Breve resumen:

1) Cromatografa: se denomina cromatografa porque el primer experimento se trat de separar los diferentes tipos de clorofilas, quien descubri la cromatografa quera saber porque las plantas tenan este color verde, por qu las flores eran rojas, etc., entonces en el proceso de aislar estos colores se obtuvo esta tcnica que permite la separacin de varios componentes que se encuentran en una mezcla, mezcla de slidos (que deben ser solubilizados en algo), mezclas de slidos con lquidos, mezclas de lquidos, etc. En este proceso, se encontr que el color verde en realidad se daba por una mezcla de varios componentes que fueron separados y cada uno tena un color diferente a. Tipos de cromatografas: existe una gran variedad, pero la ms comn es la cromatografa en capa fina (CCF) o Thin Layer Chromatography (TLC); esto se trata de una base, una especie de fase de soporte, algo o alguna sustancia en la cual se pueda poner otra y la deje fija, una fase estacionaria, sin moverse; y una fase mvil que vaya arrastrando los diferentes compuestos de la mezcla y los vaya dejando sobre la fase estacionaria que est fija gracias a la fase de soporte:
0.97

Tenemos una muestra 1, esta muestra ha recorrido una cierta distancia (desde la parte baja hacia arriba) en este proceso se han separado dos componentes, el componente a (0.20) ha sido mayormente retenido en la 0.20 fase estacionaria por esto tiene menor distancia de recorrido y menor Rf (0.20); el componente b (Rf= 0.97) ha 1 recorrido mayor distancia y es menos retenido, menor afinidad con la fase estacionaria; EL Rf ES LA RELACIN ENTRE LA DISTANCIA RECORRIDA POR LA MUESTRA CON RESPECTO A LO RECORRIDO POR LA FASE MOVIL

; donde cada distancia se Rf = distancia muestra (cm) distancia fase movil (cm)

determina desde el punto donde se coloc (donde se hizo la siembra) la muestra (en este ejemplo desde la lnea negra de abajo -por encima del 1) hasta cada mancha, para las muestras o componentes; y la distancia de la fase mvil se la mide desde la misma lnea negra (en este caso) hasta la lnea punteada (en la parte superior), ahora, siempre se acostumbra que la fase mvil el solvente por comodidad de clculo, recorra una distancia de 10 cm. Las distancias desde el punto de referencia hasta las manchas siempre, siempre sern menores a la distancia recorrida por el solvente, por ende, los valores de Rf siempre sern menores a 1. En esta figura, la fase de soporte y la fase estacionaria estn representadas por el rectngulo grande, y la fase mvil (solvente de arrastre) recorre a lo largo de este rectngulo arrastrando los diferentes componentes; a esto se le conoce como elucin, imaginemos una hoja de cuaderno o de un libro, cuando se mojan, la tinta se esparce por el papel manchndolo; el papel es la fase de soporte y a su vez la fase estacionaria, el agua es la fase mvil y la tinta la muestra. De acuerdo a la composicin de la fase estacionaria, sta tendr una mayor o menor afinidad por los componentes de la muestra, es decir, tendr una tendencia a retener a un componente ms que a otro e incluso un tercer componente ser repelido, expulsado por esta fase estacionaria, si es repelido, tardar menos tiempo en atravesar la fase estacionaria, si es ms retenido tardar ms tiempo, en el primer caso le dice que fue que no te vas y en el otro caso qudate vos eres chvere, es como una fiesta (la fase de soporte) los aniados pelucones llegan (muestras problema) y todos los saludan, los periodistas les retienen (fases estacionarias) con preguntas, las fotos, etc., llegan los que no caen bien a nadie o nadie les quiere o simplemente no son parte de los pelucones (otras muestras menos retenidas) y les hacen pasar pero para que salgan rpido sin hacerse notar; la noche avanza, unos ya como que quieren irse, otros ya se fueron y la fiesta se acaba cuando el DJ y la msica (fase mvil) - con msica todo fluye dicen este ltimo set y se acaba ser en otra oportunidad y ponen el set ochentero que significa hasta luego ya nos vemos, entonces mientras suenan las ltimas canciones todos se han ido y los Dj y dueos del sitio son los ltimos en irse (fase mvil es la que ms distancia recorre siempre). Eso es

cromatografa. La del papel y la tinta es ms simple pero esto dio chiste :-D

Entonces, cromatografas hay un montn, la ms sencilla es la cromatografa de columna, luego viene la de capa fina, por cierto, se denomina en capa fina porque se utilizan fases de soporte en placas de vidrio o en lminas muy delgadas de aluminio, la fase estacionaria suele ser SILICAGEL (compuesto de polisilano, imagina un compuesto de cadena carbonada, es decir, varios carbonos unidos uno despus de otro, como una cadena, pero en lugar de carbono ponle Silicio y sella los extremos con carbonos.) y esta fase estacionaria tiene un espesor no mayor a 1 mm. Pues bien, la fase mvil es la que arrastra los diferentes componentes, esta fase mvil debe tener las caractersticas adecuadas para que disuelva los componentes de las muestras y las lleve a travs de la fase estacionaria, pero no debe daar o reaccionar con la muestra y tampoco debe disolver la fase estacionaria.

LA ELECTROFORESIS, ELECTROFORESIS CAPILAR, CROMATOGRAFA POR ELECTROFORESIS, aplica estos mismos principios de cromatografa pero con la diferencia de que aparte de las fases de soporte, estacionarias (ya no son slidos como la silicagel sino que son geles, son blandos semislidos) y mviles, tambin pueden llegar a aplicarse pequeas cargas elctricas, milivoltios o menos con amperaje de microamperios o menos, porque las protenas son cadenas polipeptdicas que a su vez son la unin de aminocidos, los aminocidos son molculas en cuya estructura siempre se encuentran grupos carboxlicos COO- y grupos amino NH2; estos grupos provocan que dichos compuestos tengan una cierta carga elctrica y, ya que cada cadena tiene diferente composicin de aminocidos no solo habr diferente carga elctrica sino diferente peso molecular para cada protena, las cargas elctricas aplicadas y las de las protenas pueden ser una carga neta positiva o carga neta negativa, al aplicar cargas elctricas, las mismas que deben ser bien conducidas por los geles, lo positivo atrae lo negativo y lo negativo atrae lo positivo. El tamao de la cadena tambin influye en la carga elctrica neta de cada polipptido. Por esto, en los grficos del archivo de determinacin de tinina en carne posmortem hay unos grficos que en eje Y digmoslo as, estn los nombres de las

diferentes sustancias encontradas y los respectivos estndares, en el eje X en cambio estn datos expresados en Da (Daltons, que es la unidad para expresar el peso molecular de una protena, ya que puede llegar a contener tantos carbonos y nitrgenos y otros tomos que expresar ese peso en g/mol seran nmeros muy grandes, an as Da son nmeros grandes).

En fin, el mtodo de Lowry, que es un mtodo espectrofotomtrico (o colorimtrico, se le dice colorimtrico porque se mide colores, espectrofotomtrico mide colores pero hay diferencias en el equipo instrumental, un espectrofotmetro UV/VIS a utilizar con respecto al colormetro que es ms sencillo y barato), permite un anlisis de protenas rpido y relativamente barato, pero es poco selectivo, aunque al parecer tiene una buena sensibilidad pero no es selectivo, es decir, cuantifica protenas totales pero no diferencia que distintas protenas hay en esa muestra, en cambio la cromatografa de electroforesis es un mtodo analtico sensible, selectivo, pero ms caro, complicado.

Yo no he hecho electroforesis, no hay el equipo

Entonces toca ver, segn lo que quieras hacer, cul mtodo conviene o si de plano se debe hacer ambos.

Y segn eso, hay que ver las tcnicas dadas en los archivos, ver como se les acomoda, si se quitan cosas innecesarias o se obvian pasos o, si es el caso, hacerlas tal cual estn ah.