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Ingeniería Forestal, Facultad del Medio Ambiente y Recursos Naturales, Universidad Distrital Francisco José de Caldas.
Correspondencia: lcarvajal@udistrital.edu.co.
Departamento de Farmacia, Facultad de Ciencias, Universidad Nacional de Colombia, Sede Bogotá. yahatau@unal.edu.co
Departamento de Farmacia, Facultad de Ciencias, Universidad Nacional de Colombia, Sede Bogotá. nsierram@unal.edu.co
Grupo Búsqueda de Principios Bioactivos, Departamento de Farmacia, Facultad de Ciencias, Universidad Nacional de Co-
lombia, Sede Bogotá. dcruedan@unal.edu.co
Recepción: 4 de julio de 2009 / Aprobación: 1 de septiembre de 2009 Revista Colombia Forestal Vol. 12: 161-170 / Diciembre 2009 161
the genus Strhychnos, widely known because of its nar hasta estudios químicos sistemáticos bioguia-
high alkaloid content. In addition, the existence of dos. Puesto que este último tipo de estudio requiere
flavonoids in the studied organs of the plant is very una inversión considerable de tiempo y recursos,
remarkable. These compounds are well known as lo ideal es iniciar con estudios fitoquímicos pre-
scavengers, useful in prevention of diseases rela- liminares que permitan hacer una discriminación
ted with oxidative processes. Finally, the results de las plantas a estudiar en términos de su com-
of this work are very useful as a first approach to posición química, con el fin de seleccionar única-
the knowledge and utility of the vegetal species mente aquellas más interesantes para posteriores
found in this location. Furthermore, this plant has estudios sistemáticos. El objetivo de un estudio
big agronomical advantages related with the cultu- fitoquímico preliminar es determinar la presencia o
re establishment, which improves the rational use ausencia de los principales grupos de metabolitos
of natural resources in our country, as a means of en una especie vegetal, a saber: alcaloides, antra-
regional and national development. quinonas y naftoquinonas, esteroides y triterpenos,
flavonoides, taninos, saponinas, cumarinas, lacto-
INTRODUCCIÓN nas terpénicas y cardiotónicos. Dado que cada uno
de estos grupos de compuestos está relacionado
El hombre utiliza las plantas con propósitos medici- con actividades biológicas específicas, partiendo
nales desde tiempos prehistóricos y aún hoy tienen de los resultados obtenidos en el estudio fitoquí-
un papel clave en el mantenimiento de la salud de mico preliminar es posible orientar investigaciones
la mayor parte de la población mundial, pese a los posteriores para determinar la actividad biológica
avances de la medicina moderna. Esto si se tienen de las especies en cuestión y los principios activos
en cuenta las diversas formas en que se utilizan, que involucrados.
van desde la preparación de decocciones e infusio-
nes en zonas rurales y países pobres, pasando por En el caso del presente análisis fitoquímico preli-
los productos fitoterapéuticos, hasta la obtención minar se partió del extracto etanólico de tres órga-
de principios activos en países desarrollados para nos –hojas, semillas y tallos– de Strychnos schul-
la elaboración de medicamentos. Se estima que en tesiana (Loganiaceae) (Missouri Botanical Garden
el mundo se utilizan cerca de 10000 especies vege- 2008), en los cuales se evaluó la presencia de los
tales con fines medicinales, la mayor parte en sis- principales grupos de metabolitos secundarios pre-
temas de medicina tradicional (who 1993, Calixto viamente mencionados, mediante pruebas de tubo
2000, Cañigueral 2002, Newman et al. 2003). y/o cromatografía en capa delgada que se descri-
ben de manera detallada en el siguiente apartado.
En los países en vías de desarrollo, donde vive el
75% de la población mundial, se consume menos Las especies del género Strychnos han sido utili-
del 15% del mercado total de medicamentos. Las zadas tradicionalmente por muchas comunidades
plantas medicinales representan, por tanto, el úni- indígenas para la preparación de venenos conoci-
co recurso terapéutico disponible para los sectores dos como “curares”. Strychnos schultesiana es una
más desfavorecidos de esta población. Por lo ante- especie trepadora que presenta un comportamiento
rior, las autoridades de salud a nivel mundial han muy favorable para su manejo y propagación en vi-
aumentado considerablemente su atención a dichos vero, de igual manera comienza entre los 3 y 4 años
medicamentos, ya que por un lado constituyen la de edad la producción de frutos, muy abundantes
única medicina disponible en los países en vías de en el sitio de recolección y conocidos en la pobla-
desarrollo y, por otro, se han convertido en una po- ción con los nombres de cupatá, castaña espinosa o
pular alternativa en los países desarrollados (Sha- solita. Al no conocerse mucho de su composición
rapin 2002). química, se planteó la necesidad de realización de
un análisis fitoquímico preliminar para ahondar en
Para determinar la composición química de las su conocimiento químico.
plantas medicinales y conocer sus constituyentes
biológicamente activos pueden seguirse metodolo- El cupatá es una planta trepadora de hojas simples,
gías que van desde un análisis fitoquímico prelimi- opuestas, sin estipula ni exudado. La corteza exter-
na es de color café y la viva, amarilla. Las ramas curares útiles para capturar las presas fácilmente;
tienen espinas opuestas con las cuales asciende. para ello untan la punta del dardo o de la flecha
Flores de color amarillo están dispuestas en cimas con la cual van a herir al animal. Aunque los frutos
axilares. Los frutos son bayas grandes de color poseen una pulpa carnosa de un sabor muy agrada-
amarillo y con numerosas semillas de color curuba ble, las semillas no se deben consumir ya que con-
que presentan una fragancia muy agradable. En la tienen estricnina. Con respecto a la propagación,
Figura 1 se pueden observar fotografías de los di- se puede utilizar la semilla de manera exitosa y la
ferentes órganos de la especie. planta es de lento crecimiento en sus primeros esta-
dos de desarrollo, en los que requiere sombra. Por
La especie se distribuye en Perú, Ecuador y Vene-
su carácter ascendente tiende a trepar sobre árboles
zuela. En Colombia la encontramos en el Chocó
biogeográfico, Orinoquía, región Andina y piede- hasta alcanzar las copas. Se han realizado ensayos
monte llanero y es usada por los indígenas de las de propagación vegetativa que presentan buenos
regiones donde se encuentra para la preparación de resultados en vivero. La especie presenta rebrotes.
A. B.
C. D.
do “A”, se puso en un tubo de ensayo con 0.5 g de de magnesio, evaporando a sequedad y extrayendo
magnesio en polvo. Seguidamente se adicionó hcl luego con etanol al 96%. Una vez eliminados los
concentrado, gota a gota, hasta el desprendimiento taninos, 1 ml de esta solución se puso en un tubo de
de hidrógeno. Si en estas condiciones se observa la ensayo en presencia de 5 ml de suspensión norma-
aparición de coloración rojiza, violeta o naranja, se lizada de glóbulos rojos. Como patrón de hemólisis
considera positivo para compuestos con el núcleo positiva se emplearon 0.5 ml de una solución de
de la γ-benzopirona (flavonas, flavonoles, flavano- digitonina (10 mg en 100 ml de etanol del 80%)
nas, flavanonoles, isoflavonoides y xantonas). en presencia de 5 ml de suspensión normalizada
de glóbulos rojos y como blanco se emplearon 5ml
También existe otro tipo de flavonoides denomi- de la misma suspensión con 1 ml de agua. La prue-
nados leucoantocianidinas, las cuales por cambio ba de hemólisis es considerada positiva cuando en
en el pH se tornan de incoloras a intensamente 10 min se presenta hemólisis en el patrón y en la
coloreadas de rojo. Para detectar la presencia de muestra, mientras que el blanco permanece sin he-
este tipo de compuestos en la muestra, el filtrado molizar.
A fue transferido a un tubo de ensayo, se adicionó
ácido clorhídrico concentrado y se sometió a calen- La prueba de formación de espuma consiste en
tamiento en un baño maría hirviendo durante 10-15 agitar vigorosamente la solución acuosa (7:1), ob-
min. La aparición de coloración rojiza bajo estas tenida del extracto etanólico total, en un tubo de
condiciones indica la presencia de leucoantociani- ensayo y observar la espuma formada. Ésta debe
dinas. ser estable por lo menos 30 minutos para poder es-
tablecer la presencia de saponinas.
Taninos: Estos polifenoles tienen la propiedad
de unirse a las proteínas y precipitarlas. Por esta Glicósidos cardiotónicos: Estos compuestos po-
razón, la prueba más empleada para la detección seen características estructurales similares a las de
de este grupo de metabolitos secundarios emplea las saponinas, con una estructura compuesta por
el reactivo de gelatina-sal, el cual produce un pre- un núcleo esteroidal glicosilado (2 desoxiazúcares)
cipitado blanco en presencia de taninos, luego de y una lactona insaturada de 5 o 6 miembros. Para
haber extraído el extracto etanólico total con una la detección de éstos pueden emplearse pruebas
solución acuosa de etanol (7:1). Estos precipitados en tubo de ensayo específicas para cada una de
formados como consecuencia de la presencia de ta- las partes que componen la molécula, o técnicas
cromatogáficas. El presente análisis fitoquímico
ninos deben ser solubles en urea 10 M y producir
preliminar empleó cromatografía en capa delga-
coloraciones verdes, azules o negras tras la adición
da (ccd), sirviéndose de dos placas cromatográfi-
de cloruro férrico al 10% en agua.
cas eluídas en la misma fase móvil (cloroformo:
Saponinas: Son glicósidos cuya aglicona consiste metanol: agua 82:17:1) con el fin de comparar los
en un núcleo esteroidal o triterpénico; esta carac- valores de Rf de los compuestos revelados. Una de
terística estructural les confiere un carácter anfó- ellas se reveló con el reactivo de vainillina - ácido
tero que les permite actuar como tensioactivos. ortofosfórico (1% vainillina y 10% de ácido en eta-
Aprovechando esta propiedad, las dos pruebas más nol), específico para esteroides y triterpenos, con
empleadas en la detección de saponinas son la de el fin de detectar el núcleo esteroidal de los car-
hemólisis y la de formación de espuma, puesto que diotónicos. La otra placa se reveló con la reacción
al ser tensioactivas las saponinas inestabilizan la de Raymond, la cual utiliza m-dinitrobenceno (2%
membrana celular de los eritrocitos, induciendo su en etanol) y naoh al 20%; en estas condiciones, las
ruptura. γ-lactonas α-β insaturadas producen coloraciones
violeta que desaparecen rápidamente. De esta ma-
Para realizar la prueba de hemólisis el extracto eta- nera, sólo aquellas manchas que revelan en las dos
nólico fue extraído con la solución acuosa (7:1). En placas pueden considerarse cardiotónicos pues po-
caso de ausencia de taninos, se procedió a realizar seen el núcleo esteroidal además de la lactona insa-
las pruebas; de lo contrario, con el fin de eliminar- turada. Esto se evidencia claramente con un patrón
los, se adicionaron aproximadamente 2 g de óxido de digitoxina.
Practicar las 4
reacciones de
precipitación
Tabla 1. Resultados de los análisis fotoquímicos preliminares de hojas, tallos y semillas de Strychnos schultesiana.
Órgano
Metabolito
Hojas Tallos Semillas
Filtrado A +++ + ++
Filtrado B +++ + ++
Filtrado C ++ + +
Alcaloides
Filtrado D ++ - +
Capa acuosa 3 + - +
Capa Cloroformo - - -
Nafto/Antraquinonas - - -
Esteroides y/o triterpenoides libres ++ ++ ++
Flavonoides ++ ++ ++
Taninos + - -
Saponinas + - -
Glicósidos cardiotónicos - - -
Cumarinas - - -
Lactonas sesquiterpénicas - - +
La cromatografía realizada para la detección de dado que el precipitado obtenido es soluble en urea
esteroides y/o triterpenos permite determinar la y produce coloración verde tras la adición de cloru-
presencia de estos compuestos en las tres muestras ro férrico, se infiere que estos taninos son del tipo
evaluadas, lo que se evidencia en la aparición de catéquico o condensados. Sin embargo, la reducida
diversas manchas de tonalidades azulosas y roji- cantidad de precipitado obtenido indica una baja
zas. Las hojas presentan un mayor número de estos concentración de taninos en la muestra.
compuestos en comparación con semillas y tallos.
Según lo observado, el lupeol no se encuentra pre- Respecto al análisis de saponinas, sólo el extracto
sente en esta planta puesto que en ninguno de los etanólico de las hojas de la especie evaluada pro-
órganos evaluados se observan manchas con un va- dujo hemólisis comparable a la observada con el
lor de Rf similar al obtenido para este patrón. patrón, mientras que con los extractos de tallos y
semillas los eritrocitos permanecieron intactos,
El análisis fitoquímico preliminar de hojas, tallos lo que se evidenció por la turbidez de la suspen-
y semillas de S. schultesiana permitió comprobar sión de glóbulos rojos. De lo anterior se infiere
también la presencia de flavonoides en la especie, que de los tres órganos analizados, sólo las hojas
ya que en los tres órganos evaluados se obtuvie- contienen saponinas. Por otro lado, los resultados
ron resultados positivos con la reacción de Shi- de la prueba de espuma para semillas y tallos con-
noda y con la del ácido clorhídrico. Lo anterior cuerdan con esta conclusión, puesto que al agitar
indica la presencia de flavonoides tipo flavona, la muestra no se observó la formación de espuma
flavonol, flavanona, flavanonol, isoflavonoide y abundante ni estable; sin embargo, a pesar de los
leucoantocianidinas. resultados obtenidos en la prueba de hemólisis para
el extracto de hojas, el ensayo de espuma arrojó
Por otra parte, puesto que sólo las hojas de S. schul- resultados negativos, lo cual puede deberse a que,
tesiana ocasionaron precipitación del reactivo ge- como se expuso anteriormente, no todas las sapo-
latina - sal, puede concluirse que en este órgano se ninas tienen la capacidad de producir espuma. Aun
concentran los taninos producidos por la planta, y con estos resultados a simple vista contradictorios
para el extracto de hojas, puede inferirse la presen- observada en el extracto de tallos no reveló, por lo
cia de saponinas en él, pues la prueba más conclu- que puede concluirse que aunque los tallos poseen
yente para la determinación de saponinas es la de lactonas, no son de tipo terpénico.
hemólisis.
Para esta especie no se encuentran reportes sobre
En cuanto a la detección de glicósidos cardiotóni- composición química. Sin embargo, los resultados
cos, ninguno de los esteroides observados tras re- obtenidos del presente análisis fitoquímico preli-
velar una de las placas con vainillina presentó co- minar de hojas, tallos y semillas de esta planta co-
loración violeta similar a la del patrón en la placa inciden con los reportados para otras especies del
revelada con la reacción de Raymond, por lo cual género Strychnos. Ejemplo de lo anterior son los
puede deducirse que la especie S. schultesiana no reportes de la presencia de alcaloides en las hojas
contiene glicósidos cardiotónicos en hojas, tallos de S. pseudoquina y en semillas de S. nux-vomica
ni semillas. Por su parte, el patrón de digitoxina (Nicoletti & Colus 1984, Yang & Yang 1993, San-
produjo coloraciones violetas, al ser revelado tanto tos et al. 2006), flavonoides en hojas de S. pseudo-
con el reactivo de vainillina en ácido o-fosfórico quina y S. spinosa (Nicoletti et al. 1984, Hoet et al.
como con el de Raymond, tal como se esperaba. 2004, Santos et al. 2006) y esteroides y ácidos gra-
sos en raíces y tallos de S. nitida (Gu et al. 1997).
Para la detección de cumarinas se emplearon tres Adicionalmente, se reporta la presencia de otros
fases móviles, de las cuales aquella constituida por grupos de metabolitos no analizados en esta opor-
tolueno-éter etílico (1:1), saturada con ácido acé-
tunidad, como lignanos en tallos de S. vanprukii
tico al 10%, permitió una mejor separación de los
(Thongphasuk et al. 2004), glicósidos fenólicos,
componentes de cada extracto, encontrándose así
iridoides en madera y corteza de S. axillaris (Itoh
una mancha fluorescente bien definida en el ex-
y Colus 2008) y ácidos orgánicos como el quínico
tracto de tallos, otra en el extracto de semillas y
y el logánico y ésteres de los mismos en corteza y
cuatro en el de hojas; sin embargo, al revelar con la
madera de S. lucida (Itoh et al. 2008).
reacción del hidroxamato férrico, ninguna de ellas
presentó coloración café similar a la del patrón,
descartando así la presencia de cumarinas en los A pesar de no haber detectado cumarinas en el pre-
extractos. sente análisis fitoquímico preliminar de S. schulte-
siana, se ha reportado la presencia de este tipo de
Para confirmar lo anterior, se asperjó una de las metabolitos secundarios en las raíces de S. catha-
placas desarrolladas en acetato de etilo, con koh al yensis (Luo 2006). Sin embargo, este es un grupo
5%, con lo cual no se intensificó la fluorescencia de de compuestos cuya presencia no se haya amplia-
las manchas observadas, que incluso desapareció, mente descrita en la literatura de otras plantas del
confirmando que no se trata de cumarinas sino de género Strychnos, por lo que puede tratarse de un
otros compuestos poliinsaturados que pueden fluo- grupo poco difundido en estas especies y presen-
rescer también al uv. te en estos órganos (raíces). Además, cabe aclarar
que la presencia de un tipo de metabolito en una
Por otro lado, si bien los compuestos fluorescentes planta no condiciona su presencia en otras especies
presentes en semillas y hojas de S. schultesiana no del mismo género.
se colorearon tras revelar la placa con la reacción
del hidroxamato férrico, los extractos de tallos y Grupos de metabolitos secundarios como los gli-
semillas presentaron manchas de color café que no cósidos antracénicos, los cardiotónicos, saponinas
fluorescían al uv, lo que indica la presencia de lac- y taninos, los cuales no fueron detectados en el
tonas. Sin embargo, al revelar con el reactivo de presente estudio o sólo fueron detectados en uno
vainillina, sólo las lactonas presentes en el extrac- de los órganos evaluados, no se encuentran repor-
to de semillas poseen una parte terpénica que se tados en la literatura consultada para otras especies
observa de color violeta, mientras que la mancha del género Strychnos.