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CONVENIO CARDER- UTP INFORME FINAL Escuela de Tecnologa Qumica
VALIDACION DE LA METODOLOGIA POR EL METODO ESTANDAR 3111 ABSORCION ATOMICA PARA EL ANALISIS DE METALES PESADOS EN MUESTRAS DE AGUAS Y AGUAS RESIDUALES.
PRESENTADO POR: DIEGO MAURICIO GOMEZ H.
CORPORACION AUTONOMA REGIONAL DE RISARALDA CARDER UNIVERSIDAD TECNOLOGICA DE PEREIRA FACULTAD DE TECNOLOGIAS ESCUELA DE TECNOLOGIA QUIMICA PEREIRA, 2011
PRESENTADO POR: DIEGO MAURICIO GOMEZ H.
Proyecto de Trabajo de Grado para optar Por el ttulo de Tecnlogo Qumico
PRESENTADO A: LINA MARCELA URIBE R. Tecnloga Qumica Profesional en Salud Ocupacional - Directora del laboratorio de Anlisis de Aguas CARDER
CARLOS HUMBERTO MONTOYA. Qumico Industrial - Director de laboratorio de Agua y Alimentos U.T.P.
CORPORACION AUTONOMA REGIONAL DE RISARALDA CARDER UNIVERSIDAD TECNOLOGICA DE PEREIRA FACULTAD DE TECNOLOGIAS ESCUELA DE TECNOLOGIA QUIMICA PEREIRA, 2011
Nota de Aceptacin. __________________ __________________ __________________
__________________ Presidente del Jurado.
__________________ Jurado.
__________________ Jurado.
Ciudad: _______________, (da) _____ de __________ 20_____.
CONTENIDO
1. 2. 3. 4. 5. 5.1. RESUMEN JUSTIFICACION CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES PRESUPUESTO PARA EL PROYECTO INTRODUCCION OBJETIVOS 5.1.1. Objetivo General. 5.1.2. Objetivos Especficos. MARCO TEORICO 5.2.1. Teora sobre Absorcin Atmica 5.2.2. Instrumentacin. 5.2.2.1. Reguladores de Presin y Rotmetros. 5.2.2.2. Sistema de Nebulizacin Quemador. 5.2.2.3. Fuentes de luz para Absorcin Atmica. 5.2.2.4. Sistema ptico. 5.2.2.5. Sistema de Fotodetector, Amplificador Y de lectura. 5.2.3. Interferencias en Espectrometra De Absorcin Atmica. 5.2.3.1. Interferencias Fsicas. 5.2.3.2. Interferencias Qumicas. RESULTADOS Y ANALISIS. 6.1. OBJETIVO DEL METODO. 6.2. ALCANCE. 6.3. GENERALIDADES. 6.4. MATERIALES Y EQUIPOS. 6.4.1. Equipos. 6.4.2. Reactivos. 6.4.3. Material de Vidrio. 6.5. PROCEDIMIENTO (Tratamiento de Muestra). 6.5.1. Preservacin de la Muestra. 6.5.2. Tratamiento de Muestra. 6.6. RESULTADOS DE VALIDACION. 6.6.1. Criterios de Aceptacin. 6.6.2 Validacin de Hierro (Fe). 6.6.2.1. Curva de Calibracin Fe. 6.6.2.2. Sensibilidad. 6.6.2.3. Lmite de Deteccin Instrumental. 6.6.2.4. Lmite de Cuantificacin. 6.6.2.5. Registro de Resultados Pg. 1. Pg. 2. Pg. 3. Pg. 4. Pg. 5. Pg. 5. Pg. 5. Pg. 5. Pg. 6. Pg. 6. Pg. 9. Pg. 10. Pg. 10. Pg. 11. Pg. 12. Pg. 13. Pg. 13. Pg. 13. Pg. 14. Pg. 16. Pg. 16. Pg. 16. Pg. 17. Pg. 18. Pg. 18. Pg. 18. Pg. 18. Pg. 18. Pg. 18. Pg. 19 Pg. 20. Pg. 20. Pg. 20. Pg. 21. Pg. 22. Pg. 23. Pg. 24.
5.2.
6.
Validacin Hierro (Fe). 6.6.2.6. Parmetros Estadsticos de la Validacin de Hierro (Fe). 6.6.3. Validacin de Manganeso (Mn). 6.6.3.1. Curva de Calibracin Mn. 6.6.3.2. Sensibilidad. 6.6.3.3. Lmite de Deteccin Instrumental. 6.6.3.4. Lmite de Cuantificacin. 6.6.3.5. Registros de Resultados Validacin Manganeso (Mn). 6.6.3.6. Parmetros Estadsticos de la Validacin de Manganeso (Mn). 6.6.4. Validacin de Potasio (K). 6.6.4.1. Curva de Calibracin de K. 6.6.4.2. Sensibilidad. 6.6.4.3. Lmite de Deteccin Instrumental. 6.6.4.4. Lmite de Cuantificacin. 6.6.4.5. Registro de Resultados Validacin Potasio (K). 6.6.4.6. Parmetros Estadsticos de la Validacin de Potasio (K). 6.6.5 Validacin de Sodio (Na). 6.6.5.1. Curva de Calibracin de Na. 6.6.5.2. Sensibilidad. 6.6.5.3. Lmite de Deteccin Instrumental. 6.6.5.4. Lmite de Cuantificacin. 6.6.5.5. Registro de Resultados Validacin Sodio (Na). 6.6.5.6. Parmetros Estadsticos de la Validacin de Sodio (Na). 6.6.6. Validacin de Magnesio (Mg). 6.6.6.1. Curva de Calibracin de Mg. 6.6.6.2. Sensibilidad. 6.6.6.3. Lmite de Deteccin Instrumental. 6.6.6.4. Lmite de Cuantificacin. 6.6.6.5. Registro de Resultados Validacin de Magnesio (Mg). 6.6.6.6. Parmetros Estadsticos de la Validacin de Magnesio (Mg). 6.6.7. Validacin de Calcio (Ca). 6.6.7.1. Curva de Calibracin de Ca.
Pg. 26. Pg. 27. Pg. 29. Pg. 29. Pg. 30. Pg. 30. Pg. 31. Pg. 33. Pg. 34. Pg. 35. Pg. 35. Pg. 36. Pg. 36. Pg. 37. Pg. 39. Pg. 40. Pg. 41. Pg. 41. Pg. 42. Pg. 42. Pg. 43. Pg. 45. Pg. 46. Pg. 47. Pg. 47. Pg. 48. Pg. 48. Pg. 49. Pg. 51. Pg. 52. Pg. 53. Pg. 53.
6.6.7.2. Registro de Resultados Validacin de Calcio (Ca). 7. CONCLUSIONES. 8. GLOSARIO. 9. BIBLIOGRAFIA.
Pg. 54. Pg. 55. Pg. 57. Pg. 60.
1. RESUMEN
La validacin es la comprobacin de que un mtodo analtico provee datos objetivos dando cumplimiento a requisitos particulares del mismo, para darle un uso especfico. Por tal motivo se realiz la revisin documental para conocer el mtodo de espectroscopia de absorcin atmica (E.A.A.) por la tcnica de llama. Posterior a esto se efectu la induccin para poder operar el equipo de absorcin atmica correctamente y as empezar con la estandarizacin y validacin de la tcnica de E.A.A. por el mtodo 3111 para el anlisis de muestras de agua (superficiales, subterrneas y residuales) implementado en el Laboratorio de Anlisis de Aguas (L.A.A.) de la Corporacin Autnoma Regional de Risaralda (CARDER). En la validacin se realiz la revisin documental, para saber cmo tratar la muestra de agua sea superficial, subterrneo y/o residual para poder aislar el analito de inters que en este caso es un metal pesado para proceder a cuantificarlo. Hecho esto, se efectuaron mediciones de acuerdo con el plan de validacin establecido en el L.A.A. con el fin de obtener una poblacin de datos significativa para analizar. Terminada la etapa prctica de validacin del mtodo de E.A.A. se hizo el anlisis estadstico de los datos, para verificar el cumplimiento con los criterios de aceptacin adoptados en el L.A.A. orientado a la inclusin de este anlisis dentro del alcance de anlisis acreditados en el laboratorio, ante el Instituto de Hidrologa, Meteorologa y Estudios Ambientales IDEAM.
2. JUSTIFICACION
Los laboratorios de anlisis pertenecientes al SINA (Sistema Nacional Ambiental) deben estar normalizados, intercalibrados y acreditados para lo cual deben contar con un sistema de gestin de calidad, que validar su metodologa y confiabilidad mediante sistemas de referencia establecidos por el instituto de Hidrologa, Meteorologa y Estudios Ambientales (IDEAM). Para ello se producirn normas y procedimientos especificados en manuales e instructivos.1 Por esta razn los laboratorios de anlisis deben poseer un sistema de calidad cuyo fin primordial es generar resultados reproducibles y confiables. La forma de obtener estas caractersticas es la validacin del mtodo analtico utilizado en el laboratorio, proceso que establece por medio de estudios en el laboratorio que las caractersticas de funcionamiento como son la exactitud y confianza del mtodo, y de comportamiento de un procedimiento, cumplen con los requisitos, siendo adecuadas para la aplicacin analtica. Los mtodos empleados por el L.A.A. de la CARDER son normalizados por lo tanto se necesita establecer informacin en cuanto al analista, los equipos y los reactivos a utilizar en la estandarizacin y posterior validacin siguiendo el protocolo de validacin implementado en el laboratorio. La realizacin de actividades de validacin de los mtodos de ensayo realizados por el propio laboratorio, contemplan la satisfaccin de las necesidades del cliente y la adecuacin para realizar los ensayos previstos. Para el caso de las metodologas de ensayo desarrolladas por el laboratorio los mtodos deben ser adecuada y totalmente validados as como los equipos antes de su uso.
Escala de Tiempo 1 Mes 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
Actividad Semanas 44 43 42 41 40 39 38 37 36 35 34 33 32 31 30 29 28 27 26 25 24 23 22 21 20 19 18 17 16 15 14 13 12 11 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X
1. Realizacin del anteproyecto
2. Adquisicin de conocimiento.
3. Reunin con Directores de la Validacin.
4. Revisin del anteproyecto por los directores del proyecto.
CONVENIO CARDER- UTP
INFORME FINAL
5. Correcciones al anteproyecto.
Escuela de Tecnologa Qumica
6. 2 Revisin del anteproyecto por los directores del proyecto.
7. Informe de avances
X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X
8. Ejecucin del Proyecto de Validacin
3. CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES
X X X X X X X X
9. Tratamiento estadstico de los datos de la validacin. 10. Presentacin y revisin informe final.
11.
4. PRESUPUESTO PARA EL PROYECTO

Nombre del Proyecto: VALIDACION DE LA METODOLOGIA POR EL METODO ESTANDAR 3111 ABSORCION ATOMICA PARA EL ANALISIS DE METALES PESADOS EN MUESTRAS DE AGUAS Y AGUAS RESIDUALES.
Responsable del Proyecto: DIEGO MAURICIO GOMEZ HERNANDEZ.
Total CONTRATACIN DE PERSONAL Auxiliar Monitores Profesionales Director del proyecto TOTAL No. Personas 1 1 1 Valor/Hora o Mes 500.000 No. Horas o meses 6 0 3.000.000 0 3.000.000
Aportes UTP (especie)
Recursos CARDER
3.000.000 0 0 0 3.000.000
Resumen de los Costos:

Total Contratacin personal Materiales y suministros Mantenimiento Servicios pblicos Arrendamiento Viticos y gastos de viaje Impresos y publicaciones Comunicaciones y transporte Otros TOTAL COSTOS 3.000.000 0 0 0 0 0 0 0 0 3.000.000 Aportes UTP (especie) 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Recursos CARDER 3.000.000 0 0 0 0 0 0 0 0 3.000.000
5. INTRODUCCION
5.1. OBJETIVOS
5.1.1 Objetivo General.
Validar la metodologa por el mtodo estndar 3111A Absorcin Atmica para el anlisis de metales pesados en muestras de aguas y aguas residuales en el Laboratorio de Anlisis de Aguas de la Corporacin Autnoma Regional de Risaralda CARDER.
5.1.2. Objetivos Especficos.
Conocer y aprender a operar correctamente el equipo de Espectroscopia de Absorcin Atmica (EAA) con sus diferentes mtodos analticos para cuantificar metales pesados en muestras de aguas y aguas residuales. Revisar y aplicar el procedimiento de validacin de Mtodos del L.A.A. de la CARDER para la metodologa analtica de E.A.A. Validar el mtodo de llama empleado en la tcnica de E.A.A. para determinar el contenido de metales pesados tales como Hierro, Manganeso, Sodio, Potasio, Calcio y Magnesio, en muestras de aguas (superficiales, subterrneas y residuales) del L.A.A. de la CARDER. Efectuar el anlisis estadstico de valores medios, desviacin estndar, porcentaje de coeficiente de variacin, porcentaje de error y porcentaje de recuperacin, de los datos obtenidos de la validacin. Elaborar el informe de los resultados de la validacin de cada uno de los metales analizados utilizados en la tcnica de E.A.A.
5.2. MARCO TEORICO

Los mtodos espectromtricos son un amplio grupo de mtodos analticos que se basan en las espectroscopias atmica y molecular. La espectroscopia es un trmino general para la ciencia que trata de las distintas interacciones de la radiacin con la materia. Histricamente las interacciones de inters se producan entre la radiacin electromagntica y la materia, sin embargo, ahora el termino espectroscopia se ha ampliado para incluir las interacciones entre la materia y otras formas de energa. Ejemplos de ellos son las ondas acsticas y los haces de partculas como iones o electrones. La espectrometra y los mtodos espectromtricos hacen referencia a la medida de la intensidad de la radiacin mediante un detector fotoelctrico o con otro tipo de dispositivo electrnico. 2
5.2.1. Teora sobre Absorcin Atmica. El principio en el cual se basa la espectroscopia de absorcin atmica (E.A.A.) es el siguiente: La muestra es aspirada y atomizada a travs de una llama; mediante un monocromador se dirige un rayo de luz a travs de la llama y sobre un detector se mide la cantidad de luz absorbida.3 La absorcin depende de los tomos libres no excitados, pero en general la relacin entre tomos no excitados y tomos excitados, en un momento determinado, es muy alta. Como la longitud de onda del rayo de luz es caracterstica solamente de cada metal por determinar, la energa luminosa absorbida por la llama es una medida de la concentracin del metal en la muestra. Cuando a un tomo se le suministra energa suficiente para que sus electrones de la capa exterior salten a un nivel de mayor energa, se produce una absorcin de luz que le permite permanecer en un estado llamado excitado. E + energa = E excitado. Una vez que el electrn alcanza un nivel superior de energa, permitiendo la existencia del tomo excitado, queda en capacidad de regresar a la capa externa, o sea retornar a su nivel normal, emitiendo una energa igual a la absorbida cuando fue excitado. E excitado = E + energa
La atomizacin de la solucin sobre una llama permite eliminar sustancias interferentes que podran acompaar los iones que se quieren analizar. La fuente de luz facilita la irradiacin de los tomos con luz de longitud de onda igual a la requerida para excitarlos y de esta manera la luz absorbida es proporcional a la concentracin del metal.4 En la siguiente figura se muestra ms con exactitud el proceso de atomizacin de la muestra al momento de ser aspirada.
Figura 1. Procesos que tienen lugar en la atomizacin
Disolucin del Analito Nebulizacin Niebla Molculas Excitadas Desolvatacin Aerosol Solido/Gas Volatilizacin Molculas Gaseosas Disociacin (Reversible) tomos Iones Atmicos Ionizacin (Reversible) tomos Excitados Iones Excitados
La fuente de luz emite un rayo de luz intensa y estable, de una longitud de onda determinada; cada elemento que se analiza posee una longitud de onda caracterstica, la cual absorber fcilmente; por ellos para cada elemento debe usarse una fuente diferente de luz, lo cual constituye una desventaja del mtodo. 5 Inicialmente se hace pasar el rayo de la luz a travs de la llama sin muestra y luego con muestra. Como la absorcin de luz es proporcional a la concentracin del metal, la disminucin en intensidad observada por el aparato permite medir la concentracin del metal en la muestra ya sea directamente o por comparacin con curvas de calibracin preparadas con anterioridad.6 Los mtodos cuantitativos basados en la absorcin requieren de dos medidas de potencia: una, antes de que el haz de luz haya pasado a travs del medio que contiene el analito Po y la otra, despus P. la transmitancia y la absorbancia son
los dos trminos que se utilizan ampliamente en la espectrometra de absorcin y se relacionan por la razn Po y P. La velocidad de desplazamiento de la energa de un haz de energa radiante, se denota con el smbolo Po para el rayo incidente y P para la cantidad de energa que queda sin absorber despus de haber pasado la muestra o material absorbente. La relacin del poder de radiacin transmitido por la muestra al poder de radiacin incidente en la misma es la Transmitancia (T).
El Logaritmo (base 10) de la reciproca de la transmitancia es la Absorbancia (A):
La ley fundamental que rige la fotometra de absorcin se llama ley de Beer. Para una radiacin monocromtica, la absorbancia es directamente proporcional al camino ptico b a travs del medio y la concentracin C de la especie absorbente. Estas relaciones estn dadas por:
Donde a es una constante de proporcionalidad denominada absortividad. La magnitud de a claramente depender de las unidades utilizadas para b y C. con frecuencia para disoluciones de una especie absorbente, b se da en centmetros y C en gramos por litro. Las unidades de la absortividad en ese caso son L g-1 cm-1.
Figura 2. Atenuacin de un haz de radiacin por una disolucin absorbente.
b Po P
Disolucin Absorbente de concentracin C.
Esquemticamente, se muestra a continuacin una figura de las partes que componen un espectrofotmetro de absorcin atmica.
Figura 3. Esquema general de un espectrofotmetro de absorcin atmica.
5.2.2. Instrumentacin. Los instrumentos para espectroscopia de absorcin atmica consisten en una fuente de radiacin, una zona de muestra, un selector de longitud de onda, un detector y un procesador de la seal y de la lectura de salida. La zona de muestra en los instrumentos de absorcin atmica es el atomizador que contiene la muestra gaseosa atomizada. En la espectroscopia de absorcin atmica, se hace pasar por la llama la radiacin de una fuente externa de luz, que emite la lnea espectral correspondiente a la energa necesaria para una transicin electrnica del estado normal a un estado excitado. Los gases de la llama se consideran como un medio que contiene tomos libres y no excitados, capaces de absorber radiacin de una fuente externa, cuando dicha radiacin corresponde exactamente a la energa requerida para una transicin del elemento investigado de un estado electrnico normal a un estado mayor de excitacin. La radiacin no absorbida pasa entonces a travs del monocromador, que asla la lnea espectral excitante de la fuente de luz y se enva hacia el detector. La absorcin de radiacin de la fuente de luz depende de la poblacin del estado normal, la cual es proporcional a la concentracin de la solucin rociada en la llama. La absorcin se mide por medio de la diferencia entre las seales transmitidas en presencia y ausencia del elemento analizado. 7
Los mtodos espectromtricos requieren los siguientes componentes: reguladores de presin (compresores), rotmetros para el combustible y los gases oxidantes, sistema de quemador y nebulizador; sistema ptico y detectores fotosensibles; el amplificador y el sistema de lecturas con sus respectivas fuentes de energa. Adems para la absorcin atmica, se necesita una fuente de luz apropiada para cada elemento que se vaya a determinar. 5.2.2.1. Reguladores de Presin y Rotmetro. Para mantener un ambiente trmico constante en la llama, es imperativo que las presiones de los gases y los flujos de los mismos se mantengan constantes mientras se usa el espectrofotmetro de llama. Con los instrumentos de haz doble, este requisito ya no es tan necesario. Se deben instalar reguladores de presin doble de doble diafragma (de 10 lb/plg2 para el combustible y de 30 lb/plg2 para el suministro de oxidante), seguidos por un rotmetro y una vlvula de aguja en las tuberas que van de los cilindros de gas al conjunto de nebulizador y quemador. Los flujos normales varan entre 1 a 4 litros por minuto. El conocimiento de los flujos individuales de combustible y el oxidante permite al operador seleccionar varias mezclas que van desde llamas pobres hasta llamas ricas en combustible. 8 5.2.2.2. Sistema Nebulizador-Quemador El componente ms importante en cualquier espectrmetro de absorcin de llama o absorcin atmica es el sistema del nebulizador y el quemador. Este sistema transforma a la sustancia de la solucin en vapor atmico. No debe existir efecto de memoria; es decir, el contenido de una muestra no debe afectar el resultado de otra muestra. Los otros requisitos del sistema son: facilidad de limpieza, resistencia a la corrosin y facilidad de ajuste. Debido a que la regin optima de la llama que se vaya a usar varia para diferentes elementos, es esencial que la altura del quemador sea ajustable para asegurar la mxima seal de absorcin. El quemador es un quemador de flujo laminar o de premezclado. El aerosol se produce dentro de una cmara de mezclado donde se separan las gotas gruesas de las finas. Las gotas finas son prcticamente una neblina, se mezclan con los gases de la llama y despus se vaporizan. (Ver figura 1) La cabeza del quemador consiste en una ranura donde arde la llama para absorcin atmica la cabezas de los quemadores son alargadas para obtener la mxima cantidad de gases de la llama en la trayectoria de la luz. Este tipo de
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quemador es apropiado para llamas con velocidades de quemado bajas, tales como aire propano, aire acetileno, xido nitroso acetileno. El quemador es por lo regular una ranura de 10 cm, sencilla o triple, de 0.38 a 0.6 mm de ancho en una cabeza fabricada de aluminio o de acero inoxidable; la ranura se acorta a 5 cm cuando se emplea una llama de xido nitroso acetileno. Para prevenir la reversin hacia el quemador y una explosin en la cmara de mezclado, la velocidad de corriente de la mezcla de combustible y oxidante a travs del quemador debe ser por lo menos igual a la velocidad de quemado; sin embargo, para asegurarse de contar con un margen de seguridad y conseguir una llama razonablemente firme, la velocidad de corriente de los gases debe ser varias veces mayor que la velocidad de quemado.9
Figura 4. Quemador de Ranura o Flujo laminar con cmara de nebulizacin.
5.2.2.3. Fuentes de luz para Absorcin Atmica. Para la absorcin atmica, las lneas espectrales de resonancia deben ser angostas comparadas con el ancho de la lnea de absorcin que se vaya a medir. La luz de un elemento especfico no debe sufrir interferencia de otras lneas espectrales no resueltas por el espectrmetro, tales como las lneas que se originan de elementos de impurezas, materiales de los electrodos o de gases portadores. Todas las fuentes de luz deben tener un calentamiento previo, para que su seal de salida sea constante, de aproximadamente de 15 a 30 minutos.
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La lmpara de descarga de ctodo hueco consiste de un nodo y un ctodo cilndrico dentro de una cmara llena de gas. Cada lmpara est fabricada con el elemento al cual se le va a realizar el anlisis puesto que este elemento emite la longitud de onda necesaria para excitar los electrones del mismo elemento y as cuantificarlo.10
Figura 5. Diagrama esquemtico de una lmpara de ctodo hueco.
5.2.2.4. Sistema ptico. La funcin del sistema ptico consiste en seleccionar una cierta lnea en el espectro de emisin y aislarla de las dems lneas. Es posible lograr un mejor aislamiento de la energa espectral con un prisma o un monocromador de rejilla, el cual tambin produce una seleccin continua de longitudes de onda y una oportunidad para medir la radiacin de fondo adyacente a una lnea analtica. La anchura de la rendija espectral del monocromador est determinada por el ancho de la lnea de emisin de la fuente. El monocromador se usa solo para aislar la lnea deseada de otras lneas de emisin y para reducir notablemente el flujo total de luz que llega al detector. Cuando es factible, las rendijas se pueden ensanchar para permitir la entrada de ms luz, esto se traduce en una mejora en la precisin y en el lmite de deteccin.11
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5.2.2.5. Sistema de Fotodetector, Amplificador y de Lectura. El detector ideal debe tener una elevada sensibilidad, una elevada relacin seal/ruido y una respuesta constante en un intervalo considerable de longitudes de onda. Adems, debe tener un tiempo de respuesta rpido y una seal de salida igual a cero en ausencia de iluminacin. Por ltimo, la seal elctrica producida por el transductor debera ser directamente proporcional a la potencia radiante P. Todos los detectores de fotones (tambin denominados detectores fotoelctricos) tienen una superficie activa que es capaz de absorber radiacin. 12 Para una alta sensibilidad y precisin, es esencial contar con un fototubo multiplicador y su correspondiente suministro de energa. Se requieren fuentes de energa estables. Las fluctuaciones de corta duracin se pueden manejar algunas veces con un sistema integrador en el cual la seal de salida del detector se alimenta ya sea a un condensador por un tiempo fijo (unos 30 segundos), midindose la seal resultante, o a un registrados durante 1 a 2 minutos, promediando los trazos. Los instrumentos de lectura pueden ser anlogos o digitales.13 5.2.3. Interferencias en Espectrometra de Absorcin Atmica. En los mtodos de absorcin atmica se presentan dos tipos de interferencias. Las interferencias Espectrales se producen cuando la absorcin o emisin de una especie interferente se solapa o aparece muy prxima a la absorcin o emisin del analito, de modo que su resolucin por el monocromador resulta imposible. Las interferencias qumicas se producen como consecuencia de diversos procesos qumicos que ocurren durante la atomizacin y que alteran las caractersticas de absorcin del analito. 5.2.3.1. Interferencias Espectrales. Dado que las lneas de emisin de las fuentes de ctodo hueco son muy estrechas, es rara la interferencia debida a la superposicin de las lneas. Para que exista esta interferencia, la separacin entre las dos lneas tendra que ser menor de aproximadamente 0.1 Armstrong (A). Las interferencias espectrales tambin se producen debido a la presencia de productos de combustin, que poseen bandas de absorcin anchas, o de productos en forma de partculas que dispersan la radiacin. Ambos disminuyen la potencia del haz transmitido y dan lugar a errores analticos positivos. Cuando la procedencia de estos productos es la mezcla de combustible y oxidante, se puede realizar fcilmente la correccin midiendo la absorbancia de un blanco. Esta
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correccin es necesaria tanto en los instrumentos de haz sencillo como en los de doble haz, ya que estos ltimos el haz de referencia no pasa a travs de la llama. Cuando la absorcin o la dispersin se deben a la matriz de la muestra, entonces el problema es ms complicado. En este caso, la potencia del haz transmitido, Po, se reduce por la presencia de los componentes de la matriz, mientras que la potencia del haz incidente, P, no resulta afectada; por ello, se produce un error positivo en la absorbancia y por consiguiente en la concentracin.14 Afortunadamente, en la atomizacin por llama las interferencias espectrales que provienen de los componentes de la matriz no siempre se producen, y con frecuencia se pueden evitar modificando los parmetros analticos, como la temperatura y la relacin combustible/oxidante. 5.2.3.2. Interferencias Qumicas. Las interferencias qumicas son ms comunes que las espectrales. Frecuentemente sus efectos pueden minimizarse escogiendo las condiciones de trabajo adecuadas. El tipo ms comn de interferencia es probablemente el producido por aniones que forman compuestos de baja volatilidad con el analito y reducen as su velocidad de atomizacin, lo que origina resultados menores a los esperados. En muchas ocasiones pueden eliminarse o atenuarse las interferencias debidas a la formacin de especies poco voltiles aumentando la temperatura. Tambin se pueden emplear agentes liberadores (buffers de ionizacin), que son cationes que reaccionan preferentemente con el interferente e impiden su interaccin con el analito.15 Las posibles interferencias que se pueden presentar en el trascurso de la validacin, pueden derivar de la matriz de la muestra puesto que se trata de matrices complejas que pueden contener aparte de materia orgnica, partculas que formen compuestos con el analito de inters e interfieran con la cuantificacin del mismo, por lo que para evitar estas interferencias se sigue el procedimiento descrito en la pgina 16 de este documento con el fin de cuantificar el analito en su totalidad. En cuanto a interferencias fsicas o espectrales son pocas las posibilidades de que se presenten este tipo de interferencias puesto que el equipo de absorcin atmica cuenta con sistemas de correccin de fondo de doble haz el cual no permite que cierta longitud de onda se encuentre cerca o se solape (se sobreponga) sobre la longitud de onda correspondiente a cada analito y los
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metales a analizar en esta validacin su correspondiente longitud de onda se encuentran muy separadas por lo que no se corre riesgo de esta clase de interferencia.
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6. RESULTADOS Y ANALISIS.
Para la realizacin de la validacin se trabaj con la metodologa implementada en el Laboratorio de Anlisis de Aguas (L.A.A.) de la Corporacin Autnoma Regional de Risaralda (CARDER), con base en el protocolo de estandarizacin y validacin de mtodos analticos del ente regulador para los laboratorios ambientales, el instituto de Hidrologa, Meteorologa y Estudios Ambientales IDEAM, garantizando que el mtodo sea apropiado y que este mtodo estandarizado sea reproducible. El procedimiento de validacin establecido en el L.A.A. de la CARDER, es un modelo que permite evaluar los parmetros caractersticos de cada uno de los ensayos que se efectan. Es importante tener en cuenta que los parmetros caractersticos del mtodo y el nmero de rplicas dependen de cada ensayo en particular.
6.1. OBJETIVO DEL METODO. Cuantificar metales totales en muestras de aguas (superficiales, subterrneas y residuales), implementar el procedimiento para dicha cuantificacin y mostrar los resultados de la validacin con el fin de efectuar la tcnica en el laboratorio, con datos trazables y confiables.
6.2. ALCANCE. La tcnica de espectroscopia de absorcin atmica se bas en la metodologa 3111, del STANDARD METHODS FOR THE EXAMINATION OF WATER AND WASTEWATER, edicin 21, ao 2005, y el desarrollo de la validacin en el procedimiento de gestin 18L-PG13 VALIDACIN DE MTODOS del L.A.A. de la CARDER. Este informe tiene el fin de presentar los datos de la validacin del mtodo de llama por la tcnica de E.A.A. para la cuantificacin de los metales pesados Hierro (Fe), Manganeso (Mn), Sodio (Na), Potasio (K), Calcio (Ca) y Magnesio (Mg), que se realizan en el L.A.A. de la CARDER, para la matriz agua.
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6.3. GENERALIDADES. Los metales que normalmente se estudian se encuentran en diferentes formas, ya sea inorgnica o asociada a la materia orgnica; muchas de estas formas son supremamente estables. Para cuantificar los metales en su totalidad se deben liberar estos metales de las formas en las que se encuentren y pasarlos a su estado elemental. Por este motivo es muy importante establecer la metodologa de extraccin o digestin adecuada para extraer el metal de una fase estable al utilizar mtodos de ataque fuertes. Una evaluacin de las metodologas para la extraccin de los metales, permite hacer las siguientes observaciones. El Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater indica varias categoras, definidas desde un punto de vista estrictamente analtico: Metales disueltos son aquellos correspondientes a una muestra no acidificada que se ha filtrado en el momento de la recoleccin a travs de una membrana de 0,45 micras, acidificando posteriormente la muestra con cido ntrico a pH< 2. Metales suspendidos, son aquellos retenidos en la membrana despus d e filtrada la muestra anterior. Metales totales se refieren a la concentracin de metales determinados en una muestra sin filtrar, despus de una digestin vigorosa, o a la suma de los metales en la fase disuelta y la fraccin suspendida. Metales extractables en cido, son definidos como aquellos determinados en solucin despus del tratamiento de la muestra sin filtrar, con cido mineral diluido.16 El propsito de esta validacin es el de cuantificar metales totalesen este caso la palabra total indica tanto que la muestra consta de una mezcla agua y sedimento en suspensin, como que el mtodo analtico determina todo el contenido de un constituyente en dicha muestra. Para el caso de las aguas se consider conveniente el procedimiento descrito en el apartado 3030 C, 3030 D y 3030 E, del Standard Methods for the Examination of Water and Wastewaterdebido a que se cubren tanto los elementos solubles, como los que estn ligeramente adsorbidos sobre el material particulado.En el caso de las aguas residuales, es conveniente determinar las concentraciones totales de los elementos con el fin de evaluar ste aporte al medio ambiente y no solamente el potencial biodisponible.
17
6.4. MATERIALES Y EQUIPOS. 6.4.1. Equipos. Espectrofotmetro de Absorcin Atmica THERMO M SERIES Lmpara de Ctodo Hueco del elemento a determinar. Quemador de 100 mm. Plancha de Calentamiento para digestin de muestras E & Q. Agitador Magntico HEIDOLPH MR 3000. Agitadores de Tefln. Cabina Extractora de Gases C-180X. 6.4.2. Reactivos. Patrn Estndar Certificado de 1000 mg/L del elemento a analizar cidoNtrico grado Analtico al 65% (Concentrado). Agua Destilada Acidulada. 6.4.3. Material de Vidrio. Erlenmeyer Clase A de 100 mL. Balones Aforados Clase A de 2000, 200, 100 y 50 mL. Beakers de 250 y 100 mL. Pipetas Aforadas de 0.5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20 y 25 mL. Pipetas Graduadas Clase A de 5 y 10 mL. Probetas Graduadas Clase A de 50 y 100 mL. Embudos Analticos. 6.5. PROCEDIMIENTO (Tratamiento de Muestra). 6.5.1. Preservacin de la Muestra. . Limpiar cuidadosamente los recipientes para muestra con solucin jabonosa no inica, libre de metales, enjuagar con agua de grifo y luego con agua destilada acidulada. Las muestras de Agua (superficial, subterrnea, residual) deben ser almacenadas en envases de Vidrio o Plstico. Tomada la muestra, Acidular con HNO3 hasta un pH menor a 2. Conservar la muestra despus de acidulada a 4 C. La preservacin de las muestras para anlisis de metales pesados dura 6 meses, analizar lo antes posible.
. . . .
18
6.5.2. Tratamiento de Muestra. Se hace con el objetivo de destruir la materia orgnica para poder obtener el analito de inters libre de cualquier interferencia. Varias tcnicas instrumentales requieren que las muestras tengan un trato adecuado a niveles de trazas porque la variacin de la concentracin es muy ancha por lo que se presenta un mtodo de acercamiento de anlisis a niveles de concentracin altos > 1.0 mg/L y otro a niveles de trazas 0.1 mg/L del analito de inters. Para el tratamiento de la muestra observar el siguiente esquema:
Figura 6. Esquema general del tratamiento de muestra tomado del SMWW, edicin 21, 2005
Preprese un volumen De muestra aprox. Entre 50 a 100 ml. Y servir en Erlenmeyer. Llevar a digestin lenta Y evaporar hasta 1/5 del Volumen (10 o 20 ml).
Aadir 5 ml de HNO3 Y perlas de Ebullicin.
Terminada la digestin, Dejar enfriar hasta Temperatura ambiente.
NO dejar que la muestra Se seque durante la Digestin.
Si es necesario contine Agregando HNO3 para Completar la digestin.
Con agua destilada lavar Las paredes del Erlenmeyer y filtrar si es Necesario.
Pasar la solucin ya con Digestin a un baln Aforado del volumen inicial De la muestra (50 o 100 ml).
Aforar y mezclar Cuidadosamente.
ANALIZAR POR E.A.A.
19
6.6. RESULTADOS DE VALIDACION. 6.6.1. Criterios de Aceptacin. Para los criterios de aceptacin se tom como referente el procedimiento 18LPG12, Aseguramiento de la Calidad de Resultados de Ensayos, con el fin de asegurar los datos de la validacin dentro de un lmite de aceptacin propuesto. Es importante aclarar que en el L.A.A., el mencionado procedimiento no tiene an definidos estos criterios para mtodos instrumentales, puesto que el alcance de la acreditacin no incluye este tipo de parmetros.
Tabla 1. Criterios de Aceptacin. CRITERIOS DE ACEPTACION EN CUANTO A %CV Y % DE ERROR % CV % ERROR ENSAYO (Mximo permitido para muestras). (Mximo permitido para patrones). Determinacin de Metales 10 10 pesados por E.A.A.
Para la realizacin de este trabajo, se inici con una revisin documental del mtodo, posteriormente se hicieron ensayos con patrones y muestras con el objeto de operar el equipo adecuadamente teniendo presente caractersticas particulares de funcionamiento y control de variables del mtodo y del equipo. Luego de esto se comenzaron a realizar mltiples ensayos como ajuste de mtodo para cada uno de los metales a validar con el fin de obtener una mayor sensibilidad, ajuste de rangos de trabajo, evaluacin de pendiente e intercepto en curvas de calibracin, lmites de cuantificacin y deteccin y estandarizacin del procedimiento de pre-tratamiento de muestras para determinar metales totales. A continuacin se muestran algunos de los resultados representativos para ste mtodo instrumental. 6.6.2. Validacin de Hierro (Fe). Para la determinacin de hierro por el mtodo de llama por absorcin atmica se adoptaron parmetros instrumentales, los cuales ayudan a eliminar posibles interferencias para una normal medicin del analito de inters. Estos parmetros son los siguientes: Longitud de Onda (): Ancho de Banda: Corriente de lmpara (CH): 248.3 nm. 0.2 nm. 75% uso normal.
20
Correccin de Fondo: Tipo de llama: Intervalo flujo de combustible:
Lmpara de deuterio (D2) Aire/Acetileno. 0.8 a 1.0 L/min.
Es importante que se determinen exactamente estos parmetros instrumentales con el fin de cuantificar totalmente el analito de inters, en este caso hierro (Fe). 6.6.2.1. Curva de Calibracin de Hierro (Fe). Se comienza con la estandarizacin de la curva de calibracin, definiendo un rango de trabajo.
Tabla 2. Y Grafica 1. Curva de calibracin para Hierro (Fe). Concentracin (mg/L de Fe) 0.0 0.2 0.5 1.0 3.0 5.0 Absorbancia (Abs) 0.000 0.019 0.055 0.108 0.302 0.511
Esta es una curva de calibracin representativa de mltiples ensayos realizados para determinar ste, como rango de trabajo nico. Con el fin de obtener siempre la linealidad de la curva de calibracin se optimizaron parmetros del espectrofotmetro como son la altura del quemador y el flujo de gas para obtener una sensibilidad mayor en el mtodo, as:
21
Altura del quemador: 6.2 mm. Flujo de Gas (Aire/Acetileno): 1.0 L/min. Para dar como aceptada una curva de calibracin, el ajuste lineal de la misma no debe ser inferior a 0.9950 con lo que se est garantizando una adecuada correlacin entre patrones que componen la curva y asegurando una cuantificacin correcta al momento de leer cualquier muestra. 6.6.2.2. Sensibilidad. La sensibilidad de la espectrometra de absorcin atmica de llama se define como la concentracin de metal que produce una absorcin de 1% (una absorbancia de aproximadamente 0.0044).17
Tabla 3. Promedio de las pendientes de las curvas de calibracin. Fecha 07/07/2010 08/07/2010 09/07/2010 12/07/2010 13/07/2010 14/07/2010 15/07/2010 Promedio Desviacin Estndar, s Coeficiente de Variacin, %CV Pendiente 0.09163 0.08797 0.09253 0.09008 0.09220 0.08984 0.09299 0.08963 0.09067 0.08861 0.09061 0.0017 1.86% Coeficiente de Correlacin 0.9981 0.9970 0.9998 0.9986 0.9992 0.9979 0.9997 0.9987 0.9980 0.9983 0.9985 0.0009 0.09%
Para determinar la sensibilidad se utiliza la siguiente formula:
Dnde:
S es la sensibilidad. m es la pendiente de la curva de calibracin. 0.0044 es la mnima seal que produce un 1% de concentracin del analito.
22
Entonces:
A partir de las curvas de calibraciones para la validacin, se promediaron las pendientes para obtener la sensibilidad del mtodo, calculado como 0.0044/ m y es 0.048mg/L de Fe, este es el factor de respuesta del instrumento en funcin de la concentracin. 6.6.2.3. Lmite de Deteccin Instrumental. La definicin cuantitativa ms aceptada para el lmite de deteccin es la mnima concentracin o la mnima masa de analito que se puede detectar para un nivel de confianza dado. Este lmite depende de la relacin entre la magnitud de la seal analtica y el valor de las fluctuaciones estadsticas de la seal del blanco. 18
Tabla 4. Datos para el lmite de deteccin. Fecha 07/07/2010 08/07/2010 Seal del Blanco (Abs). -0.001 0.000 -0.002 -0.002 0.001 0.002 -0.001 -0.001 -0.000 0.001 -0.002 -0.003 -0.000 -0.000 -0.002 -0.002 0.001 0.003 -0.002 -0.003 -0.00065 0.0016
09/07/2010
12/07/2010
13/07/2010 14/07/2010 15/07/2010 Promedio Desviacin Estndar, s
23
Para determinar el lmite de deteccin se emplean las siguientes frmulas*:
,
Dnde: Sm Sbl K sbl m Cm es la mnima seal distinguible. es la seal promedio del blanco. es la constante de nivel de confianza igual a 3. es la desviacin estndar de las mediciones del blanco. es la pendiente de la curva. es el lmite de deteccin a determinar.
Entonces:
Para el lmite de deteccin instrumental se obtuvo una concentracin de 0.052 mg/L de Fe, lo que corresponde a la cantidad de analito que da una respuesta significativamente diferente al blanco o al ruido de una solucin que no contiene el analito. 6.6.2.4. Lmite de Cuantificacin. El lmite de cuantificacin es la cantidad de analito que da una seal igual al blanco ms diez veces la desviacin estndar del blanco, una seal suficientemente mayor a la del blanco. El lmite de cuantificacin se determin por la medicin de 20 rplicas de una concentracin cercana a este, de la desviacin estndar de los datos se calcula el lmite de cuantificacin experimental. (Ver tabla 4. Consolidado de datos validacin).
Tabla 5. Lmite de cuantificacin experimental. EXPERIMENTAL 0,226 PRACTICO 0,2
LIMITE DE CUANTIFICACION (mg/L de Fe)
* SKOOG, HOLLER, NIEMAN, Principios de Anlisis Instrumental, Quinta Edicin, 2001, formulas pg. 14.
24
Se realiz un patrn de concentracin cercana al lmite de cuantificacin (Estndar Bajo Eb) de 0.4 mg/L de Fe, se hizo el anlisis estadstico de esta concentracin calculando el promedio, desviacin estndar, coeficiente de variacin y porcentaje de error. Obtenidos estos datos se calcul el lmite de cuantificacin como diez veces la desviacin estndar del estndar de 0.4 mg/L de Fe (L.C. = 10s), dando un valor experimental de 0.226 mg/L de Fe, siendo esta concentracin la mnima cantidad de analito que se diferencia de la seal de fondo. El lmite de cuantificacin prctico ser de 0.2 mg/L de Fe. Se comprob el lmite de cuantificacin midiendo diez rplicas de concentracin arrojando los resultados dados en la siguiente tabla:
Tabla 6. Lmite de Cuantificacin de 0.2 mg/L de Fe. Solucin Estndar Replica 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Concentracin (mg/L de Fe) 0.1813 0.1875 0.1894 0.1917 0.1921 0.1951 0.2018 0.2041 0.2128 0.2176 0.1973 0.0115 5.84 1.33
[0.2] mg/L de Fe.
PROMEDIO DESVIACION ESTANDAR COEFICIENTE DE VARIACION PORCENTAJE DE ERROR
Se pasaron diez patrones de concentracin terica con el fin de determinar el lmite de cuantificacin. Para el rango de trabajo establecido, el lmite de cuantificacin que se obtuvo fue de 0.2 mg/L de Fe, por lo que se considera que es la mnima cantidad que puede ser determinada cuantitativamente sin que el coeficiente de variacin ni el porcentaje de error sean mayores al 10%. Este lmite de cuantificacin se ajusta a las necesidades del mtodo.
25
6.6.2.5. Registro de Resultados de Validacin de Hierro (Fe).

Tabla 7. Consolidado plan de validacin Hierro (Fe).
CORPORACION AUTONOMA REGIONAL DE RISARALDA - LABORATORIO DE ANALISIS DE AGUAS - LAA CONSOLIDADO PLAN DE VALIDACION HIERRO (Fe) POR E.A.A.
Valor Nominal Analito
Fe
Blanco
0,4 (Eb)
2,0 (Em)
4,0 (Ea) MR1
Ab = 5,0 MR1 Ab %R - MR1 Ab
Aa = 15,0 MR1 Aa %R - MR1 Aa MR2
Uso
Exactitud LDM, Precisin LDI y/o precisin LCM Exactitud % Precisin % Reactividad Precisin, % Reactividad control de (creacion Precisin Exactitud precisin Recuper Recuperacin cruzada Recuperacin cruzada reactivos cartas de precisin acin control) mg/L mg/L mg/L mg/L mg/L mg/L %R mg/L %R mg/L
Unidades DIA 0 DIA 1 DIA 1 DIA 2 DIA 2 DIA 3 DIA 3 DIA 4 DIA 4 DIA 5 DIA 5 DIA 6 DIA 6 DIA 7 DIA 7 Dia (n) tarde Dia (n) tarde Dia (n1) Dia (n1) Dia (n2) Dia (n2) Total datos Media Desviacion SD CV Error Recuperacion Analista
-0,0278 0,4487 2,1932 4,1740 0,9895 -0,0161 0,4622 2,2334 4,2416 1,0109 -0,0216 0,4490 2,1962 4,2345 0,9836 -0,0247 0,4481 2,2257 4,2718 0,9901 -0,0316 0,4439 2,1588 4,0920 0,9065 -0,0184 0,4434 2,1719 4,1232 0,9207 JMZ JMZ -0,0307 0,4312 2,0540 4,0185 1,0873 -0,0299 0,4348 2,0650 4,0563 1,1130 -0,0260 0,4439 2,0274 4,0271 0,9271 -0,0187 0,4816 1,9696 4,0689 0,9483 JMZ JMZ -0,0404 0,4042 2,0091 3,6588 1,1674 -0,0527 0,4096 2,0082 3,5426 1,1793 -0,0524 0,4003 1,8091 3,3813 0,9440 -0,0543 0,4015 1,8517 3,7062 0,9581 -0,0480 0,4368 1,9717 3,9848 1,1788 -0,0470 0,4398 1,9179 3,9506 1,2034 -0,0225 0,4457 2,0436 3,9057 1,2232 -0,0059 0,4693 2,1095 3,9621 1,2462 -0,0449 0,4081 2,0162 3,9514 1,1231 -0,0467 0,4249 2,0665 3,9831 1,1411 n s % CV %E %R 20 0,0143 43,19 20 20 20 20 -0,0330 0,4364 2,0549 3,9667 1,0621 0,0226 0,1190 0,2338 0,1149 5,19 9,09 5,79 2,75 5,89 -0,83 10,82
1,0999 1,1342 1,0699 1,0848 1,0990 1,1134 1,3797 1,4086 1,1452 1,1609 1,4824 1,5092 1,0939 1,1076 1,2459 1,2570 1,3317 1,3652 1,4087 1,4336 20 1,2465 0,1526 12,24 117,16
77,20 84,33 64,55 69,05 118,23 118,62 173,79 175,97 131,95 129,52 187,15 195,13 96,83 96,90 58,47 51,94 80,88 86,80 170,97 174,92 20 117,16 47,44 40,50
1,4187 1,4510 1,4974 1,5184 1,4212 1,4230 1,7905 1,8203 1,4642 1,4923 1,7387 1,7767 1,4520 1,4649 1,6827 1,7162 1,6696 1,7017 1,7331 1,7731 20 1,6003 0,1494 9,34 100,37
80,99 83,02 95,62 98,17 95,26 93,20 129,14 130,02 99,28 100,62 106,81 111,41 94,35 94,23 95,20 96,91 85,53 87,26 113,22 117,15 20 100,37 13,77 13,72
4,6105 4,5927 4,6675 4,6727 4,2625 4,3969 4,6985 4,8260 4,3965 4,3796 5,1500 5,2353 4,3689 4,4602 4,7040 4,7453 4,7071 4,7211 5,0136 5,0484 20 4,6829 0,2703 5,77
26
6.6.2.6. Parmetros Estadsticos de la Validacin de Hierro (Fe).

Tabla 8. Parmetros estadsticos de la Validacin de Hierro (Fe). PARMETRO Sensibilidad Lmite de Deteccin Instrumental (L.D.I.) Lmite de Deteccin del Mtodo (L.D.M.) Lmite de Cuantificacin (L.C.M.) Precisin (% CV). Exactitud (% Error). % de Recuperacin
0.048 mg/L Fe 0.052 mg/L Fe 0.068 mg/L Fe 0.2 mg/L Fe Ver tabla 7. Em Ver tabla 7. Em Ad. Baja: 117,16 % Ad. Alta: 100.37 %
Terminada la validacin para la determinacin de Hierro (Fe) por la tcnica de E.A.A. por llama, se han obtenido los parmetros estadsticos descritos en la tabla 8. Para la validacin de hierro (Fe), se estableci un rango de trabajo nico, comprendido entre el lmite de cuantificacin de 0.2 mg/L a 5.0 mg/L de Fe, en el cual se obtienen mejores ajustes lineales y se garantiza una lectura de concentracin ms acertada de la muestra. Se evalu la precisin y la exactitud expresados como coeficiente de variacin (%CV) y porcentaje de error (%E), en los estndares bajo, medio y alto, arrojando valores menores al 10%, criterio de aceptacin adoptado para este trabajo sin ser an definitivo, pues se planea su optimizacin en etapas posteriores, siendo este criterio adoptado para la validacin del mtodo. Para el lmite de deteccin del mtodo se cuantific por la frmula L.C. = 3s, esto es tres veces la desviacin estndar, de un estndar de concentracin terica cercana al lmite de cuantificacin (estndar bajo, Eb), adoptado del plan de validacin establecido en el L.A.A. Los criterios de aceptacin tomados como referente para este trabajo aplican para estndares y muestras (superficiales, subterrneas y residuales domsticas e industriales), sin embargo como se muestra en las tablas de consolidados de los planes de validacin para cada elemento, el criterio se cumple para estndares pero no para muestras reales debido a los siguientes factores: Interferencias qumicas presentes en la matriz de muestra, generando algn tipo de reaccin con el analito de inters y lo acomplejen (formen compuestos de baja volatilidad, reacciones de disociacin y reacciones de
27
ionizacin), por lo que se afecta directamente la concentracin del mismo en la muestra. Digestin de la muestra: si la digestin es muy fuerte puede presentarse prdida de muestra y por consiguiente de analito o se puede presentar sequedad de la muestra y el analito queda adherido al envase contenedor y se ocasione disminucin en su concentracin. Interferencias espectrales o fsicas: no suelen presentarse mucho puesto que las lneas de longitud de onda son muy estrechas pero en compuestos en la matriz del analito que tengan un espectro de emisin o absorcin muy ancha, se sobrepone a la longitud de onda del analito de inters y en ambos casos disminuye el haz de trasmisin del analito y dan lugar a errores positivos y/o negativos, por lo que puede presentar variaciones en la concentracin que da un coeficiente de variacin alto. Lavado de material: se puede asociar este factor por la presencia de sustancias que interfieran con el analito provocando ya sea una disminucin en la absorbancia por baja volatilidad o aumento por adicin intencional de analito, por lo que no se cuantifica lo que realmente est presente en la matriz de muestra.
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6.6.3. Validacin de Manganeso (Mn). Parmetros instrumentales para la determinacin de Manganeso: Longitud de Onda (): Ancho de Banda: Corriente de lmpara (CH): Correccin de Fondo: Tipo de llama: Intervalo flujo de combustible: 279.5 nm. 0.2 nm. 75% uso normal. Lmpara de Deuterio (D2). Aire/Acetileno. 0.9 a 1.2 L/min.
6.6.3.1. Curva de Calibracin de Manganeso (Mn). Estandarizacin de la curva de calibracin definiendo rango de trabajo.
Tabla 9. Y Grafica 2. Curva de calibracin para Manganeso. Concentracin (mg/L de Mn) 0.0 0.2 0.5 1.0 2.0 Absorbancia (Abs) 0.000 0.055 0.136 0.272 0.517
Altura del quemador:
7.8 mm.
Flujo de Gas (Aire/Acetileno): 1.3 L/min.
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6.6.3.2. Sensibilidad.
Sensibilidad del mtodo: 0.017 mg/L de Mn. Factor de respuesta de la concentracin del analito frente al mtodo. 6.6.3.3. Lmite de Deteccin Instrumental.
Tabla 11. Datos para el lmite de deteccin. Fecha 13/12/2010 15/12/2010 Seal del Blanco (Abs). 0.000 0.000 -0.004 -0.002 -0.001 -0.001 -0.001
16/12/2010
30

Fecha 17/12/2010 20/12/2010 Seal del Blanco (Abs). -0.000 -0.001 -0.001 0.000 -0.000 -0.000 -0.000 -0.001 0.000 -0.001 -0.001 -0.000 -0.001 -0.00075 0.001
21/12/2010
22/12/2010 Promedio Desviacin Estndar, s
6.6.3.4. Lmite de Cuantificacin.

Tabla 12. Lmite de cuantificacin experimental. EXPERIMENTAL 0.092 PRACTICO 0.1
LIMITE DE CUANTIFICACION (mg/L de Mn)
Se comprob el lmite de cuantificacin midiendo diez rplicas de concentracin arrojando los resultados dados en la siguiente tabla:
31

Tabla 13. Lmite de Cuantificacin de 0.1 mg/L de Mn. Solucin Estndar Replica 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Concentracin (mg/L de Mn) 0.0945 0.0945 0.0947 0.0954 0.0953 0.0973 0.0983 0.0993 0.0997 0.0976 0.0967 0.0020 2.09% 3.34%
[0.1] mg/L de Mn.
Se pasaron diez patrones de concentracin terica con el fin de determinar el lmite de cuantificacin. Para el rango de trabajo establecido, el lmite de cuantificacin que se obtuvo fue de 0.1 mg/L de Mn.
32
6.6.3.5. Registro de Resultados de Validacin de Manganeso (Mn).

Tabla 14. Consolidado plan de validacin Manganeso (Mn).
CORPORACION AUTONOMA REGIONAL DE RISARALDA - LABORATORIO DE ANALISIS DE AGUAS - LAA CONSOLIDADO PLAN DE VALIDACION MANGANESO (Mn). POR E.A.A.
Mn
Blanco
0,3 (Eb)
0,7 (Em)
1,5 (Ea) MR1
Uso
Exactitud LDM, Precisin LDI y/o precisin LCM Exactitud % Precisin % Reactividad Precisin, % Reactividad control de (creacion Precisin Exactitud precisin Recuper Recuperacin cruzada Recuperacin cruzada reactivos cartas de precisin acin control)
Unidades DIA 0 DIA 1 DIA 1 DIA 2 DIA 2 DIA 3 DIA 3 DIA 4 DIA 4 DIA 5 DIA 5 DIA 6 DIA 6 DIA 7 DIA 7 Dia (2) tarde Dia (2) tarde Dia (5) Dia (5) Dia (6) Dia (6) Total datos Media Desviacion SD CV Error Recuperacion Analista
mg/L
mg/L
mg/L
mg/L
mg/L
mg/L
%R
mg/L
%R
mg/L
0,2962 0,7164 1,5033 0,0448 0,2921 0,6903 1,4480 0,0411 -0,0334 0,3055 0,7343 1,5246 0,0164 -0,0231 0,2897 0,6915 1,4634 0,0163 -0,0213 0,3009 0,7103 1,5001 0,0230 -0,0179 0,2855 0,6854 1,4583 0,0215 -0,0168 0,3084 0,7251 1,4922 0,0145 -0,018 0,2927 0,6900 1,4531 0,0150 -0,0171 0,3105 0,7371 1,5512 0,0255 -0,0193 0,3075 0,7304 1,5465 0,0289 -0,0087 0,3128 0,7331 1,5448 0,0166 -0,0081 0,3070 0,7319 1,5336 0,0166 -0,0181 0,3043 0,7147 1,4989 -0,0212 0,2891 0,6853 1,4433 -0,0191 0,2955 0,6976 1,4707 0,0156 -0,0188 0,2828 0,6676 1,4135 0,0179 PP PP PP PP n s % CV %E %R -0,0208 0,3074 0,7232 1,5368 0,0107 -0,0162 0,2891 0,6920 1,4780 0,0084 -0,0213 0,3088 0,7280 1,5485 0,0155 -0,0217 0,2989 0,7082 1,5216 0,0168 20 0,0054 -28,47 20 20 20 20 -0,0189 0,2992 0,7096 1,4965 0,0203 0,0092 0,0207 0,0414 0,0096 3,09 0,25 2,92 1,37 2,77 0,23 47,23
0,1063 0,1115 0,0680 0,0702 0,0870 0,0841 0,0807 0,0831 0,0939 0,0977 0,0788 0,0706
82,19 93,58 67,90 70,89 84,35 82,46 86,79 89,28 90,20 90,89 81,69 71,03
0,1447 0,1472 0,0956 0,0903 0,1146 0,1142 0,0994 0,1061 0,1351 0,137 0,0931 0,0846
88,07 93,32 69,19 64,68 80,15 81,06 74,06 79,45 95,84 94,65 66,85 59,49
0,7347 0,7281 0,7151 0,7010 0,7089 0,69 0,6336 0,6149 0,7539 0,7494 0,7605 0,752 0,7443 0,7181
0,0717 0,0686 0,0629 0,0579 0,0845 0,0879 20 0,0814 0,0146 17,93 80,48
73,71 66,81 68,40 64,77 90,48 93,27 20 80,48 10,13 12,58
0,1175 0,1128 0,1134 0,1032 0,1293 0,1286 20 0,1148 0,0189 16,45 82,61
88,83 82,84 89,36 82,44 99,14 97,45 20 82,61 11,93 14,44
0,6995 0,6861 0,7069 0,6848 0,7332 0,7176 20 0,7116 0,0379 5,32
33
6.6.3.6. Parmetros Estadsticos de la Validacin de Manganeso (Mn).

Tabla 15. Parmetros estadsticos de la Validacin de Manganeso (Mn). PARMETRO Sensibilidad Lmite de Deteccin Instrumental (L.D.I.) Lmite de Deteccin del Mtodo (L.D.M.) Lmite de Cuantificacin (L.C.) Precisin (% CV). Exactitud (% Error). % de Recuperacin
0.017 mg/L Mn 0.012 mg/L Mn 0.027 mg/L Mn 0.1 mg/L Mn Ver tabla 14. Em Ver tabla 14. Em Ad. Baja: 80.48 % Ad. Alta: 82.61 %
34
6.6.4. Validacin de Potasio (K). Parmetros instrumentales para la determinacin de Potasio: Longitud de Onda (): Ancho de Banda: Corriente de lmpara (CH): Correccin de Fondo: Tipo de llama: Intervalo flujo de combustible: 766.5 nm. 0.5 nm. 100% uso normal. Ninguno. Aire/Acetileno. 1.1 a 1.3 L/min.
6.6.4.1. Curva de Calibracin de Potasio (K). Estandarizacin de la curva de calibracin definiendo rango de trabajo.
Tabla 16. Y Grafica 3. Curva de calibracin para Manganeso. Concentracin (mg/L de K) 0.0 0.1 0.25 0.5 0.8 Absorbancia (Abs) -0.000 0.040 0.094 0.170 0.283
6.2 mm.
35
Tabla 17. Promedio de las pendientes de las curvas de calibracin. Fecha 03/03/2011 09/03/2011 10/03/2011 16/03/2011 29/03/2011 05/04/2011 12/04/2011 Promedio Desviacin Estndar, s Coeficiente de Variacin, %CV Pendiente 0.34805 0.36285 0.36854 0.35191 0.34170 0.34092 0.33666 0.36812 0.37194 0.35452 0.013 3.67% Coeficiente de Correlacin 0.9984 0.9983 0.9990 0.9988 0.9987 0.9985 0.9963 0.9984 0.9983 0.9983 0.0008 0.08%
Sensibilidad del mtodo: 0.012 mg/L de K. Factor de respuesta del instrumento frente a la concentracin de analito.
6.6.4.3. Lmite de Deteccin Instrumental.

Tabla 18. Datos para el lmite de deteccin. Fecha 03/03/2011 09/03/2011 Seal del Blanco (Abs). -0.000 -0.002 -0.002 -0.004
10/03/2011
-0.003
36

Fecha 16/03/2011 29/03/2011 Seal del Blanco (Abs). -0.005 -0.004 0.000 0.000 -0.001
05/04/2011 12/04/2011
Promedio Desviacin Estndar, s
-0.002 -0.000 0.000 -0.001 -0.001 -0.001 -0.0016 0.0016

LIMITE DE CUANTIFICACION (mg/L de K)
37

Tabla 20. Lmite de Cuantificacin de 0.1 mg/L de K. Solucin Estndar Replica 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Concentracin (mg/L de K) 0.1001 0.0915 0.0958 0.0887 0.1011 0.0930 0.0984 0.0903 0.0970 0.0874 0.0943 0.0048 5.13% 5.63%
[0.1] mg/L de K.
Se pasaron diez patrones de concentracin terica con el fin de determinar el lmite de cuantificacin. Para el rango de trabajo establecido, el lmite de cuantificacin que se obtuvo fue de 0.1 mg/L de K.
38
6.6.4.5. Registro de Resultados de Validacin de Potasio (K).

Tabla 21. Consolidado plan de validacin Potasio (K).
CORPORACION AUTONOMA REGIONAL DE RISARALDA - LABORATORIO DE ANALISIS DE AGUAS - LAA CONSOLIDADO PLAN DE VALIDACION POTASIO (K).
K
Blanco
0,2 (Eb)
0,4 (Em)
0,7 (Ea) MR1
Uso
mg/L
mg/L
mg/L
mg/L
mg/L
mg/L
%R
mg/L
%R
mg/L
-0,0105 0,2006 0,3836 0,6564 0,3735 -0,0054 0,2003 0,3942 0,6723 0,3750 -0,0071 0,2126 0,4147 0,7567 0,3308 -0,0046 0,2013 0,3957 0,7222 0,3282 -0,0079 0,2370 0,4302 0,7023 0,3232 -0,0127 0,2156 0,4231 0,6604 0,3233 -0,0072 0,2070 0,4135 0,7213 0,3613 -0,0130 0,1942 0,3906 0,6865 0,3336 -0,0115 0,2032 0,3871 0,7010 0,4148 -0,0110 0,1956 0,3800 0,6802 0,3793 -0,0122 0,2258 0,4433 0,6970 0,3937 -0,0109 0,2157 0,4258 0,6995 0,4077 -0,0118 0,2007 0,3807 0,6798 0,3839 -0,0144 0,1973 0,3762 0,6768 0,3506 -0,0080 0,2046 0,4103 0,7332 0,3836 -0,0093 0,1975 0,3952 0,7241 0,3549 PP PP PP PP n s % CV %E %R -0,0070 0,2075 0,3770 0,7063 0,2581 -0,0124 0,1900 0,3805 0,6677 0,2790 -0,0113 0,2120 0,3893 0,6722 0,2644 -0,0132 0,2097 0,3792 0,6723 0,2707 20 0,0028 27,91 20 20 20 20 -0,0101 0,2064 0,3985 0,6944 0,3445 0,0113 0,0203 0,0268 0,0475 5,45 3,21 5,10 0,37 3,85 0,80 13,80
0,5124 0,5168 0,4487 0,4489 0,4414 0,4438 0,4964 0,4651 0,5259 0,4937 0,4513 0,4741 0,4648 0,4248 0,4709 0,4309 0,3382 0,3588 0,2759 0,2818 20 0,4382 0,0716 16,34 92,73
132,83 135,39 113,21 115,55 113,21 115,21 129,13 125,09 110,11 111,79 63,04 71,14 82,91 75,99 88,45 77,70 78,02 78,46 18,78 18,64 20 92,73 33,78 36,42
0,6130 0,6156 0,5820 0,5803 0,5659 0,5673 0,6352 0,5966 0,6009 0,5693 0,5629 0,5886 0,5364 0,4953 0,5348 0,5030 0,3374 0,3559 0,3711 0,3828 20 0,5297 0,0932 17,59 103,21
132,01 132,61 137,24 137,66 132,67 133,35 149,65 143,43 105,07 106,39 95,86 102,22 86,98 82,26 86,30 84,11 46,40 45,57 60,77 63,71 20 103,21 33,18 32,15
0,5428 0,5495 0,4454 0,4773 0,4859 0,5237 0,4188 0,4504 0,6209 0,6537 0,6180 0,6407 0,5898 0,6200
0,7123 0,6651 0,5379 0,5348 20 0,5604 0,0845 15,08
39
6.6.4.6. Parmetros Estadsticos de la Validacin de Potasio (K).

Tabla 22. Parmetros estadsticos de la Validacin de Potasio (K). PARMETRO Sensibilidad Lmite de Deteccin Instrumental (L.D.I.) Lmite de Deteccin del Mtodo (L.D.M.) Lmite de Cuantificacin (L.C.) Precisin (% CV). Exactitud (% Error). % de Recuperacin
0.012 mg/L K 0.014 mg/L K 0.034 mg/L K 0.1 mg/L K Ver tabla 21. Em Ver tabla 21. Em Ad. Baja: 92.73 % Ad. Alta: 103.21 %
40
6.6.5. Validacin de Sodio (Na). Parmetros instrumentales para la determinacin de Sodio: Longitud de Onda (): Ancho de Banda: Corriente de lmpara (CH): Correccin de Fondo: Tipo de llama: Intervalo flujo de combustible: 589.0 nm. 0.2 nm. 75% uso normal. Ninguno. Aire/Acetileno. 0.9 a 1.2 L/min.
6.6.5.1. Curva de Calibracin de Sodio (Na). Estandarizacin de la curva de calibracin definiendo rango de trabajo.
Tabla 23. Y Grafica 4. Curva de calibracin para Sodio. Concentracin (mg/L de Na) 0.0 0.1 0.25 0.5 0.7 Absorbancia (Abs) 0.000 0.076 0.163 0.318 0.459
6.2 mm.
41
Tabla 24. Promedio de las pendientes de las curvas de calibracin. Fecha 11/01/2011 12/01/2011 13/01/2011 17/01/2011 18/01/2011 19/01/2011 20/01/2011 21/01/2011 Promedio Desviacin Estndar, s Coeficiente de Variacin, %CV Pendiente 0.58617 0.65686 0.64331 0.66327 0.64448 0.58987 0.59254 0.56839 0.61626 0.65093 0.62121 0.035 5.58% Coeficiente de Correlacin 0.9982 0.9989 0.9989 0.9990 0.9986 0.9978 0.9987 0.9983 0.9961 0.9986 0.9983 0.00086 0.086%
Sensibilidad del mtodo: 0.007 mg/L de Na. Factor de respuesta del instrumento frente a la concentracin de analito. 6.6.5.3. Lmite de Deteccin Instrumental.
Tabla 25. Datos para el lmite de deteccin. Fecha 11/01/2011 12/01/2011 Seal del Blanco (Abs). 0.001 0.002 0.000 -0.001 0.001 0.001 0.000
13/01/2011
42

Fecha Seal del Blanco (Abs). 0.000 -0.000 0.000 -0.000 0.001 -0.001 -0.001 0.000 -0.001 -0.001 -0.000 -0.000 -0.003 -0.0001 0.001
17/01/2011 18/01/2011 19/01/2011 20/01/2011 21/01/2011 Promedio Desviacin Estndar, s

LIMITE DE CUANTIFICACION (mg/L de Na)
43

Tabla 27. Lmite de Cuantificacin de 0.1 mg/L de Na. Solucin Estndar Replica 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Concentracin (mg/L de Na) 0.0973 0.1040 0.0965 0.0868 0.0876 0.0957 0.0883 0.0945 0.0944 0.0941 0.0939 0.0052 5.56% 6.08%
[0.1] mg/L de Na.
Se pasaron diez patrones de concentracin terica con el fin de determinar el lmite de cuantificacin. Para el rango de trabajo establecido, el lmite de cuantificacin que se obtuvo fue de 0.1 mg/L de Na.
44
6.6.5.5. Registro de Resultados de Validacin de Sodio (Na).

Tabla 28. Consolidado plan de validacin Sodio (Na).
CORPORACION AUTONOMA REGIONAL DE RISARALDA - LABORATORIO DE ANALISIS DE AGUAS - LAA CONSOLIDADO PLAN DE VALIDACION SODIO (Na).
Na
Blanco
0,2 (Eb)
0,4 (Em)
0,6 (Ea) MR1
Uso
mg/L
mg/L
mg/L
mg/L
mg/L
mg/L
%R
mg/L
%R
mg/L
-0,0080 0,1988 0,4228 0,5664 0,5271 -0,0064 0,2077 0,4484 0,6166 0,5415 -0,0067 0,1839 0,3541 0,5773 0,4725 -0,0087 0,1722 0,3891 0,5949 0,4548 -0,0108 0,1821 0,3535 0,5801 0,4333 -0,0100 0,1833 0,3904 0,5984 0,4258 -0,0141 0,2039 0,4109 0,5856 0,4903 -0,0140 0,1995 0,3927 0,5910 0,4719 -0,0081 0,2058 0,3948 0,5612 0,4232 -0,0108 0,2011 0,3964 0,5625 0,4067 -0,0135 0,2008 0,3770 0,5568 0,4174 -0,0120 0,1951 0,3660 0,5513 0,4179 -0,0116 0,1948 0,3810 0,6160 0,4823 -0,0033 0,1874 0,3641 0,6210 0,4544 -0,0048 0,1844 0,3561 0,5755 0,3702 -0,0047 0,1829 0,3889 0,5681 0,3608 PP PP PP PP n s % CV %E %R -0,0079 0,1903 0,3561 0,5128 0,4747 -0,0080 0,1855 0,3505 0,5131 0,4627 -0,0142 0,2126 0,3853 0,5173 0,4630 -0,0116 0,1776 20 0,0033 35,05 20 20 0,5145 0,4544 20 20
0,5825 0,5821 0,4875 0,4695 0,5428 0,5379 0,6441 0,6086 0,5058 0,5042 0,5217 0,5233 0,5206 0,4983 0,4162 0,4155 0,4793 0,4643 0,4771 0,4548 20 0,5118 0,0596 11,65 102,54
98,38 79,86 43,12 41,85 164,02 167,02 224,46 201,31 128,54 147,09 156,46 157,92 73,90 79,79 78,31 89,15 29,72 25,21 41,48 23,24 20 102,54 61,70 60,17
0,6410 0,6495 0,6951 0,6711
69,77 66,99 125,20 121,57
0,5708 0,5835
0,5553 0,5421 0,6724 0,6345 0,6009 0,5957 0,6133 0,6152 0,6500 0,6231 0,6152 0,6107 0,5901 0,5753 0,5764 0,5714 20 0,6223 0,0357 5,73 98,46 104,50 93,99 100,87 106,41 110,22 110,95 96,85 96,81 134,80 137,16 69,50 67,81 68,23 69,93 20 97,31 24,00 24,66 0,6135 0,6023 0,5631 0,5702 0,5754 0,5856 0,6059 0,5816 0,6482 0,6409 0,5104 0,4925 0,5238 0,5128 20 0,5710 0,0433 7,59
-0,0095 0,1925 0,3831 0,5690 0,4502 0,0111 0,0259 0,0342 0,0452 5,75 3,76 6,76 4,24 6,01 5,16 10,04
45
6.6.5.6. Parmetros Estadsticos de la Validacin de Sodio (Na).

Tabla 29. Parmetros estadsticos de la Validacin de Sodio (Na). PARMETRO Sensibilidad Lmite de Deteccin Instrumental (L.D.I.) Lmite de Deteccin del Mtodo (L.D.M.) Lmite de Cuantificacin (L.C.) Precisin (% CV). Exactitud (% Error). % de Recuperacin
0.007 mg/L Na 0.0048 mg/L Na 0.033 mg/L Na 0.1 mg/L Na Ver tabla 28. Em Ver tabla 28. Em Ad. Baja: 102.54 % Ad. Alta: 98.46 %
46
6.6.6. Validacin de Magnesio (Mg). Parmetros instrumentales para la determinacin de Magnesio: Longitud de Onda (): Ancho de Banda: Corriente de lmpara (CH): Correccin de Fondo: Tipo de llama: Intervalo flujo de combustible: 285.2 nm. 0.5 nm. 75% uso normal. Lmpara de Deuterio (D2). Aire/Acetileno. 0.9 a 1.2 L/min.
6.6.6.1. Curva de Calibracin de Magnesio (Mg). Estandarizacin de la curva de calibracin definiendo rango de trabajo.
Tabla 30. Y Grafica 5. Curva de calibracin para Magnesio. Concentracin (mg/L de Mg) 0.0 0.05 0.1 0.2 0.3 Absorbancia (Abs) -0.001 0.068 0.133 0.263 0.385
7.8 mm.
47
Sensibilidad del mtodo: 0.0035 mg/L de Mg. Factor de respuesta del instrumento frente a la concentracin de analito. 6.6.6.3. Lmite de Deteccin Instrumental.
Tabla 32. Datos para el lmite de deteccin. Fecha 27/01/2011 28/01/2011 01/02/2011 02/02/2011 Seal del Blanco (Abs). -0.002 -0.004 -0.003 -0.004 -0.001 -0.001 -0.001
48

Fecha 04/02/2011 Seal del Blanco (Abs). -0.003 -0.003 -0.005 -0.002 -0.001 -0.002 -0.001 -0.001 -0.001 -0.004 -0.001 -0.003 -0.002 -0.0023 0.0013
07/02/2011
08/02/2011
Promedio Desviacin Estndar, s

LIMITE DE CUANTIFICACION (mg/L de Mg)
49

Tabla 34. Lmite de Cuantificacin de 0.05 mg/L de Mg. Solucin Estndar Replica 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Concentracin (mg/L de Mg) 0.0466 0.0493 0.0494 0.0441 0.0444 0.0466 0.0442 0.0472 0.0476 0.0476 0.0467 0.0019 4.17% 6.6%
[0.05] mg/L de Mg.
Se pasaron diez patrones de concentracin terica con el fin de determinar el lmite de cuantificacin. Para el rango de trabajo establecido, el lmite de cuantificacin que se obtuvo fue de 0.05 mg/L de Mg.
50
6.6.6.5. Registro de Resultados de Validacin de Magnesio (Mg).

Tabla 35. Consolidado plan de validacin Magnesio (Mg).
CORPORACION AUTONOMA REGIONAL DE RISARALDA - LABORATORIO DE ANALISIS DE AGUAS - LAA CONSOLIDADO PLAN DE VALIDACION DE MAGNESIO (Mg).
Mg
Blanco
0,06 (Eb)
0,15 (Em)
0,25 (Ea) MR1
Uso
mg/L
mg/L
mg/L
mg/L
mg/L
mg/L
%R
mg/L
%R
mg/L
-0,0037 0,0562 -0,0053 0,0542
0,2577 0,0762 0,2530 0,0745
0,0796 0,0789 0,0796 0,0800 0,0788 0,0775 0,0843 0,0850 0,0817 0,0878 0,0813 0,0820 0,0797 0,0811 0,0822 0,0786 0,0719 0,0715 0,0836 0,0854 20 0,0805 0,0040 4,97 105,95
82,30 94,45 84,80 88,75 103,15 102,50 115,90 130,00 48,35 53,90 106,90 103,50 129,85 120,55 148,60 119,30 117,20 115,75 123,05 130,20 20 105,95 25,18 23,77
0,1292 0,1285 0,1264 0,1275 0,1274 0,1265 0,1298 0,1287 0,1328 0,1395 0,1329 0,1355 0,1430 0,1402 0,1429 0,1363 0,1337 0,1331 0,1466 0,1518 20 0,1346 0,0073 5,41 107,88
96,95 98,57 92,43 94,17 97,99 98,60 94,32 93,08 95,02 96,80 103,69 106,53 127,03 118,51 125,03 115,92 122,75 122,21 125,61 132,45 20 107,88 13,97 12,95
0,1917 0,192 0,1653 0,1647 0,1797 0,1785 0,1953 0,1933 0,2017 0,2079 0,1862 0,1915 0,1973 0,1939 0,1961 0,1879 0,1862 0,1849 0,2122 0,2202 20 0,1913 0,0136 7,12
-0,0040 0,0580 0,1474 0,2663 0,0760 -0,0046 0,0567 0,1432 0,2587 0,0761 -0,0052 0,0590 0,1490 0,2575 0,0737 -0,0053 0,0598 0,1445 0,2561 0,0724 -0,0030 0,0625 0,1481 0,2433 0,0784 -0,0043 0,0556 0,1377 0,2355 0,0780 -0,0039 0,0578 0,1458 0,2426 0,0811 -0,0032 0,0602 0.1504 0,2486 0,0870 -0,0031 0,0634 0,1471 0,2550 0,0760 -0,0034 0,0618 0,1484 0,2605 0,0770 -0,0059 0,061 0,1422 0,2524 0,0725 -0,0034 0,0638 0,1437 0,2543 0,0747 -0,0050 0,0627 0,1421 0,2531 0,0736 -0,0041 0,0616 0,1385 0,2457 0,0722 BG BG BG BG n s % CV %E %R -0,0043 0,0575 0,1531 0,2653 0,0654 -0,0062 0,0558 0,1469 0,2549 0,0651 -0,0050 0,0583 0,1527 0,2508 0,0771 -0,0039 0,0568 0,1488 0,2443 0,0784 20 0,0009 21,66 20 20 20 20 -0,0043 0,0591 0,1458 0,2528 0,0753 0,0029 0,0043 0,0077 0,0048 4,86 1,44 2,95 2,78 3,06 1,11 6,39
51
6.6.6.6. Parmetros Estadsticos de la validacin de Magnesio (Mg).

Tabla 36. Parmetros estadsticos de la Validacin de Magnesio (Mg). PARMETRO Sensibilidad Lmite de Deteccin Instrumental (L.D.I.) Lmite de Deteccin del Mtodo (L.D.M.) Lmite de Cuantificacin (L.C.) Precisin (% CV). Exactitud (% Error). % de Recuperacin
0.0035 mg/L Mg 0.0031 mg/L Mg 0.0090 mg/L Mg 0.05 mg/L Mg Ver tabla 35. Em Ver tabla 35. Em Ad. Baja: 105.95 % Ad. Alta: 107.88 %
52
6.6.7. Validacin de Calcio (Ca). Parmetros instrumentales para la determinacin de Calcio: Longitud de Onda (): Ancho de Banda: Corriente de lmpara (CH): Correccin de Fondo: Tipo de llama recomendada: Intervalo flujo de combustible:
*
422.7 nm. 0.5 nm. 100% uso normal. Ninguno xido Nitroso/Acetileno*. 4.0 a 4.4 L/min.
Se recomienda la utilizacin de este tipo de llama puesto que este elemento (calcio - Ca) tiene un punto de ebullicin muy alto y puede formar xidos con el aire muy estables y difciles de disociar, por lo que este tipo de llama provee una temperatura entre (2500 a 3100) C capaz de romper los enlaces formados por este elemento y el aire (oxigeno) y as poder cuantificar calcio en su estado inico elemental. 6.6.7.1. Curva de Calibracin de Calcio (Ca). Estandarizacin de la curva de calibracin definiendo rango de trabajo.
Tabla 37. Y Grafica 6. Curva de calibracin para Calcio. Concentracin (mg/L de Ca) 0.0 0.1 0.5 1.0 2.0 Absorbancia (Abs) 0.000 0.005 0.023 0.046 0.085
53
6.6.7.2. Registro de Resultados de Validacin de Calcio (Ca).

Tabla 38. Consolidado plan de validacin Calcio (Ca).
CORPORACION AUTONOMA REGIONAL DE RISARALDA - LABORATORIO DE ANALISIS DE AGUAS - LAA CONSOLIDADO PLAN DE VALIDACION DE CALCIO (Ca).
Ca
Blanco
0,4 (Eb)
2,0 (Em)
4,0 (Ea) MR1
Uso
Unidades DIA 0 DIA 1 DIA 1 DIA 2 DIA 2 DIA 3 DIA 3 DIA 4 DIA 4 DIA 5 DIA 5 DIA 6 DIA 6 DIA 7 DIA 7 Dia (2) tarde Dia (2) tarde Dia (n1) Dia (n1) Dia (n2) Dia (n2) Total datos Media Desviacion SD CV Error Recuperacion Analista
mg/L
mg/L
mg/L
mg/L
mg/L
mg/L
%R
mg/L
%R
mg/L
-0,0252 0,1874 0,7158 1,2727 0,6016 -0,0228 0,2612 0,9083 1,5528 0,7941 0,0158 0,0054 0,0093 0,0146 0,3295 1,0776 1,9441 1,4913 0,3344 1,0729 1,8448 1,4275 0,4267 0,8214 1,3368 0,1037 0,4292 0,9166 1,5180 0,1229
0,7594 0,8942 1,2931 1,1778 0,1187 0,1469
94,09 67,93 -73,24 -101,29 9,87 14,94
1,0760 0,9324 2,1594 1,993 0,1540 0,1812
86,24 29,27 125,75 107,54 9,41 10,92
1,2560 1,1085 1,421 1,5433 1,2514 1,3769
0,0407 0,0369
0,3585 1,1280 1,9513 1,4272 0,3739 1,1318 1,8744 1,3587
1,6002 1,5535
118,50 128,47
2,0730 2,2251
121,45 159,23
1,7661 2,1823
n s % CV %E %R
20 0,0093 0,0241 257,73
20
20
20
20
20 0,9430 0,5771 61,20 32,41
20 32,41 85,82 264,80
20 1,3493 0,8786 65,11 81,23
20 81,23 57,57 70,88
20 1,4882 0,3450 23,18
0,3376 0,9716 1,6619 0,9159 0,0816 0,1543 0,5919 0,5919 24,16 15,60 15,88 51,42 35,62 58,45 64,63
54
7. CONCLUSIONES
En este documento se presentaron algunas de las curvas representativas obtenidas para mltiples ensayos realizados en la determinacin del rango de trabajo para cada elemento. Para los criterios de aceptacin, fueron tomados como referente para este trabajo el diez por ciento (10%) para coeficiente de variacin y porcentaje de error, tomados del procedimiento de gestin 18L-PG12 Aseguramiento de la Calidad de Resultados de Ensayos implementado en el L.A.A. de la CARDER. Estos criterios de aceptacin son sujetos a cambios para bajar su porcentaje, para ser ms preciso en la validacin de este mtodo instrumental, a medida que se implementen acciones de mejora en el anlisis. Para el clculo del lmite de deteccin del mtodo se bas en el procedimiento 18L-PG13 Validacin de Mtodos, calculndose as: L.D.M. = 3s (tres veces la desviacin estndar) de un estndar de concentracin baja conocida, para todos los mtodos se calcul de esta forma. Se aportan datos como evidencia objetiva para ser analizada por la directora del L.A.A. de la CARDER, con el fin de que la tcnica de E.A.A. por llama para la determinacin de metales pesados (Hierro (Fe), Manganeso (Mn), Sodio (Na), Potasio (K), Magnesio (Mg)), sea sujeta a mejoras y que esta tcnica sea incluida dentro del alcance de parmetros acreditados por el laboratorio ante el IDEAM. La validacin de la metodologa con el elemento Calcio (Ca), se estandariz la curva de calibracin con una llama Aire-Acetileno, arrojando buenos resultados de linealidad. Al momento de aplicar el esquema de validacin de 7 das adoptado en el L.A.A., se hicieron diariamente los anlisis estadsticos de los datos obtenidos. Los resultados acumulados tanto para porcentaje de error como para coeficiente de variacin, superaron en todos los casos el 10% adoptado. Por lo anterior, se hizo una discusin preliminar de datos con los analistas del LAA y con la Directora del Laboratorio, llegando a la conclusin de que esto se debe en gran parte a la carencia de la llama recomendada para el mtodo (xido Nitroso- Acetileno), la cual proporcionara un poder calorfico mayor que permite la ionizacin total del calcio en la llama, por lo que con la autorizacin de la Directora del LAA, se suspende la validacin hasta tanto no se cuente con el accesorio requerido. Se ha adoptado un criterio de aceptacin para porcentaje de recuperacin de 100 20%, debido a que no se tena un criterio de aceptacin definido para la recuperacin en este mtodo analtico, este criterio lo recomienda el Standard
55
Methods for the Examination of Water and Wastewater, como punto de partida para calcular el porcentaje de recuperacin. La verificacin del plan de validacin adoptado en el L.A.A. de la CARDER en el procedimiento 18L-PG13 Validacin de Mtodos es apto para implementar como metodologa de validacin en tcnicas instrumentales ya que evala aspectos tcnicos como sensibilidad, lmite de deteccin, lmite de cuantificacin, exactitud y precisin cumpliendo as con requisitos mnimos de calidad para su implementacin en el laboratorio y dando oportunidad para mejoras continuas en futuros ensayos. Al tecnificar el proceso de validacin por medio de la estadstica se elaboraron los registros de validacin, donde se pueden evidenciar los parmetros estadsticos de cada uno de los elementos validados con el fin de brindar informacin para su fcil consulta en caso de que se requiera.
56
8. GLOSARIO*
Sigla o trmino L.A.A. CARDER IDEAM Validacin Definicin. Laboratorio de Anlisis de Aguas. Corporacin Autnoma Regional del Risaralda. Instituto de Hidrologa, Meteorologa y Estudios Ambientales La validacin es la confirmacin, a travs del examen y el aporte de evidencias objetivas, de que se cumplen los requisitos particulares para un uso especfico previsto. verificacin de que los requisitos especificados son adecuados para un uso determinado Aporte de evidencia objetiva de que un elemento satisface requisitos especificados, para lo cual se toma en cuenta la incertidumbre de medida Confirmacin mediante la aportacin de evidencia objetiva de que se han cumplido los requisitos especificados. Es un sistema fsico que no contiene muestra real y por consiguiente no debera contener el analito de inters, pero que debe contener todos los reactivos que se utilizan en el mtodo de anlisis, y ser sometido a las mismas condiciones y al mismo procedimiento de las muestras reales y los estndares Para este propsito, el trmino se refiere a cada fsico que sea sometido al procedimiento de siguiendo el mtodo que est estandarizado, ya blanco, un estndar, una muestra adicionada o una real propiamente dicha. sistema anlisis sea un muestra
Verificacin
Blanco
Muestra
Muestra adicionada
Es una muestra natural a la cual se le ha adicionado una cantidad conocida del analito que se estudia. Esta adicin debe hacerse en forma prevista en el diseo de las condiciones de estandarizacin para que sea reproducible. Es la menor cantidad que puede ser distinguida del fondo
Lmite de
*Corporacin Autnoma Regional de Risaralda, CARDER. Procedimiento de Gestin 18L-PG13 Validacin de Mtodos, Edicin N 1, 2008, pg. 3 a 5.
57
deteccin
con cierto nivel de confianza especificado (generalmente 95%). LD=k*desv. estndar del ruido de fondo (generalmente k=3) Es la menor cantidad que puede ser determinada cuantitativamente con una incertidumbre asociada, para un dado nivel de confianza. LC=k*desv. estndar del ruido de fondo (3 k 10) Proporcionalidad entre la concentracin y la seal producida por el instrumento Intervalo de concentracin de analito sobre el cual el mtodo produce resultados proporcionales a la misma Intervalo de concentracin donde acta el mtodo en cuestin. El intervalo de trabajo de un mtodo de anlisis es aquel intervalo entre dos concentraciones de un analito en una muestra, para la cual se podra mostrar, que el mtodo tiene suficiente precisin y exactitud, y muestra linealidad. Se prefiere que este incluido en el rango lineal. Cambio en la respuesta de un instrumento de medicin dividido por el correspondiente cambio de estmulo. Medida del factor de respuesta del instrumento como una funcin de la concentracin. Normalmente se mide como la pendiente de la curva de calibracin Proximidad entre el resultado de una medicin y el valor verdadero del mesurando. Proximidad de concordancia entre valores medidos obtenidos por mediciones repetidas de un mismo objeto, o de objetos similares, bajo condiciones especificadas La precisin de una medicin usualmente se expresa en forma numrica por medidas de la imprecisin, tales como la desviacin estndar, la varianza o el coeficiente de variacin bajo las condiciones especificadas de la medicin.
Lmite de cuantificacin
Linealidad
Rango lineal
Rango de trabajo
Sensibilidad
Exactitud
Precisin
Repetibilidad
Precisin de una medida bajo un conjunto de condiciones de
58
repetibilidad de medicin Reproducibilidad Precisin de una medida reproducibilidad de medicin bajo condiciones de
Robustez
Es la medida de la capacidad de un procedimiento analtico para permanecer inafectado por pequeas pero deliberadas variaciones en los parmetros del mtodo. Proporciona adems una indicacin de su fiabilidad durante su uso normal Es la capacidad que tiene un procedimiento para determinar cuantitativamente una especie qumica que ha sido adicionada a una muestra, se expresa como porcentaje (%R)
Recuperacin
59
9. BIBLIOGRAFIA.
[1] COLOMBIA, MINAMBIENTE, Decreto 1600 del 27 de julio de 1999, por el cual se reglamenta parcialmente el sistema nacional ambiental (SINA), Articulo 5, Pargrafo 1. [2] SKOOG HOLLER NIEMAN, Principios de Anlisis Instrumental, 5ta. Edicin, McGraw-Hill, 2001. Cap. 6, pg. 120. [3] Jairo Alberto Romero Rojas, CALIDAD DEL AGUA, 2da edicin, Escuela Colombiana de Ingeniera, 2005, pg. 40-41. [4] [5] [6] Ibid., pg. 41. Ibid., pg. 42. SKOOG HOLLER NIEMAN, Op. Cit., pg. 42.
[7] WillardMerrittDean, METODOS INSTRUMENTALES DE ANALISIS, 4ta. Edicin, CECSA 1981, Cap. 12 pg. 383. [8] [9] [10] [11] [12] [13] [14] [15] Ibid., pg. 385. Ibid., pg. 385-386. Ibid., pg. 389. Ibid., pg. 391. SKOOG, HOLLER, NIEMAN, Op. Cit., pg. 177. Willard Merritt Dean, Op. Cit., pg. 391. SKOOG HOLLER NIEMAN, Op. Cit., pg. 231. Ibid., pg. 235.
[16] APHA AWWA WEF, Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater, 21st edition, 2005, Metals part 3000, 3010A pag. 3-1
60
[17] [18] [19] [20]
Ibid., 3111A pg. 3-15 SKOOG HOLLER NIEMAN, Op. Cit. pg. 13-14 18L-PG13 Validacin de Mtodos. 18L-PG12 Aseguramiento de la Calidad de resultados de ensayos.
61

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CONVENIO CARDER- UTP INFORME FINAL Escuela de Tecnologa Qumica

PRESENTADO POR: DIEGO MAURICIO GOMEZ H.

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PRESENTADO POR: DIEGO MAURICIO GOMEZ H.

Proyecto de Trabajo de Grado para optar Por el ttulo de Tecnlogo Qumico

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Nota de Aceptacin. __________________ __________________ __________________

__________________ Presidente del Jurado.

Ciudad: _______________, (da) _____ de __________ 20_____.

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6.6.7.2. Registro de Resultados Validacin de Calcio (Ca). 7. CONCLUSIONES. 8. GLOSARIO. 9. BIBLIOGRAFIA.

Pg. 54. Pg. 55. Pg. 57. Pg. 60.

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Escala de Tiempo 1 Mes 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11

1. Realizacin del anteproyecto

3. Reunin con Directores de la Validacin.

4. Revisin del anteproyecto por los directores del proyecto.

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6. 2 Revisin del anteproyecto por los directores del proyecto.

8. Ejecucin del Proyecto de Validacin

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4. PRESUPUESTO PARA EL PROYECTO

Responsable del Proyecto: DIEGO MAURICIO GOMEZ HERNANDEZ.

Aportes UTP (especie)

Resumen de los Costos:

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5.1.2. Objetivos Especficos.

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5.2. MARCO TEORICO

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El Logaritmo (base 10) de la reciproca de la transmitancia es la Absorbancia (A):

Disolucin Absorbente de concentracin C.

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Aadir 5 ml de HNO3 Y perlas de Ebullicin.

Terminada la digestin, Dejar enfriar hasta Temperatura ambiente.

NO dejar que la muestra Se seque durante la Digestin.

Si es necesario contine Agregando HNO3 para Completar la digestin.

Aforar y mezclar Cuidadosamente.

ANALIZAR POR E.A.A.

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Correccin de Fondo: Tipo de llama: Intervalo flujo de combustible:

Lmpara de deuterio (D2) Aire/Acetileno. 0.8 a 1.0 L/min.

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Para determinar la sensibilidad se utiliza la siguiente formula:

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13/07/2010 14/07/2010 15/07/2010 Promedio Desviacin Estndar, s

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Nota de Aceptacin. __

Ciudad: _____________, (da) _ de ____ 20_.