1

Identificacin de productos naturales

por mtodos espectroscpicos

2
Esquema del espectro electromagntico

Regiones del espectro electromagntico utilizadas en Espectroscopa

Regin del
espectro

Cambio molecular

Frecuencia
(Hz)

Energa,
Kcal/mol

Longitud de onda,
cm

Radiofrecuencias

Orientacin del espin de

los ncleos en un campo
magntico

106

10-7

5 x 105

Microondas

Rotaciones moleculares

3 x 1010

3 x 10-3

Infrarrojo

Vibraciones
moleculares

1013 a1014

10-4 a 10-2
(1000 a 10000 nm)

Visible

Transiciones
electrnicas

5 x 1014

50

4 x 10-5 a 8 x 10-5
(400-800 nm)

Ultravioleta

Transiciones
electrnicas

1015

100

2 x 105 a 4 x 10-5
(200-400 nm)

CH3
N

COOCH 3
H
O
H
O

cocana

Vibraciones de los enlaces

H

H
C

H
H

modo simtrico
los tres se estiran
y contraen en fase
2872 cm-1

modo asimtrico
dos se estiran y uno
se contrae
2962 cm-1

H
C
H

H
C

H
modo asimtrico
2926 cm-1

H
C
H

H
modo asimtrico
1465 cm-1
modos en el plano

H
H

modo simtrico
1375 cm-1

modo asimtrico
1450 cm-1

modo simtrico
2853 cm-1

H
C

modo simtrico
720 cm-1

H
C

H
modo asimtrico
1350 cm-1

modo simtrico
1150 cm-1

modos fuera del plano

Intensidad de las bandas de absorcin

Regin de las huellas dactilares

Proporcional a la variacin del momento dipolar

El enlace del grupo carbonilo

tiene un gran momento dipolar

Absorcin intensa

Intensidad de la seal

Aumento del momento dipolar cuando se

produce la vibracin de tensin

Datos de un espectro de IR:

Frecuencia de absorcin

Momento dipolar nulo o

pequeo

Pequeo cambio en el momento dipolar

cuando se produce la vibracin de tensin

Absorcin dbil o nula

Cmo analizar un espectro de IR:

- Observar la regin de 4000-1300 cm-1
- Bandas de estiramiento CH alrededor de 3000 cm-1
Bandas a la derecha de 3000 cm-1 : grupos alquilo
Bandas a la izquierda de 3000 cm-1 : C=C o grupos aromticos
- Banda en la regin del grupo carbonilo 1790-1670 cm-1

Banda de O-H:
Banda de C-O:
Banda C-H de aldehdo:
Banda N-H:
Ninguna de las anteriores:

cido carboxlico
ster
aldehdo
amida
cetona

- Determinar la posicin exacta de la seal del grupo carbonilo

CH3
N

COOCH 3
H
O
H
O

cocana

10

Grupo carbonilo
rango

Tipo de compuesto

1750-1735 cm-1

steres alifticos
saturados

Ejemplo
O
H3C

R
O
O

1740-1720 cm-1
1730-1715
1715

cm-1

cm-1

Aldehdos alifticos
saturados

steres , insaturados

H3C

H
O
O

H3C

Cetonas alifticas
saturadas

R
O

R
O

O
CH3

H3C

1710-1665 cm-1

Aldehdos y cetonas ,
-insaturados

O
H3C

CH3

H H3C

11

- Banda aguda, simple o doble, de NH en la regin 3400-3250 cm-1

Una sola banda
Dos bandas

Amina secundaria
Amina primaria

- Otros aspectos estructurales

Banda de estiramiento C-O
ter ( o ster si existe la seal de C=O)
Banda de estiramiento C=C
alqueno
Bandas de estiramiento aromticas
compuesto aromtico
Banda CC
alquino
Bandas NO2
compuesto nitro
- Ausencia de seales de grupos funcionales en la regin 40001300 cm-1 (excepto estiramientos CH), probablemente
hidrocarburo.

- Region de 900-650 cm-1. Compuestos aromticos, haluros de

alquilo, cidos carboxlicos, aminas y amidas muestran bandas
de absorcin moderadas a fuertes (vibraciones de flexin).

12

H3C

COOH

OH

cido lctico

furano

13

Espectroscopa de infrarrojo
1.

2.
3.

4.
5.

6.

7.

Si dos molculas estn constituidas por tomos distintos, o tienen distinta

distribucin isotpica, o configuracin, o se encuentran en ambientes distintos,
los espectros infrarrojos sern distintos.
Una sustancia definida puede identificarse por su espectro infrarrojo. Estos
espectros pueden ser considerados como las huellas digitales de dicha sustancia.
Los espectros muestran bandas que son tpicas de grupos funcionales
particulares y que tienen localizaciones e intensidades especficas dentro de los
espectros infrarrojos .
A partir de los espectros se pueden inferir las estructuras moleculares. Para ello
se requiere un modelo en el cual basar los clculos.
Las intensidades en las bandas del espectro de una mezcla son, generalmente,
proporcionales a las concentraciones de las componentes individuales. Por lo
tanto, es posible determinar la concentracin de una sustancia y realizar anlisis
de muestras con varias componentes.
Mediante el uso de dispositivos experimentales adecuados, es posible obtener
espectros infrarrojos sin alteracin de la muestra. Constituye a esta
espectroscopa como una herramienta de anlisis no destructiva.
El tiempo necesario para obtener y almacenar un espectro infrarrojo es del
orden de minutos.

14
Qumica
Bioorgnica

15

Espectrometra de masas
Separacin de partculas moleculares o atmicas por su diferente masa.
- Ionizacin de la muestra.
- Aceleracin de los iones por un campo elctrico.
- Dispersin de los iones segn su masa/carga.
- Deteccin de los iones y produccin de la correspondiente seal elctrica.

16

Mtodos de ionizacin:
- Por impacto electrnico
- Ionizacin qumica

Trminos importantes usados en la em

- Relacin masa/carga: m/z, relacin del nmero de masa (m) de una
partcula dada entre el nmero (z) de unidades cargadas
electrostticamente (e) que posee la partcula.
- Ion molecular: El ion molecular resulta de la ionizacin de la molcula
a analizar. Representa la molcula intacta y es el ltimo precursor de todos
los iones fragmentados que componen el espectro de masas. Aparece a un
valor m/z numricamente igual al peso molecular del compuesto.
- Pico base: Pico ms intenso en el espectro de masas. Es la base para
normalizar las intensidades de los otros picos. Se le asigna una intensidad
relativa de 100%.
- Intensidad relativa: Representa su intensidad en comparacin con el
pico base. Se representa como % respecto al pico base que es 100%.

17

18
H3C
CH3
CH3

HO

CH3

CH3

19

Esquema parcial de degradacin de colesterol

H3C
CH3
CH3
H

CH3
H

+.

H3C
CH3

CH3

CH3

- H2O

CH3

H3C

+.

CH3

CH3

CH3

- CH3.

CH3

HO

m/z = 386 (50%) (M+)

m/z = 368 (40%)(M - 18)

m/z = 353 (50%)(M - 18 - 15)

+
H3C
CH3

H3C
CH3

CH3
H

CH3

CH3
H3C

H3C

CH3

m/z = 277 (60%) ( M - 109)

m/z = 301 (45%) (M - 18 - 15 - C3H6)

20

Aplicaciones de la espectrometra de masas

- Elucidacin de la estructura de molculas orgnicas y biolgicas.
- Determinacin del peso molecular de pptidos, protenas y oligonucleicos.
- Identificacin de los compuestos de cromatogramas en capa fina y papel.
- Determinacin de secuencias de aminocidos en muestras de polipptidos y
protenas.
- Deteccin e identificacin de especies separadas por cromatrografa y
electroforesis capilar.
- Identificacin de drogas de abuso y sus metabolitos en sangre, orina y saliva.
- Control de gases en enfermos respiratorios durante los procesos quirrgicos.
- Pruebas para confirmar la presencia de drogas en sangre de caballos de
carreras y en atletas olmpicos.
- Datacin de ejemplares en arqueologa.
- Anlisis de partculas en aerosoles.
- Determinacin de residuos de pesticidas en alimentos.
- Control de compuestos orgnicos voltiles en el agua de suministro

21
CH3
N

Qumica
Bioorgnica

COOCH 3
H
O
H
O

22

Resonancia Magntica Nuclear

Algunos ncleos empleados en RMN
Ncleo

g (MHz/T)

Protones
desaparead
os

Neutrones
desapareado
s

Espin
neto

1H

1/2

42.58

2H

6.54

31P

1/2

17.25

23Na

3/2

11.27

14N

3.08

13C

1/2

10.71

19F

1/2

40.08

Estudia ncleos atmicos con un nmero impar de

protones o neutrones (o de ambos).

23

Sin campo
magntico

La diferencia de E de los estados de espn

depende de la fuerza del campo
magntico

Estados de
espn

n = g H0
g = relacin giromagntica

24

Desplazamientos
qumicos de
algunos
compuestos
orgnicos

25

Algunos espectros sencillos

26

vj -vref (Hz) x 106

Referencia: tetrametilsilano (TMS)

nj = frecuencia de resonancia del ncleo

vequipo

= ppm

27

La constante de acoplamiento (J) es una medida de la interaccin entre los

protones.
Se expresa en Hertz (ciclos/segundo)
J es independiente del campo aplicado (H0)

28

Valores de constantes de
acoplamiento (J) en funcin de
la estructura

Tipos de informacin accesibles va RMN de alta resolucin:

1. Anlisis de grupos funcionales (corrimiento qumico)
2. Conectividad de los enlaces y orientacin (acoplamiento J)
3. Conectividad a travs del espacio (efecto Overhauser)
4. Conformaciones moleculares, DNA, pptidos; secuencia
enzimtica y estructura
5. Dinmica Qumica (Anchos de lnea, fenmenos de relajacin)

29

C3H5BrO2; PM = 152

I.I. = nC n H/2 n Hal./2 + n N/2 + 1

I.I. = 3 5/2 1/2 + 0/2 + 1

I.I. = 1

30

31

Rango de corrimientos qumicos en RMN 13C

32

33

34
CH3
N

COOCH 3
H
O
H
O

6.5
6.0
5.5

Espectro de RMN1H
5.0
4.5
4.0
3.5
2.03

7.0

2.00

7.5
1.01
1.01

1.99

3.0
ppm

180
160
140
120
100

Espectro de RMN 13C

80
60
40

23.67

29.19

77.54
77.22
76.91

116.85

128.22
128.06
124.39
122.70

151.99

168.55

3.008
2.990
2.971
2.784
2.766
2.747

7.260
7.240
7.221
7.202
7.184
7.107
7.089
7.070
7.034
7.014

35

2
3

3,4-dihidro-2H-cromen-2-ona
dihidrocumarina

ppm

36

Espectro de masas de DHC (C9H8O2)

MKS-2010-103 #365 RT: 7,57 AV: 1 NL: 4,70E6

T: + c Full ms [ 40,00-510,00]
90,97

100
95
90
85
80
75
70

Relative Abundance

65
60
55
50
45
119,99

40
35
30
25

147,97
20
148,99

15

64,95

91,98

118,94

10
77,97
5

50,90

62,90
65,97

49,12

0
40

50

60

70

88,98
79,00
80

90

93,01

105,02 117,99

100

110

120,92 131,03
129,19
120

130

147,02

140
m/z

149,98
150

169,03
160

170

183,02
180

197,00
190

200

213,04
210

224,96
226,04
220

230

37

Espectro COSY

Espectro HMBC

38

Objetivos para la determinacin estructural

1) Obtencin de una frmula molecular.
2) Identidad de los grupos funcionales.
3) Conectividades de los tomos de carbono.

4) Posicionamiento de los sustituyentes y/o los grupos funcionales

sobre el esqueleto carbonado (Obtencin de subestructuras).
5) Determinacin de las propiedades estereoqumicas
(incluyendo tanto los aspectos estticos como dinmicos).
6) Asignacin de una estructura a la molcula.
7) Comprobacin de que las propiedades espectroscpicas
observadas se corresponden con las que debera tener la estructura
propuesta.