Bacillus anthracis.

Carbunco o ntrax maligno.

Lpez Manrique Aldo Rodrigo. Grupo 7QV1. Carrera: Qumico Bacterilogo Parasitlogo. Correo electrnico: gilroe02@hotmail.com

INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL. Escuela Nacional de Ciencias Biolgicas. Bacteriologa Mdica.

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1. Introduccin. Bacillus anthracis es un microorganismo que puede causar una infeccin aguda en animales y en seres humanos. sta es fundamentalmente una enfermedad de herbvoros, que adquieren la infeccin despus de estar en contacto con las esporas que se encuentran en el suelo. En su forma de espora esta bacteria puede persistir en la naturaleza durante periodos prolongados, posiblemente por aos. La distribucin del ntrax maligno abarca a todo el mundo. La enfermedad ocurre en forma primaria en tres formas: cutnea, respiratoria y gastrointestinal. Si bien la incidencia del ntrax maligno ha disminuido en los pases desarrollados, contina siendo un problema de salud considerable en los pases en vas de desarrollo. Se encuentra en la siguiente Clasificacin Taxonmica: Dominio Phylum Clase I Orden IV Familia III Genero Especie Bacteria Proteobacteria Alphaproteobacteria Rhizobiales Brucellaceae Bacillus anthracis

2. Objetivo general. Presentar y conocer los aspectos patognicos, microscpicos, moleculares y epidemiolgicos de Bacillus anthracis como agente etiolgico que produce el ntrax (carbunco), as como la importancia mdica que tiene para su cuadro clnico, identificacin y profilaxis. 3. Importancia de estudiar a Bacillus anthracis. Puede, primordialmente, considerarse a este microorganismo como una potencial arma biolgica. El uso de este microorganismo puede verse antagonizada con la elaboracin de medidas preventivas ante la exposicin o riesgo probable, disminuyendo considerablemente el nmero de organismos infectados. Este
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microorganismo afecta a animales herbvoros principalmente, repercutiendo en ganado y consumo de carne, generando prdidas econmicas, y tambin afecta a los humanos, por lo que la enfermedad abarca importancia mundial por su rpida distribucin. La alta resistencia a condiciones adversas, facilidad de dispersin como las corrientes de aire, incrementa los casos de infeccin y representa un problema sumamente serio el poder controlar a informar a las personas acerca del peligro que representa este agente patognico. 4. Caractersticas microscpicas y de cultivo, e identificacin. Morfologa microscpica.

Se le conoce como un bacilo largo de 1-4 m, con terminaciones cuadradas, cuya visibilidad es posible con tincin de Gram, vindose propiamente como un bacilo largo Gram positivo, con disposiciones de cadenas largas sobre la observacin fijada. En caso de querer observar la cpsula polipeptdica del bacilo, se recomienda utilizar azul de metileno policrmico. El microorganismo es esporulado (las esporas se encuentran en el centro de los bacilos), presenta extremos y son inmviles.

Figura 1. Tincin de Gram de Bacillus anthracis.

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Morfologa colonial o de cultivo.

El crecimiento de las colonias se da en una temperatura ptima de 37C, aunque puede hacerlo en una amplia escala de temperaturas que van de 12-45C. Las colonias del B. anthracis virulento son grandes, y rugosas, con bordes rizados. Las colonias ms pequeas pertenecen a razas avirulentas. Son de color gris-blanco, ser totalmente blancas y no hemoltico cuando se le cultiva en gelosa sangre estndar.

Figura 2. Acercamiento sobre el crecimiento caracterstico de colonias virulentas de B. anthracis en gelosa sangre a crecimiento de 37C. Identificacin presuntiva de B. anthracis.

Se le reconoce por las siguientes caractersticas: a) Se le debe a la presencia de la cpsula polipeptdica, observada con azul de metileno policrmico para teirle. b) Crece en Agar Gelosa Sangre de cordero 5%, o Gelosa Chocolate de 3537c/15-20 horas. c) Es inmvil, debido a la ausencia de flagelos. d) Catalasa positivo. e) Es lisado por -bacterifagos. f) Es sensible a penicilina. g) Es aerbico estricto.
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h) Tincin de anticuerpos fluorescentes (API Productos, Painview, NY). i) Prueba de formacin de cpsula en agar bicarbonato. j) Identificacin mediante anlisis de cidos grasos por cromatografa gaseosa. Tanto en las muestras muy contaminadas como en materia fecal puede requerirse el empleo de un agar muy selectivo o mtodos de descontaminacin debido a la resistencia de las esporas al calor o al etanol. Tabla 1. Caractersticas bioqumicas para la identificacin presuntiva de B. anthracis en el laboratorio. Prueba
Catalasa Oxidasa Glucosa D-Manosa Hemlisis Movilidad Manitol Citrato Hidrlisis de urea Reduccin de NO3 Hidrlisis de gelatina Maltosa Lactosa Sensibilidad a penicilina*

Resultado
POSITIVO NEGATIVO NEGATIVO NEGATIVO NEGATIVA NEGATIVA NEGATIVO VARIABLE NEGATIVO POSITIVO POSITIVO POSITIVA NEGATIVA SENSIBLE

* (sensidiscos de 10 U): positiva con zonas de inhibicin de 15 a 20mm. Es importante anotar que B. anthracis no crece en agar MacConkey. 5. Composicin antignica e importancia. Este microorganismo produce la toxina del ntrax maligno que est compuesta por tres protenas: el antgeno protector (AP), el factor del edema (FE), y el factor letal (FL).

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a) Antgeno protector (AP): Se une o liga a los receptores celulares y forma un anillo heptmero en la superficie de la clula al que se adhieren los otros dos factores. A continuacin se produce la endocitosis y los factores de virulencia pasan al interior de la clula. b) Factor del Edema (FE): Una vez en el interior de la clula este factor, activado por la calmodulina, se incrementa la produccin de la molcula mensajera AMPc a niveles anormales, causando una acumulacin de fluidos en el interior y alrededor de la clula que da lugar al edema. c) Factor Letal: Este factor recibe su nombre por causar la muerte en animales de experimentacin. Acta mediante la ablacin de un fragmento de la citoquinina MAPKK, que juega un papel crucial en el reclutamiento de otras clulas del sistema inmunolgico para combatir la infeccin. 6. Espectro de sensibilidad a antibiticos. Se estima que casi el 20% de los casos no tratados de ntrax maligno concluyen fatalmente, mientras que el ntrax maligno respiratorio es casi siempre mortal. Sin embargo, los fallecimientos son raros despus del tratamiento de la forma cutnea. La penicilina G intravenosa es el frmaco de eleccin, en una dosis aproximada de 4 millones de unidades cada 4 a 6 horas. Si a las 6 horas las lesiones que se ven negativas en el cultivo, el tratamiento deber continuar de 7 a 10 das. Es sensible a penicilina (aunque existen informes de unos pocos casos resistentes), eritromicina, tetraciclina, gentamicina, cloranfenicol y quinolonas. 6.1.1. Problemas relacionados con los mecanismos de resistencia antimicrobiana. En los distintos estudios llevados a cabo para investigar la sensibilidad in vitro de B. anthracis a los distintos agentes antibacterianos se han utilizado diferentes metodologas para determinar la concentracin mnima inhibitoria (CIM). Se demostr que, en el caso de los -lactmicos, el porcentaje de esporas en el inculo no influye sobre la CMI de la benzilpenicilina, la amoxicilina y la combinacin amoxicilina-clavulanato. Sin embargo, los antibiticos disponibles frente a B. anthracis no son activos contra las esporas. Se ha demostrado que
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esta cepa es sensible a bencilpenicilina y ampicilina o amoxicilina. El cefaclor y el cefadroxilo tienen gran actividad in vitro contra esta cepa, al igual que el flomoxef, una cefamicina sustituida. Entre los carbapenmicos, el panipenem parece ser altamente efectivo, as como el imipenem. Los aminoglucsidos y la vancomicina tienen baja actividad, pero la teicoplanina parece tener buena actividad in vitro, con una CMI de 0.20 mg/l. Entre los macrlidos, la claritromicina tiene la mayor actividad. Las fluoroquinolonas son muy activas, aunque la actividad es algo menor para lomefloxacina, fleroxacina, enoxacina y norfloxacina. 7. Enfermedades que produce. I. ntrax maligno cutneo.

Presenta grandes dificultades para diagnosticarse. Ocurre en las reas de la piel expuestas en los brazos y manos, seguido de la cara y el cuello. La infeccin comienza como una ppula pruriginosa que se parece a la picadura de un insecto. La ppula se agranda y dentro de dos das se transforma en una lcera rodeada de vesculas. La lesin habitual tiene un dimetro de 1-3 cm, de aspecto redondeado y regular. Despus se desarrolla una costra central necrtica negra caracterstica que se asocia con edema. Generalmente es indolora y provoca prurito. Despus de 1 o 2 semanas la lesin se seca y la costra comienza a desprenderse y poco despus se separa, lo que revela la presencia de una escara permanente. Puede haber linfangitis y linfadenopata regional y algunos sntomas sistmicos se presentan, como: II. Fiebre. Malestar general. Cefaleas. ntrax maligno respiratorio.

Las esporas inhaladas del bacilo no secreta toxina antes de la germinacin y provocan escasa reaccin inflamatoria, por lo que la neumona por lo general no se torna evidente por signos o sntomas den las etapas iniciales de la evolucin. Las esporas germinan y forman bacilos a medida que son transportadas hacia los
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ganglios hiliares y mediastnicos, en los que provocan una necrosis hemorrgica grave y edema mediastnico, lo que lleva al ensanchamiento mediastnico significativo y al dolor subesternal. A medida que la necrosis se extiende hacia la pleura aparecen derrames pleurales sanguinolentos. Los hallazgos secundarios a los efectos en la trquea incluyen tos seca y estridor. La extensin del edema desde el mediastino hasta el cuello se puede volver visible desde el punto de vista clnico. La diseminacin hematgena hacia la submucosa del tracto gastrointestinal conduce a numerosas lesiones, generando lceras, hematemesis o ambas. Los ganglios mesentricos muestran edema y necrosis. La diseminacin hematgena hacia las meninges provoca meningitis sanguinoleta y purulenta. Se presentan dos etapas. De 1 a 3 das, en la primer fase: a. b. c. d. Malestar general. Fiebre. Tos seca. Opresin subesternal.

En la segunda fase: a. Muerte por shock sptico despus de 2 3 das. b. Fiebre alta. c. Diaforesis difusa. d. Disnea de reposo. e. Estridor. f. Tos seca. g. Traquipnea. h. Taquicardia. i. j. Fiebre alta. Dolor abdominal.

k. Delirio y coma (a los que sobreviven a partir de este punto).

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Los que sobreviven antes del ltimo punto pueden morir rpidamente, vindose lcidos, hasta que ocurre el shock fatal. El examen fsico revela la presencia de rales crepitantes hmedos en pulmones y derrame pleural. Hay ensanchamiento de mediastino y derrame pleural. III. ntrax gastrointestinal.

Se adquiere principalmente en comunidades donde hay pobreza, donde la gente se ve obligada a consumir la carne de los animales muertos por ntrax. O bien, puede usarse esta carna infectada para elaborar embutidos. El periodo del ntrax gastrointestinal es de 3 a 7 das. Hay dos presentaciones clnicas despus de la ingesta de alimentos contaminados: abdominal y orofarngeo. Se incluyen como sntomas: a. Nuseas. b. Anorexia. c. Fiebre. Las lesiones se describen en el ciego y reas adyacentes al intestino. Se presentan a veces en duodeno e intestino grueso. Hay dolor abdominal, hematemesis y diarrea con sangre. Se desarrolla toxemia con shock, cianosis y muerte. Tarde en manifestarse de 2 a 5 das. IV. Meningitis.

La meningitis se observa en menos del 5% de los casos de ntrax maligno y puede ser una complicacin de cualquiera de las tres formas de infeccin primaria por B. anthracis. 7.1.1. Mecanismos de patogenicidad. El AP se une a los receptores especficos de la superficie celular y, a travs de la activacin proteoltica de un fragmento 63-kD (AP 63), forma un canal de membrana que media la entrada del FE y el FL dentro de la clula. El FE es una adenilciclasa y junto con el AP forma una toxina que se denomina Toxina del
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edema. La toxina letal es un factor dominante de virulencia producida por B. anthracis y es la causa principal de la muerte en los animales infectados. Experimentalmente, una inyeccin de esta toxina mata a una rata en 38 minutos.

Figura 3. Mecanismo de accin de la toxina letal de B. anthracis. La produccin de los factores de toxina es regulada por un plsmido y la del material de la cpsula por un segundo plsmido (pXO1 y pXO2 respectivamente). Los efectos de los componentes de la toxina en los neutrfilos humanos se han estudiado en detalle.

8. Figura 4. Composicin primaria de la clula de B. anthracis.

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La fagocitosis de B. anthracis ozonizados y muertos por radiacin no se ve afectada por los componentes individuales de la toxina. Sin embargo, la combinacin de la TL y la TE inhibe la fagocitosis bacteriana y bloquea el estallido oxidativo de los PMN. Ambas toxinas incrementa los niveles intracelulares de AMPc. En los macrfagos la toxina letal, despus de la internalizacin a travs de los receptores de la superficie celular, induce la entrada de calcio y la inhibicin de la sntesis macromolecular. La toxina letal provoca apoptosis y necrosis a travs de las fosfatasas proteicas, lo que conduce a la lisis en dos horas. Se ha demostrado en forma reciente que el FL es una proteasa que cliva el terminal amino de las protencinasas activadas por los mitgenos 1 y 2 (MAPKK 1 y MAPKK 2) y de este clivaje inactiva la MAPKK 1e inhibe la va de traduccin de la seal de MAPK. Esto ltimo sugiere que dos de los componentes de la toxina aumentan la susceptibilidad del husped mediante el bloqueo de la traduccin de seales, por supresin de los PMN, y la induccin de los efectos citotxicos. 8.1.1. Gneros y especies. Tabla 2. Clasificacin y diversidad de las especies del gnero Bacillus.
ACIDFILAS B. acidocaldarius B. coagulans B. polymyxa ALCALINFILAS B. alkalophilus B. pasteurii HALFILAS B. pantothenticus B. pasteurii PSICRTROFAS B. globisporus B. insolitus B. marinus B. macquariensis B. megaterium B. polymyxa TERMFILAS B. acidocaldarius B. schlegelii B. stearothermophilus DENITRIFICANTES B. azotoformans B. cereus B. laterosporus B. licheniformis B. pasteurii B. stearothermophilus FIJADORAS DE N2 B. macerans B. polymyxa

PRODUCTORAS DE ANTIBITICOS

PATGENOS DE INSECTOS

PATGENOS DE VERTEBRADOS

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B. brevis B. cereus B. circulans B. laterosporus B. licheniformis B. polymyxa B. pumilus B. subtilis B. larvae B. lentimorbis B. popilliae B. thuringiensis B. alvei B. anthracis B. cereus B. coagulans B. laterosporus B. megaterium B. subtilis B. sphaericus B. circulans B. brevis B. licheniformis B. macerans B. pumilus B. thuringiensis B. brevis B. cereus B. circulans B. laterosporus B. licheniformis B. polymyxa B. pumilus B. subtilis B. larvae B. lentimorbis B. popilliae B. thuringiensis B. alvei B. anthracis B. cereus B. coagulans B. laterosporus B. megaterium B. subtilis B. sphaericus B. circulans B. brevis B. licheniformis B. macerans B. pumilus B. thuringiensis B. brevis B. cereus B. circulans B. laterosporus B. licheniformis B. polymyxa B. pumilus B. subtilis

9. Profilaxis (prevencin y vacunas). Si existen indicios de que est ocurriendo un brote de ntrax maligno o que se han utilizado esporas de un patgeno en guerra biolgica, se puede administrar la profilaxis con ciprofloxacina (500 mg por va oral dos veces al da) o doxiciclina (100 mg por va oral dos veces al da) a las personas no inmunizadas potencialmente susceptibles. La duracin del tratamiento para la profilaxis posexposicin es de al menos 6 semanas (o 2 semanas despus de la tercera dosis de vacuna cuando los anticuerpos inducidos por la vacuna son detectables). El tratamiento antibitico alivia los sntomas sistmicos, aunque no previene la progresin a la costra. La excisin de la lesin est contraindicada. El tratamiento tpico no es efectivo. Los corticosteriodes sistmicos se han empleado para los pacientes con edema extenso o cervical y en aquellos con meningitis, no obstante las indicaciones no estn bien establecidas. En ocasiones requiere una traqueotoma cuando el edema cervical compromete la va area. Las vestimentas con secreciones de las lesiones se deben incinerar, esterilizar en autoclave o descartar como desechos biolgicos peligrosos. Los pacientes con lesiones que drenan deben ser sometidos a aislamiento de contactos. No se ha documentado la transmisin de persona a otra, incluso en los pacientes con ntrax por inhalacin. Se han desarrollado las vacunas con virus vivos atenuados y las vacunas con virus muertos. La nica vacuna para el humano en uso actualmente fue producida por la Michigan Biologic Products Institute, que en la actualidad es fabricada por Bio-Port. La vacuna es un filtrado estril de cultivos de una cepa
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avirulenta no capsulada que elabora AP. La vacuna en sus etapas de desarrollo ha alcanzado el 92.5% de eficacia, y se debera usar para personas altamente expuestas con material contaminado o al medio ambiente. Se administra en un volumen de 0.5 mL en forma subcutnea a las 0, 2 y 4 semanas y nuevamente a los 6, 12 y 18 meses seguidos de un refuerzo anual. Los veterinarios deben ser inmunizados contra el ntrax maligno. Se puede determinar la inmunidad mediada por clulas posvacunacin mediante la prueba de anthraxina o por la presencia de anticuerpos especficos. La capacidad para preparar componentes purificados de la toxina de ntrax maligno por tecnologa recombinante ha abierto la posibilidad de nuevas vacunas contra esta enfermedad. Por ejemplo, las inmunizaciones con vacuna toxoide AP, o vacunas de virus vivos productores de AP provocan una proteccin parcial o completa contra la infeccin por B. anthracis; estas nuevas vacunas merecen ser sometidas a pruebas de campo cuidadosas. 10. Resumen. B. anthracis, el agente etiolgico del ntrax, es un bacilo grampositivo formador de esporas. El hombre puede contraer la enfermedad por exposicin al

microorganismo a travs de animales infectados o de tejidos de estos animales, o por exposicin directa a la bacteria. En los ltimos 25 aos se han producido slo unos pocos brotes. Existen al menos tres formas clnicas de ntrax: cutnea, gastrointestinal y pulmonar diseminada (va inhalatoria). No existen informes de transmisin directa entre personas. La mayora de los casos que tienen lugar en los pases industrializados se asocian con exposicin a productos animales o bioaerosoles, conteniendo esporas del microorganismo. Aunque B. anthracis parece ser muy sensible a las penicilinas, es importante destacar que los antibiticos -lactmicos no se concentran en los fagocitos, lo cual s ocurre en el caso de las fluoroquinolonas, los macrlidos, los ketlidos y las ciclinas. Es preciso tener en cuenta la tolerancia al tratamiento prolongado para asegurar la adherencia al tratamiento. Las esporas de B. anthracis son potenciales agentes de guerra

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biolgica, que se difunden con facilidad y son resistentes al calor, la luz y la radiacin. El ntrax ms a menudo resulta ser una enfermedad cutnea, sin embargo, una infeccin grave y a menudo fatal puede ocurrir debido a la ingestin o la inhalacin de esporas. Las lesiones cutneas se caracterizan por un dolor, ppula pruriginosa que evoluciona en una lesin vesicular o ulcerativa. La necrosis se presenta, acompaada por el desarrollo de cicatrices y edema masivo. El ntrax se puede diagnosticar a travs de cultivos y muestras de la sangre, lesiones de la piel o de esputo de un paciente expuesto. Si B. anthracis se asla, se confirma el diagnstico. Adems, los anticuerpos especficos se pueden detectar en la sangre. El tratamiento se inicia tan pronto como se sospeche de la exposicin al ntrax; es esencial para prevenir la infeccin por ntrax. El tratamiento temprano puede ayudar a prevenir la fatalidad. Muchos antibiticos son eficaces contra el ntrax. El ms utilizado son la penicilina, ciprofloxacina y doxiciclina. 11. Summary. B. anthracis, the causative agent of anthrax is a spore-forming gram-positive bacillus. Humans can contract the disease from exposure to the organism through infected animals or tissue from these animals, or direct exposure to the bacteria. In the last 25 years there have been only a few outbreaks. There are at least three clinical forms of anthrax: cutaneous, gastrointestinal and disseminated pulmonary (inhalation). There are no reports of direct transmission between people. Most cases occur in industrialized countries are associated with exposure to animals or bioaerosols containing spores of the microorganism. Although B. anthracis to be sensitive to penicillin, it is important to note that lactam antibiotics are not concentrated in phagocytes, which does occur in the case of fluoroquinolones, macrolides, ketolides and cyclins. Its necessary to consider tolerance to ensure long-term treatment adherence. B. anthracis spores are potential agents of biologic warfare; they are easily disseminated and are resistant to heat, light, and radiation.
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This anthrax most often results in cutaneous disease; however, a severe and often fatal infection can occur due to spore ingestion or inhalation. Cutaneous lesions are characterized by a painless, pruritic papule that evolves into a vesicular or ulcerative lesion. Necrosis follows, accompanied by scar development and massive edema. Anthrax can be diagnosed through cultures of the blood, skin lesions, or sputum of an exposed patient. If B. anthracis is isolated, the diagnosis is confirmed. Additionally, specific antibodies may be detected in the blood. Treatment thats initiated as soon as exposure to anthrax is suspected is essential to preventing anthrax infection; early treatment may also help prevent fatality. Many antibiotics are effective against anthrax. The most widely used are penicillin, ciprofloxacin, and doxycycline. 12. Bibliografa. Duesbery NS, Webb CP, Leppla SH, et al. Proteolytic inactivation of MAPkinasa-kinase by anthrax lethal factor. Science 1998;280:734-737. http://www.higiene.edu.uy/cefa/2008/grampositivosaerobios.pdf Consultado el 04/10/2013, a las 01:24 am. Tonello F, Zornetta I. Bacillus anthracis factors for phagosomal escape. Toxins (Basel). 2012 Jul;4(7):536-53. http://textbookofbacteriology.net/B.anthracis1.jpeg Figura 1. http://fundacionio.org/img/bacteriology/img/bacillus%20anthracis%2002.jpg Figura2. http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/3/34/B_anthracis_diagram_f r.png Figura 3 y 4. Mandell, Douglas, Bennett, et al. Enfermedades infecciosas. Principios y Prctica, Vol. 2. 5a Edicin. Editorial Mdica Panamericana. 2002; Pp. 2687-2692. Swartz M. Recognition and management of anthrax-An update. New England Journal of Medicine. 2001. Nov 29;345(22):1621-1626.

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