UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS Y FARMACIA

RAS ORBIS TE CO C

UA CARO IC LI SP N N

Tamizaje fitoqumico de la especie vegetal guatemalteca Vliz (Bombacaceae)

Quararibea yunckeri Standley Subsp. izabalensis W.S. Alverson ex

ADEMIA CO AC AC

INFORME DE TESIS

LENSIS INT ER MA TE
Presentado por

ESMERALDA ORANTES MORALES

Para optar al ttulo de

QUMICA

Guatemala, Agosto 2008

UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS Y FARMACIA

RAS ORBIS TE CO C

UA CARO IC LI SP N N

Tamizaje fitoqumico de la especie vegetal guatemalteca Vliz (Bombacaceae)

Quararibea yunckeri Standley Subsp. izabalensis W.S. Alverson ex

ADEMIA CO AC AC

LENSIS INT ER MA TE
ESMERALDA ORANTES MORALES
QUMICA
Guatemala, Agosto 2008

NDICE
I. II. III. RESUMEN INTRODUCCIN ANTECEDENTES A. GENERALIDADES DE Quararibea yunckeri Standley Subsp. izabalensis W.S. Alverson ex Vliz. 1) 2) 3) 4) 5) 6) 7) 8) 9) B. 1) 2) 3) 4) 5) 6) 7) 8) 9) 10) IV. V. VI. VII. VIII. IX. X. XI. XII. XIII. Familia a la que pertenece Nombre Cientfico Nombre Comn Sinnimos Distribucin Geogrfica Hbitat Descripcin Taxonmica Composicin Qumica Usos Tradicionales CARACTERSTICAS DE METABOLITOS SECUNDARIOS Y FUNAMENTOS TERICOS DE LAS PRUEBAS A REALIZAR Alcaloides Flavonoides y Antocianinas Antraquinonas Cumarinas Esteroides o triterpenoides Saponinas Principios Amargos Taninos Aceites Voltiles Sesquiterpenlactonas 6 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 17 18 19 20 37 40 44 45 46 49 63 4 4 4 4 4 4 4 5 5 5 1 3 4

JUSTIFICACIN OBJETIVOS HIPTESIS MATERIALES Y MTODOS RESULTADOS DISCUSIN DE RESULTADOS CONCLUSIONES RECOMENDACIONES REFERENCIAS ANEXOS

XIV. GLOSARIO

1 I. RESUMEN

El presente informe se basa en la identificacin de grupos de metabolitos secundarios en hojas y tallos de la especie vegetal Quararibea yunckeri Subsp. izabalensis (Molinillo) colectada en su hbitat natural, en la selva baja muy hmeda de la Sierra Santa Cruz, en el departamento de Izabal, Guatemala. (Ver anexo #5) Hasta hoy se careca de informacin sobre los metabolitos secundarios presentes en Quararibea yunckeri Subsp. izabalensis, nicamente se cuenta con antecedentes de la familia a la que pertenece (Bombacaceae), por lo tanto en el presente informe se dan a conocer los resultados del estudio exploratorio acerca de la composicin qumica, por ser este un estudio no experimental, descriptivo y transversal (5); los resultados se dan a conocer de forma cualitativa indicando la presencia o ausencia del grupo de metabolito secundario presente. Los grupos de metabolitos secundarios estudiados en Quararibea yunckeri Subsp. izabalensis son: alcaloides, esteroides flavonoides o y antocianinas, saponinas, antraquinonas, cumarinas, triterpenoides,

principios amargos, taninos, aceites voltiles y sesquiterpenolactonas; previo a la realizacin de las pruebas la muestra se seco y moli a temperatura ambiente para evitar la transformacin de los metabolitos; el anlisis se realizo mediante pruebas va hmeda y cromatografa en capa fina las cuales estn basadas en el Manual de Tamizaje Fitoqumico LIPRONAT; para el anlisis de aceites voltiles se utilizo cromatografa de gases acoplado a masas. Segn los resultados obtenidos Quararibea yunckeri Subsp. izabalensis presenta posible presencia de todos los metabolitos secundarios en

2 estudio, detectan excepto las taninos; sin va embargo hmeda, antraquinonas ambas pruebas y se

sesquiterpenlactonas estn presentes en cantidades menores a las que pruebas especificas detectaron nicamente por cromatografa en capa fina. Se caracterizaron 20 aceites voltiles en la especie vegetal mediante Cromatografa de Gases acoplada a Masas; se detecto la presencia de Timol, Metil Eugenol, -Santaleno, -cis-Farneseno, cis-Geranilacetona trans--Ionona, cis-Nerolidol, Benzofenona, Fitol, entre otros (11). Este informe aportar al establecimiento de perfiles de composicin de metabolitos secundarios de productos naturales, especficamente a la flora guatemalteca con posibles futuras evaluaciones de intereses de uso medicinal, industrial y/o alimenticio, as como su potencial farmacolgico.

3 II. INTRODUCCIN Quararibea yunckeri Standley Subsp. izabalensis (Molinillo) fue

recientemente descrita como una especie vegetal nueva que crece en la selva baja muy hmeda, en suelos arcillosos, poco profundos; crece junto a Quararibea funebris, Clusia flava, Terminalia nyssaefolia, Blakea bella, entre otras; pertenece a la Alseis familia hondurensis,

Bombacaceae, la cual no ha sido ampliamente estudiada a nivel nacional e internacional, es por esta razn que se desea llevar a cabo el tamizaje fitoqumico1 de dicha especie para conocer su composicin qumica (15). Los metabolitos secundarios son compuestos qumicos que poseen similitudes entre si, los cuales confieren a la planta propiedades farmacolgicas, de all el inters de su investigacin, especialmente de las que se desconoce su composicin qumica (1). En el siguiente trabajo de investigacin, se realizan pruebas para caracterizar los grupos de metabolitos secundarios, especficamente, alcaloides, flavonoides y antocianinas, antraquinonas, cumarinas, esteroides o triterpenoides, saponinas, principios amargos, aceites voltiles y sesquiterpenolactonas; en la parte area de la planta (hojas y tallos), la cual ser colectada en su hbitat natural (8).

1.

Caracterizacin de grupos de metabolitos secundarios

4 III. ANTECEDENTES A. GENERALIDADES DE Quararibea yunckeri Standley Subsp.

izabalensis W.S. Alverson ex Vliz. 1) FAMILIA A LA QUE PERTENECE: Bombacaceae. 2) NOMBRE CIENTFICO: Quararibea yunckeri Standley Subsp. izabalensis W.S. Alverson ex Vliz (15). 3) NOMBRE COMN: Molinillo (15). 4) SINONIMOS: No posee (15). 5) DISTRIBUCIN GEOGRFICA: Guatemala (Izabal, Alta Verapaz y Huehuetenango), Mxico (15). 6) HBITAT: Quararibea yunckeri Standley Subsp. izabalensis crece en la selva baja muy hmeda, en suelos arcillosos, poco profundos, de origen custico; crece junto a Quararibea funebris, Clusia flava, Terminalia nyssaefolia, Alseis hondurensis, Blakea bella, Calophyllum brasilensis var. rekoi, Pithecellobium donnellsmithii, Manikara zapata, Parathesis belizensis, Stylogyne guatemalensis, Sloanea tuerckheimii, Cleidion nicaraguensis y Psychotria spp. (15).

5 7) DESCRIPCIN TAXONMICA: Reino: Plantae Subreino: Embriobionta Clase: Magnoliopsida Subclase: Dilleniidae Orden: Malvales Familia: Bombacaceae Gnero: Quararibea Especie: Quararibea yunckeri Standley Subsp. izabalensis W.S. Alverson ex Vliz. Notas taxonmicas: especie raramente colectada (15). 8) COMPOSICIN QUMICA: No se tienen antecedentes de la composicin qumica de la especie en estudio acerca de los metabolitos secundarios presentes en ella, pero se posee informacin acerca de la composicin qumica de la familia a la que pertenece (Bombacaceae), siendo estos los siguientes: taninos y aceites voltiles (12). 9) USOS TRADICIONALES: El uso de la especie vegetal en estudio a nivel comunitario, reportado en Honduras, Mxico y Belice es alimenticio, como condimento y aromatizante, especialmente para la fabricacin de chocolate a partir de cacao. poseen Las especies vegetales de la familia Bombacacea actividad antidiabtica, narctica, antigripal, supuracin, astringente, diurtica,

antipirtica, otros (12).

antiodontlgico, contra gonorrea, contra hemorroides, entre

6 B. CARACTERSTICAS DE METABOLITOS SECUNDARIOS Y

FUNAMENTOS TERICOS DE LAS PRUEBAS A REALIZAR Los metabolitos secundarios son sustancias que se producen en un organismo a partir de los metabolitos primarios (carbohidratos, protenas, lpidos, y aminocidos), con funciones variadas y propias de los organismos en los que se encuentran (1). 1) Alcaloides: Uno de los grupos ms importantes dentro de las sustancias de origen natural con inters teraputico debido a su actividad farmacolgica significativa. como de sustancias Los alcaloides verdaderos se definen bsicas, de un de origen natural y nitrogenadas, parte

distribucin restringida, poseen una estructura compleja y su tomo nitrgeno forma sistema heterocclico, biosintticamente se forman a partir de un aminocido; pueden encontrarse en forma de sales. caractersticas de alcaloides Los pseudoalcaloides poseen pero no derivan de verdaderos

aminocidos y por ltimo los protoalcaloides son aminas simples cuyo nitrgeno no se encuentra incluido en un sistema heterocclico, poseen reaccin bsica y se forman in vivo a partir de aminocidos. Los alcaloides poseen propiedades que actan a nivel del sistema nervioso central (sedante o estimulante), a nivel del sistema autnomo (anticolinergicos, ganglioplegicos entre otros); adems algunos son anestsicos locales, antitumorales, antipaldicos, amebicidas y antifibrilantes, entre otros. (1) La extraccin de alcaloides se basa en que habitualmente se encuentran en estado de sales, en su basicidad y en disolventes orgnicos; puede llevarse a cabo con un disolvente (diclorometano, cloroformo, benceno o dixido de etilo) en medio alcalino o en medio cido con una disolucin alcohlica o hidroalcohlica

7 acidificada. fina (1,8). 2) Flavonoides y Antocianinas: Son pigmentos vegetales que poseen esqueleto carbonado C6C3-C65 los cuales se encuentran ampliamente distribuidos en plantas libres y como glucsidos, estos ltimos son los responsables de la coloracin de flores, frutos y a veces de las hojas, la mayora son hidrosolubles. Los flavonoides presentan coloraciones amarillas y los antocianosidos rojo, azul y violeta. copigmentos. hidroxicinmico. De no ser directamente visibles, contribuyen a la coloracin ya que cumplen un papel de El origen biosinttico de los flavonoides es la Las antocianinas provienen de (2R,3R,4S)-transcondensacin de tres molculas de malonil-CoA y un cido 2,3-flavan-cis-3,4-diol. Las antocianinas son estables como sales en medio cido. La principal propiedad biolgica de los flavonoides es la de ser venosoactivo (capaz de disminuir la permeabilidad de los capilares sanguneos y aumentar su resistencia). Su extraccin puede llevarse a cabo con una mezcla de agua-acetona (20:80); agua-alcohol (metanol o etanol) en caliente, la proporcin de agua depende del estado de la muestra, fresca o seca; luego se realiza una extraccin liquido-liquido con disolventes inmiscibles con agua (hexano o acetato de etilo, en este ultimo se obtienen los hetersidos que son de inters) (1).
Mayers: yoduro de mercurio y potasio Dagendorff: yoduro de bismuto y potasio 4. Wagner: yodo-yoduro de potasio 5. compuestos C15, su estructura posee dos anillos bencnicos unidos por una cadena de tres tomos de carbono, Ar-C3-Ar, segn un encadenamiento, 1,3-diarilpropano (flavonoides), 1,2-diarilpropano (isoflavonoides)
3. 2.

Ensayos macro y semimicro: reacciones de color con

reactivos de Mayers2, Dagendorff3, Wagner4 y Cromatografa en capa

8 Se identifican mediante ensayos macro y semimicro: reacciones de color con reactivos especficos: cido sulfrico concentrado, las flavonas forman un complejo soluble color naranja o guinda, resultado de la sustitucin ncleofilica del grupo SO3H en la posicin para- respecto al grupo hidroxilo; las charconas y auronas forman coloraciones rojo-guinda a rojo-azulado. Cloruro frrico al 10 % (p/v); cido clorhdrico concentrado; magnesio metlico; medio bsico, en este medio se lleva a cabo la formacin de un fenxidos de sodio los cuales presentan coloraciones caractersticas: para las flavonas, amarillo a rojo, los flavones, amarillos, los flavonoles, amarillo a caf, los isoflavononas, diversos tonos de rojo, las chalconas, prpura rojizo y las antocianinas, azul (1,8). 3) Antraquinonas: Las antraquinonas son una clase de metabolitos secundarios vegetales con una funcionalidad p-quinoide en un ncleo antracnico (Anexo # 1, pag. 50); son biosintetizadas por la ruta de la malonil Coenzima-A en el caso de los hongos, lquenes y plantas superiores de las familias Ramnceas, Poligonceas y Leguminosas; mientras que en las las Rubiceas, y las las Gesnericeas, Bignoniceas, las se Sin Escrofulariceas, Verbenceas

biosintetizan a partir de cido shikmico y cido mevalnico.

embargo, existen todava dudas acerca del verdadero estado natural de estas sustancias, existen evidencias experimentales de algunas plantas, las cuales demuestran que las antraquinonas no se encuentran como tales en ellas, sino que son productos de degradacin enzimtica de las correspondientes formas reducidas, es decir, las antronas y los antranoles. Segn esto, las antraquinonas aisladas corresponden a productos de oxidacin o dimerizacin de antronas o antranoles. Por lo anterior, antes de realizarse reportes de antraquinonas vegetales debe considerarse

9 esta posibilidad. Las antraquinonas naturales generalmente

presentan las siguientes caractersticas estructurales, tienen grupos hidroxilo (OH-) en C-1 y C-8, grupo metilo, hidroximetileno o carboxilo sobre C-3, grupos hidroxilo (OH-) o metoxi (OMe) en el C-6, carbohidratos ligados principalmente glucosa, ramnosa y rutinosa; los orto-glicsidos tienen los carbohidratos ligados a travs de C-6 o C-8 y los C-glicsidos tienen los carbohidratos ligados a travs de C10. Los procedimientos para el aislamiento de estas sustancias dependen del tipo de ncleo de inters (1). Se identifican mediante las siguientes pruebas: Prueba de Borntrger y Borntrger modificado6 y Cromatografa en capa fina (1,8). 4) Cumarinas: Las cumarinas son 2H-1-benzopiran-2-onas las cuales se pueden considerar como primera aproximacin como lactonas de cidos 2-hidroxi-Z-cinamicos. Se encuentran sustituidas en C-7 por un hidroxilo (OH-); su precursor es la 7-hidroxicumarina (umbelifenona); los hidroxilos de las cumarinas simples pueden metilarse o formar parte de una unin heterosdica7. Se encuentran distribuidos en el reino vegetal. Las cumarinas libres son solubles en alcoholes y en disolventes orgnicos como dixido de etilo y disolventes clorados con los cuales pueden ser extradas (1). Ensayos macro y semimicro (fluorescencia en medio bsico (KOH)) esta prueba se basa en la apertura y solubilizacin en medio bsico, las cumarinas se caracterizan por su intensa absorcin en la regin ultravioleta del espectro, las cuales al ser examinadas a la luz ultravioleta presentan coloracin exaltada en presencia de amoniaco. S6. Ambas, en medio alcohlico pero Borntrger modificado medio bsico
alcohlico. Unin acetlica entre un azcar reducido a grupo hidroxilo (alcohol o fenol) y un no azcar (genina); en la naturaleza los mas abundantes son los Ohetersidos, pueden existir C-, N-, y S-hetersidos.
7.

10 e identifica mediante cromatografa en capa fina con los siguientes estndares de cumarinas: umbelifenona, cido para-cumarico, cumarina y extracto metanlico de canela (1). 5) Esteroides o triterpenoides: Los esteroides o triteroenoides son compuestos basados en ms de 40 esqueletos diferentes, todos poseen 30 carbonos procedentes de la ciclacin del 3S-2,3-epoxido-2,3-dihidroescualeno, o eventualmente del escualeno, casi siempre se encuentran hidroxilados en 3 (debido a la apertura del ciclo). Los triterpenos

presentan una gran variedad estructural debida principalmente a la conformacin adoptada por el epoxiescualeno o escualeno antes de la ciclacin. Los ciclos tetra- y pentacclicos son caractersticos de los triterpenos. Los esteroides poseen una unidad estructural muy marcada, aunque todos tienen el mismo esqueleto base (Anexo # 2, pag. 50). Se estima que no existen diferencias fundamentales entre esteroides y triterpenos; los esteroides pueden ser considerados como triterpenos tetracclicos que han perdido, como mnimo tres metilos en C-4 y en C-14, es importante mencionar que su biosntesis es va cido mevalnico. Algunos de los intereses de los esteroides y triterpenos en se debe y y a que poseen propiedades antivirales, otros; cubrir para teraputicas insecticidas, diversos anabolizante campos, citostticos,

molusquicidas

analgsicos, antiinflamatorios

entre

anticonceptivos,

necesidades en la industria farmacutica (1). Su identificacin se lleva a cabo mediante las siguientes reacciones de color: Liebermann Burchard8, cido Tricloroactico9 y Carr-Price10 (1).
Liebermann Burchard: anhdrido actico-cido sulfrico cido Tricloroactico: cido tricloroactico 10. Carr-Price: tricloruro de antimonio al 30% en cloroformo
8. 9.

11 6) Saponinas: Poseen propiedades tenso-activas, que constituyen un amplio grupo de hetersidos muy frecuentes en los vegetales, se disuelven en agua formando disoluciones espumosas. Se pueden distinguir dos grandes grupos de saponinas, esterodicas (habitualmente de 6 ciclos, uno furnico y otro pirnico debido a la cetalizacin intramolecular posterior a la oxidacin en C-16, C-22 y C-26) y triterpnicas (la mayora proceden de la ciclacin del 3(S)-2,3-epoxi2,3-dihidroescualeno), dependiendo del esqueleto base carbonado que posea. En plantas se encuentran en forma de mezclas complejas, poseen fuerte polaridad, relativa fragilidad y muy pequeas diferencias estructurales de masa molecular elevada, difcil de obtener en forma pura, difcilmente cristalizan, son higroscpicas y raramente se obtienen puntos de fusin netos y sin descomposicin. Una de sus funciones es la hemlisis en clulas, permitiendo as la liberacin de hemoglobina; muchos actan como antimicrobianos o antifngicos, espermicidas y citotxicos. Son solubles en agua y por lo tanto se pueden extraer generalmente a ebullicin, sin embargo se prefiere extraerlos en medio alcohlico (metanol o etanol), seguido de una particin con n-butanol y precipitarlos posteriormente con extracciones de ter dietlico (1). Se identifican mediante las siguientes pruebas: test de espuma; test de hemlisis, que se basa en la destruccin de las paredes de glbulos rojos, dispersando la hemoglobina; y gliciricina como estndar (1,8). con material fresco y seco con cromatografa en capa fina, utilizando

7) Principios Amargos:

12 Se caracterizan por el sabor amargo y su estructura triterpenoide. comn unidades La de mayor parte derivan Los de monoterpenos, son los sesquiterpenos, diterpenos y triterpenos, todos ellos tienen en isoprenos. monoterpenos constituyentes mas sencillos de la serie de terpenos, son el resultado de acoplamientos de unidades isoprenicas, la mayora se encuentran en forma libre y estn ampliamente distribuidos en vegetales superiores; son el resultado del encadenamiento bsico del acoplamiento cabeza-cola de dos unidades C5, dando inicialmente GPP, pirofosfato de geranilo (Anexo # 3, pag. 50) y dependiendo el ataque que ocurra, ya sea intramolecular biy pueden formarse Los monoterpenos acclicos, monocclicos, tricclicos.

sesquiterpenos poseen como precursor comn el pirofosfato de farnesilo, todos tienen en comn el nmero de carbonos de la cadena carbonada C15 como resultado de ciclaciones intramoleculares, reagrupamientos y oxidaciones, las cuales dan lugar a un gran numero de estructuras. Los diterpenos son compuestos C20 procedentes del metabolismo del 2E, 6E, 10Egereranilgeranilpirofosfato (Anexo # 4, pag. 50), pueden formarse compuestos acclicos, monocclicos, bicclicos, tri- y tetracclicos (1). Las propiedades de los principios amargos son antiespasmdico, sedante, antiinflamatoria, analgsica, inhibidor de la agregacin plaquetaria, antibacterianos, fitoalexinas, reguladores del crecimiento, micotoxinas, antihipertensivas, antiretrovirales, entre otras (1). Se identifican mediante cromatografa en capa fina, utilizando estndares para principios amargos seguido de la deteccin mediante el revelador Lieberman-Burchard detectando su presencia con luz ultra violeta a una longitud de onda de 365 nm con colores caractersticos: gris o caf (8).

13 8) Taninos: Son polifenoles cuya estructura qumica exacta es la de los proantocianidoles y polisteres de los cidos glico y elgico. Son compuestos fenlicos hidrosolubles que tienen una masa molecular comprendida entre 500 y 3000, poseen la capacidad de combinarse con macromolculas por lo tanto precipitan celulosa, pectinas y protenas y alcaloides. por su origen En vegetales superiores se distinguen taninos hidrolizables11 y taninos generalmente dos grupos diferentes tanto por su estructura como biosinttico: condensados o proantocianidoles12. Los taninos poseen propiedades antioxidantes, inhibicin de algunas enzimas, oposicin al efecto mutagnico de ciertos cancerigenos estimulando el mecanismo inmunitario, inhibidores de la replicacin de virus in vitro, aumentan la resistencia capilar y disminuyen la permeabilidad capilar, aumento del tono venoso, estabilizadores del colgeno e inhibicin de la fijacin de la serotonina, entre otros. Son solubles en agua, formando disoluciones coloidales de estabilidad moderada, su solubilidad disminuye conforme aumenta el grado de polimerizacin (1). Se identifica mediante ensayos macro y semimicro: Precipitacin de protenas con gelatina al 1 % (p/v), gelatina al 1% cloruro de sodio al 10% y cloruro frrico al 10 % (p/v), si la prueba es positiva debe observarse precipitado en las pruebas que contienen gelatina ya que los taninos tienen la propiedad de reaccionar con las p
11.

r Oligo o polisteres de un azcar, generalmente de glucosa; taninos glicos derivados del cido glico y del cido hexahidoroxidifinico; los taninos elgicos derivados de la oxidacin del cido hexahidroxidifnico. o 12. Son polmeros constituidos por unidades flavan-3-oles ligadas entre si por enlaces carbno-carbono, generalmente 48 o 46. t e nas formando compuestos insolubles, con cloruro frrico dan coloraciones distintas dependiendo del compuesto que forman, si la

14 coloracin es negra griscea, posible presencia de catecol; si la coloracin es negro azulada posible presencia de pirogalol (1,8). 9) Aceites Voltiles: Los aceites voltiles son mezclas complejas y variables los cuales pertenecen principalmente a dos grupos dependiendo de su origen biosinttico: los terpenoides de masa molecular no muy elevada (monoterpenos acclicos, monocclicos o bicclicos y sesquiterpenos compuestos por monociclos o policiclos, alcoholes, cetonas, aldehdos y esteres) y los compuestos aromticos derivados del fenilpropano. Son lquidos a temperatura ambiente, voltiles, muy raramente son coloreados, generalmente densidad menor a la del agua, poseen alto ndice de refraccin y la mayora desva la luz polarizada. Son liposolubles y solubles en disolventes orgnicos Su poder antisptico, sedante, cicatrizante, colrico e incluso habituales, se pueden extraer por arrastre de vapor de agua ya que son poco solubles en ella. neurosedante, espasmoltico,

irritante, son algunas de las propiedades de los aceites voltiles. Se identifican mediante cromatografa de gases tras hidrodestilacin del material fresco (14).

10)Sesquiterpenlactonas:

15 Se conocen bajo alrededor el de 3,000 de estructuras, descritas su

antiguamente Hongos y

nombre en

principios

amargos 13,

distribucin botnica es bastante espordica, se encuentran en Briofitas, Angiospermas (Apiaceae, Lauraceae, Se localizan Menispermaceae) y mayoritariamente en Asteraceae.

frecuentemente en hojas, tallos y bracteas de la inflorescencia, son escasas en los rganos subterrneos. Poseen estructuras variadas, todas relacionadas con el producto de ciclacin ciclodecadienlico de 2E, 6E-farnesil-pirofosfato. antifngica, Algunas poseen propiedades antihelmntica, antibacteriana, anrimalrica,

molusquicida, citotxica.

No existe un mtodo especifico de su

extraccin, se pueden extraer con etanol o metanol caliente, cloroformo o ter dietlico, tambin se pueden aislar con una mezcla de hexano:cloroformo:acetato de etilo (2:2:1); luego se fraccionan los extractos con una tcnica cromatogrfica apropiada con diferentes reactivos reveladores como vapores de yodo, disolucin diluida de permanganato de potasio, vainillina sulfrica, cloruro de cobalto en disolucin sulfrica acuosa y otros. (1, 8) Se identifican lactonas , -insaturadas mediante las siguientes pruebas: Prueba de Legal, el reactivo utilizado en esta prueba es el nitroprusiato de sodio en medio bsico, debido a que las lactonas , -insaturadas son reductores muy fuertes, son capaces de reducir al reactivo y por lo tanto oxidarse, de esta forma reaccionar ocasionando un cambio de coloracin en dicho proceso, por lo tanto si se presenta coloracin roja oscura, la prueba se interpreta como posible presencia de sesquiterpenlactonas; la Prueba de Baljet se basa en la formacin de un complejo formado
13.

Esta terminologa obsoleta rene un conjunto de compuestos muy homogneo en el cual se incluyen lactonas terpnicas (mono, di, tri y sesquiterpenicas) cuya caracterstica principal es el sabor amargo de las drogas; en la actualidad los principios amargos y las sesquiterpenlactonas se distinguen segn su precursor.

16 entre el cido pcrico y la lactona , y insaturada, dicho complejo presenta coloracin rojo claro a oscuro. Tambin se realiza analiza mediante cromatografa en capa fina (8).

17 IV. JUSTIFICACIN

Quararibea yunckeri Standley Subsp. izabalensis (Molinillo) fue descrita en el ao 2000 (Vliz, M. 2000) como una nueva subespecie de Guatemala que crece en el departamento de Izabal, en selvas bajas muy hmedas de la Sierra Santa Cruz. El genero vegetal Quararibea pertenece a la familia Bombacaceae, la cual no esta ampliamente estudiado, razn por la cual se desea investigar su composicin qumica como un estudio exploratorio, no experimental, descriptivo y transversal. Los antecedentes de composicin qumica de la familia Bombacaceae son presencia de taninos, flavonoides, triterpenos y aceites esenciales. El objetivo de llevar a cabo la identificacin cualitativa de grupos de metabolitos secundarios (presentes o ausentes) en la especie vegetal guatemalteca anteriormente indicada mediante tamizaje fitoqumico, es contribuir al estudio profundo de la diversidad florstica de Guatemala, ya que recientemente se ha realizado su anlisis taxonmico. Una vez analizados los grupos de metabolitos secundarios se pretende documentar los mismos y posteriormente dar a conocer su composicin qumica. Dicha composicin investigacin de aporta al establecimiento de de perfiles de

metabolitos

secundarios

productos

naturales,

especficamente a la flora guatemalteca con posibles futuras evaluaciones de intereses de uso medicinal y/o industrial, as como su potencial farmacolgico.

18

V. OBJETIVO GENERAL: Identificar especie

OBJETIVOS

cualitativamente guatemalteca

los

grupos

de

metabolitos

secundarios en la parte area de la planta (hojas y tallos) de la vegetal Quararibea yunckeri Standley Subsp. izabalensis, que crece en la quebrada seca de la Sierra Santa Cruz, Izabal, Guatemala; mediante tamizaje fitoqumico.

19

VI.

HIPTESIS

La investigacin no posee hiptesis debido a que el estudio es exploratorio y descriptivo; la especie vegetal en estudio esta recin descubierta por lo que es un estudio inicial y por consiguiente se desconoce su composicin qumica, en la cual se basara la hiptesis planteada.

20

VII. MATERIALES Y MTODOS A. UNIVERSO DE TRABAJO: POBLACIN: Especie vegetal guatemalteca Quararibea yunckeri Standley Subsp. izabalensis MUESTRA: 50 g secos y 50 g frescos de la parte area (hojas y tallos) de la especie vegetal Quararibea yunckeri Standley Subsp. izabalensis B. RECURSOS 1. HUMANOS: Investigadora: Esmeralda Orantes Morales Asesores: a. Licda. Irma Nohemi Orozco Godinez. b. Ing. Agr. Mario Esteban Vliz Prez. INSTITUCIONALES: Departamento de Qumica Orgnica de la Facultad de Ciencias Qumicas y Farmacia, Universidad de San Carlos. Laboratorio San Carlos. Biblioteca de la Facultad de Ciencias Qumicas y Farmacia, Universidad de San Carlos. de Investigacin en Productos Naturales (LIPRONAT), Facultad de CCQQ y Farmacia, Universidad de

21 Laboratorio de Toxicologa, Antigua Facultad de CCQQ y Farmacia, Universidad de San Carlos. 2. RECURSOS MATERIALES: a) b) EQUIPO: Cromatgrafo de Gases marca HP 5890, serie II, acoplado a un detector Selectivo de Masas modelo HP 5971A Columna Capilar HP de dimensiones HP-5 con dimetro interno de 0.2 mm y espesor film de 0.3 Balanza Analtica Marca AND, modelo FR-2000. Estufa de metal marca Corning con agitacin magntica Manta de calentamiento Corning con restato y niveles de calentamiento Lmpara UV ( 254 nm y 365 nm) Cmara fotogrfica HP Mechero Bunsen con manguera de hule. REACTIVOS:

REACTIVO

CANTIDAD (gramos o mililitros) 11.0 ml 1.0 ml 5 ml 260 ml

CALIDAD Y PUREZA A.C.S., 99 % A.C.S., 99 % A.C.S., 99 % A.C.S., 99 % A.C.S., 30 %

cido Actico cido Sulfrico Anhdrido Actico Cloroformo

Tricloruro de Antimonio 2 g

22 cido tricloroactico Metanol Artemisina Acetato de etilo Anisaldehdo Vainillina Diclorometano Tolueno Xileno 1,8-cineol Nitroprusiato de sodio Hidrxido de potasio cido pcrico ter etlico Hidrxido de sodio Yodo Permanganato de potasio Acetona Hidrxido de amonio Papaverina Antropina Yoduro de Potasio 0.5 g 250 ml 1 microlitro 77 ml 1 ml 1 ml 50 ml 10 ml 10 ml 0.5 ml 1 ml 1g 1g 5 ml 10 g 2g 2g 50 ml 0.5 ml 1 microlitro 1 microlitro 35 g A.C.S., 99 % A.C.S., 99 % A.C.S., 99 % A.C.S., 99 % A.C.S., 99 % A.C.S., 99 % A.C.S., 99 % A.C.S., 99 % A.C.S., 99 % A.C.S., 99 % A.C.S., 99 % A.C.S., 99 % A.C.S., 99 % A.C.S., 99 % A.C.S., 99 % A.C.S., 99 % A.C.S., 99 % A.C.S., 99 % A.C.S., 99 % A.C.S., 99 % A.C.S., 99 % A.C.S., 99 %

23

Cloruro de Mercurio Nitrato de Bismuto Dietilamina Tolueno Peroxido de hidrogeno

Difenilboriloxietilamina

2g 8g 20 ml 70 ml 5 ml 1 ml 5 ml 10 ml 10 microlitrros 10 microlitrros 10 microlitrros 10 microlitrros 10 microlitrros 10 microlitrros 10 microlitrros 10 microlitrros 10 microlitrros 10 microlitrros 100 ml

A.C.S., 99 % A.C.S., 99 % A.C.S., 99 % A.C.S., 99 % A.C.S., 3.0 % A.C.S., 99 % A.C.S., 99 % A.C.S., 99 % A.C.S., 99 % A.C.S., 99 % A.C.S., 99 % A.C.S., 99 % A.C.S., 99 % A.C.S., 99 % A.C.S., 99 % A.C.S., 99 % A.C.S., 99 % A.C.S., 99 % A.C.S., 99 %

Polietilenglicol Benceno Quercetina Rutina cido clorognico Hipersido Alona Flangulina Glucofrangulina Agliconas Reina Aloeemodina n-butanol

24 c) CRISTALERA: Pipetas de 1, 2, 3 y 5 ml. Micropipetas con bulbo. Beakers de 10, 50, 100, 250 y 500 ml. Probetas de 10, 25 y 100 ml. Balones aforados de 10 y 250 ml. Tubos de ensayo. Gradilla para tubos de ensayo. Pinzas para tubo de ensayo. Vidrio de reloj Varilla de agitacin. Frascos de vidrio color mbar con tapadera. Capilares sin heparina. Cmara cromatogrfica Cromatoplacas de Silicagel 60F254. Maskin tape. Papel filtro Wathman No. 41. Papel parafilm. Caja de Petri con agar sangre. Jeringa para cromatografa de gases marca Hamilton de vidrio de escala de 0 a 10 microlitros. Vaso florentino Corning 45/50 esmerilado Baln Corning de 5000 ml y condensador 45/50 esmerilado. Termmetro graduado de -5 a 360 oC

25 3) MTODOS: a. DISEO DE INVESTIGACIN: El diseo de la investigacin es no experimental, descriptivo y transversal. b. PROCEDIMIENTOS Los procedimientos de las pruebas especficas para la investigacin de metabolitos secundarios estn basados en el Manual de Tamizaje Fitoqumico del Laboratorio de Investigacin de Productos Naturales (LIPRONAT), versin 2005. 1. Obtencin de la muestra: La muestra de la especie vegetal en estudio se tom en su hbitat natural, ubicado en la Quebrada Seca de la Sierra Santa Cruz, departamento de Izabal, Guatemala. Se cortaron dos ramas, de las cuales se escogieron las hojas y tallos sanos para su anlisis. La muestra fue colectada el 02 de diciembre de 2006 a las 13:20 hrs. 2. a) Determinacin de alcaloides: (7,8) Ensayos macro y semimicro: i. ii. 60C. iii. iv. Filtrar con papel filtro Whatman No. 41 y el filtrado con cido clorhdrico 2 N. La solucin resultante dividirla en 4 tubos y Tubo 1: agregar 5 gotas del reactivo de Mayers. (Color blanco a crema). acidificar Pesar 1 g de material vegetal Agregar 2 gotas de solucin de hidrxido de

amonio al 10% (p/v), luego aadir 25 mL de metanol a

evaluar de la siguiente manera:

26 Tubo 2: agregar 5 gotas del reactivo de Dragendorff. (Color rojo a naranja). Tubo 3: agregar 5 gotas del reactivo de Wagner. (Color marrn). Tubo 4: testigo. Nota: Estndares soluciones al 1% de atropina y papaverina. Observar durante 2 horas la existencia de precipitados, turbidez o precipitacin de complejos en los tubos, si se observa alguno de los cambios anteriores se asume la presencia de alcaloides. v. Preparacin de Reactivos:

Mayers (yoduro de mercurio y potasio): 1. Se prepararon las siguientes soluciones: Solucin A: Disolver 1.36 g de HgCl2 en 3 mL H2O y 4.98 g KI en 3 mL H2O, mezclar ambas soluciones disueltas y completar a 10 ml, agregar a la mezcla 1.5 ml de una solucin al 17% de cido clorhdrico. Solucin B: Disolver 0.5g de ZnCl en 8 ml de cido clorhdrico fumante. Solucin C: diluir 5 ml de amoniaco en 33 ml de agua destilada. 2. Mezclar volmenes iguales de las soluciones A, B y C, dejar reposar. Dragendorff (yoduro de bismuto y potasio) 1. Preparar las siguientes soluciones: Solucin A: Disolver 8 g Bi(NO3)3 5 H2O en 20 mL HNO3 Solucin B: Disolver 27.2 g KI en 50 mL H2O

27 2. Mezclar volmenes iguales de las soluciones A y

B, reposar, decantar sobrenadante y diluir a 100 mL. Conservar en refrigeracin. Wagner (yodo-yoduro de potasio) 1. 2. 3. b) Disolver 1.00 g de I2 y 10 b g KI en 50 mL H2O Acidificar con 2 ml cido actico glacial. Diluir a 100 ml.

Cromatografa en capa fina: i. Pesar 1 g de material vegetal seco y molido y agregar 1 mL de hidrxido de amonio al 10% (p/v) y extraer con 5 mL de metanol. ii. iii. Colocar en bao mara a 60C durante 5 minutos, filtrar y concentrar. Aplicar en una placa de slica gel 60 F254, utilizando iv. v. como estndar una solucin de atropina y papaverina al 1 % en metanol (10 L). Preparar la fase mvil: acetato de etilo-metanolagua (100:13.5:10). Detectar sin tratamiento qumico: UV 254nm fluorescencia, UV 365 nm algunos fluorescen azul o amarillo. vi. Detectar con Reactivo de Dragendorff: zonas cafs o naranjas en regin visible, los colores no son estables, presentan un tiempo de estabilidad menor a 30 minutos.

28 3. a) Determinacin de flavonoides y antocianinas: (7,8) Ensayos macro y semimicro: i. ii. Extraer 3 g de material vegetal pulverizado con 10 Enfriar a temperatura ambiente y triturar el mL de etanol al 80 %, filtrar y concentrar. residuo con 15 mL de hexano hasta que la extraccin sea incolora. iii. Disolver el residuo en 30 mL de metanol al 80 %, Tubo 1: agregar 0.5 mL de cido sulfrico concentrado. Tubo 2: agregar 3 a 5 gotas de cloruro frrico al 10 % (p/v). Tubo 3: agregar 0.5 mL de cido clorhdrico concentrado y calentar en bao de mara por 5 minutos (prueba para leucoantocianinas). Tubo 4: agregar magnesio metlico y 0.5 mL de cido clorhdrico concentrado. Tubo 5: agregar un lcali a un extracto acuoso. Tubo 6: testigo. Observar los siguientes cambios de color y/o formacin de precipitado comparados con el testigo: flavonas y flavonoles (amarillo a rojo), flavanonoles (rojo a magenta), flavanonas (rojo, magenta, violeta, azul), isoflavonas (amarillo); isoflavononas, chalconas y auronas no dan coloracin. c) Cromatografa en capa fina: i. Extraer 1 g de material vegetal seco pulverizado con 10 mL de metanol por 5 minutos en bao de mara a 60C y posteriormente filtrar. filtrar y dividir en 5 tubos:

29 ii. Aplicar la solucin filtrada sobre las cromatoplacas de

slica gel 60 F254, utilizar como estndar una solucin de flavonoides al 0.05 % en metanol (10 L). (Quercetina, rutina, cido clorognico, hipersido). iii. iv. Preparar la fase mvil: acetato de etilo-cido frmicoDetectar sin zonas tratamiento azules o qumico: amarillas. UV UV 254nm 365 nm, cido actico glacial-agua (100:11:11:27). fluorescencia, iv.

dependiendo la estructura fluorescen amarillo, azul o verde. Detectar con Reactivo de Productos Naturales NP/PEG): fluorescencia intensa en UV-365 nm (mezclar partes iguales de las soluciones NP y PEG que se describen a continuacin. v. Preparacin de reactivos: Solucin 1: Difenilboriloxietilamina (NP) al 1%. Disolver 0.5 g de difenilboriloxietilamina (NP) en 60 ml de metanol al 99.9% Solucin 2: Polietilenglicol 4000 (PEG) al 5%. Disolver 2.5 g de polietilenglicol 4000 (PEG) en 59 ml etanol al 75%. Aplicar a la placa vapores de amoniaco para intensificar el color de las manchas. 4. a) Determinacin de antraquinonas: (7,8) Prueba de Borntrger: i. (60C). ii. filtrar. iii. Extraer con 10 mL de benceno y separar las fases. Disolver el residuo con 30 mL de agua destilada y Extraer 3 g de material vegetal pulverizado con 10 mL de etanol al 80 %, filtrar y concentrar en bao de mara

30 iv. Aadir 5 mL de solucin de test de amonio a la

fase bencnica y agitar. Observar cambios de color en la fase alcalina, si se observa color rojo o rosado la prueba es positiva. b) Prueba de Bortrnger modificado: i. Calentar 0.3 g de material vegetal pulverizado durante 10 minutos en bao de mara a 60C con 10 mL de hidrxido de potasio alcohlico 0.5 N y 1 mL de perxido de hidrgeno al 3 % a 60C. ii. iii. Aadir 10 gotas de cido actico glacial para acidificar. Extraer con 10 mL de benceno. A la fase bencnica adicionar 5 mL de solucin de prueba de amonio y agitar. Observar cambios de color en fase alcalina (color rojo, rosado: positivo). c) Cromatografa en capa fina: i. Extraer 0.5 g de material vegetal seco pulverizado

con 5 mL de metanol en bao mara a 60C por 5 minutos. ii. Filtrar y aplicar 10 L en la cromatoplaca de slica

gel 60 F254, utilizar como estndar 10 L de una solucin al 0.1 % en metanol de antraquinonas (alona, flangulina A/B, glucofrangulina A/B y sus agliconas, reina, aloe-emodina, extracto de sen). iii. Preparar la fase mvil: acetato de etilo-metanol-

agua (100:17:13). iv. v. de Detectar sin tratamiento qumico: UV 254nm Detectar con una solucin etanlica de hidrxido al 10 % las siguientes coloraciones

fluorescencia, UV 365 nm fluorescencia amarilla o rojo-caf. potasio

31 respectivamente: antraquinonas: zonas rojas en visible y fluorescencia roja en UV-365 nm; antronas y antranolas: zona amarillas en visible y fluorescencia amarilla en UV-365 nm. 5. a) Determinacin de cumarinas: (7,8) Ensayos macro y semimicro: i. enfriar. ii. Aplicar 2 manchas en papel filtro, a la primera mancha agregar 1 gota de hidrxido de potasio 0.5N y observar bajo luz UV de 365 nm (fluorescencia azul o verde: positivo). b) Cromatografa en capa fina: i. ii. Pesar 1 g de material vegetal, agregar 10 mL de Filtrar y evaporar hasta 1 mL, aplicar 20 L en Medir 5 mL de extracto vegetal metanlico y

agregar 1 mL de agua destilada a punto de ebullicin; dejar

metanol y calentar 30 minutos en bao de mara. una cromatoplaca de slica gel 60 F254 utilizando como estndar canela en metanol al 1 %, umbeliferona, cido pcumrico y cumarina. iii. (93:7). iv. Detectar sin tratamiento qumico: UV 254nm fluorescencia y UV 365 nm si se observa intensa fluorescencia azul o verde-azul la prueba es positiva ya que todas las cumarinas presentan dicha coloracin a esta longitud de onda. v. Deteccin con solucin etanlica de hidrxido de potasio al 10%: UV-365 nm presencia de fluorescencia azul o verde, prueba positiva. Preparar la fase mvil: tolueno-acetato de etilo

32

6.

Investigacin de esteroides o triterpenoides: (7,8) i. ii. Aplicar unas gotas de cido actico y 3 mL de Observar la presencia de color rosado o prpura

a) Reacciones de color: Liebermann Burchard: anhdrido actico-cido sulfrico (50:1) lo cual indicara que la prueba es positiva para saponinas triterpenoidales; presencia de coloracin verde, azul verdoso: posibles esteroides conteniendo 2 enlaces C=C conjugados o formados por deshidratacin con cido sulfrico.

b) cido tricloroactico: i. Aadir a la muestra cristales de cido

tricloroactico ii. presencia 110C. Observar de color naranja, rojo, rojo los oscuro:

triterpenos

tetracclicos;

esteroides

desarrollan color a 60C y los triterpenos pentacclicos a

7.

Determinacin de saponinas: (8)

a) Prueba de espuma: Tubo 1: 100 mg de material vegetal pulverizado y seco. Tubo 2: 2 mL de control de saponinas (0.5 %). Tubo 3: 2 mL de agua. i. ii. Adicionar a cada tubo 10 mL de agua destilada y Enfriar, tapar los tubos, agitar vigorosamente 30 a

calentar en bao de mara (60C) durante 30 minutos. 40 segundos y dejar reposar los tubos durante 30 minutos.

33 iii. Observar la formacin de capa de espuma. Si una

capa de espuma mayor de 3 cm persiste en la superficie lquida despus de 30 minutos se presume la presencia de saponinas. b) Cromatografa en capa fina: i. Pesar 2 g de material vegetal seco y extraer con 10

mL de etanol al 70% con reflujo por 10 minutos.; concentrar a 5 mL y aplicar 25-40 L en una cromatoplaca de silicagel 60 F254 utilizando estndar de saponinas al 0.1 % en metanol (10 L). ii. (64:50:10). iii. Deteccin con reactivo de Komarowsky: observar sulfrico y anisaldehdo-cido sulfrico: zonas azules, amarillas y rojas indican prueba positiva; con vainillina-cido observar zonas azules, violetas, amarillentas. 8. a) Determinacin de principios amargos: (8) Cromatografa en capa fina: i. Calentar 1 g de material vegetal con 10 mL de Preparar la fase mvil: cloroformo-metanol-agua

metanol en bao de Mara a 60C por 10 minutos, filtrar y concentrar a 2 mL. ii. Aplicar 20 L de la solucin anterior en la en cromatoplaca, utilizar como estndar Neurolena al 1 % metanol (20 L). iii. iv. Preparar la fase mvil: cloroformo-metanol (95:5). Detectar con vainillina-cido sulfrico o

anisaldehdo-cido sulfrico observando la presencia de zonas rojas-violetas, cafs-rojas, azules-verdes; con reactivo de

34 Liebermann-Buchard: UV-365 nm: gris, caf y VIS: caf oscuro o gris indican prueba positiva. 9. a) Determinacin de taninos: (8) Ensayos macro y semimicro: i. ii. iii. Extraer 10 g de material vegetal pulverizado con Aadir 25 mL de agua caliente al residuo y agitar Agregar 1 mL de solucin de cloruro de sodio al 10 Tubo 1: testigo. Tubo 2: agregar 4 a 5 gotas de solucin de gelatina al 1 % (p/v). Tubo 3: agregar 4 a 5 gotas de gelatina-sal (1 % de gelatina y cloruro de sodio al 10%). Tubo 4: agregar 3 a 4 gotas de solucin de cloruro frrico al 10 % (p/v). iv. Observar la formacin de precipitado y/o cambio de coloracin. Con cloruro frrico: grisceo-negro: presencia de catecol; negro-azulado: presencia de pirogalol)

30 mL de etanol al 80 %, filtrar y evaporar a sequedad. con varilla y dejar enfriar. % y filtrar y separar en 4 tubos de ensayo:

10. a)

Determinacin de aceites voltiles: (8) Cromatografa Gases-Mases i. ii. iii. Pesar entre el 40-50 aceite g de material en vegetal pentano e y

hidrodestilar por 1 hora. Recolectar esencial rotavaporear a temperatura menor a 60 oC. Tomar 2 L de aceite esencial extrado e inyectar en el cromatgrafo de Gases acoplado a Masas (utilizar helio

35 como gas acarreador); la temperatura inicial del horno debe ser de 50

oC

por un tiempo inicial de 3 minutos, luego

oC

incrementar la temperatura 20 oC por minuto hasta llegar a una temperatura mxima de 280 minutos. 11. a) Determinacin de Sesquiterpenlactonas: (8) Prueba de Legal: i. ii. presencia Tomar 1-2 mg de muestra en agua o etanol Agregar 1 mL de solucin fresca de nitroprusiato coloraciones caractersticas; rojo oscuro para y mantener por 15

de sodio 0.5% en agua y 1-4 gotas de KOH 2N. Observar la lactonas , y insaturada. b) Prueba de Baljet: i. ii. c) Preparar el reactivo de Baljet: mezclar 1 g de cido Aadir unas gotas del reactivo a la muestra; una Cromatografa en capa fina: i. ii. de Preparar la fase mvil: cloroformo: metanol (99:1). Deteccin con Vapores de yodo, solucin acuosa de potasio al 5%, cido sulfrico pcrico en etanol al 95% a 10 g de NaOH en 100 mL de agua. coloracin roja clara a oscura indica que la prueba es positiva.

permanganato

concentrado o al 50%, vainillina al 1% en etanol, luego del calentamiento de la placa por 5 min a 100 105 C si se observan manchas verdes, amarillas, marrones, rojas o azules la prueba se toma positiva. 12. Anlisis de Resultados:

36 Los resultados se interpretaron como positivo o negativo, refirindose a la presencia o ausencia respectivamente de los grupos de metabolitos secundarios en la especie vegetal en estudio.

37 VIII. RESULTADOS Tabla No. 1: Resultados Tamizaje Fitoqumico de la parte area (hojas y tallos) de la especie vegetal Quararibea yunckeri Subsp. izabalensis (Molinillo):
METABOLITO PRUEBA Mayer`s CAMBIOS OBSERVADOS Precipitado blanco INTERPRETACIN Posible presencia de alcaloides (precipitan en medio neutro o ligeramente cido) Posible presencia de alcaloides. Posible presencia alcaloides generales Posible presencia alcaloides. Posible presencia flavonas y flavonoles. Posible presencia flavonas y flavonoles de de RESULTADO

+ + + + + +

Alcaloides

Dragendorf Wagner CCF H2SO4 Concentrado FeCl3 al 10% p/v

Coloracin naranja Coloracin marrn UV 365: fluorescencia azul

Color amarillo

de

Color amarillo

de

Mtodo de Shinoda Flavonoides y Antocianinas Borntrger

Coloracin rojiza

Coloraciones rojas indican la presencia de posibles ncleos de gama-benzopirona, flavananoles y flavanolas Posible presencia isoflavonas de

Coloracin amarilla UV 254 nm: manchas con fluorescencia. UV 365 nm fluorescencia verde y roja.

CCF

Coloracin verde sin tratamiento a 365 nm posible presencia de flavonoides y antocianinas. Ninguna mancha corresponde a las de los estndares. No se observo cambios de color en la fase alcalina, ausencia de antraquinonas.

Con revelador NP/PEG: Amarillo-anaranjado y verde (se intensifico con vapores de amoniaco) No presenta cambios respecto al testigo

Antraquinonas

Borntrger

38
Ausencia antraquinonas naftoquinonas de y

Borntrger modificado

No presenta cambios respecto al testigo Sin tratamiento: no se observan manchas con coloraciones caractersticas. Con tratamiento: leve coloracin amarilla

CCF

Sin tratamiento: Ausencia de Antraquinonas. Con tratamiento: medio bsico posible presencia de Antronas y Antranolas.

Fluorescencia

Cumarinas CCF

Segn fluorescencia posible presencia de hidroxicumarinas sencillas Con y sin tratamiento qumico se observa fluorescencia caracterstica para cumarinas. La muestra coincide con la altura y Fluorescencia verde y azul color de los estndares, cumarina y umbelifenona, por lo tanto posible presencia de los mismos en la muestra. Anillo fluorescente definido e intenso color azul. Coloracin amarillenta Coloracin rojiza, inestable (duro 10 segundos) Coloracin verdeamarillenta Presencia de espuma, despus de 30 minutos la capa de espuma en la superficie es menor a 3 cms. Con revelador LibermanBurchard: coloraciones azul, rojas y violeta. UV 365 nm: fluorescencia roja y violeta. Con revelador LiebermanBuchard: manchas gris y marrn. Ninguno Ausencia de saponinas triterpenoidales. Posible presencia de saponinas esteroidales. Ausencia de derivados del colestano. Posible presencia de saponinas, la espuma es inestable debido a la presencia de flavonoides, protenas y otros que interfieren en su estabilidad. Posible presencia de saponinas esferoidales. Posible presencia de principios amargos (monoterpenos, sesquiterpenos, diterpenos y/o triterpenos) Ausencia de taninos.

Libermann Burchard cido Tricloractico Car-Price

+ -

Esteroides o Triterpenoides

Prueba de espuma Saponinas

CCF

Principios Amargos

CCF

Taninos

Gelatina

39
Gelatina-Sal Ninguno Ausencia de taninos.

Aceites Esenciales

Coloracin caf indica posible presencia de Cloruro Cambio de Amarillo a Caf Frrico compuestos fenlicos ms no polifenoles (taninos). Timol, Ciclohexano, Metil Eugenol, -Santaleno, cis-Farneseno, cisGeranilacetona (Nerilacetona), transGeranilacetona, trans-Ionona, (+)--Selineno, Cromatografa cis-Nerolidol, Si hay presencia de de Gasesaceites esenciales. Benzofenona, Masas Heptadeceno, trans-9Octadeceno, cis-7Hexadeceno, Aldehido C14, 5,9,13-Pentadecatrien2-ona, cido metil ester palmtico, Fitol, Eicosano, n-Pentacosano. Cambio a coloracin Ausencia de lactona alfa, Legal amarillo-mostaza. beta-insaturada Baljet Ausencia de lactona alfa, beta-insaturada Fluorescencia roja a 365 UV 365 nm: dos manchas nm coincide con el estndar Neurolena y se con fluorescencia roja: arriba (clorofila), abajo; observa adems otra mancha roja bien mancha en el borde de la definida. cromatoplaca la cual Deteccin con Vainillina al indica presencia de 1% en etanol y luego clorofila ya que ambas calentamiento de la placa son hojas. Con revelador resultado por 5 min a 105 oC: mancha verde. posible presencia de lactona sesquiterpnica. Cambio a coloracin amarilla

Lactonas Sesquiterpnicas

CCF

Fuente: Datos Experimentales.

40 VIII. DISCUSIN DE RESULTADOS Se investigaron nueve familias de metabolitos secundarios en la parte area (hojas y tallos) de la especie vegetal Quararibea yunckeri Subesp. izabalensis (Molinillo) crecida en la selva muy baja de la Sierra Santa Cruz, departamento de Izabal, Guatemala; la colecta se realiz en su hbitat natural; los grupos de metabolitos secundarios estudiados son: alcaloides, flavonoides y antocianinas, antraquinonas, cumarinas, esteroides o triterpenoides, saponinas, principios amargos, taninos, aceites voltiles y sesquiterpenolactonas por medio de diferentes pruebas especficas (8). Las pruebas va hmeda para la investigacin de alcaloides dieron todas positivas lo cual indica que la especie vegetal en estudio presenta posible presencia de alcaloides generales; segn la cromatografa en capa fina se detecta mancha con fluorescencia a 365 nm de color caracterstico (azul), intensa y definida la cual confirma posible presencia de alcaloides. Las pruebas va hmeda para flavonoides y antocianinas indican posible presencia de flavonas, flavanoles, posibles ncleos gama-benzopirona, flavanoles, flavanolas e isoflavonas; la cromatografa en capa fina es positiva para posible presencia de flavonoides y antocianina (8) (Ver Figura #4, anexo 5). Las pruebas va hmeda (Borntrger y Borntrger modificado) para antraquinonas son negativas por lo cual se presume que la concentracin del metabolito es menor a la concentracin mnima detectable por dichas pruebas, ya que mediante cromatografa en capa fina si fue posible detectar las manchas caractersticas con deteccin UV y con revelador (vainillina al 1% en etanol) siendo ambas positivas e indicando posible presencia de antraquinonas en la muestra (8,13).

41 Segn las pruebas va hmeda realizadas para cumarinas existe posible presencia de hidroxicumarinas sencillas; la cromatografa en capa fina revela la presencia de cumarina y umbelifenona, ya que la muestra coincide con alturas y colores de ambos estndares (8) (Ver Figura #5, anexo 5). Las pruebas de color realizadas para la investigacin de esteroides o terpenoides fueron las siguientes: Liberman Burchard (especfica para determinar saponinas triterpenidales) la cual es negativa; Prueba del cido tricloroactico (especfica para determinar saponinas esteroidales) es positiva y Car-Price (especfica para determinar derivados del colestano) es negativa, por lo tanto se reporta posible presencia de saponinas triterpenoidales mas no saponinas triterpenoidales ni derivados del colestano (8) (Ver Figuras # 6 y 7, anexo 5). Las pruebas realizadas para determinacin cualitativa de saponinas son: prueba de espuma y cromatografa en capa fina, la prueba de espuma es una prueba presuntiva en la cual interfiere la presencia de metabolitos diferentes al de inters y otros compuestos provocando que la cantidad de espuma sea inestable, por lo tanto debido a la presencia de protenas, flavonoides y otros la espuma luego de 30 minutos es menor a 3 cms, sin embargo debido a que aun permanece y la cromatografa en capa fina es positiva para presencia de saponinas esteroidales, se reporta posible presencia de saponinas en la muestra (13). La placa cromatogrfica corrida en capa fina para la investigacin de principios amargos utilizando como estndar Neurolena es positiva por lo tanto se presume posible presencia de principios amargos (mono-, di-, triy sesquiterpenos) en la muestra, as como la presencia de Neurolena en la especie vegetal en estudio, ya que la misma coincide con las caractersticas de coloracin y altura de la mancha (Ver Figura #8, anexo 5).

42

Las pruebas va hmeda para la investigacin de taninos dieron todas negativas ya que no se observ formacin de precipitado en presencia de protenas, esta prueba indica ausencia de taninos debido a que los mismos poseen la capacidad de formar complejos con macromolculas, especialmente con protenas; uno de los tubos se hizo reaccionar con cloruro frrico dando como resultado cambio de coloracin, sin embargo no se observan coloraciones caractersticas (negro azulado o grisceo), por lo tanto se presume la presencia de compuestos fenlicos mas no polifenoles (taninos) (8,13) (Ver Figura #9, anexo 5). Los aceites voltiles detectados segn Cromatografa de Gases acoplada a Masas en la especie vegetal son: Timol, Ciclohexano, Metil Eugenol, Santaleno, -cis-Farneseno, cis-Geranilacetona (Nerilacetona), Aldehido transC-14 Geranilacetona, trans--Ionona, (+)--Selineno, cis-Nerolidol, Benzofenona, Heptadeceno, trans-9-Octadeceno, cis-7-Hexadeceno, (mirstico), 5,9,13-Pentadecatrien-2-ona, cido metil ester palmtico, Fitol, Eicosano, n-Pentacosano; dichos aceites voltiles se detectaron utilizando las referencias reportadas por la librera del espectrmetro de masas y tomando de base certezas mayores al 90% (Ver Anexo # 6) (10). Las pruebas para la identificacin de sesquiterpenolactonas presentan coloraciones caractersticas, comnmente rojas, marrones o verdes; al realizar las pruebas especficas para la identificacin del anillo lactnico alfa, beta-insaturado no se observan colores caractersticos sin embargo mediante cromatografa en capa fina se observan dos fluorescencias rojas, una en la parte superior de la placa a 365 nm la cual coincide con uno de los estndares (Neurolena), sin embargo ambas son hojas y debido a que ambas contienen clorofila tambin presentan otra mancha en la frontera superior de la placa, esto puede causar confusin ya que de no estar bien separada la muestra y observarse claramente la mancha inferior se puede

43 reportar un falso positivo para sesquiterpenlactonas, ya que la clorofila es un interferente en esta prueba, sin embargo en la parte inferior de la placa se observa otra mancha roja a 365 nm la cual confirma la posible presencia de sesquiterpenlactonas coincidiendo con las caractersticas de Neurolena en la especie en estudio. Es posible que la concentracin de sesquiterpenlactonas sea menor a la concentracin mnima detectable mediante las pruebas va hmeda y por tal motivo estas no presentaron los colores caractersticos (8).

44

IX.

CONCLUSIONES

1.

Los ocho posibles metabolitos secundarios presentes en Quararibea

yunckeri Subsp. izabalensis, son los siguientes, alcaloides, flavonoides y antocianinas, antraquinonas, cumarinas, saponinas, aceites voltiles, eseroides y triterpenoides (especficamente saponinas esteroidales), principios amargos (especficamente mono-, di-, tri- y sesquiterpenos) y sesquiterpenlactonas. 2. Los metabolitos secundarios identificados mediante cromatografa en capa fina presentes en la especie vegetal guatemalteca Quararibea yunckeri Subsp. izabalensis son: Cumarina, Umbelifenona, y Neurolena; estos metabolitos secundarios fueron utilizados como estndares y la muestra de la especie en estudio coincide con las caractersticas de color y altura de revelado en la cromatoplaca de cada uno. 3. Los principales aceites voltiles presentes en la especie vegetal Quararibea Santaleno, yunckeri Subsp. izabalensis identificados mediante transC-14 Cromatografa Gases-Masas son: Timol, Ciclohexano, Metil Eugenol, -cis-Farneseno, cis-Geranilacetona (Nerilacetona), Aldehido Geranilacetona, trans--Ionona, (+)--Selineno, cis-Nerolidol, Benzofenona, Heptadeceno, trans-9-Octadeceno, cis-7-Hexadeceno, (mirstico), 5,9,13-Pentadecatrien-2-ona, cido metil ester palmtico, Fitol, Eicosano y n-Pentacosano.

45

XI. RECOMENDACIONES 1. Debido a la presencia de alcaloides generales en Quararibea yunckeri Standley Subsp. izabalensis (Molinillo), y la importancia farmacolgica que estos confieren a una especie, se recomienda caracterizar cada alcaloide. 2. Cuantificar Quararibea los aceites voltiles mayoritarios presentes en

yunckeri

Standley

Subsp.

izabalensis

mediante

Cromatografa de Gases-Masas.
3. Realizar pruebas de bioactividad de acuerdo al los grupos de

metabolitos secundarios encontrados.

46

XII. REFERENCIAS 1. Bruneton, J. 2001. Farmacognosia, Fitoterapia y Plantas

Medicinales. 2 edicin. Espaa. Editorial Acribia, S.A. 2. Cceres, A., 1996. Plantas de uso medicinal en Guatemala. 1 edicin, Editorial Universitaria, Direccin General de Extensin, Volumen 1, Guatemala. 1996. 45 p. 3. Domnguez, X. 1979. Mtodos de Investigacin Fitoqumica.

Mxico. Editorial Limusa, S.A. 281p. 4. Garrido, J. 2001. Tamizaje fitoqumico de las hojas y flores de

Lycaste skinneri variedad Rosea, Ruborosa y Armeniaca por medio de cromatografa en capa fina. Guatemala. 43 p. Tesis de Licenciatura en Qumica Farmacutica. Universidad de San Carlos. Facultad de Ciencias Qumicas y Farmacia. Escuela de Qumica Farmacutica. 5. Hernndez, R., et.al. 2004. Metodologa de la Investigacin. 3

Edicin. Editorial Mc Graw Hill Interamericana. 106 p. 6. Ikan, R. 1969. Natural Products; A laboratory guide. U.S.

Academic Press Inc. 293 p. 7. Kuklinsky, C. 2000. Farmacognosia. Estudio de las drogas y sustancias medicamentosas de origen natural. Omega. Barcelona. 8. Manual de Operaciones; Tamizaje Fitoqumico. 2005. Guatemala. LIPRONAT. 9 p.

47

9. Murray, R.K., 1994. Bioqumica de Harper. Mxico. 14a. Edicin Tr. Maria del Rosario Carsolio P. de la 28 edicin en ingles, Editorial El Manual Moderno S.A. de C.V. 54 p. 10. NIST Chemistry WebBook, NIST Standard Reference Database Number 69, June 2005 Release www.webbook.nist.gov/chemistry/ 11. Santizo, I. 2004. Identificacin de familias de metabolitos Guatemala. 100 p. Tesis de Escuela de Universidad de San Carlos de

secundarios en Myrica cerifera. Licenciatura en Qumica Biolgica. Guatemala. Qumica Biolgica. 12. 278 p. 13.

Facultad de Ciencias Qumicas y Farmacia.

Morton, J. 1981. Atlas de Plantas Medicinales en Centro

Amrica, Estados Unidos. Editorial Charles C. Thomsons Publisher.

Santa Cruz, L. Manual Seleccin Fitoqumica, Gua Prctica

para los laboratorios de Qumica de Productos Naturales y Fitoqumica. USAC. Guatemala. 92 p. 14. Velsquez, M., 2001. Determinacin de los componentes

mayoritarios del aceite esencial de Lippia graveolens H.B.K. (Organo) por cromatografa de gases. Guatemala 79p. Tesis de Licenciatura en Qumica. Universidad de San Carlos de Guatemala. Facultad de Ciencias Qumicas y Farmacia. Escuela de Qumica. 15. Vliz. M. 2000. Subespecie nueva Quararibea (Bombacaceae) de

Guatemala. Mxico. Serie Botnica 71(2):81-85. Anales del Instituto de Biologa Universidad Nacional Autnoma de Mxico (UNAM).

48 16. Vila, R & Reing, M. 2003. Mtodos de Control de Calidad. Madaus, UB Virtual, Imicromat. 39 p.

49

XIII. ANEXOS

50 Anexo # 1: Antraquinona:
8 7 6 5

O
9 10

1 2 3 4

Fuente: Bruneton, J. 2001. Farmacognosia, Fotoqumica y Plantas Medicinales. 2 edicin. Espaa. Editorial Acribia.

Anexo # 2:

Esteroide:

CH3 H3C CH3 CH3

H3C

Fuente: Bruneton, J. 2001. Farmacognosia, Fotoqumica y Plantas Medicinales. 2 edicin. Espaa. Editorial Acribia.

Anexo # 3:
H3C

Pirofosfato de geranilo:
O-PP

CH3

CH3

CH3

CH3

Fuente: Bruneton, J. 2001. Farmacognosia, Fotoqumica y Plantas Medicinales. 2 edicin. Espaa. Editorial Acribia.

Anexo # 4:

2E,6E,10E-geranilgeranilpirofosfato
H3C CH3

H3C

O-PP

Fuente: Bruneton, J. 2001. Farmacognosia, Fotoqumica y Plantas Medicinales. 2 edicin. Espaa. Editorial Acribia.

51 Anexo # 5: Fotografas del Proceso Experimental. Figura No. 1: Mapa de Localizacin de Quararibea yunckeri Subsp. izabalensis. Figura #3: Quararibea yunckeri Subsp. izabalensis (Molinillo) en su hbitat natural
Tronco

1. Quebrada Seca, localidad Tipo; 2. Ro Cinega; 3. Puerto Mndez; 4. La Cumbre; 5 Finca Exmibal; 6. Aldea Chichipate. Fuente: Vliz. M. 2000. Subespecie nueva Quararibea (Bombacaceae) de Guatemala. Mxico. Serie Botnica 71(2):84. Anales del Instituto de Biologa Universidad Nacional Autnoma de Mxico (UNAM).

Figura #2: Quararibea yunckeri Subsp. izabalensis

Follaje (parte area de la planta; hojas y tallos)

Hojas y tallos colectados en la quebrada seca, localidad tipo, Izabal, Guatemala.

Fuente: Herbario Bigu, USAC. Fuente: Colecta de la especie en la localidad tipo.

52 Figura #4: Identificacin de Flavonoides y Antocinanias: Figura #6 y 7: Identificacin de Esteroides o Triterpenoides:

Flavonoides (+) Con Revelador NP/PEG tras vapores de amoniaco De izquierda a derecha: Mancha 1: Muestra (+) con revelador: color verde; sin revelador: roja. Mancha 2: Estndar cido Clorognico Mancha 3: Estndar de Rutina Mancha 4: Estndar de Quercetina
Fuente: Datos Experimentales

Derecha: Testigo Izquierda: Prueba Libermann Burchard(-)

Figura #5: Identificacin Cumarinas:

de
Derecha: Testigo Izquierda: Prueba Car-Price (-)

Figura #8: Taninos (-)

Identificacin

de

A 365 nm fluorescencia azul y verde (+) De izquierda a derecha: Mancha 1: Estandar Umbelifenona Mancha 2: Estandar Umbelifenona Mancha 3: Muestra (+) se observan manchas verde y azul (poco intensas)
Fuente: Datos Experimentales

De izquierda a derecha: Tubo 1: Testigo; Tubo 2: Prueba Gelatina (-);Tubo 3: Gelatina-Sal(-); Tubo 4: Cloruro frrico(-).
Fuente: Datos Experimentales

53 Figura #9: Identificacin de Principios Amargos (+)

A 365 nm: fluorescencia roja y violeta Izquierda: Neurolena (estndar) Derecha: Muestra. (+)
Fuente: Datos Experimentales

Figura No. 10: Morfologa de Quararibea yunckeri Subsp. izabalensis

1. rbol; 2.rama con flor; 3.flor; 4.fruto.

Fuente: Vliz. M. 2000. Subespecie nueva Quararibea (Bombacaceae) de Guatemala. Mxico. Serie Botnica 71(2):83. Anales del Instituto de Biologa Universidad Nacional Autnoma de Mxico (UNAM).

54

Anexo # 6: Reporte del Anlisis de Cromatografa de Gases-Masas para la identificacin de Aceites Voltiles presentes en Quararibea yunckeri Subsp. izabalensis. A. Condiciones Cromatogrficas para el Anlisis del Aceite Esencial: Equipo: Cromatgrafo de gases HP 5890, serie II. Detector Selectivo de Masas 5971 Librera Wiley 275 L y Software Chemstation Integrator. Columna: Columna Capilar de dimensiones HP-5 con dimetro interno de 0.2 mm y espesor de film de 0.3 y 30 m largo. Gas acarreador: Helio Flujo: 1 ml/min Temperaturas: Inicial del horno: 50 0C Inicial del Inyector: 250 0C Temperatura del Detector: 280 0C Rampa de temperatura: Inicia en 500C y finaliza en 250 0C, con un gradiente de 20 0C cada 5 minutos. Cantidad de Inyeccin: 0.6 L de muestra del aceite esencial extrado. Tiempo de corrida: 30 minutos.

55

B. Componentes identificados por la Librera del Detector. Tabla No. 2: Aceites voltiles identificados mediante Cromatografa de Gases-Masas.
No. Pico 1 3 4 5 8 9
TR *

23.99 27.35 27.69 28.32 29.17 29.24

% rea 0.95 0.35 2.72 0.65 1.23 5.00

Compuesto Identificado Timol: 2-Isopropil-5-metilfenol Ciclohexano: 2,4-Diisopropenil-1metil-1-vinilciclohexano Metil Eugenol: 1,2-Dimetoxi-4-(2propenil)benceno -Santaleno: Triciclo[2.2.1.0(2,6)]heptano, 1,7-cis-Farneseno: 1,6,10Dodecatrieno cis-Geranilacetona: (5Z)-6,10Dimetil-5,9-undecadien-2-ona trans-Geranilcetona: (5E)-6,10Dimetil-5,9-undecadien-2-ona trans--Ionona: 4-(2,6,6-trimetil1-ciclohexen-1-il)-3-buten-2-ona -Selineno:7-Isopropenil-4a-metil1-Metilenedecahidronaftaleno cis-Nerolidol: (6E)-3,7,11-Trimetil1,6,10-dodecatrien-3-ol Benzofenona: Difenil cetona Heptadeceno trans-9-Octadeceno cis-7-Hexadeceno Aldehdo C-14: 1-Tetradecil aldehdo 5,9,13-Pentadecatrien-2-ona cido metil ester palmtico Fitol:(2E)-3,7,11,15-Tetrametil-2hexadecen-1-ol Eicosano n-Pentacosano

# Ref 35717 89681 62369 89456 89677 78880

# CAS 89-83-8 515-13-9 93-15-2 512-61-8 28973-97-9 3879-26-3

Certez a 93 91 94 97 90 90

10 11 13 16 17

30.42 30.75 32.86 35.24 36.25

1.47 0.99 0.43 29.44 1.55

78881 76514 89381 108611 67341 124595 137623 110850 98182 146619 153626 175363 163883 212921

3796-70-1 79-77-6 17066-67-0 40716-66-3 119-61-9 6765-39-5 7206-25-9 35507-09-6 124-25-4 762-29-8 112-39-0 150-86-7 112-95-8 629-99-2

91 96 95 90 97 91 91 91 91 96 93 90 94 95

18 26 27 30 32 33

37.39 42.87 43.05 47.71 49.68 51.92

1.50 14.83 0.49 9.60 0.41 0.34

*TR: Tiempo de Retencin.

Fuente: Datos Experimentales

56

C. Cromatograma: Figura No. 11: Cromatograma del Aceite Esencial de Quararibea yunckeri Subsp. izabalensis.

Abundance TIC: 3228.D 35.24

5500000 5000000 4500000 4000000 3500000 3000000 2500000 2000000

42.87

47.71 29.09 40.71

1500000 29.23 1000000 500000 0 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 45.00 50.00 55.00 Time-->
Fuente: Datos Experimentales.

41.86 28.51 29.17 40.90 27.70 37.3841.58 36.25 41.37 30.42 34.69 23.99 28.32 32.86 43.61 33.73 43.06 49.68 42.63 48.45 42.19 44.07 26.5330.74 27.35 31.71

57 Anexo # 6: Estructuras de los Aceites Voltiles identificados en Quararibea yunckeri Subsp. izabalensis mediante Cromatografa de Gases-Masas.

Timol C10H14O -cis-Farneseno C15H24

11. (+)--Selineno C15H24

Ciclohexano C15H24 cis-Geranilacetona (Nerilacetona) C13H22O

cis-Nerolidol C15H26O

Metil Eugenol C11H14O2

trans-Geranilacetona C13H22O

Benzofenona C13H10O

-Santaleno C15H24 trans--Ionona C13H20O

58

Heptadeceno C17H34

trans-9-Octadeceno C18H36

cis-7-Hexadeceno C16H32

Aldehido C-14 (mirstico) C14H28O

5,9,13-Pentadecatrien-2-one C18H30O

Palmitic acid, methyl ester (n-Hexadecanoic acid methyl ester) C17H34O2

Fitol C20H40O

Eicosano C20H42

59

n-Pentacosano C25H52
Fuente: Datos Experimentales.

60

Anexo # 7: Reacciones de caracterizacin identificacin de metabolitos secundarios.

empleadas

en

la

1. Identificacin de Alcaloides mediante la Prueba de Mayers: Precipitacin de alcaloides en medio cido (3:217).
CH3 O O CH3 CH3 HgI2 H
+

N Hg O

CH3 O CH3

CH3

2
Atropina

2. Identificacin de Antraquinonas mediante la Prueba de Borntrger: Formacin de imina (3:42)

H N H H
+

NH3
H H H H

+
H

H2O

antrona

antranol

3. Identificacin de Cumarinas: Apertura del anillo lactnico en medio bsico y formacin de la sal del cido hidroxicinmico (3:114)
O
KOH / H 2O

O K

HO

O
Umbeliferona

+ H2O
HO OH

61
4. Identificacin de Taninos: Precipitacin de protenas mediante formacin de puentes de hidrogeno entre el sitio electronegativo de la protena y el grupo hidroxilo del tanino (polifenol) (9).
COOH Protena: HO OH O
O OH
O NH NH R2 NH O O R3 R1 O .

COOH

HO OH O H O R2 NH NH O O H HO O OH n HOOC R3 R1 O H .

3
HO OH OH

NH

cido Glico

5. Identificacin de Compuestos Fenlicos mediante la formacin de complejo de Fenol con cloruro frrico acuoso. (2)
+

OH OH 4

+
OH

Fe OH OH

6 H2O

fenol

hexaacuo hierro (III)

(complejo formado a partir de FeCl 3 (ac))

tetrafenol hierro (III)

62

6. Identificacin de Sesquiterpenlactonas mediante la Prueba de Baljet: Apertura de Anillo lactnico en medio bsico (3:97)
H3C H

H3C H O HO CH2 KOH / H 2O CH3 O O CH2 O K

+

+ H2O

CH3 O

Ambrosina

Sal potsica del cido hidroxicido

63

XI. 1.

GLOSARIO

Amebicidas: Sustancia que combate la enfermedad conocida como

amebiasis, la cual es causada debido presencia de amebas (protozoo que carece de membrana rgida y se desplaza mediante pseudopodos) 2. Anticolinrgicos: Frmaco que bloquea el paso de ciertos impulsos

nerviosos al sistema nervioso central por inhibicin de la produccin de acetilcolina, un neurotransmisor (sustancia que transporta seales entre las clulas nerviosas y los msculos). 3. Antifibrilantes: Medicamento o compuesto contra la afeccin del

corazn caracterizada por contracciones muy rpidas, pero ineficaces para el impulso sanguneo 4. Antipaldicos: Sustancia o medicamento que combate la

enfermedad causada por causada por un protozoo (Plasmodium) que es transmitido al hombre a travs de la picadura de la hembra del mosquito Anopheles. 5. Antitumorales: Sustancia que contrarresta el efecto del crecimiento

desordenado y excesivo de las clulas en un rgano. 6. Auronas: Se caracterizan por una estructura 2-

bencilidencumaranona. 7. Ganglioplegicos: Inmovilizacin debida a la inflamacin de los

ganglios.

64

8.

Hetersido: Compuesto que posee variabilidad estructural y su

parte osdica es un disacrido o trisacarido que puede ser lineal o ramificado. Se caracterizan por la presencia de una cadena tricarbonada cetnica, ,-insaturada. 9. Venoactivo: Capacidad de una sustancia de disminuir la

permeabilidad de los capilares sanguneos y aumentar su resistencia.

___________________________________________ Esmeralda Orantes Morales Autora

___________________________________________ Licda. Irma Nohemi Orozco Godnez Asesora

___________________________________________ Ing. Agr. Mario Esteban Vliz Prez Asesor

___________________________________________ Lic. Jhoni Frank lvarez Castaeda Director

___________________________________________ Dr. Oscar Manuel Cbar Pinto Decano