Ministerio de

Ambiente, Vivienda
y Desarrollo
Territorial

DIPLOMADO VIRTUAL
FORMACIN AVANZADA EN BIODIVERSIDAD Y CONSERVACIN
CON NFASIS EN BIOSEGURIDAD

BOGOT, D. C. DICIEMBRE DE 2008

CULTIVO DE TEJIDOS
VEGETALES
DIPLOMADO VIRTUAL FORMACIN
AVANZADA EN BIODIVERSIDAD Y
CONSERVACIN CON NFASIS EN
BIOSEGURIDAD

JENNIFER BLANCO

BOGOT, D. C. DICIEMBRE DE 2008

CULTIVO DE TEJIDOS
VEGETALES
Es una biotecnologa por la cual las plantas o
sus rganos se pueden multiplicar en gran
nmero o su crecimiento individual puede ser
controlado, a partir de
pequeos
trozos de tejido
vegetal sobre una
combinacin precisa de
nutrientes en un recipiente
estril. (Morgan 1987).
Tomado de Vanegas 2008

FUNDAMENTO TERICO
Debe su origen a la investigacin sobre
hormonas que controlan el crecimiento y
desarrollo vegetal combinado con tcnicas
bsicas de microbiologa.

FUNDAMENTO TERICO
Requiere la diseccin de la planta con el
propsito de transferir su punto de crecimiento
o tejido que crece activamente (los tejidos
meristemticos) con seguridad y limpieza
dentro de un recipiente estril sin introducir
microorganismos contaminantes.

FUNDAMENTO TERICO

En algunos casos las clulas conformarn una

masa aparentemente desorganizada, conocida
como callo, en otros estarn presentes otras
estructuras reconocibles como tallos, rganos,
races, bulbos u otros rganos.

FUNDAMENTO TERICO

Multiplicacin

de brotes de yemas
terminales, axilares o laterales.
Organognesis Directa
Organognesis Indirecta
Embriognesis Somtica

FUNDAMENTO TERICO
Gel acuoso solidificado con agar o medio lquido
Macro y micronutrientes
Vitaminas
Azcares
Cocktail de hormonas vegetales
pH
Esterilizacin

Cultivo de Tejidos

Tomado de Vanegas 2008

FUNDAMENTO TERICO
Micropropagacin
Se obtienen poblaciones clonales de material
introducido a condiciones in vitro o de
regenerantes potencialmente transgnicos.
Los explantes ms comnmente utilizados en
los procesos de micropropagacin son los
nudos.

FUNDAMENTO TERICO
Regeneracin
Se utilizan entrenudos aislados de plntulas in
vitro en los que se inducen procesos de
organognesis adicionando hormonas vegetales
que incluyen auxinas y citoquininas las cuales
provocan la formacin de callo y posteriormente
la formacin de brotes. Se agrega cefatoxina
para eliminar el exceso de bacteria.

OBJETIVO
Obtencin de plantas transgnicas
Obtencin del material fuente que
posteriormente va a ser transformado
Procesos de regeneracin y propagacin del
material potencialmente transgnico
obtenido despus del proceso de
transformacin.

PROCEDIMIENTO
Medios de Cultivo
Medio de micropropagacin MS
complementado con AG3 0.1 mg/L. Los
diferentes macro y microelementos se
disponen en forma de nueve soluciones.
pH 5,6

PROCEDIMIENTO
Medios de Cultivo

Soluciones MS
Sacarosa
Agar
Phytagel
gua destilada
Soluciones de NaOH 1N y HCl 1N

PROCEDIMIENTO
Micropropagacin
Tomar cuidadosamente una plntula,
ubicarla en la caja de petri.
Cortar y aislar segmentos nodales
(segmentos de 0.5-1 cm).

PROCEDIMIENTO
Micropropagacin
Ubicar en el medio de cultivo de manera
vertical.
Tapar con vinilpel y llevar a cuarto de
crecimiento (17-20C, fotoperodo 12/12 o
16/8).

PROCEDIMIENTO

Tomado de Vanegas 2008

PROCEDIMIENTO
Regeneracin
Preparar medio MS bsico slido (sin adicin
de hormonas). Esterilizar en autoclave.
Adicionar los siguientes componentes segn
necesidad: AG3, ANA, AIA, ZR y cefatoxina.
Servir

en cajas de petri plsticas y

almacenar en nevera hasta su uso.

PROCEDIMIENTO
Regeneracin
Despus de realizar la transformacin ubicar entre
10-15 explantes por caja.
Mantener en cuarto de crecimiento (18C,
fotoperodo 16/8 y HR 60%). Cambiar los explantes
de medio cada tres semanas.
Aislar los regenerantes cuando estn lo
suficientemente grandes y micropropagar en medio
MS con adicin de 0.1 mg/L de AG 3.

RESULTADOS ESPERADOS
Micropropagar

nudos de plntulas in vitro de

papa manteniendo su verticalidad, polaridad
y la esterilidad del medio de cultivo.

Sembrar

entrenudos transformados de papa

evitando la contaminacin del material con
hongos y bacterias.

CASO PAPA

Tomado de Yaya y Chaparro 2006

CASO ARROZ

Tomado de Perafan 2008

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
Roca, W. Mroginski, L. 1993. Cultivo de Tejidos en la
Agricultura. Fundamentos y Aplicaciones. CIAT. Cal,
Colombia.
Morgan, W. 1987. In Vitro Cellular & Developmental Biology
Plant. Springer Berlin / Heidelberg. Vol. 23 (3).

GRACIAS POR SU
ATENCIN !!