Viabilidad de las levaduras

Objetivos
Determinar la presencia de clulas vivas y muertas en levaduras a travs de
conteo celular, utilizando una tcnica ligeramente modificada.

Marco terico
La viabilidad es el porcentaje de clulas vivas que existe en relacin al total de clulas.
Su importancia radica en que nos brinda una idea de la eficiencia de la levadura para
fermentar.
La tcnica es un conteo celular que se hace en el microscopio y es basada en la tcnica
en fresco. Como se utiliza azul de metileno, se trata de una tcnica ligeramente
modificada, es decir, se emplea colorante.
En la industria, se pesa la levadura, los milmetros a utilizar y as se puede brindar un
dato porcentual de las clulas vivas. All, este ensayo es una tcnica operativa porque
emite resultados al instante.
Se determina el nmero TOTAL de clulas presentes (VIABLES Y NO VIABLES).
Ocasionalmente se pueden utilizar colorantes que indiquen diferentes estados
metablicos de las clulas. Por ejemplo en un recuento en cmara de un cultivo de
levaduras con azul de metileno, se pueden distinguir las clulas VIABLES (no absorben
el colorante, se vern transparentes) de las NO VIABLES (absorben el colorante y se
vern azules).
Escuela profesional de Biologa de Lambayeque
Materiales y sustancias utilizadas
Microscopio
Levadura: Saccharomyces cerevisiae
Azul de metileno
Aguja enmangada
Agua destilada
2 tubos de ensayo pequeos
Porta y cubre objeto
Papel filtro

Procedimiento
1) Se coloca agua destilada en cada uno de los tubitos de ensayo.
2) Introducimos levadura en pequeas cantidades en cada uno de los tubos de
ensayo.
3) Agitamos.
Hay dos mtodos para preparar la muestra.
a) En el primer tubo de ensayo se aade de 2 3 gotas de azul de metileno. Luego
se agita hasta que sea homognea.
b) Con ayuda de la aguja enmangada, colocamos una pequea muestra en el porta
objeto.

c) Finalmente colocamos el cubre objeto y secamos el exceso con ayuda de papel

filtro.
2do mtodo:
a) Colocamos 2 3 gotas de azul de metileno sobre el porta objeto.
b) Colocamos una pequea muestra alrededor del colorante.
c) Con ayuda de la aguja enmangada homogenizamos la muestra con el colorante
(azul de metileno) y se coloca con cuidado el cubre objeto, eliminando el exceso
con ayuda de un papel filtro.
A pesar de que realizamos ambos mtodos, utilizamos el segundo portaobjeto.
ste es llevado al microscopio y una vez conseguido el enfoque apropiado para iniciar
el conteo, dividimos el plano en cuatro cuadrantes y anotamos la cantidad de clulas
vivas y clulas muertas en cada uno de estos cuadrantes.
Finalmente realizamos los clculos para obtener la eficiencia (viabilidad).
Resultados
Clulas muertas
Clulas vivas
Total de clulas observadas

107 aproximadamente
32 aproximadamente
139

76,97%
23,02%

Debido a que el resultado es muy desfavorable (23,02%), podemos decir que la

viabilidad de la levadura analizada, no es efectiva.

Anexos

Conclusiones y recomendaciones
Utilizamos la tcnica en fresco ligeramente modificada, ya que utilizamos colorante
(azul de metilo).
Mediante el microscopio logramos observar las clulas vivas, las cuales aparecan
transparentes. Mientras que las clulas muertas se tien de azul. Y as es como se
diferencian para poder realizar el conteo.
El conteo se realiza con la lente de 40x.
Es muy importante determinar la viabilidad de la levadura, ya que sta nos permite
determinar si emplearla o no. En el caso de que se utilice una levadura con una baja
viabilidad, tendremos como consecuencia que utilizar ms levadura, por ende las
caractersticas organolpticas cambiaran, daando el producto.