Laura del Olmo

Tema 9. RECEPTORES DE MEMBRANA

TIPOS DE RECEPTORES HORMONALES Y VAS DE TRANSDUCCIN DE SEALES

CARACTERSTICAS GENERALES DE LOS DISTINTOS TIPOS DE RECEPTORES DE MEMBRANA MS IMPORTANTES 1. Receptores acoplados a canales de iones 2. Receptores acoplados a Protenas G 3. Receptores acoplados a Enzimas 4. Receptores de Citoquinas

1. RECEPTORES ACOPLADOS A CANALES DE IONES

Respuesta: muy rpida (mili segundos) Ligandos: molculas orgnicas pequeas. Los ms importantes son los NEUROTRANSMISORES Unin (afinidad): de baja afinidad, con una KD (concentracin a la cual se produce la mitad de la unin de receptores con sus ligandos) que est en el rango micro-milimolar. Si tiene baja afinidad significa que se necesitan concentraciones altas para alcanzar la respuesta Cuando el receptor se une con su ligando se produce un cambio de conformacin que se traduce en la apertura de un canal que permite la entrada de iones, lo que produce finalmente un cambio en el potencial de membrana Transmisin de la seal: mediante la regulacin de otros canales, es decir, modulan canales dependientes de voltaje (Ca2+). Abren otros canales por ese cambio en el potencial de membrana

Laura del Olmo Tipos ms importantes de receptores acoplados a canales de iones. Se pueden dividir en 2 grupos: (1) Aquellos que permiten el paso de CATIONES (+) producen una respuesta excitatoria. Acetilcolina Glutamato Serotonina ATP

(2) Aquellos que permiten el paso de ANIONES (-) generan respuestas inhibidoras de la seal. GABA (cido Gamma-AminoButrico) Glicina

Ejemplo para explicar el funcionamiento del canal: Receptor Nicotnico de acetilcolina (se llama nicotnico porque tambin se le puede unir nicotina)

Son receptores formados por varias subunidades proteicas (este en concreto tiene 5) que se disponen de forma concntrica. 2

Laura del Olmo Cada una de las subunidades (protenas independiente) est formada a su vez por protenas que tienen varios dominios transmembrana (trozos de la protena que estn atravesando completamente la membrana). *Los cilindros representan alfa-hlices. Va haber uno de los dominios que siempre estar orientado hacia el interior y hacia el centro. En el caso de este receptor la subunidad II es la que est orientada hacia el interiorcentro y posee residuos de leucina (aa hidrfobo). La presencia de las leucinas en la alfa-hlice del dominio de ese receptor hace que el canal pueda estar cerrado para que no pasen los iones.

Cuando el ligando se une al receptor (en este caso la acetilcolina) genera un pequeo cambio de conformacin que produce un mnimo cambio en las alfa-hlices, de manera que la leucina deja de estar orientada hacia el interior, disponindose ahora hacia la parte interna del propio canal (parte proteica del canal) y permitiendo que el canal est abierto. Los canales que permiten el paso de cationes/aniones suelen tener aminocidos cargados que evitan el paso de cationes/aniones que no debieran de pasar. Mutaciones puntuales en la estructura de la protena (por ejemplo cambios en las leucinas) producirn alteraciones tales como que el canal est permanentemente abierto. Como ya hemos dicho, las respuestas de este tipo de receptores acoplados a canales inicos son muy rpidas, de milisegundos, lo que significa que segn se abre el canal pasa el in y rpidamente se bloquea la respuesta. 3

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Formas a travs de las cuales se para la respuesta/seal:

I. Disociacin del neurotransmisor, de manera que el canal se vuelve a cerrar. II. Cierra del canal a pesar de estar unido todava el ligando y el ligando se liberar en un tercer paso. Suele ser la forma ms rpida.

2. RECEPTORES ACOPLADOS A PROTENAS G

Prcticamente todas las clulas del organismo tiene algn tipo de estos receptores y son diana de numerosos frmacos, como los antagonistasadrenrgicos (empleados para problemas cardacos).

Respuesta: algo ms lenta que en los receptores acoplados a canales Ligandos: gran variedad (distintos tamaos) y ejercen funciones o procesos de sealizacin muy distintos Accin: autocrina, paracrina, endocrina o sinptica (neurotransmisores) Procesos: regulan los sentidos (olor, vista, sabor), estn implicados en la contraccin cardaca y en procesos metablicos (regulacin de la liplisis) Unin (afinidad): media, con una KD que se encuentra en el rango nanomicromolar, es decir, con concentraciones mucho ms pequeas el receptor produce la respuesta 4

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Funcionamiento (estructura):
La protena G es una protena integral transmembrana con varios dominios. Se encuentra en el interior y es inactiva cuando tiene unido GDP. Las protenas G tienen varias subunidades: SubU alfa: contiene el sitio de unin al nucletido de guanina (GDP/GTP) SubU beta y gamma: participan en la activacin y regulacin de la protena G

Cuando el ligando se une al receptor se produce un pequeo cambio de conformacin que se transmite a la parte interna del receptor, que tambin va a favorecer un cambio de conformacin en la protena G; entonces saldr el GDP y ya podr entrar el GTP en el sitio de unin que queda libre. Al unirse el GTP a la protena G sta queda activa, generndose un cambio de conformacin: se separa la subunidad alfa de las subunidades beta y gamma (liberacin de las subunidades reguladoras). La subunidad alfa se va a desplazar y se va a unir a la molcula efectora de la sealizacin, que est cerca de la membrana, activndola. La molcula efectora puede ser, en el caso de las protenas G: Un canal Una enzima

Una vez activado el efector la sealizacin ha de bloquearse. El GTP se hidroliza a GDP + Pi, quedando de nuevo el GDP en el sitio de unin de la protena G (estado inactivo). Esta reaccin es catalizada por una actividad GTPasa que contiene la propia protena G. La subunidad alfa ya puede volverse a unir con las subunidades reguladoras (beta y gamma) regresando a su conformacin inicial. Esto se denomina el CICLO DE LAS PROTENAS G y requiere un gasto de energa.

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EFECTOS DE TOXINAS BACTERIANAS sobre estas vas de sealizacin: bloquean que se puedan reunificar la subunidad alfa con las subunidades reguladoras beta y gamma
Hay determinadas toxinas, como la botulnica o la del clera, que lo que hacen es que inhiben la actividad GTPasa de las protenas G, impidiendo su reunificacin con las subunidades reguladoras ( y ), quedando la va de sealizacin permanentemente activada. Como algunas de estas protenas G estn implicadas en la regulacin de la contraccin muscular del corazn, producen alteraciones en los ritmos cardacos pudiendo llegar a provocar un paro cardaco, ya que dejan el sistema permanentemente activado. En el clera la gastroenteritis que se produce se debe a la hiperactividad de uno de los canales inicos que hace que se eliminen grandes cantidades de agua por el intersticio.

Distintos efectores para las protenas G clasificados en 5 grupos:

1. Gs: activan a la AC >> AMPC

Tienen como efector a la adenilato ciclasa (AC) a la cual estimulan y por tanto aumentan el AMPC. Ejemplos de hormonas que actan por esta va son: glucagn, aminas--adrenrgicas (adrenalina) 6

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2. Gi: inhiben a la AC << AMPC

Tambin actan sobre la adenilato ciclasa pero disminuyendo su actividad y por tanto disminuyen los niveles intracelulares de AMPC. Los ligandos de estas protenas G son: acetilcolina, neurotransmisores

3. Gq: activan a la fosfolipasa C >> segundos mensajeros

La sealizacin se lleva a cabo mediante la fosfolipasa C (actan sobre la PLC), la cual produce un aumento intracelular de los segundos mensajeros como el inositol trifosfato o el calcio.

4. Gt: activan a la fosfodiesterasa de GMPC

Se activan por la accin de la luz sobre la protena G y actan activando la fosfodiesterasa de GMPC. Estas protenas participan en el proceso de la visin.

5. G1,3: abren canales catinicos (Na+ y H+)

Son las menos abundantes y su funcin es abrir canales catinicos, es decir, que permitan el intercambio de cationes (Na+ y H+).

Las vas ms importante de sealizacin son las de las protenas Gs y Gi, las que actan activando/inhibiendo a la adenilato ciclasa respectivamente. Cuando el ligando se une al receptor que tenga estas protenas G, stas se activan y se unen a la adenilato ciclasa alterando su actividad. 7

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ADENILATO CICLASA - AMPC

Como ya hemos dicho, las vas ms importantes de sealizacin a travs de los receptores acoplados a protenas G son las que actan sobre la adenilato ciclasa, y stas son las protenas G que tienen las subunidades s y i. Cuando el ligando se acopla a una protena G s sale GDP, entra GTP y la protena que activa se une a la adenilato ciclasa, enzima que cuando est activa cataliza la formacin de AMPC a partir de ATP.

PROTENA KINASA A (PKA)

El AMPC se va a unir a la PKA, que es una quinasa muy importante en la regulacin del metabolismo. La PKA es un tetrmero con 4 subunidades: 2 Reguladoras y 2 Catalticas (con la actividad enzimtica). El AMPC se une a las subunidades reguladoras y al hacerlo se produce la separacin de las subunidades reguladoras de las subunidades catalticas. Las subunidades catalticas libres (2C) activan la funcin de la PKA (actividad: unin de AMPC y separacin de las subunidades). La PKA tiene numerosas dianas a las que va a fosforilar. Un grupo importante de estas dianas son enzimas que cuando se fosforilan se activan, por ejemplo la lipasa sensible a hormonas (cuando se fosforila se activa y cataliza la sntesis de TAG). Adems, cuando est activada es capaz de traslocar al ncleo y en el ncleo va a fosforilar factores de transcripcin.

Laura del Olmo Uno de los factores de transcripcin que se regula por la accin de la PKA es CREB: factor de transcripcin de respuesta a AMPC. Cuando se fosforila por la PKA se dimeriza y en la forma dimrica se une al DNA y modula la transcripcin de distintos genes. Es decir, se une a ciertas secuencias de DNA o elementos de respuesta a AMPC mediante los cuales incrementa o reduce la transcripcin regulada por estos genes.

3. RECEPTORES ACOPLADOS A ENZIMAS

Hay un gran nmero de receptores que son enzimas, es decir, el propio receptor cuando se activa presenta actividad cataltica. Los grupos ms importantes son los que presentan las siguientes actividades: *Actividad QUINASA*: mayoritariamente *tirosina*; tambin serina/treonina Actividad FOSFATASA Actividad PROTEASA Actividad FOSFODIESTERASA DE NUCLETIDOS (como guanilato) Los ms importantes y mayoritarios son: I. II. Receptores con actividad tirosina-quinasa Receptores con actividad guanilato-ciclasa

Caractersticas generales:
Efectos: mucho ms lentos, largos. El tiempo de duracin depende mucho del receptor y puede oscilar entre minutos y horas. Por ejemplo: si se activa la enzima tardar minutos; en cambio, si se activa la transcripcin tardar horas Procesos que regulan: estn implicados en la activacin/inhibicin de la expresin gnica, en la divisin celular, en la diferenciacin celular y tambin en los procesos de apoptosis Algunos tienen efectos muy importantes en la regulacin del metabolismo, como el RECEPTOR DE INSULINA, que pertenece a este grupo. Ligandos: protenas Unin (afinidad): alta, con una KD que suele oscilar en el rango picomolar (es decir, con concentraciones de 10-12 ya se estn produciendo efectos) 9

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I.

RECEPTORES CON ACTIVIDAD TIROSINA-QUINASA (RTK)

Es uno de los ms importantes. Este tipo de receptores los presentan los factores de crecimiento (molculas que inducen la divisin celular) as como el receptor de insulina. Los receptores suelen ser monmeros que atraviesan la membrana en la porcin extracelular donde tienen la zona de unin al ligando; la porcin intracelular es la que posee la actividad cataltica tirosina-quinasa. El receptor de insulina es una excepcin porque ya se encuentra en las clulas en forma de dmero y el mero hecho de que se una la insulina (ligando) activa al receptor y hace que se fosforile. Para que el receptor se active es necesario que se unan dos molculas del ligando y estas subunidades se aproximen (cross linking").

- Autofosforilacin del receptor: activacin

Una vez que se ha producido la aproximacin de dos receptores la actividad quinasa ya es activa y la primera diana va a ser el propio receptor, es decir, va a ser fosforilado en tirosina.

- Fosforilacin de otras protenas

La autofosforilacin del receptor incrementa su actividad cataltica y adems a los residuos de fosfotirosinas se podrn unir diferentes protenas adaptadoras que los reconocen. Al unirse a ellas, como el receptor est plenamente activado, estas mismas protenas adaptadoras se van a fosforilar.

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Laura del Olmo Una vez que se ha producido la activacin a travs de la autofosforilacin del receptor, las otras protenas nos pueden dar 2 vas distintas de sealizacin:

i.

VA DE LA PI3K (Fosfatidil-Inositol-3-Kinasa) & PKB (Akt)

En el caso concreto del receptor de insulina est implicado en los efectos metablicos de la hormona. Por ejemplo, regula el transporte de glucosa mediante la translocacin de los trasportadores GLUT-4 del interior a la membrana plasmtica (en musculo esqueltico o tejido adiposo preferentemente), activa la gluclisis, inhibe la liplisis Todas estas vas que regula la insulina lo har a travs de esta va de sealizacin de la PI3K. El receptor se autofosforila para activarse y luego se unen protenas adaptadoras que permitirn la unin de PI3K y que sea fosforilada por el receptor, lo que le va permitir actuar sobre su sustrato, los cuales son fosfolpidos de membrana, en particular el PI4,5-bisfosfato. Cuando acta la PI3K lo fosforila dando lugar al PI-3,4,5-trifosfato. La presencia de este PI-3,4,5-trifosfato permite que protenas que tienen dominios PH (dominios de unin a fosfolpidos) se puedan aproximar y unir a la membrana plasmtica.

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Laura del Olmo PROTENAS CON DOMINIOS PH: (1) PKD y (2) PKB Dos de las protenas que presentan estos dominios PH y que se unen al PI-3,4,5trifosfato en la membrana plasmtica son 2 quinasas: PKD y la PKB. La unin de la PKD a los inositoles de membrana la activa, y al activarse va a fosforilar a la PKB (como se han unido a la membrana van a estar fsicamente al lado). Cuando la PKB (tambin llamada AKT) se fosforila por un lado se activa y por otro se disocia de la membrana y se trasloca al interior de la clula, donde va a fosforilar a sus dianas.

ii.

VA DE LAS MAPK (Protena Activada por Mitgenos; factores que inducen la mitosis): RTK ras GTPasa

Es una va muy importante porque es la va que regula la mayor parte de los procesos de mitosis y divisin celular. Los factores de crecimiento sealizan a travs de esta va para inducir que la clula se divida. Estas vas de sealizacin en los tumores estn permanentemente activas, por lo que son rutas que tienen un inters muy alto sobre todo en el estudio molecular del cncer.

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PROTENA RAS (protena G): ACTIVACIN DE LA VA DE LAS MAPK

Una vez que el receptor se ha autofosforilado se une una protena adaptadora, que en esta va es una protena que finalmente va a permitir la activacin de una protena G, la protena RAS, la cual se activa cuando se activan estos receptores. La protena RAS se activa como todas las protenas G (con GTP) y cuando est activa induce la activacin de la va de las MAPK.
*Oncogn: gen que cuando muta induce un proceso tumoral. La protena RAS est fisiolgicamente en nuestro organismo y participa en procesos de divisin celular fisiolgicos. Cuando muta se vuelve permanentemente activa.

VA DE LAS MAPK PROPIAMENTE DICHA

Las MAPK son quinasas que finalmente inducen procesos de divisin celular y que se activan por mitgenos (factores que actan en el ciclo celular estimulando la divisin celular; factores de crecimiento). Hay distintos tipos de MAPK y se conocieron asociadas a procesos tumorales en los que se vea que su actividad era muy alta. 13

Laura del Olmo Tienen distintas dianas y la mayora activan factores de transcripcin y por tanto modulan la expresin gnica. Tambin fosforilan protenas produciendo la activacin de enzimas, cambios en la permeabilidad de las membranas... Las MAPK para ser activas tienen que ser fosforiladas por las MAPKK, las cuales tambin tienen que estar fosforiladas para ser activas por las MAPKKK. En muchas de las rutas la MAPKKK se activa por la protena G. MEK (MAPK) y Raf (MAPKK) son algunos de los nombres de las protenas que pertenecen a este grupo. Como se trata de fosforilaciones, en cada uno de estos pasos necesitamos ATP, lo que conlleva un gasto energtico muy grande (cuando una hormona se une a un receptor).

En un proceso tumoral se estar gastando mucho ATP ya que en los tumores estas vas de las MAPK estarn permanentemente activas.

II.

RECEPTORES CON ACTIVIDAD GUANILATO CICLASA: GMPC

Este tipo de receptores atraviesa la membrana y tambin consta de 2 dominios: (1) Dominio extracelular sitio de unin al ligando (2) Dominio intracelular donde se localiza la enzima El receptor se tiene que unir al ligando para que se produzca un acercamiento entre dos receptores, se dimericen y as se active la enzima.

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Laura del Olmo La enzima GUANILATO-CICLASA cataliza la transformacin de GTP GMPC, el cual es un segundo mensajero que a su vez (de forma parecida al AMPC) activa a una quinasa, la PKG. Al igual que ocurra con el AMPC, tambin hay una enzima, la fosfodiesterasa, que elimina el GMPC transformndolo en 5-GMP, con lo que la va se parar. *La viagra inhibe la fosfodiesterasa, por lo que aumenta el GMPC pudiendo llegar a producirse un paro cardaco por la activacin permanente de la va. En resumen: I. II. III. IV. Activacin: acercamiento y dimerizacin de los receptores Guanilato-ciclasa: GTP GMPC GMPC: activacin de la PKG PKG: actuacin sobre distintas dianas (canales, enzimas, algn factor de transcripcin) Fosfodiesterasa (eliminacin del GMPC): GMPC 5-GMP

V.

FACTOR NATRIURTICO ATRIAL (ANF): vasodilatador secretado en respuesta a un aumento de TA regulacin de la TA

Un ejemplo de estos receptores acoplados a la guanilato-ciclasa es el FACTOR NATRIURTICO ATRIAL, que es una protena que producen los cardiomiocitos (miocitos del msculo cardaco) en respuesta a un aumento de la tensin arterial. Lo que ocurre es que aumenta el GMPC, que a travs de su sealizacin por PKG, en el caso del msculo liso de los vasos donde hay estos receptores, produce la vasodilatacin. Adems acta con el fin de reducir el agua y el sodio del sistema circulatorio para reducir as la presin arterial, por lo que en las nefronas se une a canales de sodio regulando la eliminacin de Na+ a nivel renal. Efectos del ANF:

o Musculatura lisa de los vasos vasodilatacin (disminucin de la TA) o Tbulos renales eliminacin de Na+
Una vez que se ha regulado la TA la fosfodiesterasa ha de eliminar el FNA. 15

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FOSFOLIPASA C: hidrlisis del IP2 en (1) DAG y (2) IP3

Adems de estas vas existe posibilidad de interacciones con los receptores enzimticos y los receptores acoplados a protenas Gq (de convergencia) que se producen a travs de la enzima fosfolipasa C, la cual se puede activar por ambos receptores. La fosfolipasa C hidroliza los fosfatidil inositol bifosfato, es decir, acta sobre fosfolpidos de membrana llevando a cabo la hidrlisis del PIbisfosfato en 2 productos: (1) el diacilglicerol (DAG) y (2) el inositol trifosfato (IP3), y cada una de estas dos molculas son segundos mensajeros. 1. Diacilglicerol (DAG). Va a permanecer anclado a la membrana por su hidrofobicidad. 2. Inositol trifosfato (IP3). Va a difundir al interior del citoplasma. Va actuar como ligando de un canal de calcio que se localiza en la membrana del RE. En el momento en el que se abre el canal sale el Ca++ del interior del RE al citoplasma (aumento brusco del calcio citoplasmtico). El Ca2+ acta como una seal qumica y tambin como un segundo mensajero ya que acta como activador de distintas protenas quinasas que se activan por la unin de calcio: PKC PK dependiente de Ca2+/calmodulina Efectos ms importantes mediados por el calcio: contraccin muscular o movimientos intracelulares con secrecin de vesculas

4. RECEPTORES DE CITOQUINAS
*Citocinas o citoquinas: protenas que regulan la funcin de las clulas que las producen u otros tipos celulares.

Los receptores de citocinas tienen vas de sealizacin menos conocidas porque stas se conocen desde hace poco tiempo. Las citocinas son pptidos pequeos que pueden ser producidos por cualquier tipo celular, y dentro de todos esos grupos celulares, las que las producen en mayores cantidades son las clulas sanguneas. 16

Laura del Olmo Dentro del grupo de las citosinas encontramos: Interleuquinas (IL): regulan los procesos de diferenciacin de los leucocitos Interferones Factor de necrosis tumoral (TNF) Leptina

VA JAK/STAT
En general sus receptores presentan una va de sealizacin que se denomina VA JAK/STAT. Los receptores no son enzimas pero tras la unin de su ligando (citocina) van a activar a una enzima quinasa, la JAK (Janus Kinase). La JAK se autofosforila y fosforila al receptor, es decir, el receptor se fosforila por accin de la JAK. El hecho de fosforilar al receptor permite que aparezcan en l dominios de reconocimiento de fosfotirosinas y en uno de esos dominios se va a unir otra protena, la STAT (Seal Activadora y Transductora de la Transcripcin), que es un factor de transcripcin.

En resumen: I. II. III. Fosforilacin Separacin del receptor Dimerizacin. Para ello tiene que estar fosforilado. El dmero transloca al ncleo y all se abre a regiones especficas del DNA modulando la transcripcin.

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