LABORATORIO N° 12

CUANTIFICACIÓN DE HIERRO

SÉRICO
1. Introducción.
El hierro se encuentra principalmente en la hemoglobina, la mioglobina, los citocromos P450 y
componentes de la cadena respiratoria (citocromos, proteína hierro-azufre), enzimas como el
ribonucleótido reductasa. El hierro de la dieta puede ser ligado al hemo o en forma inorgánica.
El primero es más fácilmente absorbido y el segundo requiere estar como ión ferroso. La
absorción de hierro ocurre principalmente en el duodeno.
El hierro es transportado por la transferrina y depositado en la médula ósea como ferritina de
donde es utilizado para la síntesis de hemoglobina. La deficiencia de hierro produce anemia
ferropénica de tipo microcítica hipocrómica, es la causa más frecuente de anemia nutricional,
en niños, mujeres y adultos mayores. Se reconocen diversos estadios de la deficiencia de
hierro, siendo el III el de la anemia ferropénica propiamente dicha. La determinación del hierro
sérico es parte del estudio de la anemia y disminuye en la fase II.
2. Fundamento
El hierro se libera del complejo de transferrina en medio ácido y se reduce a Fe (II) con ácido
ascórbico. Luego reacciona con el reactivo de color Ferene, dando un complejo color azul que es
medido a 600 nm. La absorbancia obtenida es directamente proporcional a la concentración de
hierro.

3. Material y reactivos
Reactivo A: ácido cítrico 200 mM, ácido ascórbico 34 mM, tiourea 100 mM y tensioactivo.
Reactivo B: solución estabilizada de ferene > 3 mM
Standard*: solución de iones hierro (III) equivalente a 100 ug/dl
Espectrómetro
Centrífuga

4. Muestra: suero
5. Procedimiento
Armar el siguiente sistema
B S D
Agua bidestilada 200 ul
Standard 200 ul
Muestra 200 ul
Reactivo A 1 ml 1 ml 1 ml
Mezclar. Leer la absorbancia del tubo D (blanco de desconocido, BD) en espectrofotómetro a
600 nm llevando a cero con el blanco. Luego agregar
Reactivo B 200 ul 200 ul 200 UL
Mezclar cada tubo inmediatamente. Volver a leer a los 5 minutos cada tubo contra agua como
blanco.
Cálculos:
Corregir las lecturas de S y D, restándoles los Blancos correspondientes: S - B = S corregida
D - (B + BD) = D corregida Fe (ug/dl) = D corregida x f 100 ug/dl (Standard)*
donde: f = 100 ug/dl
S corregida
6. Resultados

 B= 0.020

 S= 0,270

Muestra 1, mujer de 18 años, con hemoglobina 10 g/dl

 BD= 0.050

 D= 0.170

 D corregida Fe = 0.170 - (0.020+0.050) = 0.1 ug/dl

Muestra 2, varón de 65 años, con hemoglobina 14 g/dl

 BD = 0,060

 D= 0,320

Cálculos
 S corregida= 0,270- 0,020 = 0. 250
 Factor= 100 / 0,250 = 400
Muestra 1:
 0,170- (0,020 +0,050) = 0.1 ug/dl x 400
 Fe sérico = 40 ug/dl
Muestra 2
 0,340- (0,020 +0,060) = 0.26 x400
 Fe sérico = 104 ug/dl
7.Interpretación
Hemoglobina proporcional al hierro sérico.
 Muestra 01: De acuerdo con los cálculos obtenidos, la paciente de 18 años presenta
una cantidad baja de Fe sérico, ya que los valores normales en mujeres son de 50 a
170. Anemia ferropénica.

 Muestra 02: De acuerdo con los cálculos obtenidos, el paciente de 65 años presenta
una cantidad normal de Fe sérico.

8. Valores de referencia:
Hombres: 65 a 175 ug/dl (11,6-31,3 umol/l)
Mujeres: 50 a 170 ug/dl (9-30,4 umol/l)

9. Cuestionario
1. ¿Cuáles son las principales fuentes de hierro en la dieta?
El hierro es un mineral que se encuentra en cada célula del cuerpo. Este se considera un
mineral esencial debido a que se necesita para producir hemoglobina, una parte de las
células sanguíneas.

2. ¿Cómo se absorbe el hierro hemínico?

El hierro de origen animal que es mejor absorbido es el de los alimentos de origen animal
conocido como "hierro hem", su porcentaje promedio de absorción es del 25%.
3. ¿Cómo se absorbe el hierro no hemínico?
El hierro que se encuentra en los alimentos vegetales "hierro no hem" se absorbe con
dificultad, su porcentaje de absorción es del 1 al 10%

4. ¿Cómo se regula la absorción del hierro?

Se conoce que la tasa de absorción es afectada por una serie de factores, algunos
interrelacionados entre sí, que pueden actuar simultáneamente, como son: el estado de las
reservas corporales, la hipoxia, la actividad eritropoyética y la inflamación.
5. ¿Cuáles son los requerimientos del hierro?
 Los lactantes de 7 a 12 meses de edad necesitan 11 mg de hierro al día.
● Los niños de entre 1 y 3 años necesitan 7 mg de hierro al día.
● Los niños entre 4 y 8 años necesitan 10 miligramos de hierro al día.
● Los niños que tienen entre nueve y 13 años necesitan 8 miligramos al día.
 De 19 a 50 años: 18 mg/día.
● De 51 años o más: 8 mg/día.
● Mujeres embarazadas de todas las edades: 27 mg/día.
● Mujeres lactantes de 19 a 30 años: 9 mg/día (de 14 a 18 años: 10 mg/día)
6. ¿Qué es la transferrina y la ferritina?
Es la proteína que transporta el hierro absorbido en el intestino y el liberado por el
catabolismo de la hemoglobina hacia los sitios de almacenamiento (hígado y sistema
retículo-endotelial).
Es responsable de la distribución del hierro y de su oferta a los sitios de absorción,
almacenamiento, donde es incorporado a la ferritina y hemosiderina y a las células que
sintetizan componentes que requieren hierro como la hemoglobina, mioglobina y
citocromos.
Su concentración plasmática está regulada por la disponibilidad de hierro.
La ferritina es una proteína que almacena el hierro en las células. El hierro es necesario
para la producción de glóbulos rojos sanos. Los glóbulos rojos transportan oxígeno de los
pulmones al resto del cuerpo.
Un bajo nivel de ferritina podría significar el padecimiento de anemia por deficiencia de
hierro u otro problema relacionado con niveles bajos de hierro.
7. ¿Cuáles son los estadios de la deficiencia de hierro?
"El proceso de deficiencia de hierro consta de 3 estadios: prelatente, latente y anemia
microcítica hipocrómica.
● El primer estadio consiste en una reserva deficiente de hierro
● Segundo estadio, denominado también «eritropoyesis deficiente en hierro», el cual se
caracteriza por cambios bioquímicos que reflejan la falta de hierro suficiente para la
formación normal de los hematíes. Ya en esta etapa encontramos concentraciones de HS,
saturación de transferrina (ST) y FS inferiores.
● tercer estadio, que se caracteriza por una disminución de la concentración de Hb
circulante, que llega a ser inferior al valor crítico de referencia para las personas de la
misma edad y sexo
8. ¿Qué es la hemosiderosis?
Hemosiderosis es un término usado para la acumulación excesiva de depósitos de hierro,
llamados hemosiderina, en los tejidos. Hemosiderosis es un término usado para la
acumulación excesiva de depósitos de hierro, llamados hemosiderina, en los tejidos. A
menudo, los pulmones y los riñones son órganos afectados por la hemosiderosis. La
hemosiderosis puede resultar de
● Sangrado directo en los tejidos, seguido de degradación de los glóbulos rojos y liberación
de hierro a los tejidos
● Destrucción de glóbulos rojos en el interior de los vasos sanguíneos, lo que conduce a la
liberación de hierro en la sangre y su posterior acumulación en los riñones, cuando estos
filtran los productos de desecho de la sangre
 9. ¿Qué tipos de células son afectadas por la deficiencia de hierro?

10. ¿Cómo se previene la anemia ferropénica en los niños?

Las principales medidas de prevención son: ligadura oportuna del cordón umbilical,
alimentación adecuada y suplementación con hierro medicamentoso a grupos de riesgo

10. Referencias
1. Harper. Bioquímica ilustrada, 31 ed, 2018
2. Vademecum Wiener Lab , Rosario, Argentina.
3. Huamán-Saavedra J. Laboratorio clínico. Procedimiento e interpretacion , 2 edición Edit.
Universitaria . Trujillo, 2018

Video https://www.youtube.com/watch?v=PUjAGL_Ko-g
 DETERMINACIÓN DE CALCIO SÉRICO

1. Introducción.
Es el catión más abundante del organismo: 1 a 2 Kg en un adulto. En su regulación
intervienen las hormonas calcitriol, paratohormona y la calcitonina. El calcitriol
derivado de la vitamina D aumenta la absorción intestinal y la reabsorción renal del
calcio. La PTH aumenta la resorción ósea y la liberación del calcio del hueso, y la
reabsorción renal del calcio. El calcio plasmático constituye tan solo el 2 % del calcio
total., el 98 % se encuentra en el esqueleto óseo.

En el plasma el calcio se encuentra en tres formas: libre o iónico en un 46 % (Ca++),

unido a las proteínas en un 40 % y el resto formando complejos solubles con el
bicarbonato, citrato, fosfato y sulfato. Cerca del 80 % del calcio proteico plasmático
está unido a la albúmina y el restante a la globulina.

Las funciones del calcio son múltiples: constituyente fundamental de la estructura ósea,
es un segundo mensajero de varias hormonas, interviene en la coagulación sanguínea,
en la excitabilidad neuromuscular y la transmisión nerviosa.

El calcio sérico puede disminuir (hipocalcemia) por hipoparatiroidismo hereditario o

adquirido, pancreatitis aguda, etc. Puede aumentar (hipercalcemia) en el
hiperparatiroidismo primario, la insuficiencia renal crónica, en neoplasia maligna, etc.

2. Fundamento
El calcio reacciona con arsenazo III dando un complejo de color azul que se mide
fotocolorimétricamente a 650 nm

3. Material y reactivos
Material para toma de muestra
Reactivo A: arsenazo III 100 mg/l y 8-hidroxi- quinolina sulfonato 1,4 g/l en buffer Tris
100 mM, pH 8,5.
Standard: calcio 10 mg/dl.
Agua destilada
Espectrofotómetro Centrífuga
Pipeta
4. Muestra: suero
 5. Procedimiento
Armar el siguiente sistema:
B S D
Muestra 10 ul
S 10 ul
H2O 10 ul
destilada
Reactivo A 1 ml 1 ml 1 ml
Mezclar e incubar 2 minutos a temperatura ambiente (15-25 °C). Leer la absorbancia
en espectrofotómetro a 650 nm , llevando el aparato a cero con el Blanco.
Cálculos: Calcio sérico (mg/dl) = D x f

F = 10 mg/dl
S
6. Resultados

 B= 0,0

 S= 0,350

 D= 0,320

Cálculos F= 10 = 28,571
0,350
 D= 0,320 x F = 320x 28,571
 D= 9, 14mg/dl
7.Interpretación:
Luego de realizar la determinación de calcio sérico el paciente presenta un valor de 9.14 mg/dl;
el cual se encuentra en un rango normal.

8.Valores de referencia: Suero: 8,5 - 10,5 mg/dl

9. Referencias bibliográficas
1. Gil A. Tratado de nutrición, 2da ed. 2010
2. Harper, Bioquímica Ilustrada, 30 ed, 2016
3. Vademecum Wiener Lab , Rosario, Argentina
4. Huamán-Saavedra J. Laboratorio clínico. Procedimiento e interpretacion , 2 edición Edit.
Universitaria . Trujillo, 2018
Video https://www.youtube.com/watch?v=pJMH2fJsIV4