Preparacin de gel de agarosa para electroforesis

Por DoctorGenoma | febrero 26, 2010

Esto parece ms de cocinitas, pero es algo bsico en un laboratorio de biologa molecular. La agarosa es un polisacrido formado por galactosas alfa
y beta que se extrae de las algas de los gneros Gellidium y Gracillaria. De lo que se trata es de formar una matriz inerte y no txica para construir
geles que permitan separar molculas de ADN mediante electroforesis, adems de ser utilizada para fijar molculas a su estructura como
anticuerpos, antgenos y enzimas. Igualmente se utiliza para el cultivo celular y microbiologa. Otros usos menos extendidos son la utilizacin de estos
geles como matrices en la reparacin de tejidos daados.
Una vez puestos en materia nos quedamos con la idea principal: separacin de molculas gracias a un entramado que lo permite. Esta separacin se
produce gracias a la aplicacin de un campo elctrico. Las muestras migrarn de un lado a otro dirigidas por ese campo elctrico. As molculas
como los cidos nucleicos que son de polaridad negativa se dirigirn al nodo.
Para la preparacin de un gel de agarosa se precisan 4 cosas:

1. La agarosa en polvo.

2. Tampn en el que se disuelve la agarosa y que sirve para embeber el gel y transmitir el campo elctrico.
3. Fuente de calor o microondas para mezclar y fundir la agarosa en el tampn.
4. Cubeta y molde para solidificar el gel y sumergirlo en el tampn. La cubeta tiene los bornes para conectar los cables a la fuente de
alimentacin.
Los pasos a seguir son:

1. En un matraz, verter la cantidad de tampn para completar el volumen del molde a rellenar con el gel.

2. Medir la cantidad de agarosa dependiendo de la concentracin a la que se quiera obtener el gel. A ms concentracin, mayor resolucin. Por
ejemplo, un gel al 2% sera 2 gramos de agarosa en polvo disueltos en 100 ml de tampn. Como podis comprobar, la concentracin se obtienen
mediante la relacin peso/volumen. Sencillo.

3. Se procede a mezclar la agarosa con el tampn y fusionar los componentes para obtener el gel. Se necesita una fuente de calor como un bao
(poco recomendable si se quiere rapidez) a una temperatura que permita fundir la agarosa o un microondas, que permite realizar el proceso ms
rpidamente. Con la experiencia, es todo un arte dependiendo de las concentraciones y las agarosas. Pero esto es slo a modo introductorio.
4. Se enfra el gel para poder verterlo en la cubeta. Siempre hay que acordarse de poner unos lmites con cinta para que no se disperse el gel por la
mesa y el peine que formar los pocillos. En unos minutos, al enfriarse del todo, se tiene el gel polimerizado.

5. Por ltimo se introduce en la cubeta que contiene el tampn, a la misma concentracin que el que se ha utilizado para generar el gel.
Ya slo queda cargar las muestras y correr el gel al voltaje predeterminado (generalmente a 10 voltios por cm de gel, pero depende de las muestras,
el gel y los protocolos a seguir). Luego se deber realizar una tincin para poder ver las bandas. Existen varios mtodos y sern limitantes para el
posterior visionado, pero eso lo comentar en otro artculo.

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