Cromatografa de Gases con detector de captura de electrones Introduccin La cromatografa es un mtodo muy utilizado en todas las ramas de la ciencia

y que permite la separacin, identificacin y determinacin de los componentes qumicos en mezclas complejas. Ningn otro mtodo de separacin es tan potente y de aplicacin tan general como la cromatografa. Nos basaremos en la cromatografa de gases que la idea de esta tcnica se basa en la volatilizacin de la muestra y su posterior inyeccin en la cabeza de una columna cromatografa. Para la elucin de la muestra se usa un gas inerte como fase mvil, de esta manera la fase mvil no interacciona con las molculas del analito, simplemente transporta el analito a travs de la columna. Existen dos tipos de cromatografa de gases (GC): Cromatografa gas-slido (GSC) la fase estacionaria es slida y la retencin de los analito se produce mediante adsorcin Cromatografa gas-lquido (GLC): la fase estacionaria son molculas de lquido inmovilizadas sobre la superficie de un gas inerte. Esta es la que se usa ms ampliamente .GSC la fase estacionaria es slida y la retencin de los analitos en ella se produce mediante el proceso de adsorcin. Precisamente este proceso de adsorcin, que no es lineal, es el que ha provocado que este tipo de cromatografa tenga aplicacin limitada, ya que la retencin del analito sobre la superficie es semipermanente y se obtienen picos de elucin con colas. Su nica aplicacin es la separacin de especies gaseosas de bajo peso molecular. La GC es un sistema compuesto de gas portador, sistema de inyeccin de muestra, columna (generalmente dentro de un horno), y detector. En el caso del detector utilizaremos el de captura de electrones para la determinacin de un frmaco en fluidos biolgicos que mas adelante se hablara sobre ello. Fundamento terico de cromatografa de gases El detector de captura de electrones ha llegado a ser uno de los detectores mas ampliamente utilizados en el anlisis de muestras medioambientales debido a su selectividad para detectar compuestos que contienen halgenos tal es el caso de los pesticidas y de los bifenilos policlorados. Este tipo de detector opera as del mismo modo que en un contador proporcional para la medida de rayos X.

Un electrn de emisor provoca la ionizacin del gas portador (con frecuencia, nitrgeno) y la produccin de una rfaga de electrones. De este proceso de ionizacin en ausencia de especies orgnicas, resulta una corriente constante entre un pa de electrodos. Sin embargo la corriente disminuye siendo muy sensible a las molculas que contienen grupos funcionales electronegativos tales como halgenos perxidos, quinonas y grupos nitro; en cabio, no es sensible a grupos funcionales como aminas, alcoholes e hidrocarburos. Una aplicacin importante del detector de captura de electrones dees la deteccin y determinacin de insecticidas clorados. Los detectores de captura de electrones son altamente sensibles y tienen la ventaja de no alterar la muestra de manera significativa (a diferencia del detector de llama). Por otra parte, su intervalo de respuesta lineal se limita normalmente a unos dos rdenes de magnitud. Cromatografo De Gases Partes Y Funcionamiento El corazn de los procesos de cromatografa de gases es la separacin en columna. Los requerimientos bsicos en un equipo de cromatografa de gases son: 1. 2. 3. 4. Gas de arrastre o acarreador Puerto de inyeccin Una columna Un detector

5. Un registrador o cualquier otro dispositivo de salida para medir la seal del detector 6. Cromatogramas

En la siguiente figura de detallan estos requerimientos en un cromatgrafo de gases:

Componentes bsicos de un cromatografo de gases En el cromatografo de gases la mezcla de solutos a separar, una vez volatizada, se hace pasar a travs de un tubo largo y estrecho (columna) con la ayuda de un gas portador inerte, basndose la separacin en la distinta velocidad de los solutos a su paso por la columna, los cuales van llegando a continuacin al sistema de deteccin. As seales del detector se registran adecuadamente obtenindose una serie de picos que constituyen el cromatograma. La posicin de los picos (tiempo de retencin) se utiliza con los fines cualitativos, mientras que el tamao de los mismos se relaciona con la concentracin de los solutos. Segn este proceso, los componentes de un cromatografo de gases son: 1Sistema de suministro de gas portador, que generalmente es una bala o botella de gas a presin, y que a su salida tiene: a) un manorreductor, b) un sistema de regulacin y medida del caudal. Frecuentemente, el gas se divide en dos flujos antes de llegar al sistema de introduccin de la muestra: uno se dirige directamente al detector, para que acten como referencia, mientras que el otro pasa a travs de la columna, y es el que transporta la muestra. 2Sistema de introduccin de la muestra, cuya configuracin vara segn el estado fsico de la misma y el tipo y capacidad de la columna utilizada. Este sistema pone en contacto a la muestra son la corriente de gas portador.

3Sistema de termostatacion, tambin denominado horno, que controla la temperatura del sistema de introduccin de la muestra y de la columna ya que esta es una variable decisiva para conseguir una separacin y reproductibilidad adecuadas. 4Columna, que es el componente esencial del cromatografo ya que es donde se produce la separacin de los solutos. En ella se encuentran la fase estacionaria (liquida o solida). Presenta distintas formas y tamaos segn el tipo de aplicacin. 5El sistema de deteccin, situado a la salida de la columna. A travs de el pasa el gas portador con los solutos ya separados. Cuando pasa un soluto se origina una seal elctrica que se amplifica adecuadamente. 6Registrador, al que llega la seal elctrica amplificada y da lugar al cromatograma. A partir del mismo se obtienen los datos cualitativos y cuantitativos. 7Integrador computador, que es un sistema informativo incorporado al cromatografo para la toma y tratamiento de datos. Realiza automticamente las operaciones siguientes: a) integra el rea del pico, b) mide el tiempo de retencin, c) realiza los clculos con estndares y d) da impreso el informe al final del anlisis. Detector de captura electrnica (ECD) Cuenta con dos electrodos, por lo que pasa el efluente de la columna, uno tiene un radioistopo Ni 63 o tritio absorbido en titanio que emite electrones al desintegrarse. El Ni 63 es mas usado, porque aunque es menos sensible que el tritio produce una corriente constante y es menos sensible a la contaminacin. Estos producen electrones secundarios de baja energa que bombardean al gas portador (nitrgeno), lo que produce un plasma de iones positivos, radicales y electrones trmicos, al aplicar una diferencia de potencial entre los dos electrodos se recogen los electrones trmicos y se produce una corriente constante que corresponde a la seal de la lnea base cuando solo pasa el gas portador. Los compuestos que absorben electrones reaccionan con los electrones trmicos para producir iones negativos de mayor masa, la velocidad de recombinacin entre iones positivos y negativos es mayor que entre los electrones trmicos y los iones positivos. En presencia de especies orgnicas que capturan electrones como halgenos, perxidos, quinonas, el grupo nitro, la corriente disminuye y esta disminucin es la base del funcionamiento cuantitativo del detector. No es sensible a aminas, alcoholes e hidrocarburos. En este detector el voltaje se aplica en pulsos 0.6 us y

amplitud de 50 V para recolectar los electrones mviles. En los ECD pulsantes se emplea Ar con 5 por ciento a 10 por ciento de metano ya que as los electrones son mas veloces que en nitrgeno. Es muy sensible y no altera la muestra, pero su intervalo de respuesta lineal es de cuatro rdenes de magnitud. Un detector ECD tiene las siguientes caractersticas: el efluente de la columna pasa por un emisor constante entre los dos electrodos. Es sensible a los elementos electronegativos, el orden de respuesta es F-< Cl-< Br< IEl gas de Make up debe ser Ar-metano o N2, el volumen de celda es 0.2 mL, el intervalo de lnea es de 104. Funcionamiento del detector El detector de captura de electrones consiste en una celda de volumen pequeo que contiene una baja energa b fuente de rayos, por lo general una fuente Ni63. El detector puede funcionar de dos maneras, ya sea con un potencial constante aplicado a travs de la celda (el modo DC) o con un potencial de pulsos a travs de la clula (el modo pulsado). En el modo de CC, hidrgeno o nitrgeno puede ser utilizado como gas portador y un pequeo potencial (por lo general slo unos pocos voltios) se aplica a travs de la clula que es justamente suficiente para reunir todos los electrones disponibles y proporcionar una pequea corriente permanente. Si una molcula de captura de electrones (por ejemplo, una molcula que contiene un tomo de halgeno que tiene solamente siete electrones en su capa externa) entra en la clula, los electrones son capturados por la molcula y las molculas cargadas convertidas. La movilidad de los electrones capturados se reduce mucho en comparacin con los electrones libres y, por tanto, la corriente de electrodo cae dramticamente. Hay algunas desventajas en el uso del modo de DC de deteccin que surge de la variacin de la energa de los electrones con un potencial aplicado para la respuesta especfica del detector para diferentes molculas depender del potencial aplicado. En el modo pulsado una mezcla de 10% de metano en argn se emplea generalmente al medio ambiente y captura de electrones, estos son muy diferentes. Los electrones generados por la fuente radiactiva rpidamente asumen solamente energa trmica y, en ausencia de un potencial de recoleccin , existe en la superficie de la fuente en una regin anular alrededor de 2 mm de profundidad a la temperatura ambiente y aproximadamente 4 mm de profundidad a 400 C. por un perodo corto se aplica un impulso rectangular al electrodo de la

recoleccin de los electrones y la produccin de una corriente de base. El metano de pie actual, utilizando 10% en atmsfera de argn se trata de 10-8 amplificador con un nivel de ruido de alrededor de 5 x 10-12 amp. La forma de onda del pulso se muestra en la figura 63.

Durante el perodo de inactividad de la forma de onda, los electrones con energa trmica slo se procedern a unirse fcilmente a cualquier molcula de captura de electrones presentes en la clula y producir iones cargados negativamente. Los iones negativos rpidamente recombinan con los iones positivos y, por lo tanto, no estn disponibles para su recoleccin. En consecuencia, la seal recibida constituye una reduccin en la corriente de pie. El perodo del potencial pulsado se ajusta de manera que relativamente a pocas de las molculas cargadas negativamente y al ser lentas tienen tiempo de llegar al nodo, pero los electrones que se mueven ms rpido recogen todo. Durante el "perodo d" los electrones tratan de restablecer el equilibrio con el gas. Las tres variables de funcionamiento son la duracin del pulso, frecuencia del pulso y la amplitud del pulso. Mediante el ajuste adecuado de estos parmetros, la corriente puede ser hecha para reflejar las movilidades relativas de las diferentes especies cargadas en la clula y, por lo tanto, ejercer cierta discriminacin entre diferentes materiales de electrones de captura. Hay un gran nmero de diseos diferentes, pero el detector de captura de electrones su base consta de una cmara pequea de uno o dos ml de volumen con dos electrodos metlicos. Los electrodos pueden estar formados por cilindros concntricos o por discos de metal separados por un aislante adecuado. La columna contiene la fuente radiactiva, generalmente elctricamente conectado al conducto a travs del cual el gas portador entra y al lado negativo de la fuente de alimentacin. Un difusor de gasa "difusor" a veces se conecta a la salida de la columna y al lado positivo de la fuente de alimentacin. La corriente de electrodo se mide mediante un amplificador adecuado y los datos adquiridos por un equipo apropiado.

El detector de captura de electrones es extremadamente sensible, probablemente el detector ms sensible disponible GC (ca. 10-13 g / ml) y se utiliza ampliamente en la deteccin y anlisis de compuestos halogenados, en particular plaguicidas,. Se funcionarn utilizando helio, argn o argn / mezclas de metano como gases portadores. Metodologa Determinacin de Morfina en fluidos biolgicos (suero/ plasma) Material Cromatografo de gases Hp 5713 con una columna de vidrio de 3 pies en espiral un detector de captura de electrones 63Ni . la cromatografa se hizo a temperaturas de columna y detector de 220 y 300 C respectivamente y un vehiculo ( 5% de metano en argn ) velocidad de flujo de 40 ml / min, Tubo de vidrio de 50 ml con tapn Pipetas graduadas de 2ml y 10 ml Centrifugadora Reactivos Solucin tampn borato con p H 8.9 Solucin tampn fosfato con p H 10,1 Solucin etanolica de nalorfina diluida con acetato de etilo Isobutanol 10% de cloroformo Indicaciones El material de vidrio se lav con dicromato acido antes de su uso.

Recoleccin de la muestra Tomar una muestra de sangre en un tubo rojo centrifugar durante 5 minutos a 3500 rpm posteriormente separar el suero / plasma en otro tubo para trabajarlo posteriormente.

Procedimiento En un tubo de vidrio de 50 ml agregar 2 mililitros de suero / plasma , dos mililitros de solucin tampn borato junto con 25 ml de isobutanol al 10% se tapa el tubo y agitar vigorosamente durante 3 minutos. Se retira la parte acuosa del centrifugado y el disolvente se centrifugo durante 5 minutos a 2000 rpm, despus se decantara en un en un cilindro graduado de vidrio con tapn de 25 ml. La capa orgnica se lavara dos veces con 5 ml de solucin tampn de fosfato. se aadirn 5 ml de HCl 0.5 N y se agitara el cilindro vigorosamente durante tres minutos. Se extraer 4.5 ml ml el extracto del cido y se transferirn a un tubo tapado , y el p H se ajustara a 8,7 Se extrajo de la solucin acuosa en 5mlde acetato de etilo que contiene 10% de isopropanol Cuatro y medio mililitros de de la solucin de acetato de etilo isopropanol junto con 0.1 ml de la solucin de nalorfina se transfirieron a un tubo de 10 por 120 mm con una capa de tefln Se evaporara a una sequedad bajo una suave corriente de aire filtrado a 50 C Se le aadir una decima de mililitro cada una de acetato de etilo y anohidrido trifluoroacetico y se tapara el tubo y se mezclara vigorosamente un minuto Posteriormente se coloc el tubo en bao de agua a 50 C durante 20 minutos, donde se vuelven a evaporar. Estos se reconstituirn en 0.1 ml de acetato de etilo, y se utiliza 1-5 alcuotas para la cromatografa. La cuantificacin se basa en la altura del pico.

Resultados Conclusiones La cromatografa de gases tiene amplia aplicacin, en las industrias se enfoca principalmente a evaluar la pureza de los reactantes y productos de reaccin o bien a monitorear la secuencia de la reaccin, para los fabricantes de reactivos qumicos su aplicacin para la determinacin de la pureza es lo ms importante. En la investigacin es un auxiliar indispensable para diversas tcnicas de evaluacin, entre las principales estn los estudios cinticos, anlisis de adsorcin a temperatura programada, determinacin de reas especficas por adsorcin de gas y determinacin de isotermas de adsorcin.

En el campo tambin pueden ser aplicados, principalmente en estudios de contaminantes del agua: insecticidas en agua, pesticidas en aguas de lagos, lagunas, ros; desechos industriales descargados en ros o lagunas. En la industria del petrleo juega una funcin primordial, por medio de la cromatografa se pueden analizar los constituyentes de las gasolinas, las mezclas de gases de refinera, gases de combustin, etc. Las aplicaciones de la cromatografa son mltiples y la convierten en la tcnica de anlisis ms poderosa que existe, su utilizacin requiere principalmente de constancia y entusiasmo. Referencias Skoog, A. D, Holler J.F, Nieman T.A. principios de anlisis instrumenta, 5 edicin, pp. 767-768 grupo editorial Mc Graw Hill / interamericana de Espaa, Aravaca (Madrid), 2001