CONTADOR DE COLONIAS Un contador de colonias es un instrumento utilizado para contar colonias de bacterias o de otros microorganismos que crecen en una

placa Petri. Los primeros contadores slo eran superficies iluminadas sobre las que se colocaba la placa, con las colonias marcadas con un rotulador en la superficie externa de la placa mientras el operador realizaba el recuento manual. Los contadores ms recientes intentan contar las colonias por va electrnica, mediante la identificacin de reas individuales de oscuridad y luz, de acuerdo a los umbrales definidos por el usuario, contando los puntos en los que se aprecia contraste, o de modo automtico mediante registro electrnico tras presionar con cualquier tipo de marcador. MODO DE CONTEO DE MICROORGANISMOS

Estos contadores se utilizan para estimar la densidad de microorganismos en un cultivo lquido. Una dilucin adecuada, o varias diluciones en serie dentro del rango estimado apropiado, se propagan utilizando una tcnica estril en la placa Petri, que se incuba en las condiciones adecuadas para el crecimiento hasta que aparecen las colonias individuales. Cada colonia marca el lugar donde se coloc un solo organismo originalmente, con lo que el nmero de colonias en la placa es igual al nmero de organismos en el volumen de lquido existente en la placa. Esta concentracin se extrapola a partir de la dilucin practicada sobre el cultivo original, para estimar la concentracin de organismos existentes en ese cultivo inicial. Cada vez que se cuenta una colonia el instrumento da tres seales: una seal audible, una marca sobre la cpsula y adems, en la pantalla numrica. El mximo nmero de colonias que pueden ser efectivamente contadas con una sola placa est comprendido entre 100 y 1.000, dependiendo del tamao de la colonia y el tipo de organismo.

MICROSCOPIO El microscopio es un instrumento que permite observar objetos que son demasiado pequeos para ser vistos a simple vista. El tipo ms comn y el primero que se invent es el microscopio ptico. Se trata de un instrumento ptico que contiene dos o ms lentes que permiten obtener una imagen aumentada del objeto y que funciona por refraccin. La ciencia que investiga los objetos pequeos utilizando este instrumento se llama microscopa.

El microscopio fue inventado por Zacharias Janssen en 1590. En 1665 aparece en la obra de William Harvey sobre la circulacin sangunea al mirar al microscopio los capilares sanguneos y Robert Hooke publica su obra Micrographia. En 1665 Robert Hooke observ con un microscopio un delgado corte de corcho y not que el material era poroso, en su conjunto, formaban cavidades poco profundas a modo de celditas a las que llam clulas. Se trataba de la primera observacin de clulas muertas. Unos aos ms tarde, Marcello Malpighi, anatomista y bilogo italiano, observ clulas vivas. Fue el primero en estudiar tejidos vivos al microscopio. A mediados del siglo XVII un holands, Anton van Leeuwenhoek, utilizando microscopios simples de fabricacin propia, describi por primera vez protozoos, bacterias, espermatozoides y glbulos rojos. El microscopista Leeuwenhoek, sin ninguna preparacin cientfica, puede considerarse el fundador de la bacteriologa. Tallaba l mismo sus lupas, sobre pequeas esferas de cristal, cuyos dimetros no alcanzaban el milmetro (su campo de visin era muy limitado, de dcimas de milmetro). Con estas pequeas distancias focales alcanzaba los 275 aumentos. Observ los glbulos de la sangre, las bacterias y los protozoos; examin por primera vez los glbulos rojos y descubri que el semen contiene espermatozoides. Durante su vida no revel sus mtodos secretos y a su muerte, en 1723, 26 de sus aparatos fueron cedidos a la Royal Society de Londres. Durante el siglo XVIII continu el progreso y se lograron objetivos acromticos por asociacin de Chris Neros y Flint Crown obtenidos en 1740 por H. M. Hall y mejorados por John Dollond. De esta poca son los estudios efectuados por Isaac Newton y Leonhard Euler. En el siglo XIX, al descubrirse que la dispersin y la refraccin se podan modificar con combinaciones adecuadas de dos o ms medios pticos, se lanzan al mercado objetivos acromticos excelentes. Durante el siglo XVIII el microscopio tuvo diversos adelantos mecnicos que aumentaron su estabilidad y su facilidad de uso, aunque no se desarrollaron por el momento mejoras pticas. Las mejoras ms importantes de la ptica surgieron en 1877, cuando Ernst Abbe public su teora del microscopio y, por encargo de Carl Zeiss, mejor la microscopa de inmersin sustituyendo el agua por aceite de cedro, lo que permite obtener aumentos de 2000. A principios de los aos 1930 se haba alcanzado el lmite terico para los microscopios pticos, no consiguiendo estos aumentos superiores a 500X o 1,000X. Sin embargo, exista un deseo cientfico de observar los detalles de estructuras celulares (ncleo, mitocondria, etc.).

El microscopio electrnico de transmisin (TEM) fue el primer tipo de microscopio electrnico desarrollado. Utiliza un haz de electrones en lugar de luz para enfocar la muestra consiguiendo aumentos de 100.000X. Fue desarrollado por Max Knoll y Ernst Ruska en Alemania en 1931. Posteriormente, en 1942 se desarrolla el microscopio electrnico de barrido. TIPOS DE MICROSCOPIOS

Microscopio ptico Un microscopio ptico es un microscopio basado en lentes pticos. Tambin se le conoce como microscopio de luz, (que utiliza luz o "fotones") o microscopio de campo claro. El desarrollo de este aparato suele asociarse con los trabajos de Anton van Leeuwenhoek. Los microscopios de Leeuwenhoek constaban de una nica lente pequea y convexa, montada sobre una plancha, con un mecanismo para sujetar el material que se iba a examinar (la muestra o espcimen). Este uso de una nica lente convexa se conoce como microscopio simple, en el que se incluye la lupa, entre otros aparatos pticos. Microscopio simple Un microscopio simple es aquel que utiliza una sola lente de aumento. Es el microscopio ms bsico. El ejemplo ms clsico es la lupa. El microscopio ptico estndar utiliza dos sistemas de lentes alineados. El objeto a observar se coloca entre el foco y la superficie de la lente, lo que determina la formacin de una imagen virtual, derecha y mayor cuanto mayor sea el poder diptrico de la lente y cuanto ms alejado est el punto prximo de la visin ntida del sujeto. El holands Antoni van Leeuwenhoek construy microscopios muy eficaces basados en una sola lente. Esos microscopios no padecan las aberraciones que limitaban tanto la eficacia de los primeros microscopios compuestos, como los empleados por Robert Hooke, y producan una ampliacin de hasta 300 veces; gracias a ellos Leeuwenhoek fue capaz incluso de describir por primera vez las bacterias. Microscopio compuesto Un microscopio compuesto tiene ms de una lente objetivo. Los microscopios compuestos se utilizan especialmente para examinar objetos transparentes, o cortados en lminas tan finas que se transparentan. Se emplea para aumentar o ampliar las imgenes de objetos y organismos no visibles a simple vista. El microscopio ptico comn est conformado por tres sistemas:

El sistema mecnico est constituido por una palanca que sirve para sostener, elevar y detener los instrumentos a observar. El sistema de iluminacin comprende un conjunto de instrumentos, dispuestos de tal manera que producen las ranuras de luz. El sistema ptico comprende las partes del microscopio que permiten un aumento de los objetos que se pretenden observar mediante filtros llamados "de antigel subsecuente". Microscopio de luz ultravioleta

La imagen en el microscopio de luz ultravioleta depende de la absorcin de esa luz por las molculas de la muestra. La fuente de luz ultravioleta tiene una longitud de onda de 200 nm, por lo tanto puede alcanzar una resolucin de 100 nm. La microscopia ultravioleta no es muy diferente del funcionamiento de un espectrofotmetro pero sus resultados son registrados en fotografas. La muestra no se puede observar directamente a travs del ocular porque la luz ultravioleta puede daar la retina. El mtodo sirve para detectar cidos nucleicos, protenas que contienen determinados aminocidos. Mediante longitudes de ondas especficas para la iluminacin se puede obtener mediciones espectrofotomtricas para cuantificar el ADN y el ARN de cada clula. El microscopio de luz ultravioleta utiliza el rango ultravioleta del espectro luminoso en lugar del rango visible, bien para aumentar la resolucin con una longitud de onda menor o para mejorar el detalle absorbiendo selectivamente distintas longitudes de onda de la banda ultravioleta. Dado que el vidrio no transmite las longitudes de onda ms cortas de la luz ultravioleta, los elementos pticos de estos microscopios estn hechos con cuarzo, fluorita o sistemas de espejos aluminizados. Adems, dado que la radiacin ultravioleta es invisible, la imagen se muestra con fosforescencia, en fotografa o con un escner electrnico. El microscopio de luz ultravioleta se utiliza en la investigacin cientfica. Microscopio de fluorescencia El microscopio de fluorescencia es una variacin del microscopio de luz ultravioleta en el que los objetos son iluminados por rayos de una determinada longitud de onda. La imagen observada es el resultado de la radiacin electromagntica emitida por las molculas que han absorbido la excitacin primaria y reemitido una luz con mayor longitud de onda. Para dejar pasar slo la emisin secundaria deseada, se deben colocar filtros apropiados debajo del condensador y encima del objetivo. Se usa para detectar sustancias con autofluorescencia (vitamina A) o sustancias marcadas con fluorocromos. Microscopio petrogrfico

El microscopio petrogrfico, microscopio polarizador o de luz polarizada es un microscopio ptico al que se le han aadido dos polarizadores (uno entre el condensador y la muestra y el otro entre la muestra y el observador). El material que se usa para los polarizadores son prismas de Nicol o prismas de Glan-Thompson (ambos de calcita), que dejan pasar nicamente la luz que vibra en un nico plano (luz polarizada). Esta luz produce en el campo del microscopio claridad u oscuridad, segn que los dos ncoles estn paralelos o cruzados. Algunos compuestos inorgnicos responden al efecto de la luz, stos tienen un alto grado de orientacin molecular (sustancias anistropas), que hace que la luz que los atraviesa pueda hacerlo en determinados planos vibratorios atmicos. El prisma de Nicol permite el paso de luz en un solo plano, as la calcita gira la posicin de polarizacin, facilitando la identificacin de sustancias que extinguen la luz. Al fenmeno de extincin de luz causado por estos planos atmicos y orientaciones moleculares se llama birrefringencia. Este tipo de microscopio se usa para poder identificar sustancias cristalinas (minerales) o fibrosas (como el citoesqueleto), sustancia amiloide, asbesto, colgeno, cristales de uratos, queratina, slice, polen, etc.

Microscopio de campo oscuro El microscopio de campo oscuro utiliza un haz enfocado de luz muy intensa en forma de un cono hueco concentrado sobre el espcimen. El objeto iluminado dispersa la luz y se hace as visible contra el fondo oscuro que tiene detrs, como las partculas de polvo iluminadas por un rayo de sol que se cuela en una habitacin cerrada. Por ello las porciones transparentes del espcimen quedan oscuras, mientras que las superficies y partculas se ven brillantes, por la luz que reciben y dispersan en todas las direcciones, incluida la del eje ptico que conecta el espcimen con la pupila del observador. Esta forma de iluminacin se utiliza para analizar elementos biolgicos transparentes y sin pigmentar, invisibles con iluminacin normal, sin fijar la muestra, es decir, sin matarla. Tambin es bastante utilizado en la observacin de muestras metalogrficas para la observacin de detalles en superficies con alta reflectancia. El objetivo recibe la luz dispersa o refractada por las estructuras del espcimen. Para lograrlo, el microscopio de campo oscuro est equipado con un condensador especial que ilumina la muestra con luz fuerte indirecta. En consecuencia el campo visual se observa detrs de la muestra como un fondo oscuro sobre el cual aparecen pequeas partculas brillantes de la muestra que reflejan parte de la luz hacia el objetivo.

El efecto es similar a las partculas de polvo que se ven en el haz de luz emanado de un proyector de diapositivas en una habitacin oscura. La luz reflejada por las partculas de polvo llegan hasta la retina del ojo, lo que las hace visibles. La luz dispersa permite incluso distinguir partculas ms pequeas que el poder separador del sistema ptico usado por transparencia. Los condensadores que se emplean en Microscopa de campo oscuro son de dos tipos: del tipo paraboloide (tiene una superficie espejada), y los del tipo cardioide, con dos superficies espejadas. El empleo de uno u otro es indistinto, mediante cualquiera de ambos, la luz no incide directamente en el objetivo (este es el objetivo de estos condensadores), sino que incide con una apertura numrica mayor al del objetivo.

Microscopio de contraste de fases El microscopio de contraste de fases permite observar clulas sin colorear y resulta especialmente til para clulas vivas. Este aprovecha las pequeas diferencias de los ndices de refraccin en las distintas partes de una clula y en distintas partes de una muestra de tejido. La luz que pasa por regiones de mayor ndice de refraccin experimenta una deflexin y queda fuera de fase con respecto al haz principal de ondas de luz que pasaron la muestra. Aparea otras longitudes de onda fuera de fase por medio de una serie de anillos pticos del objetivo y del condensador, anula la amplitud de la porcin fuera de fase inicial del haz de luz y produce un contraste til sobre la imagen. Las partes oscuras de la imagen corresponden a las porciones densas del espcimen; las partes claras de la imagen corresponden a porciones menos densas. Por lo tanto estos microscopios se utilizan para observar clulas vivas, tejidos vivos y cortes semifinos no coloreados. Dos modificaciones del microscopio de fase son el microscopio de interferencia y el microscopio de interferencia diferencial.[cita requerida] Su inventor fue el fsico neerlands Frits Zernike que junto al mtodo de contraste de fases le vali para ganar el Premio Nobel de Fsica en 1953.

Microscopio confocal El microscopio confocal es un microscopio que emplea una tcnica ptica de imagen para incrementar el contraste y/o reconstruir imgenes tridimensionales utilizando un "pinhole" espacial (colimador de orificio delimitante) para eliminar la luz desenfocada o destellos de la lente en especmenes que son ms gruesos que el plano focal. El pinhole es una apertura localizada delante del fotomultiplicador que evita el pasaje de fluorescencia

de las regiones de la muestra que no estn en foco, la luz que proviene de regiones localizadas por encima o por debajo del plano focal no converge en el pinhole y no es detectada por el fotomultiplicador. Esta tcnica ha ido adquiriendo cada vez mayor popularidad entre las comunidades cientfica e industrial. Se aplica tpicamente en las ciencias biolgicas y en la inspeccin de semiconductores. Microscopio electrnico Un microscopio electrnico es aqul que utiliza electrones en lugar de fotones o luz visible para formar imgenes de objetos diminutos. Los microscopios electrnicos permiten alcanzar ampliaciones hasta 5000 veces ms potentes que los mejores microscopios pticos, debido a que la longitud de onda de los electrones es mucho menor que la de los fotones "visibles". El primer microscopio electrnico fue diseado por Ernst Ruska y Max Knoll entre 1925 y 1930, quienes se basaron en los estudios de Louis-Victor de Broglie acerca de las propiedades ondulatorias de los electrones. Un microscopio electrnico, como el de la imagen, funciona con un haz de electrones generados por un can electrnico, acelerados por un alto voltaje y focalizados por medio de lentes magnticas (todo ello al alto vaco ya que los electrones son absorbidos por el aire). Un rayo de electrones atraviesa la muestra (debidamente deshidratada y en algunos casos recubierta de una fina capa metlica para resaltar su textura) y la amplificacin se produce por un conjunto de lentes magnticas que forman una imagen sobre una placa fotogrfica o sobre una pantalla sensible al impacto de los electrones que transfiere la imagen formada a la pantalla de un ordenador. Los microscopios electrnicos producen imgenes sin ninguna clase de informacin de color, puesto que este es una propiedad de la luz y no hay una forma posible de reproducir este fenmeno mediante los electrones; sin embargo, es posible colorizar las imgenes posteriormente, aplicando tcnicas de retoque digital a travs del ordenador. Microscopio electrnico de transmisin Un microscopio electrnico de transmisin (TEM, por sus siglas en ingls, o MET, en espaol) es un microscopio que utiliza un haz de electrones para visualizar un objeto, debido a que la potencia amplificadora de un microscopio ptico est limitada por la longitud de onda de la luz visible. Lo caracterstico de este microscopio es el uso de una muestra ultrafina y que la imagen se obtenga de los electrones que atraviesan la muestra. Los microscopios electrnicos de transmisin pueden aumentar un objeto hasta un milln de veces.

 Microscopio electrnico de barrido El Microscopio electrnico de barrido o SEM (Scanning Electron Microscope), es aquel que utiliza un haz de electrones en lugar de un haz de luz para formar una imagen. Tiene una gran profundidad de campo, la cual permite que se enfoque a la vez una gran parte de la muestra. Tambin produce imgenes de alta resolucin, que significa que caractersticas espacialmente cercanas en la muestra pueden ser examinadas a una alta magnificacin. La preparacin de las muestras es relativamente fcil pues la mayora de SEMs slo requieren que estas sean conductoras. En el microscopio electrnico de barrido la muestra generalmente es recubierta con una capa de carbn o una capa delgada de un metal como el oro para darle propiedades conductoras a la muestra. Posteriormente es barrida con los electrones acelerados que viajan a travs del can. Un detector mide la cantidad de electrones enviados que arroja la intensidad de la zona de muestra, siendo capaz de mostrar figuras en tres dimensiones, proyectados en una imagen de TV o una imagen digital. Su resolucin est entre 4 y 20 nm, dependiendo del microscopio. Inventado en 1931por Ernst Ruska, permite una aproximacin profunda al mundo atmico. Permite obtener imgenes de gran resolucin en materiales ptreos, metlicos y orgnicos. La luz se sustituye por un haz de electrones, las lentes por electroimanes y las muestras se hacen conductoras metalizando su superficie. Microscopio de iones en campo La microscopa de iones en campo (FIM) es una tcnica analtica empleada en ciencia de materiales. El microscopio de iones en campo es una variedad de microscopio que puede ser usado para visualizar la ordenacin de los tomos que forman la superficie de la punta afilada de una aguja de metal. Fue la primera tcnica con la que se consigui resolver espacialmente tomos individuales. La tcnica fue desarrollada por Erwin Mller. En 1951se publicaron por primera vez imgenes de estructuras atmicas de tungsteno en la revista Zeitschrift fr Physik. En la FIM, se produce una aguja de metal afilada y se coloca en una cmara de ultra alto vaco, que despus se llena con un gas visualizador tal como el helio o el nen. La aguja se enfra hasta alcanzar temperaturas criognicas (20-100 K). Luego se aplica un voltaje positivo que va de 5.000 a 10.000 voltios sobre la punta. Los tomos de gas absorbidos por la punta se ven ionizados por el fuerte campo elctrico que existe en las proximidades de ella. La curvatura de la superficie cercana a la punta provoca una magnetizacin natural; los iones son repelidos bruscamente en direccin perpendicular a la superficie (un

efecto de "proyeccin de punto"). Se coloca un detector de modo que pueda recoger esos iones repelidos; y la imagen formada por todos los iones repelidos puede tener la resolucin suficiente como para mostrar tomos individuales en la superficie de la punta. Al contrario que los microscopios convencionales, donde la resolucin espacial se ve limitada por la longitud de onda de las partculas empleadas en la visualizacin, el microscopio basado en FIM funciona por proyeccin y alcanza resoluciones atmicas, con una magnificacin aproximada de unos pocos millones de aumentos. Microscopio de sonda de barrido Un microscopio de sonda de barrido (tambin llamado SPM por sus siglas en ingls Scanning Probe Microscopy) es aquel que tiene el transmisor en la parte exequimal del lente (Objetivo 4x). Este microscopio electrnico utiliza una sonda que recorre la superficie del objeto a estudiar. Su uso en investigaciones cientficas es el de regular la imagen mediante un barrido de electrones haciendo que la imagen aumente (10.000.000 nm). Microscopio de efecto tnel Un microscopio de efecto tnel (STM por sus siglas en ingls) es un instrumento para tomar imgenes de superficies a nivel atmico. Su desarrollo en 1981 hizo ganar a sus inventores, Gerd Binnig y Heinrich Rohrer (de IBM Zrich), el Premio Nobel de Fsica en 1986. Para un STM, se considera que una buena resolucin es 0.1 nm de resolucin lateral y 0.01 nm de resolucin de profundidad. Con esta resolucin, los tomos individuales dentro de los materiales son rutinariamente visualizados y manipulados. El STM puede ser usado no solo en ultra alto vaco, sino que tambin en aire, agua, y varios otros lquidos o gases del ambiente, y a temperaturas que abarcan un rango desde casi cero Kelvin hasta unos pocos cientos de grados Celsius. El STM est basado en el concepto de efecto tnel. Cuando una punta conductora es colocada muy cerca de la superficie a ser examinada, una corriente de polarizacin(diferencia de voltaje) aplicada entre las dos puede permitir a los electrones pasar al otro lado mediante efecto tnel a travs del vaco entre ellas. La resultante corriente de tunelizacin es una funcin de la posicin de la punta, el voltaje aplicado y la densidad local de estados (LDOS por sus siglas en ingls) de la muestra. La informacin es adquirida monitoreando la corriente conforme la posicin de la punta escanea a travs de la superficie, y es usualmente desplegada en forma de imagen. La microscopa de efecto tnel puede ser una tcnica desafiante, ya que requiere superficies extremadamente limpias y estables, puntas afiladas, excelente control de vibraciones, y electrnica sofisticada.

 Microscopio de fuerza atmica El microscopio de fuerza atmica (AFM, de sus siglas en ingls Atomic Force Microscope) es un instrumento mecano-ptico capaz de detectar fuerzas del orden de los nanonewtons. Al rastrear una muestra, es capaz de registrar continuamente su topografa mediante una sonda o punta afilada de forma piramidal o cnica. La sonda va acoplada a un listn o palanca microscpica muy flexible de slo unos 200 m. El microscopio de fuerza atmica ha sido esencial en el desarrollo de la nanotecnologa, para la caracterizacin y visualizacin de muestras a dimensiones nanomtricas

DESINFECCIN DEL REA DE TRABAJO La limpieza y la desinfeccin son procedimientos de gran importancia, ya que permiten controlar la presencia de microorganismos sobre las superficies. La limpieza se define como el proceso de remover fsicamente el sucio, el polvo, la grasa, y otros contaminantes de las superficies, equipos, reas, etc. Para ello generalmente se utilizan detergentes que eliminan el tipo de sustancia presente y que no daan la superficie a tratar. La desinfeccin es un proceso que implica la destruccin de microorganismos perjudiciales (formas vegetativas), a travs del uso de sustancias qumicas o agentes fsicos aplicados sobre superficies inertes. Entre los desinfectantes ms utilizados podemos citar los alcoholes, los compuestos de amonio cuaternario, y los compuestos clorados, etc. La limpieza debe ser un paso previo a la desinfeccin ya que con este proceso, adems de eliminar muchas sustancias que pueden servir como nutrientes para los microorganismos, se eliminan sustancias que pueden impedir que las soluciones desinfectantes acten eficientemente. Es importante seleccionar productos que aseguren una correcta desinfeccin, por cual deben responder a lo siguiente: Tener amplio espectro de accin. Un efecto prolongado. Que su eficacia se mantenga ante la presencia de residuos de suciedad.

Buen precio. Que se adapten a cambio de ph y dureza de agua. No corrosivos. Carentes de toxicidad para el hombre incluso a altas concentraciones. Aroma agradable.