III.

DETALLES EXPERIMENTALES

Materiales:

Vasos de precipitados
Bagueta
Tubos de ensayo
Cocinilla elctrica
Huevo

Reactivos:

-naftol (0,2%) en alcohol

KNO2 (0,5%)
NaCO3 (10%)
CuSO4 (0,04 M)
NaBrO
Reactivo de Millon
Ninhidrina
Acido actico glacial
H2SO4 (cc) y al 2,5%
PbCH3COO al 5%
Nitroprusiano de sodio al 5%
Acido sulfanilico (1%) en HCl (5%)
Reactivo de Biuret
HNO3(cc)
NaOH(ac) al 10 y 20%
Agua destilada

Procedimiento:
Se rompe un huevo y cuidadosamente se procede a separar la clara
de la yema, vertiendo la clara en un vaso de precipitado. Con ayuda
de una bagueta, se bate bien la clara hasta que quede bien
espumoso, se vierte una cantidad en un vaso de precipitado para
luego agregar una cantidad de agua destilada 20 veces mayor en
volumen. El resto se conserva para algunas reacciones que no
requieren la solucin diluida.

Reaccin de Biuret sobre el grupo peptdico

Se toman dos tubos de ensayo, en uno se coloca un poco de muestra

de albumina y en otro glicina, a cada uno se le agregan dos gotas de
reactivo de Biuret, se agita suavemente y se observa la coloracin
que toman.
Reaccin de la ninhidrina sobre el grupo -amino
Se toman tres tubos ensayo, colocando 5 gotas de ovoalbmina, alanina, -alanina y prolina respectivamente. Luego se agrega a cada
tubo dos gotas de solucin de ninhidrina y se calienta hasta
ebullicin. Anotar lo observado.
Reaccin xantoproteica sobre el anillo aromtico de aminocidos
cclicos
Se toman tres tubos, colocando 5 gotas de ovoalbmina, tirosina e
histidina respectivamente. A cada uno se le agregan 3 gotas de cido
ntrico concentrado, para luego calentarlos hasta ebullicin. Se
observa el cambio de color, luego se enfra cada tubo y lentamente
agregar una solucin de NaOH hasta observar el cambio de color.
Reaccin de Millon sobre la tirosina
En dos tubos se agregan 5 gotas de ovoalbmina y de tirosina
respetivamente, luego de esto se le agrega a cada uno 3 gotas del
reactivo de Millon y se calienta suevemente, teniendo en cuenta el
cambio de color que se produce.
Reaccin de Hopkins-Cole sobre triptfano
Se toman dos tubos, en uno se agrega ovoalbmina y en otro
triptfano. Luego, se agrega a cada tubo 5 gotas de cido actico
glacial y se calienta suavemente por unos minutos hasta disolver el
precipitado, luego de enfriar se agrega lentamente y por las paredes
del tubo de 5 a 10 gotas de H2SO4 concentrado.
Reaccin de Foly sobre aminocidos que contienen azufre dbilmente
unido
Se toman tres tubos y se agrega a cada uno 5 gotas de acetato de
plomo y tambin hidrxido de sodio gota a gota. Al primer tubo se le
agrega 5 gotas de ovoalbmina, al segundo 5 gotas de cistena y al
ultimo tubo metionina. Se calienta por unos minutos hasta observar la
formacin de precipitado.
Reaccin de aminocidos que contiene azufre con nitroprusiato de
sodio

Se toman tres tubos, y se agrega albumina sin diluir, cistena y

metionina respectivamente. A cada tubo se le agrega hidrxido de
sodio y se les hierve por unos minutos, luego de esto se agrega a
cada tubo 3 gotas de solucin de nitroprusiato de sodio y se observa
la aparicin de color

Reaccin de Sakaguchi
En un tubo de ensayo se colocan 10 gotas de una solucio 0,01% de
arginina, 10 gotas de hidrxido de sodio al 10% y algunas gotas de
solucin alcohlica de alfa naftol al 0,2%. Se agita bien, y se aade
0,5% de solucion de hipobromito, se vuelve a agitar, y por ultimo se
agrega de 5 a 10 gotas de urea al 40% para estabilizar el color
anaranjado rojizo que se forma.
Prueba de pauly
En un tubo de ensayo se agregan de 5 a 10 gotas de solucin de
acido sulfanilico en acido clorhdrico al 5% y 10 gotas de nitrito de
potasio al 0,5% y se agita fuertemente para luego agregar 5 gotas de
histidina al 0,01% , se vuelve a agitar. Luego, se agrega 10 gotas de
carbonato de sodio al 10%. Si la reaccin se torna rojo intenso no
indica que el resultado fue positivo.

Al el primer tubo se le adiciona el reactivo de Biuret, en donde se

aprecia un cambio de coloracin. En el siguiente tubo de ensayo se
hace la prueba de la ninhidrina, aadiendo este reactivo y calentando
hasta ebullicin. Se observa la aparicin de una coloracin oscura. Al
tercer tubo se le agrega cido ntrico concentrado y se lleva a
calentamiento por un minuto, en donde se aprecia un cambio de
color. Luego se enfra con un chorro de agua de cao y se le adiciona
una solucin de hidrxido de sodio. Se observa un nuevo cambio de
color.