Protocolo de Validacion de Valoración Naproxeno Universidad Del Atlántico

P RO TO CO LO DE V AL I D AC I N
PRO-KJYE07
PROTOCOLO DE VALIDACIN DEL MTODO

ANALTICO PARA LA VALORACIN DE NAPROXENO
SDICO 550 MG. TABLETA POR CROMATOGRAFA
LQUIDA DE ALTA RESOLUCIN
Vigencia: 2016--01-
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Elaborado:________________________________________Fecha:_________________
Nombre/ Area
YYY-MM-DD
Revisado: ________________________________________Fecha:_________________
Nombre/ rea
YYYY-MM-DD
Aprobado por: _______________________________________Fecha:___________________
Nombre/rea
YYYY-MM-DD
PRO-KJYE07

Tabla de Contenido
Vigencia: 2016--01-
Pgina 2 of 34
Pgina
1.
OBJETIVO .................................................................................................................................. 5
2.
PRINCIPIO DEL METODO ......................................................................................................... 5
3.
RESPONSABILIDADES.............................................................................................................. 5
3.1.
Analista de producto terminado ............................................ Error! Bookmark not defined.
3.2.
Coordinador de validacin de mtodos analticos ................................................................. 5
3.3.
Jefe de desarrollo analtico ................................................................................................... 5
3.4.
Jefe de Cumplimiento ........................................................................................................... 6
4.
CATEGORIAS DEL METODO ANALITICO................................................................................. 6
5.
MATERIALES ............................................................................................................................. 6
6.
5.1.
REACTIVOS ......................................................................................................................... 6
5.2.
MATERIAS PRIMAS ............................................................................................................. 7
5.3.
ESTANDAR .......................................................................................................................... 7
MUESTRAS ................................................................................................................................ 8
6.1.
Productos: .................................................................................................................. 8
6.2.
Placebos: ................................................................................................................... 8
7.
EQUIPOS ................................................................................................................................... 8
8.
METODO DE ANALISIS. ............................................................................................................ 8

8.1.
9.
Mtodo de anlisis del producto final. ................................................................................... 8
8.1.1.
Preparacin de las soluciones ....................................................................................... 8
8.1.2.
Sistema Cromatografico ................................................................................................ 9
8.1.3.
Procedimiento................................................................................................................ 9
8.1.4.
Clculos....................................................................................................................... 10
PARAMETROS A EVALUAR .................................................................................................... 10

9.1.
SELECTIVIDAD .................................................................................................................. 11
9.1.1.
Solucines : ................................................................................................................. 11
9.1.2.
procedimiento .............................................................................................................. 12
PRO-KJYE07

9.1.3.
9.2.
Vigencia: 2016--01-
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Criterios de aceptacion ................................................................................................ 13
SELECTIVIDAD INDICADORES DE ESTABILIDAD ....................................................... 13
9.2.1.
Soluciones ................................................................................................................... 13
9.2.2.
Procedimiento ............................................................................................................. 17
9.2.3.
Criterio de aceptacion ................................................................................................. 19
9.2.4.
Reporte de resultados ................................................................................................ 19
9.3.
LINEALIDAD....................................................................................................................... 19
9.3.1.
Soluciones ................................................................................................................... 19
9.3.2.
Procedimiento.............................................................................................................. 20
9.3.3.
Clculos....................................................................................................................... 21
9.3.4.
Criterio de aceptacin .................................................................................................. 21
9.3.5.
Reportar los resultados................................................................................................ 21
9.4.
EXACTITUD DEL METODO ............................................................................................... 22
9.4.1.
9.5.
Soluciones ................................................................................................................... 22
9.4.2.
Procedimiento....................................................................................................... 22
9.4.3.
Clculos................................................................................................................ 23
9.4.4.
Criterio de Aceptacin .......................................................................................... 23
9.4.5
Reporte de resultados .......................................................................................... 23
PRECISION ........................................................................................................................ 23
9.5.1.
PRECISION INSTRUMENTAL .................................................................................... 23
9.5.1.1.
Soluciones ............................................................................................................ 24
9.5.1.2.
Procedimiento....................................................................................................... 24
9.5.1.3.
9.5.2.
REPETIBILIDAD .......................................................................................................... 22
9.5.2.1.
Solucin................................................................................................................ 24
9.5.2.2.
Procedimiento....................................................................................................... 25
PRO-KJYE07

9.5.2.4.
Reporte de resultados .......................................................................................... 25
PRECISION INTERMEDIA .......................................................................................... 25
9.5.3.1.
Solucin................................................................................................................ 25
9.5.3.2.
Procedimiento....................................................................................................... 26
9.5.3.3.
9.5.3.4.
Reporte de Resultados ......................................................................................... 27
ESTABILIDAD DE LAS SOLUCIONES............................................................................... 27
9.6.1.
Soluciones ................................................................................................................... 27
9.6.2.
Procedimiento.............................................................................................................. 27
9.6.3.
Clculos....................................................................................................................... 28
9.6.4.
Criterio de Aceptacin ................................................................................................. 28
9.6.5.
Reporte de resultados ................................................................................................. 28
9.7.
10.
Pgina 4 of 34
9.5.2.3.
9.5.3.
9.6.
Vigencia: 2016--01-
ROBUSTEZ ........................................................................................................................ 28
9.7.1.
Solucin....................................................................................................................... 28
9.7.2.
Procedimiento.............................................................................................................. 29
9.7.3.
Clculos....................................................................................................................... 29
9.7.4.
Criterio de Aceptacin ................................................................................................. 29
9.7.5.
Reportar los resultados................................................................................................ 29
REGISTROS DE MODIFICACIONES ................................................................................... 29

BIBLIOGRAFIA.:
ANEXOS ..................................................................................................................................
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1. OBJETIVO
Validar el mtodo analtico usado para la cuantificacin de Naproxeno sdico en tabletas de 550
mg. Con la finalidad de demostrar que este mtodo es adecuado para tal propsito y cumple con
los parmetros de validacin recomendados por la USP en la categora I.
Figura 1. Naproxeno
2. PRINCIPIO DEL MTODO
El mtodo se fundamenta en el uso de la cromatografa liquida de alta eficiencia en fase reversa para
la cuantificacin de Naproxeno sdico en tabletas de 550 mg, comparando la muestra problema con
un estndar de concentracin conocida.
3.
RESPONSABILIDADES
3.1. Analista de producto terminado.

Realizar y documentar los diversos anlisis desarrollados de acuerdo al presente
protocolo.
3.2. Coordinador de validaciones.
Elaborar protocolo de validacin.
Coordinar el desarrollo de los anlisis programados.
Recopilar los resultados y emitir el reporte final de validacin.
3.3. Jefe de desarrollo analtico
Verificar el cumplimiento del protocolo.
Revisar el reporte de validacin.
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3.4. Jefe de Cumplimiento

Aprobar el protocolo y el reporte de Validacin.
4. CATEGORIAS DEL METODO ANALITICO
El mtodo que se desea validar se encuentra dentro de la categora I, que corresponde a la

valoracin de principios activos y excipientes. Las caractersticas de desempeo a validar segn
la categora indicada son:
a) Selectividad
b) Linealidad
c) Exactitud
Porcentaje de recuperacin
Lmite de descarte y evaluacin del filtro
d) Precisin
Precisin instrumental
Repetibilidad
Precisin intermedia
e) Estabilidad de la muestra analtica
f) Robustez
5. MATERIALES
5.1. REACTIVOS
Se utilizaran los siguientes reactivos:
Agua purificada.
Acetonitrilo HPLC.
cido actico glacial.
Butirofenona.
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5.2. MATERIAS PRIMAS
Tabla 1. Materias primas a emplear. FORMULACION

PRESENTACION
CODIGO
Contenido
NAPROXENO SODICO
177678009
CELULOSA MICROCRISTALINA
123138398
LAURILSULFATO DE SODIO
102345383
POVIDONA
653000130
TALCO
100374648
ESTEARATO DE MAGNESIO
105340594
MACROGOL 400/DIXIDO DE TITANIO/

HIPROMELOSA
390384050
AGUA PURIFICADA
653000100
COLOR INDIGOTINA
763234354
MACROGOL 6000
976665554
5.3. ESTANDARES
Nombre
NAPROXENO SDICO USP
Cdigo
120003124
Registro:
Concentracin:
28 g / mL
Fecha de Anlisis
Fecha de re-anlisis:
ESTANDAR INTERNO
Nombre
BUTIROFENONA
Cdigo
23000314
Registro:
Concentracin:
Fecha de Anlisis
Fecha de re-anlisis:
0.5 g / mL
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NOTA: Almacenar protegido de la luz.

6.
MUESTRAS
6.1. Productos:
Nombre
Cdigo
NAPROXENO SODICO 550mg
1011478
6.2. Placebos:
Los placebos sern preparados y entregados por el rea de formulacin de I&D
7.
EQUIPOS.
Los equipos a utilizar son:
HPLC DETECTOR ULTRAVIOLETA / VISIBLE

MARCA: PERKIN ELMER
MODELO: 250.
BALANZA ANALITICA
MARCA: METTLER
MODELO: AT261
8. METODO DE ANALISIS.
8.1. Mtodo de anlisis del producto final.
8.1.1. Preparacin de las soluciones
Mezcla de disolventes: Preparar una mezcla de acetonitrilo y agua 90:10.
Fase mvil: Preparar una mezcla adecuada de acetonitrilo, agua y cido actico glacial (50:49:1).
Estndar interno: Diluir 5.0 mL de Butirofenona con Acetonitrilo en un matraz para obtener 100
mL, enrasar y homogenizar. Diluir 1,0 mL de esta solucin con acetonitrilo en un matraz para
obtener 100 mL, enrasar y homogenizar.
Cada mL de esta solucin contiene aproximadamente 0,5 L de Butirofenona.)
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Solucin stock del estndar: Disolver una cantidad de ER Naproxeno USP pesada con
exactitud en Mezcla de disolventes para obtener una solucin con una concentracin conocida de
aproximadamente 2,8 mg por mL.
Solucin estndar: Transferir 1,0 mL de la solucin stock del estndar y 2,0 mL de la Solucin
de estndar interno a un matraz volumtrico de 100 mL, diluir a volumen con Fase mvil y
mezclar.
(Esta solucin contiene aproximadamente 28 g de ER Naproxeno USP por mL).
Solucin stock muestra: Pesar y reducir a polvo fino no menos de 20 Tabletas. Transferir una
porcin del polvo, pesada con exactitud, que equivalga aproximadamente a 280 mg de Naproxeno
sdico, a un matraz volumtrico de 100 mL. Agregar 10 mL de agua y agitar hasta que el material
se disperse completamente. Diluir a volumen con acetonitrilo y mezclar. Dejar que el material
insoluble sedimente.
Solucin muestra: transferir 1,0 mL del sobrenadante transparente de la solucin stock muestra
a un matraz volumtrico de 100 mL, agregar 2,0 mL de la Solucin de estndar interno, diluir a
volumen con Fase mvil y mezclar.
(Esta solucin contiene una concentracin terica de aproximadamente 28,0 g de Naproxeno
por mL).
NOTA: Proteger las soluciones Estndar y muestra de la luz directa utilizando material de vidrio
anti-actnico, material de vidrio color mbar o cubriendo el material de vidrio con papel aluminio
8.1.2. Sistema Cromatografico
Condiciones Cromatogrficas
Columna:
L1 (4.6mm x 150 mm)
Flujo:
1,2 mL /min.
Volumen de Inyeccin:
20 L
Detector DAD:
Ultravioleta, 254 nm.
Temperatura:
25.0C
Fase mvil:
Acetonitrilo: Agua: cido actico glacial 50:49:1
Tiempo de corrida:
30 minutos
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8.1.3. Procedimiento
Realizar el orden de Inyeccin segn lo establecido en la siguiente tabla:
Tabla 2. Orden de Inyeccin y Test de Adecuabilidad
Nmero
Solucin
de
Inyecciones
Solucin Diluyente
Test de adecuabilidad
Especificacin
NA
NA
Desviacin
Relativa
Estndar
de
las
inyecciones (RSD)
Eficiencia
Solucin estndar
de
El
valor
de
Standard
RSD
(Relative
Deviation)
para
inyecciones repetidas no es ms
del 1.5%
la
columna
no menos de 4000 platos tericos

la resolucin entre el pico del
Resolucin
analito y del estndar interno no es

menor de 11,5
Factor
de
(K)
El
Muestra
Replicas)
(3
1 (Por cada
Replica)
RSD
capacidad
Factor de capacidad (K) > 2
(Relative El
valor
Standard Deviation) y Standard
de
RSD
(Relative
Deviation)
para
las especificaciones de inyecciones repetidas no es ms

valoracin propias del del 1.5%
producto.
8.1.4. Clculos
9. PARAMETROS A EVALUAR
Considerando el captulo <1225>, de la USP, validacin de procedimientos farmacopeicos se
evaluaran los siguientes parmetros de evaluacin segn la categora I.
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9.1. SELECTIVIDAD
Para la prueba de selectividad seria preparado un placebo de acuerdo a la formulacin del
producto como se describe en las siguientes tablas.
Tabla 3.Formulacin Del Producto
PRESENTACION
CODIGO
Contenido
NAPROXENO SODICO
177678009
CELULOSA MICROCRISTALINA
123138398
LAURILSULFATO DE SODIO
102345383
POVIDONA
653000130
TALCO
100374648
ESTEARATO DE MAGNESIO
105340594
MACROGOL
400/DIXIDO
TITANIO/ HIPROMELOSA
DE
390384050
AGUA PURIFICADA
653000100
COLOR INDIGOTINA
763234354
MACROGOL 6000
976665554
9.1.1. Soluciones
Solucin estndar:
Transferir 1,0 mL de la solucin stock del estndar y 2,0 mL de la Solucin de estndar interno a
un matraz volumtrico de 100 mL, diluir a volumen con Fase mvil y mezclar.
Solucin stock de Preparacin del Placebo.
Pesar y reducir a polvo fino no menos de 20 Tabletas placebo. Transferir una porcin del polvo
placebo pesada con exactitud de 747.21 mg, equivalente a una tableta, a un matraz volumtrico
de 100 mL. Agregar 10 mL de agua y agitar hasta que el material se disperse completamente.
Diluir volumen con acetonitrilo y mezclar. Dejar que el material insoluble sedimente.
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Vigencia: 2016--01-
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Solucin muestra de preparacin placebo.

Transferir 1,0 mL del sobrenadante transparente de la solucin stock de preparacin placebo a
un matraz volumtrico de 100 mL y diluir a volumen con Fase mvil y mezclar
Solucin stock muestra.
Pesar y reducir a polvo fino no menos de 20 Tabletas. Transferir una porcin del polvo, pesada
con exactitud, que equivalga aproximadamente a 280 mg de naproxeno sdico, a un matraz
volumtrico de 100 mL. Agregar 10 mL de agua y agitar hasta que el material se disperse
completamente, Diluir a volumen con acetonitrilo y mezclar. Dejar que el material insoluble
sedimente.
(Esta solucin contiene una concentracin terica de aproximadamente 28,0 mg de Naproxeno
por mL).
Solucin muestra
Transferir 1,0 mL del sobrenadante transparente de la solucin stock muestra a un matraz
volumtrico de 100 mL, agregar 2,0 mL de la Solucin de estndar interno, diluir a volumen con
Fase mvil y mezclar.
por mL).
9.1.2. PROCEDIMIENTO.
Inyectar las soluciones en el siguiente orden:
Solucin diluyente
1 inyeccin
Solucin estndar
3 inyeccin
Solucin diluyente
1 inyeccin
Solucin placebo
3 inyeccin
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Solucin diluyente
1 inyeccin
Solucin de la muestra
3 inyeccin
9.1.3
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CRITERIOS DE ACEPTACIN.
La matriz no debe presentar ningn tipo de seal que interfiera con la seal que se encuentra
para el estndar ni para el estndar interno.
La muestra no debe presentar ningn tipo de seal que interfiera con la seal que se
Encuentra para el estndar y el estndar interno.
9.2 SELECTIVIDAD-INDICADORES DE ESTABILIDAD
9.2.1. Soluciones
Solucin stock estndar:
Disolver una cantidad de ER Naproxeno USP pesada con exactitud en Mezcla de disolventes para
obtener una solucin con una concentracin conocida de aproximadamente 2,8 mg por mL.
Solucin stock Placebo:
Pesar y reducir a polvo fino no menos de 20 Tabletas placebo. Transferir una porcin del polvo,
pesada con exactitud de 747.21 mg equivalente a una tableta, a un matraz volumtrico de 100 mL.
Agregar 10 mL de agua y agitar hasta que el material se disperse completamente. Diluir a volumen
con acetonitrilo y mezclar. Dejar que el material insoluble sedimente.
Solucin stock muestra.
Pesar y reducir a polvo fino no menos de 20 Tabletas. Transferir una porcin del polvo, pesada con
exactitud, que equivalga aproximadamente a 280 mg de naproxeno sdico, a un matraz volumtrico
de 100 mL. Agregar 10 mL de agua y agitar hasta que el material se disperse completamente. Diluir
a volumen con acetonitrilo y mezclar. Dejar que el material insoluble sedimente.
Solucin stock materia prima. Pesar con exactitud 280 mg de naproxeno sdico, a un matraz
volumtrico de 100 mL. Agregar 10 mL de agua y agitar hasta que el material se disperse
completamente. Diluir volumen con acetonitrilo y mezclar.
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Vigencia: 2016--01-
Pgina 14 of 34
Tabla 4. Condiciones de degradacin Solucin Stock Placebo.

Volumtrica
Identificacin
Solucin
Alcuota final (mL)
Stock
(mL)
(diluir con
Condicin Tratamiento
fase mvil)
SSP-1
1.0
SSP-2
1.0
SSP-3
1.0
100.0
100.0
100.0
Normal
Medio
cido
Ninguno
Adicionar 10mL HCl 0.1N, y
calentar a 70C en bao de
agua, por 24 horas
Medio
Adicionar 10mL NaOH 0.1N, y
bsico

agua, por 24 horas
Adicionar 10mL de Perxido
SSP-4
1.0
100.0
Oxidativas de Hidrogeno al 3% (v/v) y

calentar a 70C por 48 horas.
SSP-5
Placebo de 1.0
100.0
Calor
550mg
SSP-6
Calentar a 70C por 48horas

Exponer por 24 horas en una
1.0
100.0
Luz solar
volumtrica transparente, a la
luz solar directa.
SSP-7
SSP-8
1.0
1.0
100.0
100.0
Luz
254nm
Luz
365nm

luz solar directa.
luz solar directa.
Adicionar 1mL de solucin de
SSP-9
1.0
100.0
Oxidativas tricloruro frrico al 1% (w/v) y

Neutralizar las soluciones en condiciones cidas y bsicas, adicionando un volumen similar de cido
o base. Una vez finalizado el tratamiento, enfriar a temperatura ambiente y aforar a volumen con
solucin diluyente. Pasar a vial como se indica en el tratamiento de las muestra.
PRO-KJYE07

Tabla 5.
Vigencia: 2016--01-
Pgina 15 of 34
Condiciones de degradacin de la solucin stock muestra.
Identificacin
Solucin
Alcuota Volumtrica
Stock
(mL)
final (mL)
1.0
100.0
SSM-1
SSM-2
1.0
SSM-3
1.0
100.0
100.0
Condicin Tratamiento
Normal
Medio
cido
Medio
bsico
Ninguno
agua, por 24 horas
agua, por 24 horas
SSM-4
1.0
100.0
Oxidativas
de Hidrogeno al 3% (v/v) y
SSM-5
SSM-6
Muestra de
550mg
1.0
100.0
Calor

1.0
100.0
Luz solar
luz solar directa.
SSM-7
SSM-8
1.0
1.0
100.0
100.0
Luz
254nm
Luz
365nm

luz solar directa.
luz solar directa.
SSM-9
1.0
100.0
Oxidativas
tricloruro frrico al 1% (w/v) y

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Vigencia: 2016--01-
Pgina 16 of 34
Tabla 6. Condiciones de degradacin Solucin Stock Materia prima

Identificacin
Solucin
Alcuota
Volumtrica
Stock
(mL)
final (mL)
SSMP-1
1.0
SSMP-2
1.0
SSMP-3
1.0
100.0
100.0
100.0
Condicin
Tratamiento
Normal
Ninguno
Medio
cido
Medio
bsico

agua, por 24 horas
agua, por 24 horas
SSMP-4
1.0
100.0
Oxidativas
de Hidrogeno al 3% (v/v) y
SSMP-5
SSMP-6
Materia
Prima
1.0
100.0
Calor

1.0
100.0
Luz solar
luz solar directa.
SSMP-7
SSMP-8
1.0
1.0
100.0
100.0
Luz
254nm
Luz
365nm

luz solar directa.
luz solar directa.
SSMP-9
1.0
100.0
Oxidativas
tricloruro frrico al 1% (w/v) y

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Vigencia: 2016--01-
Pgina 17 of 34
9.2.2. Procedimiento.
Inyectar las soluciones diluyentes, estndar, placebos y muestra en el siguiente orden:
Corrida de la solucin stock placebo.
Solucin
Inyeccin
SSP-1
Diluyente
SSP-2
Diluyente
SSP-3
Diluyente
SSP-4
Diluyente
SSP-5
Diluyente
SSP-6
Diluyente
SSP-7
Diluyente
SSP-8
Diluyente
SSP-9
Estndar 1
Corrida de la solucin stock muestra.

Solucin
Inyeccin
SSM-1
Diluyente
SSM-2
Diluyente
SSM-3
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Vigencia: 2016--01-
Pgina 18 of 34
Diluyente
SSM-4
Diluyente
SSM-5
Diluyente
SSM-6
Diluyente
SSM-7
Diluyente
SSP-8
Diluyente
SSM-9
Corrida de la solucin stock materias primas.
Solucin
Inyeccin
SSMP-1
Diluyente
SSMP-2
Diluyente
SSMP-3
Diluyente
SSMP-4
Diluyente
SSMP-5
Diluyente
SSMP-6
Diluyente
SSMP-7
Diluyente
SSMP-8
Diluyente
SSPM-9
Estndar 1
PRO-KJYE07

Vigencia: 2016--01-
Pgina 19 of 34
9.2.3 Criterio de Aceptacin

El mtodo es capaz de detectar nicamente al analito o en su defecto, separarlos de las impurezas y
productos de degradacin, que aparecen durante la degradacin artifial.
9.2.4 Reporte de Resultados
Se debe hacer un reporte con los resultados obtenidos en la tabla 10.
9.3
LINEALIDAD
9.3.1. Soluciones
Solucin stock (Concentracin = 280 g/mL)
Transferir aproximadamente 28mg de ER USP NAPROXENO SDICO, a un matraz de 100mL,
adicionar 50 mL de solucin diluyente y agitar hasta disolver, aforar a volumen con solucin
diluyente y homogenizar.
Solucin estndar interno: Diluir 5.0 mL de Butirofenona con acetonitrilo en un matraz para
obtener 100mL, aforar y homogenizar, diluir 1.0 mL de esta solucin en un matraz para obtener
100 mL, aforar y homogenizar. Cada mL de esta solucin contiene 0.05 L de Butirofenona.
Preparaciones de las diluciones:
1. Solucin Estndar al 50% (Concentracin = 14 g/mL)
En un matraz de 100 mL, colocar 5 mL de la solucin Stock ms 2.0 mL de solucin estndar
interno exactamente medidos, aforar con la fase mvil y homogenizar.
2. Solucin estndar al 75% (Concentracin = 21 g/mL)
En un matraz de 200 mL, colocar 15 mL de la solucin STOCK exactamente medidos ms 4.0 mL
de solucin estndar interno, aforar con la fase mvil y homogenizar.
3. Solucin estndar al 100%( Concentracin = 28 g/mL)
En un matraz de 100 mL, colocar 10mL de la solucin STOCK exactamente medidos ms 2.0 mL
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4. Solucin estndar al 125% (Concentracin =35 g/mL)

5. Solucin estndar al 150% (Concentracin =42 g/mL)
.Inyectar las soluciones en el orden de inyeccin siguiente:
Solucin
Replicas
Inyeccin
Diluyente
Estndar
Nivel 50%
Nivel 50%
Nivel 50%
Nivel 80%
Nivel 80%
Nivel 80%
Nivel 100%
Nivel 100%
Nivel 100%
Nivel 120%
Nivel 120%
Nivel 120%
Nivel 150%
Nivel 150%
Nivel 150%
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9.3.3. Clculos.
Graficar las reas obtenidas versus la concentracin de cada solucin, y calcule los siguientes
valores empleando el mtodo de los mnimos cuadrados:
Coeficiente de Correlacin: (r)
Coeficiente de determinacin: (r2)
Intercepto: (a)
Pendiente: (b)
Factor de respuesta: (f)
Desviacin estndar relativa de los factores de respuesta
Desviacin estndar del intercepto: (Sa)
Varianza: (S2yx)
Desviacin estndar de la pendiente: (Sb)
Desviacin estndar del intercepto: (Sa)
La regresin lineal y el valor nominal de la ecuacin al 100% (Obtenido a partir de la ecuacin).
Intercepto expresado como porcentaje de 100%.
Desviacin estndar residual (RSD).
9.3.4. Criterio de aceptacin
Coeficiente de correlacin: (r)
r0.990
Coeficiente de determinacin: (r2)
r20.980
Diagrama de residuales
La distribucin de los puntos debe ser al azar y no refleja ninguna tendencia
Prueba de la pendiente
La desviacin estndar relativa (RSD) de los factores de respuesta es menor o igual a 2.0%
Prueba Proporcionalidad:
El valor de la interseccin, expresado como un porcentaje del valor y del 100%, es inferior o igual
al 2,0%.
La desviacin estndar residual de la interseccin es menor que o igual a 2.0%.
9.3.5. Reportar los resultados
Reportar los resultados obtenidos en la tabla 11.
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9.4 EXACTITUD (Porcentaje de recuperacin).

9.4.1. Soluciones
Preparacin de la solucin Stock enriquecida
Pesar y reducir a polvo fino no menos de 20 Tabletas placebo. Transferir una porcin del polvo
placebo pesada con exactitud de 747.21 mg equivalente a una tableta, agregar 280 mg de
Naproxeno estndar USP a un matraz volumtrico de 100 mL. Agregar 10 mL de agua y agitar
hasta que el material se disperse completamente. Diluir a volumen con acetonitrilo y mezclar.
Solucin exactitud nivel 50%:
Transferir una alcuota de 1.0 mL del sobrenadante de la solucin Stock enriquecida a una
volumtrica de 200-mL, aforar a volumen con Solucin Diluyente y mezclar.
(Esta solucin contiene una concentracin terica de aproximadamente 14 g de Naproxeno por
mL).
Solucin exactitud nivel100%:
(Esta solucin contiene una concentracin terica de aproximadamente 28 g de Naproxeno por
mL).
Solucin exactitud nivel 150%:
(Esta solucin contiene una concentracin terica de aproximadamente 42 g de Ibuprofeno por
mL).
Inyectar las soluciones en el sistema Cromatogrfico para cada presentacin en el siguiente
orden:
Solucin
Replicas
# Inyeccin
Diluyente
Estndar
SEN 50%
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9.4.3
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SEN 50%
SEN 50%
SEN 100%
SEN 100%
SEN 100%
SEN 150%
SEN 150%
SEN 150%
Clculos
Calcular la concentracin obtenida de Naproxeno en cada nivel en mg/mL

Calcular el porcentaje de Naproxeno en cada nivel, mediante la siguiente formula:
Porcentaje (%) :
Concentrac in Obtenida(m g/mL)

x100
Concentrac in teorica(mg/mL)
Calcular el porcentaje recuperacin promedio para el Naprofeno en cada nivel (Redondear los
valores a una cifra significativa).
Calcular el valor de RSD % para cada nivel (Redondeado a una sola cifra significativa).
9.4.4
Criterio de Aceptacin
El porcentaje recuperacin promedio para quince valores debe estar entre el rango de
98.0%-102.0%.
El RSD total para el porcentaje recuperado de los nueve datos obtenidos debe ser menor
o igual 2.0%.
Al graficar la cantidad recuperada contra la cantidad adicionada, debe obtenerse un
coeficiente de correlacin de 1.00, una pendiente de 1.00 y el intercepto debe ser 0.00. Lo
cual puede ser corroborado estadsticamente.
9.4.5
Reporte de resultados

9.5
PRECISION
9.5.1. PRECISION INSTRUMENTAL
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9.5.1.1. Solucin estndar

Transferir 1,0 mL de la solucin stock del estndar y 2,0 mL de la Solucin de estndar interno a
un matraz volumtrico de 100 mL, diluir a volumen con Fase mvil y mezclar.
9.5.1.2.
Procedimiento

Solucin diluyente
1 Inyeccin
Solucin estndar
5 Inyeccin
Solucin estndar
1 Inyeccin
Solucin estndar
1 Inyeccin
Solucin estndar
10 Inyeccin
9.5.1.3.
Criterio de Aceptacin
El RSD 1.0%.
9.5.1.4. Reporte de Resultados
Reportar los resultados obtenidos.
9.5.2. REPETIBILIDAD
9.5.2.1.
Soluciones.
Solucin estndar:
Disolver una cantidad de ER Naproxeno USP pesada con exactitud en Mezcla de disolventes para
obtener una solucin con una concentracin conocida de aproximadamente 2,8 mg por mL.
Transferir 1,0 mL de la solucin resultante y 2,0 mL de la Solucin de estndar interno a un matraz
volumtrico de 100 mL, diluir a volumen con Fase mvil y mezclar.
Solucin Muestra:
Pesar y reducir a polvo fino no menos de 20 Tabletas. Transferir una porcin del polvo, pesada con
exactitud, que equivalga aproximadamente a 280 mg de naproxeno sdico, a un matraz volumtrico
de 100 mL. Agregar 10 mL de agua y agitar hasta que el material se disperse completamente. Diluir
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a volumen con acetonitrilo y mezclar. Dejar que el material insoluble sedimente y luego transferir 1,0
mL del sobrenadante transparente a un matraz volumtrico de 100 mL, agregar 2,0 mL de la
Solucin de estndar interno, diluir a volumen con Fase mvil y mezclar.
(Esta solucin contiene una concentracin terica de aproximadamente 28,0 g de Naproxeno por
mL).
9.5.2.2. Procedimiento
Solucin diluyente
1 inyeccin
Solucin estndar
5 inyecciones
Solucin estndar
1 inyeccin
Solucin estndar
1 inyeccin
Solucin muestra
1 inyeccin
Solucin muestra
1 inyeccin
Solucin muestra
1 inyeccin
Solucin muestra
1 inyeccin
Solucin muestra
1 inyeccin
Solucin muestra
1 inyeccin
Solucin estndar
1 inyeccin
9.5.2.3. Criterio de Aceptacin

El RSD 2.0%.
9.5.2.4. Reporte de resultados
9.5.3. PRECISION INTERMEDIA
9.5.3.1. Solucin
Preparar tres soluciones de muestras a niveles de 50%, 100%, y 150% como se describe en el
item 9.4.1.por dos analistas en dos das.
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9.5.3.2. Procedimiento
Analista 1
Da 1
Solucin
Analista 2
Da 2
Inyecciones
Da 1
Da 2
Solucin
Inyecciones
Solucin
Inyecciones
Solucin
Inyecciones
diluyente
diluyente
diluyente
diluyente
Estndar
Estndar
Estndar
Estndar
Estndar
Estndar
Estndar
Estndar
Estndar
Estndar
Estndar
Estndar
Muestra
Muestra
Muestra
Muestra
50 %
Muestra
50 %
100%
Muestra
Muestra
50 %
100%
150%
Muestra
150%
Muestra
50 %
100%
Muestra
150%
Muestra
100%
Muestra
150%
9.5.3.3. Clculos.
Calcular el % de recuperacin de los 6 resultados para cada nivel segn la formula estipulada en el
tem 9.4.3.
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9.5.3.4. Criterio de Aceptacin

Valor total del RSD para todos los datos debe ser menor o igual al 3.0%
9.5.3.5. Reporte de Resultados
9.6. ESTABILIDAD DE LAS SOLUCIONES
9.6.1. Soluciones
mezclar.
Solucin muestra: transferir 1,0 mL del sobrenadante transparente de la solucion stock muestra
por mL).
Table 7.Los parmetros y condiciones de almacenamientos a ser evaluados son:
Parmetros a evaluar y condiciones de estabilidad
Solucin prueba
Condicin de estabilidad
Solucin estndar
Volumtrica ubicada en el
laboratorio a temperatura
Solucin muestra
ambiente
inyecciones
Tiempo (das)
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Solucin de trabajo estndar:

Para la solucin estndar, inyectar 3 rplicas de la solucin preparada, y se cuantifica con una
solucin estndar de Ibuprofeno recin preparada. Los resultados se expresan como un porcentaje.
Solucin de muestra
Cuantificar cada solucin en contra de una solucin estndar recin preparado, a los cuatro y los
ochos das en las condiciones de almacenamiento sealadas. Los resultados se expresan en
porcentaje.
9.6.3. Clculos
Calcular la media aritmtica (valores redondeados a un dgito significativo) del primer anlisis (Y
promedio)
ya la condicin de almacenamiento (Y i promedio). Calcular la diferencia de la media aritmtica
de la condicin de almacenamiento en el anlisis inicial, utilizando la frmula siguiente:
d i Yi average Yo average
9.6.4. Criterio de Aceptacin
La solucin propuesta (estndares y muestras) son estable hasta un cierto momento del anlisis,
si el valor para di en un tiempo de anlisis es menor que o igual a 3.0%.
9.6.5. Reporte de resultados
9.7. ROBUSTEZ
9.7.1. Solucin
mezclar.
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Solucin muestra: transferir 1,0 mL del sobrenadante transparente de la solucion stock muestra
por mL).
Inyectar muestras por duplicado.
Los parmetros del mtodo analtico a modificar, en sus valores son resumidos en la tabla 8.
Tabla 8. Parmetros de Robustez
Valor Valor
Valor Valor Valor Valor
2*
Temperatura de la Columna (C)
15
17
19
21
23
25
27
29
Flujo (mL/min)
0.6
0.8
1.0
1.2
1.4
1.6
1.8
2.0
Volumen de Inyeccin (L)
17
18
19
20
21
22
23
24
Parmetros
Valor7
Valor
8
* Valores especificados en el mtodo. Item 8.1.2

9.7.3. Clculos
Calcular los parmetros de adecuabilidad del sistema, y los mg por tableta en cada experimento,
deben cumplir con las especificaciones indicadas en el mtodo analtico.
9.7.4. Criterio de Aceptacin
Las especificaciones de la adecuabilidad del sistema y los resultados para el producto terminado
deben cumplir con lo indicado en el mtodo analtico.
9.7.5. Reportar los resultados
10.
REGISTROS DE MODIFICACIONES
Reportar cualquier desviacin al protocolo
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Tabla 9. Registro de modificacin.

Cdigo
Fecha
No.
modificacin
11.
de Numero
de Descripcin
modificacin
de Responsable
la modificacin
para
aprobar los cambios
ANEXOS
Tabla 10. Reporte de los test de Indicadores de estabilidad

Producto Final
Condiciones de Estrs
Concentracin
Remanente (%)
Ninguno
Adicionar 10mL HCl 0.1N, y calentar a 70C en bao de
agua, por 24 horas
Adicionar 10mL NaOH 0.1N, y calentar a 70C en bao
de agua, por 24 horas
Adicionar 10mL de Perxido de Hidrogeno al 3% (v/v) y
Exponer por 24 horas en una volumtrica transparente, a
la luz solar directa.
Adicionar 1mL de solucin de tricloruro frrico al 1%
(w/v) y calentar a 70C por 12 horas.
Pureza
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Tabla 11. Reporte de resultados para linealidad

Factor de
X (Concentracin)
Y (area)
XY
X2
Y2
Respuesta (f)
(Y/X)
50%
50%
50%
80%
80%
80%
100%
100%
100%
120%
120%
120%
150%
150%
150%
Coeficiente de Correlacin (r)
Intercepto (a)
Pendiente (b)
Varianza residual (S2y,x)
Desviacin estndar de la pendiente (Sb)
Desviacin estndar del intercepto (Sa)
Ecuacin de la lnea recta
Valor Nominal obtenido a partir de ecuacin
[(a)/Valor Nominal]x100
[(Sa)/Valor Nominal]x100
RSD de los factores de respuestas
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Tabla 12. Reporte de resultados para la Exactitud

No.
NIVEL (%) REPLICAS
RECUPERACION
(%)
CRITERIO
% RSD
ACEPTACIN
I (50%)
El promedio
Promedio
recuperado es entre
98.0% y 102.0%
para cada nivel
I (100%)
evaluado y el RSD
Promedio
para los nueve

niveles es menor o
igual a 2.0%
I (150%)
Promedio
Referencia
CONCLUSION
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Tabla 13. Reporte de resultados para la repetibilidad

Inyeccin
No.
Area
RSD
Criterio de
Aceptacin
Conclusin
1
2
3
4
5
El RSD debe ser
menor de 1.0%
7
8
9
10
Referencia
Tabla 14. Reporte de resultados para la precisin intermedia

Resultados de la Precisin Intermedia
Da 1
Da 2
Promedio
Promedio
RSD
RSD
Promedio
Promedio
RSD
RSD
Analista 1
HPLC 1
Analista 2
Referencia
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Tabla 15. Reporte de resultados de la estabilidad de soluciones

Tiempo de almacenamiento
Replica No.
condicin 1
Inicial (%y0)
4 das
Criterio de
Aceptacin
8 das
Conclusin
1
2
di (para
cada
Promedio
y0-promedio=
y1-promedio=
y2-promedio=
tiempo) es
di=[yipromedio-
menor o
y0promedio]
d1=
d2=
igual a 2.0%
Tabla 16. Reporte de los resultados de Robustez

Resultados
Parmetros
Especificacin
Exp 1
La Resolucin, R, entre el pico de

Resolucin
Ibuprofeno e Ibuprofeno Impureza B

es mayor o igual a 2.5.
Desviacin
Estndar
Relativa de las
reas (RSD)
Asimetra
El valor de RSD (Relative Standard

Deviation)
entre
obtenidas
para
las
cinco
el
reas
pico
de
Ibuprofenodebe ser menor o igual a

2.0%.
La
asimetra
para
el
pico
Ibuprofeno debe ser menor de 2.0.
de
Nominal
Exp 2

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P RO TO CO LO DE V AL I D AC I N

PROTOCOLO DE VALIDACIN DEL MTODO

Aprobado por: _______________________________________Fecha:___________________

PROTOCOLO DE VALIDACIN DEL MTODO

PRINCIPIO DEL METODO ......................................................................................................... 5

Analista de producto terminado ............................................ Error! Bookmark not defined.

Coordinador de validacin de mtodos analticos ................................................................. 5

Jefe de desarrollo analtico ................................................................................................... 5

Jefe de Cumplimiento ........................................................................................................... 6

CATEGORIAS DEL METODO ANALITICO................................................................................. 6

MATERIAS PRIMAS ............................................................................................................. 7

METODO DE ANALISIS. ............................................................................................................ 8

Mtodo de anlisis del producto final. ................................................................................... 8

Preparacin de las soluciones ....................................................................................... 8

Sistema Cromatografico ................................................................................................ 9

PARAMETROS A EVALUAR .................................................................................................... 10

PROTOCOLO DE VALIDACIN DEL MTODO

Criterios de aceptacion ................................................................................................ 13

SELECTIVIDAD INDICADORES DE ESTABILIDAD ....................................................... 13

Criterio de aceptacion ................................................................................................. 19

Reporte de resultados ................................................................................................ 19

Criterio de aceptacin .................................................................................................. 21

Reportar los resultados................................................................................................ 21

EXACTITUD DEL METODO ............................................................................................... 22

Criterio de Aceptacin .......................................................................................... 23

Reporte de resultados .......................................................................................... 23

PRECISION INSTRUMENTAL .................................................................................... 23

Criterio de Aceptacin .......................................................................................... 24

PROTOCOLO DE VALIDACIN DEL MTODO

Criterio de Aceptacin .......................................................................................... 25

Reporte de resultados .......................................................................................... 25

PRECISION INTERMEDIA .......................................................................................... 25

Criterio de Aceptacin .......................................................................................... 27

Reporte de Resultados ......................................................................................... 27

ESTABILIDAD DE LAS SOLUCIONES............................................................................... 27

Criterio de Aceptacin ................................................................................................. 28

Reporte de resultados ................................................................................................. 28

Criterio de Aceptacin ................................................................................................. 29

Reportar los resultados................................................................................................ 29

REGISTROS DE MODIFICACIONES ................................................................................... 29

PROTOCOLO DE VALIDACIN DEL MTODO

2. PRINCIPIO DEL MTODO

3.1. Analista de producto terminado.

PROTOCOLO DE VALIDACIN DEL MTODO

3.4. Jefe de Cumplimiento

4. CATEGORIAS DEL METODO ANALITICO

El mtodo que se desea validar se encuentra dentro de la categora I, que corresponde a la

cido actico glacial.

PROTOCOLO DE VALIDACIN DEL MTODO

5.2. MATERIAS PRIMAS

Tabla 1. Materias primas a emplear. FORMULACION

MACROGOL 400/DIXIDO DE TITANIO/

NAPROXENO SDICO USP

PROTOCOLO DE VALIDACIN DEL MTODO

NOTA: Almacenar protegido de la luz.

NAPROXENO SODICO 550mg

Los equipos a utilizar son:

HPLC DETECTOR ULTRAVIOLETA / VISIBLE

PROTOCOLO DE VALIDACIN DEL MTODO

L1 (4.6mm x 150 mm)

Ultravioleta, 254 nm.

Acetonitrilo: Agua: cido actico glacial 50:49:1

PROTOCOLO DE VALIDACIN DEL MTODO

no menos de 4000 platos tericos

Aprobado por: _____________________Fecha:_