivo de color (ferrozina 5mM, hidroxilamina clorhidrato 100 mM)
Solucin estndar de hierro (Fe(II) en hidroxilamina clorhidrato 500,g/dl)

Equipo:
Centrfuga
Espectrofotmetro
Bao de agua a 37oC

TECNICA
1. Obtener 4 ml de sangre que se dejar coagular para obtener suero, libre de
hemlisis.
2. Todo el material deber estar perfectamente limpio, seco y libre de hierro.Para ello
se sugiere lavarlo con una solucin de HCl diluido 1:3 y enjuagarle
exhaustivamente con agua destilada o desionizada.
3. Montar la prueba de acuerdo al siguiente esquema:

Mezclar e incubar a 37 C por 10 minutos. Leer las absorbancias (A2) contra el

blanco de reactivos a 560 nm.

OBSERVACIONES.
De acuerdo a los valores arrojados en los resultados y comparados con los valores de referencia
obtenidos, podemos decir que nuestro paciente se encuentra con cantidades de hierro entre los
lmites aceptables, estos valores podran variar debido a impurezas en el material utilizado, ya que
estos podran contener hierro adherido, por lo que se recomienda utilizar tubos de venopuncin
rojos.
Una fuente de error constante ocurrio al momento de medir con el espectrofotometro, debido a la
reincidencia de la descalibracin de este, por tal motivo algunos resultados no conordaban con los
valores de referencia.

Inicialmente se obtuvo el espectro de absorbancia referido al analito de inters. Obtenindose el

siguiente grfico.Observndose un mximo en la absorbancia a los 511,7 nm
Por otra parte se procedi a preparar la muestra para su centrifugado. En las imgenes que se
muestran a continuacin se puede observar una secuencia en la cual se forma el precipitado
blanco que se corresponde a las protenas presentes en el suero correspondientes al punto dos del
protocolo como resultado de agregar al Eppendorff de la muestra, cido tricloroactico.
Lo mismo se hizo para el blanco en el que solo se agreg suero, agua mili Q y el cido
tricloroactico ya que se esperaba que el hierro precipitara completamente con las protenas.
Una vez centrifugados ambas muestras se obtuvieron los correspondientes sobrenadantes
observndose, particularmente en el caso del precipitado del blanco un color verde claro, evidencia
fundamental de la presencia de catin hierro (III).

CONCLUSIONES.
Dados los resultados obtenidos podemos concluir que la concentracin de hierro srico de la
muestra est muy prxima a los valores normales, pudindose descartar de ambas curvas que el
adulto del cual se extrajo la muestra tenga un dficit de hierro
Igualmente dado el gran nmero de errores que se cometieron y no fueron considerados por
ejemplo los errores en las diluciones al poner cada volumen, no es un resultado del todo confiable.
Por otra parte al analizar la grfica obtenida agregando a nuestros datos los de otro grupo, se
obtuvo que la concentracin mxima de hierro estaba dentro del intervalo delimitado por los valores
normales. Pero al no poder encontrar el valor mnimo posible, por ser negativa la pendiente, no
podemos afirmar con certeza ningn intervalo en el cual sea ms probable encontrar el valor de la
concentracin de nuestro analito. Igualmente no sera tan incoherente pensar dado los datos
obtenidos antes, (en la primera curva) que la persona de la cual se extrajo la muestra tiene valores
de la concentracin de hierro srico dentro de los valores normales, o que al menos no presenta un
dficit de hierro. Se consider apropiada la unin de los datos de ambos grupos producto de que
vemos que se confunden y claramente tienen una relacin muy similar, aunque fueron realizados
por diferentes personas cometindose por cada uno diferentes errores sistemticos.

BIBLIOGRAFA.
(1) Gonzlez Hernndez, A. (2010). Principios de bioqumica clnica y patologa molecular. 3era
edicin. Barcelona, Espaa. Editorial: Elsevier Espaa

(2) Harris. C, Daniel (2007). Anlisis Qumico Cuantitativo. 3era edicin. Barcelona, Espaa.
Editorial:RevertS.A.

(3) Fernndez, P. Equilibrio de formacin de complejos.

www.hospitalelcruce.org/pdf/revista/revis3/nota2.pd. 19/11/11

(4) Guyton- Hall (2001).Tratado de la Fisiologa Mdica. 10ma edicin. Madrid, Espaa. Editorial:

Mac-Graw Hill Interamericana.