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Medios de Cultivo PDF
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MEDIOS DE CULTIVO
(CURSO 2012-2013)
(GRUPOS 1 y 2)
Agar BCYE (agar tamponado con extracto de levadura y carbn, buffered, charcoal, yeast extract)
Medio rico suplementado con L-cistina y pirofosfato frrico que permite el crecimiento y enriquecimiento
de especies de Legionella. Cuando se le aade polimixina B, vancomicina y anisomicina es selectivo para
Legionella y Nocardia, ya que inhibe bacterias Gram negativas, Gram positivas y levaduras, respectivamente.
Agar BHI (infusin cerebro-corazn, brain-heart)
La infusin cerebro-corazn es una frmula muy rica que puede emplearse, ya sea como caldo o medio
slido, con sangre adicional o sin sta, para el crecimiento de una gran variedad de microorganismos. Los
componentes clave incluyen infusin de distintos tejidos animales con el agregado de peptona, tampn fosfato y
una pequea concentracin de glucosa que proporciona una fuente de energa fcilmente accesible a los
microorganismos.
Los caldos infusin cerebro-corazn se emplean con frecuencia como medio para hemocultivo y como
medio base para muchas pruebas metablicas, en especial para la identificacin de estreptococos.
Agar BHI con antibiticos
El agar BHI adicionado de cloranfenicol y cicloheximida se utiliza para el aislamiento selectivo de hongos
patgenos. La cicloheximida inhibe el crecimiento de hongos saprfitos mientras que el cloranfenicol acta como
agente antibacteriano tanto de bacterias Gram positivas como Gram negativas. La incorporacin de ambos
antimicrobianos proporciona una mayor selectividad frente a hongos saprfitos y bacterias.
Agar BHI con 5% sangre de oveja
El agar infusin cerebro-corazn con 5-10% de sangre de oveja adicionado de cloranfenicol y gentamicina
inhibe el crecimiento de bacterias, pero permite el crecimiento de hongos, incluso de los ms exigentes. Este agar
se emplea como medio de aislamiento primario para el crecimiento de hongos, ya que permite una mejor
recuperacin de patgenos que el agar glucosa de Sabouraud.
Agar Campy con sangre
Medio selectivo para el aislamiento de especies de Campylobacter. El medio est suplementado con sangre
y con cefoperazona, vancomicina y anfotericina B para inhibir el desarrollo de la mayora de las bacterias Gram
negativas, Gram positivas y levaduras, respectivamente.
Agar CCF (fructosa, cicloserina, cefoxitina)
Medio utilizado para el aislamiento selectivo de Clostridium difficile en muestras de heces u otros
materiales intestinales. Contiene rojo neutro como indicador. Cicloserina y cefoxitina inhiben la microbiota
intestinal. C. difficile a las 48 horas de incubacin forma colonias rizoides amarillentas que tienen estructuras
internas cristalinas birrefringentes.
Agar chocolate
Este medio usa la misma base que el agar sangre. En un principio, los eritrocitos se adicionaban a la base
fundida y luego se elevaba la temperatura (alrededor de 85C) para lisar parcialmente las clulas, lo que otorgaba al
medio el color pardo-chocolate. Actualmente, la hemoglobina y otros nutrientes presentes en los lisados de los
glbulos rojos, como hemina (factor X) y coenzima NAD (factor V), se aaden como suplementos a un agar base
muy rico. Tambin se puede agregar IsoVitaleX, un suplemento definido que proporciona el factor V, vitaminas,
aminocidos, coenzimas, glucosa, iones frricos y otros factores que favorecen el crecimiento de especies
exigentes.
El agar Mueller-Hinton se utiliza para la realizacin del ensayo de difusin en placa, en tanto que el caldo
Mueller-Hinton se emplea para la determinacin de la concentracin mnima inhibidora en el ensayo de diluciones
seriadas.
Agar nutritivo
Medio slido que se prepara aadiendo agar a un caldo nutritivo. Existen diversas clases de agar nutritivo
comercializadas: agar infusin de cerebro y corazn (agar BHI), agar triptona de soja (TSA), agar brucela, agar
Columbia.
Agar NYC (New York City)
Medio selectivo para Neisseria gonorrhoeae. Suplementado con 3% de hemoglobina, plasma de caballo y
vancomicina, colistina, anfotericina B y trimetoprim.
Agar PEA (alcohol feniletlico, phenylethanol)
Agregando alcohol feniletlico a una base con peptona, extracto de carne y agar se obtiene un medio que
inhibe el desarrollo de las bacterias Gram negativas. La adicin de un 5% de sangre de oveja proporciona nutrientes
para estreptococos y estafilococos. Este medio tambin se emplea para el cultivo de microorganismos anaerobios
que no son inhibidos por el alcohol. Despus de su preparacin las placas con alcohol feniletlico huelen a rosas.
Agar Regan Lowe
Medio de enriquecimiento y selectivo para Bordetella pertussis. Es un agar con carbn, suplementado con
sangre de caballo, cefalexina y anfotericina B.
Agar SABHI (agar base de Sabouraud, infusin de cerebro y corazn)
Este medio es una combinacin del agar glucosa de Sabouraud y el agar BHI. Se emplea para el
aislamiento y cultivo de hongos patgenos como los dermatfitos y tambin no patgenos. Es til para la mxima
recuperacin de Blastomyces dermatitidis e Histoplasma capsulatum de tejidos y fluidos corporales. La adicin de
sangre incrementa la recuperacin de H. capsulatum y ayuda la conversin de H. capsulatum y B. dermatitidis a la
fase de levadura (hongos dimrficos). La incorporacin de antibiticos de amplio espectro como el cloranfenicol
inhibe el crecimiento de muchas bacterias Gram negativas aunque puede inhibir el crecimiento de algunos hongos.
Agar salino manitol (SM, MS mannitol saline, Medio de Chapman)
Es un medio selectivo para estafilococos debido a la alta concentracin de cloruro sdico (75 g/L). La
mayora de los microorganismos no crecen a esta concentracin de sal, mientras que los estafilococos, entre los que
se encuentran los del gnero Staphylococcus, s lo hacen. Incorpora manitol como fuente de carbono y rojo fenol
como indicador, lo que permite aprovechar la correlacin que existe entre la patogenia y la capacidad fermentadora
del manitol de los estafilococos para establecer un diagnstico presuntivo y sirve, por lo tanto, como indicativo de
la presencia de Staphylococcus aureus. Los estafilococos patgenos fermentan el manitol y producen colonias
amarillas. Los estafilococos no patgenos no lo fermentan y producen colonias de color rosa.
Agar sangre (AS BA, blood agar)
Medio muy rico que permite el crecimiento de todos los microorganismos con importancia clnica excepto
el de los ms exigentes. Se prepara aadiendo un 5% de sangre desfibrinada (oveja, caballo, conejo, etc.) a un agar
base rico (agar Columbia, por ejemplo). Se utiliza tambin para ver la capacidad hemoltica de los
microorganismos patgenos, por lo que se considera un medio diferencial. Ciertas bacterias producen enzimas
extracelulares que actan sobre los glbulos rojos. Observando los halos hemolticos alrededor de las colonias se
determina el tipo de hemlisis que poseen: alfa, beta o gamma. Para leer con exactitud la hemlisis producida, se
debe levantar la placa de agar sangre y observarla contra la luz.
La hemlisis de tipo alfa es una hemlisis incompleta, caracterizada por la destruccin parcial de la
membrana de los eritrocitos y prdida de algo de hemoglobina en el agar. A simple vista este tipo de hemlisis se
detecta por la aparicin de una coloracin verdosa alrededor de la colonia. La beta-hemlisis se caracteriza por la
destruccin total de la membrana por lo que se detecta por la aparicin de un halo transparente alrededor de la
colonia. Cuando los microorganismos no producen ningn tipo de hemlisis se dice que son gamma-hemolticos.
mientras que las lactosa negativas son transparentes (Shigella). Las colonias de Salmonella son transparentes con el
centro negro.
Agar sulfito de bismuto
Medio para el aislamiento de Salmonella typhi. El sulfato ferroso acta como indicador en la produccin de
sulfhdrico. El sulfito de bismuto y el verde brillante inhiben considerablemente el crecimiento de bacterias
contaminantes. S. typhi produce colonias con centro negro y bordes claros que a las 48 horas adquieren halo negro
grisceo y brillo metlico.
Agar TCBS (tiosulfato, citrato, sales biliares)
Medio selectivo para especies del gnero Vibrio debido a las altas concentraciones de tiosulfato sdico,
citrato frrico y cloruro sdico que inhiben a la mayora de las enterobacterias. Por la presencia de sacarosa y el
azul de timol y bromotimol como indicadores, permite diferenciar los microorganismos que fermentan este azcar,
como V. cholerae (colonias amarillas), de otros que no lo fermentan, como V. parahaemolyticus (colonias verdes),
y, entre stos, los productores de sulfhdrico (generalmente Proteus).
Agar Thayer-Martin
Este medio es una modificacin del agar chocolate para que sea selectivo para las neiserias patgenas.
Estas modificaciones incluyen la adicin de colistina (para inhibir otras bacterias Gram negativas), vancomicina
(para inhibir bacterias Gram positivas) y nistatina o anisomicina (para inhibir levaduras).
El agar Thayer-Martin incorpora nistatina. El agar Thayer-Martin Modificado (MTM) incluye trimetoprim
para inhibir a Proteus.
Agar triptona-soja (TSA)
Medio rico de uso general para el crecimiento de una amplia variedad de microorganismos. Se produce por
digestin enzimtica de la soja y de la casena. Con frecuencia se utiliza como agar base para otros tipos de medios,
como agar sangre, por ejemplo. En este medio pueden crecer algunos microorganismos exigentes como ciertas
especies de Brucella, Corynebacterium, Listeria, Neisseria y Vibrio.
Agar verde brillante
Medio altamente selectivo para el aislamiento de especies de Salmonella excepto S. typhi y S. paratyphi.
No se recomienda para el aislamiento de Shigella. Incluye lactosa, sacarosa y rojo fenol. El verde brillante es el
agente inhibidor. Las colonias de Salmonella se ven de color rosa o blanco, o transparentes, sobre un fondo rojo.
Agar XLD (xilosa, lisina, desoxicolato)
Como el agar de Hektoen, este medio es diferencial y selectivo para Salmonella y Shigella. No necesita ser
esterilizado en autoclave. Las sales biliares inhiben a muchas enterobacterias y microorganismos Gram positivos.
El indicador rojo fenol permite la diferenciacin de los no fermentadores de lactosa (Salmonella y Shigella) como
colonias incoloras (rosa plido). El citrato de hierro y amonio permite la visualizacin de microorganismos
productores de sulfhdrico como colonias con centros negros. Los microorganismos que fermentan los
carbohidratos del medio (xilosa, lactosa y sacarosa) dan lugar a colonias amarillas.
Caldo con carne picada
Este medio se emplea para enriquecer y conservar el desarrollo de bacterias anaerobias. Los trozos de carne
proporcionan un sustrato proteico para las enzimas proteolticas, que actan como sustancias reductoras
manteniendo un potencial de xido-reduccin bajo y de algn modo evitan que las bacterias de crecimiento rpido
sobrepasen a las formas ms lentas.
Si se coloca una capa de vaselina lquida sobre un caldo con carne picada en el que se ha cultivado una
bacteria anaerobia, muchos microorganismos permanecern viables, a temperatura ambiente, durante varios meses.
El medio con carne picada no necesita ser incubado en anaerobiosis para permitir el crecimiento de los anaerobios.
Caldo nutritivo
Contiene extracto de carne y cloruro sdico. Puede complementarse con peptonas, extracto de levadura y/o
glucosa. Asimismo, puede incorporar un tampn. Este tipo de medio se encuentra comercializado bajo diferentes
denominaciones, segn su formulacin ms o menos rica: caldo de infusin de cerebro y corazn (BHI), caldo
lactosa en proporcin 1:10, respectivamente. Lleva, adems, una fuente de azufre (tiosulfato sdico) y una fuente
de hierro (sulfato ferroso). Como indicador cido-base se aade rojo fenol (pH neutro: color rojo; pH cido: color
amarillo). La parte de arriba del medio se denomina pico de flauta y la de abajo, fondo. Ambas deben tener la
misma altura, aproximadamente 3 cm. La siembra se puede realizar con asa o con hilo (fondo en picadura y pico de
flauta por estras) y la incubacin es de 24 a 48 horas a 37C.
Interpretacin de los resultados:
1. Fondo y pico de flauta amarillos (cido)
La bacteria fermenta la glucosa y la lactosa (si el medio aparece roto, significar que se han producido
gases).
2. Fondo negro y pico de flauta amarillo (cido)
La bacteria fermenta la glucosa y la lactosa y produce sulfhdrico (aunque no se vea el color amarillo en la
zona que cubre el precipitado negro, debe suponerse que est amarillo porque es necesario un pH cido para que se
forme el precipitado). El sulfhdrico es incoloro, pero cuando en el medio hay una fuente de hierro se forma sulfuro
de hierro que precipita en un entorno cido con un color negro caracterstico.
3. Fondo amarillo (cido) y pico de flauta rojo (alcalino)
La bacteria fermenta slo la glucosa. A las pocas horas de incubacin tanto el fondo como el pico de flauta
estarn amarillos debido a la utilizacin de la glucosa y al descenso del pH por la produccin de cidos. A medida
que transcurre el tiempo, la formacin de aminas en la parte que est en contacto con el aire, debido a reacciones de
descarboxilacin oxidativa de los aminocidos, provoca la alcalinizacin del medio, lo que hace virar el indicador a
color rojo. En profundidad, donde no hay oxgeno, se mantiene el color amarillo.
4. Fondo negro y pico de flauta rojo (alcalino)
La bacteria fermenta slo la glucosa y produce sulfhdrico.
5. Fondo y pico de flauta rojos (alcalino)
La bacteria no fermenta la glucosa ni la lactosa.