PRCTICA 1: RECUENTO TOTAL DE BACTERIAS

AERBICAS MESFILAS VIABLES

ESIA-2014

PRCTICA 1
RECUENTO TOTAL DE BACTERIAS AERBICAS MESFILAS
VIABLES
I.

INTRODUCCION

Las bacterias aerbicas mesfilas constituyen un grupo de microorganismos capaces de crecer en un rango
de temperatura de 30 a 37 C.
La cuantificacin de microorganismos por contaje

de colonia, ha sido

ampliamente

utilizada para

determinar poblaciones microbianas viables en os alimentos, este procedimiento est basado en la

presuncin de que cada clula microbiana es una muestra formara a simple vista, con colinas separadas
cuando son mezcladas con el lagar u otro medio solido permita su crecimiento.

II.

OBJETIVO

Conocer el mtodo para determinar el nmero de bacterias aerbicas mesfilas viables.

Determinar la presencia y cantidad de bacterias aerbicas mesofilas viables en el material
analizado.

III.

FUNDAMENTO TERICO

La aceptabilidad de un proceso es frecuentemente el aspecto ms difcil del anlisis de alimentos. Los

anlisis microbiolgicos de los alimentos

son una herramienta eficaz en

esta evaluacin, pero

la

interpretacin de los resultados de laboratorio obtenidos en microbiologa es, frecuentemente, el ms

difcil y complejo aspecto de todo el proceso de evaluacin, donde entran en juego el criterio profesional
y las circunstancias que rodean al hecho ( brote, control de rutina, toma de muestra en lnea de proceso
o en punto de venta, producto listo para consumo, etc.)
El mtodo de contaje de colonias provee una estimulacin el nmero de microorganismos viables en una
muestra de acuerdo al medio empleado y el tiempo y la temperatura de incubacin.

Las clulas microbianas a menudo se encuentras como conjunto o grupos de clulas, por tanto, la muestra
y las diluciones homogeneizadas pueden uniformemente distribuir los conjuntos de bacterias, ya que estos
grupos no pueden ser disgregados completamente por ellos mismos.
El mezclado y la disolucin inicial en un bleder mecnico puede proveer mayo rotura a estos productos.
De todos modos, esto nos asegura que los microorganismos puedan estar bien distribuidos como clulas
libres.

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Consecuentemente, cada colina aparece en el Agar Plate puede aparecer como grupos de clulas y deben
ser referidos como unidades formadas de colonias (UFC).

APLICACIN
El mtodo puede ser utilizado para cualquier tipo de muestra, con excepcin de ciertos productos, donde
intervenga el proceso de fermentacin , tales como ciertos quesos y embutidos, yogurt o de maduracin
natural, ya que estos dan cifras muy

elevadas de bacterias. Tambin se puede

utilizar para medio

ambiente, utensilios, etc.

IV.

EQUIPOS Y MATERIALES
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.

V.

Los requisitos necesarios para la dilucin de las muestras de alimentos

Placas Petri
Pipetas bacteriolgicas de 1 y 10 ml
Bao de agua regulado a 44-45 C para mantener elagar licuado
Bao de agua regulado a 29-31 C
Contados de colonias
Agar plate count

PROCEDIMIENTO
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1. Preparar muestra la muestra

2. Pipetear por duplicado a placas de Petri estriles alcuotas de 1 ml a partir de dilucin 10 -1102

10-310-310-410-510-6.

Se sugiere esta serie de diluciones cuando no se conoce el rango aproximado del nmero de
bacterias.

3. Agregar rpidamente a las placas de Petri 15 ml de agar licuado y temperatura entre la

preparacin de la dilucin y la dilucin del agar no debe transcurrir ms de 10 minutos.

4. Mezclar inmediatamente la alcuota con el agar mediante movimientos de vaivn y rotacin de las
placas Petri. Una secuencia satisfactoria de paso es la siguiente.
a. Mover la placa de arriba 5 veces en un direccin
b. Rotar 5 veces la placa en sentido de los guajas del reloj.
c. Mover la placa 5 veces en la direccin que haga ngulo recto al usado en el primer tiempo.
d. Rotar la placa en sentido inverso al de las agujas del reloj.
5. Como control de esterilidad, adicionar a placas Petri, agar sin inocular y agar inoculado con el
diluyente.
6. Una vez solidificado el agar, invertir las placas e incubarlas a (29-31) C durante 48*/- 3 horas

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7. Computo del recuento estndar en placas

a. Seleccionar dos placas correspondientes a una dilucin que

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contenga entre 30

y 3000

colonias utilizando un contador de colonias.

b. Si las placas de diluciones consecutivas presentan menores que 30 y mayores que 300,
tomar el promedio de los 2 recuentos.
c. Si el nmero de colonias de las placas de 2 diluciones consecutivas estn dentro del rango
de 30 -300, computar el recuento para cada una de las de las diluciones y establecer la
relacin de los 2 recuentos. Si el cociente es menor que 2, reportar el promedio de los 2
valores, pero, si el recuento mayor cociente 2 veces o ms que al menor, en este caso se
reportan en recuento del menor.
d. Multiplicar por el factor por el factor de dilucin reciproco de la dilucin utilizada. Reportar
el resultado como numero de microorganismos aerobios mesofilos por gramo o mililitro
segn el caso.

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8. Computo del estimado de recuento estndar en placas

a. Si la placa de las diluciones muestran ms de 3000 colonias, dividir cada duplicado de las
placas dela dilucin ms alta en secciones radiales convenientes (2,4,8,) y contar todas las
colonias en una o ms secciones. Multiplicar el total en cada caso por el factor apropiado
para obtener el nmero de colonias por cada placa. Promediar los estimados de las 2 placas
y multiplicar por dilucin correspondiente. Reportar el resultado como estimado del nmero.
b. Si no hubiese colonias en placas de mayor concentracin, reportar el estimado como menor
que la inversa de la dilucin
c. Ejemplo: 10-1 = 0 colonias.
d. Se reporta como < 10 ufc/g o ml. Si se hubiese sembrado, 0.1 ml en este caso se reporta <
100ufc/g o ml.
Expresin de resultados:
a. Se deber reportar

nicamente

2 dgitos significativos, ellos son el

primero

y el segundo

(comenzando por la izquierda) del promedio de los recuentos. Los dems dgitos se reemplazaran
por cero.
Ejemplo:
523,000 se reportara 520,000= 52 x 104 ufc/ g o ml de alimento segn el caso.
Si el tercer digito de la izquierda es 5 o mayor que 5, adicionar una unidad al segundo digito
(redondear).
b. Si el recuento en placa se utiliza para determinar la aceptacin o rechazo de un lote de alimento,
nicamente se considera el recuento estndar en placa, nunca el estimado se considera el recuento
estndar en placa, nunca el estimado del recuento, este es til solamente como una aproximacin
primaria en la determinacin de la calidad microbiolgica de un alimento.

VI.

CLCULOS Y EXPRESIN DE RESULTADOS

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Para el computo de colonias contadas, se debe multiplicar el nmero total de colonias por placas

por la reciproca de la dilucin utilizada.

Para evitar imprecisiones cuando se computan las colonias contadas, se tienen en cuenta nicamente

los dos primeros dgitos.

El aumento del segundo dgito, en un nmero ms alto, sucede cuando el tercer digito de la

izquierda es 5,6,7,8 o 9.
Usar ceros para cada digito sucesivo para la derecha del segundo digito.

Cuando una placa contiene 25 a 250 colonias:

Seleccionar cada placa conteniendo entre 25 a 250 colonias, excluyendo aquellas con colonias

invasivas o que tuvieron algn accidente dentro del laboratorio.

Contar todas las colonias, incluyendo aquellas de tamao pequeo, y recordar la dilucin usada y el
nmero total de colonias contadas.
Ejemplo:
Placas en duplicado:
Contar las placas conteniendo entre 25 y 250 colonias y promediar el contaje obtenido para tener
el nmero de colonias contadas.
Ejemplo:
Si solo una placa del par, proporciona 25 a 250 colonias , contar ambas placas, como excepcin
excluir las placas que

presenten

colonias invasivas, y

promediar el

contaje.

Ejemplos:
Placas con diluciones

consecutivas

conteniendo entre 25 y 250

En caso de que dos placas con

colonias
diluciones

decimales consecutivas,

presenten cada

una entre 25 y 250 colonias,

el contaje por

gramo para cada dilucin y el

reporte es el

promedio aritmtico de ambas.

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Se utiliza para ello, la siguiente formula:

Donde;
N: nmero de colonias por gramo o ml. De producto.

: Suma de todas las colonias en todas las placas contadas.

n1 : Nmero de placas en la primera dilucin contada.

n2 : Nmero de placas en la segunda dilucin contada.
d : Dilucin del cual fue obtenido e l primer contaje.
Ejemplo:

Placas que contienen entre 25 y 250 colonias:

-

Reportar el contaje como Estimado (Est.)

Ejemplo:
-

Si las placas contienen entre 25 a 250 colonias y una o ms de las placas tiene ms de 250 colonias,
seleccionar la(s) placa(s), que presenta cerca de 250 colonias y contar como placas que presentan
ms de 250 colonias.

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Cuando todas las placas contienen menos de 25 colonias

Si las placas con todas las diluciones, presentan menos de 25 colonias, registrar el nmero de colonias en
la dilucin ms baja(a excepcin, de las colonias invasivas), y registrar el contaje como Estimado. (Est.).
Ejemplo:

Placas que no presentan colonias

Si las placas de todas las diluciones no presentan colonias y no se detectan sustancias inhibidoras, el
contaje estimado reportar como menor que(<) 25 x 1/d,
Ejemplo:

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Placas que presentan ms de 250 colonias

-

Si el nmero de colonias por placas excede de 250 colonias, contar en porciones de la placa que

presentan una distribucin respectiva de colonias aerobias y reportar como Estimado.

Si estas son menores que 10 colonias por cm 2 contar las colonias en 12 cm2, seleccionando seis

cuadrados consecutivos horizontales y a la derecha seis cuadrados consecutivos verticales.

Tener cuidado en no contar un cuadrado mas de una vez.
Para el clculo, se puede utilizar la siguiente formula.
Numero obtenido de los 12 cuadrados contados x 65 d/12
Dnde:
65= rea de la placa de Petri de vidrio de 9 cm de dimetro ( para placas de plstico el rea ser de
56 cm).
D= dilucin a la cual se obtuvo el contaje.
12= por los 12 cuadrados representativos contados.
Cuando estn ms de 10 colonias por cm2, contar las colonias en cuatro cuadrados representativos.
Numero obtenido de los 4 cuadrados contados x 65 d/4
Dnde:
65= rea de la placa de Petri de vidrio de 9 cm de dimetro (para placas de plstico el rea ser de
56 cm).
D= dilucin a la cual se obtuvo el contaje.
4= por los cuatro cuadrados representativos contados.
En ambas instancias, se reportan como Estimativo (Est).
Ejemplo:
Usando un contaje promedio de 15 colonias por cm, en una placa de 65 cm. De rea y considerando
la dilacin 1/1000 y dividiendo entre los 12 cuadrados representativos, se tiene;

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OBSERVACIONES: los datos y resultados obtenidos en este presente informe fueron sacados de
libros y datos mencionados por la profesora en clase, ya que la prctica fue terico y NO SE
REALIZ EN EL LABORATORIO.

VII.

CONCLUSIONES

Recuentos altos en ALIMENTOS ESTABLES a menudo indican materias primas contaminadas o

tratamientos no satisfactorios desde el punto de vista sanitario

En los PRODUCTOS PERECEDEROS pueden indicar tambin condiciones inadecuadas de

tiempo/temperatura durante su almacenamiento.

La presencia de un nmero elevado de bacterias aerobias mesfilas que crecen bien a temperatura
corporal o prxima a ella, significa que pueden haberse dado condiciones favorables a la

multiplicacin de los microorganismos patgenos de origen humano o animal.

Todas las BACTERIAS PATOGENAS conocidas vehiculadas por los alimentos son mesfilas y en

algunos casos contribuyen con su presencia a los recuentos en placa encontrados.

En determinados tipos de alimentos con una fermentacin o maduracin (embutidos fermentados,
col cida, queso y otros derivados lcteos) es natural y deseable una gran multiplicacin bacteriana.

Los microorganismos impropios no pueden diferenciarse de la microflora propia o normal.

En los alimentos tratados por el calor, la poblacin de microorganismos viables suele ser muy baja,
aunque un examen microscpico de estos productos puede a veces poner de manifiesto la presencia
de microorganismos muertos, cuyo nmero indica que la materia prima estaba muy contaminada.

VIII.

BIBLIOGRAFA

http://ocw.um.es/cc.-de-la-salud/higiene-inspeccion-y-control-alimentario/practicas-1/practica-1significado-y-caracteristicas-de-los/skinless_view

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http://books.google.com.pe/books?
id=HcsOAQAAIAAJ&pg=PA26&lpg=PA26&dq=recuento+de+bacterias+mes
%C3%B3filas+aerobias&source=bl&ots=u5shfSHbZk&sig=T0lc238DpEabv5dNdrCeeBfcmqQ&hl=es&
sa=X&ei=DdRdU6foOI_gsATMuIDABQ&sqi=2&ved=0CC0Q6AEwAQ#v=onepage&q=recuento%20de

%20bacterias%20mes%C3%B3filas%20aerobias&f=false
http://clubensayos.com/Temas-Variados/Practica-4-DETERMINACI%C3%93N-DE-

AEROBIOS/1030851.html
http://cybertesis.unmsm.edu.pe/bitstream/cybertesis/758/1/espino_sr.pd
http://www.imbiomed.com/1/1/articulos.php?

method=showDetail&id_articulo=23723&id_seccion=269&id_ejemplar=2436&id_revista=46
http://www.um.es/nutbro/docs/hica/Microorganismos_marcadores.pdf
http://books.google.com.pe/books?id=OykG04ClBUC&pg=PA75&lpg=PA75&dq=recuento+de+bacterias+mesofilas+aerobias+en+alimentos&sour
ce=bl&ots=jZTyIzKMjo&sig=_5pBMNNa5gST1p3YhE56L50UNJg&hl=es&sa=X&ei=VhNnU9iDKKels
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%20aerobias%20en%20alimentos&f=false

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