BIOSENSORES PTICOS

Ana Gonzlez Segura Qu entendemos por biosensor? Un biosensor, como su nombre indica, es simplemente un dispositivo electrnico que se encarga de detectar sustancias biolgicas en una determinada muestra, o, de forma algo ms rigurosa, podra definirse como una herramienta o sistema analtico compuesto por un material biolgico inmovilizado (tal como una enzima, anticuerpo, clula entera, orgnulo o combinaciones de los mismos), en ntimo contacto con un sistema transductor adecuado que convierta la seal bioqumica en una seal elctrica cuantificable (fig. 1).

Fig. 1. Esquema de Biosensor.

Quiz, el biosensor ms conocido y difundido comercialmente sea el utilizado por los diabticos para medir la concentracin de glucosa en sangre. Su funcionamiento se basa en el anclaje sobre un electrodo de una enzima seca (en estado hidrofilizado) que, al entrar en contacto con la sangre, se regenera, originndose as una reaccin qumica que lleva asociado un movimiento de electrones. El electrodo es capaz de registrar dicho cambio y traducirlo en la informacin que aparecer en la pantalla del medidor de forma casi inmediata. Sin embargo, la cantidad y tipos de biosensores que actualmente estn en uso o en periodo de investigacin es mucho ms amplia, ya que dentro de los mismos podemos incluir desde sensores de hidrgeno hasta sensores de ADN, pasando por dispositivos detectores de colesterol en sangre o de virus tales como el SIDA. Todos ellos poseen una caracterstica comn: para poder detectar una determinada sustancia, a la que denominaremos analito (por ejemplo, un antgeno), es necesario anclar a nuestro sensor otra que acte como receptora (su correspondiente anticuerpo). Otras aplicaciones de este tipo de tecnologa son las usadas en alimentacin para el anlisis de alimentos susceptibles de contener sustancias nocivas tales como la bacteria de la salmonella, por ejemplo. Tambin hay muchos grupos de investigacin trabajando en la creacin de biosensores para la deteccin rpida de agentes contaminantes en caso de guerra qumica y bacteriolgica. En realidad, el uso de biosensores puede extenderse a una infinidad de campos, ya que, como veremos, si se tiene el receptor biolgico adecuado, esta tecnologa es susceptible de detectar prcticamente cualquier sustancia. 20
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Biosensores pticos Algunas de las propiedades que posee la luz, ya sea la de ser guiada a travs de ciertas estructuras o la de sufrir fenmenos de resonancia, pueden ser aprovechadas para implementar un biosensor, que en este caso recibe el nombre de biosensor ptico. Su funcionamiento es esencialmente el mismo que el sensor de glucosa, slo que ahora es la luz la que se encarga de proporcionarnos la informacin. Los pasos a seguir para desarrollar uno de estos dispositivos de forma completa seran, primero, decidir que efecto ptico queremos que est involucrado en el funcionamiento del sensor; segundo, conocer cmo inmovilizar el receptor biolgico en la superficie del sensor y cmo hacer que ste sobreviva y, por ltimo, proponer un sistema de adquisicin y tratamiento de datos (hardware y software) apropiado. Veamos con ms detalle los dos primeros. Los efectos pticos que actualmente se proponen para el desarrollo de un biosensor son tres: la fluorescencia, las configuraciones de campo evanescente y la absorcin. La fluorescencia consiste en la emisin de luz por parte de los tomos cuando, tras un proceso previo de excitacin, stos vuelven al estado fundamental. En nuestro caso, cada analito genera unos parmetros caractersticos de excitacin-emisin, con lo que es posible determinarlo unvocamente. El segundo efecto tiene que ver con sensores que utilizan guas de onda. En una gua de ondas, la luz se transmite en condiciones de reflexin total interna. Sin embargo, el campo electromagntico no queda estrictamente confinado en el interior de la misma, sino que parte de l escapa al exterior presentando un decaimiento exponencial. Es el campo evanescente, que ser el encargado de detectar la sustancia de inters, ya que cualquier cambio que se produzca en l influir en las caractersticas de la luz que se propaga por el interior de la gua. Tambin puede ocurrir que la interaccin analito-receptor lleve asociado un fenmeno de absorcin. De este modo, cuando ambas sustancias reaccionen, la cantidad de luz que llega al detector se ver afectada. Cuando pretendamos anclar el receptor sobre nuestro sensor, hay que tener en cuenta que la inmovilizacin se realiza a escala nanomtrica y sobre soportes slidos. La tcnica ms usada es recubrir la superficie de la gua con algn metal, de forma que sta se consiga mediante enlaces covalentes (fig. 2). Sin embargo, tambin existen muchas otras tcnicas como por ejemplo, el atrapamiento fsico del receptor sobre una membrana o un polmero, o bien la adsorcin directa sobre el sensor. Por otro lado, para que el receptor sobreviva, ste debe estar en disolucin acuosa, con lo que es necesario disponer de celdas de flujo que contengan la parte adecuada del sensor y que permitan que dicha disolucin se regenere.
Analito Sustancia receptora En lace Cova lente

Capa de oro Gu ia

Fig. 2. Metodo de anclaje por en lace covalente

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El mtodo de anclaje por enlace covalente puede conseguirse depositando una pelcula de oro sobre la superficie del sensor y consiste, a grandes rasgos, en provocar modificaciones qumicas en la superficie de este metal que den lugar a un enlace covalente entre los tomos de su superficie y una parte especfica de la sustancia receptora (deben quedar libres las partes que reaccionarn con el analito). Para conseguir el anclaje ptimo, se conectan a la placa de oro unas microcubetas con distintas disoluciones que se hacen pasar en un determinado orden (segn sea su pH o concentracin). Todos los pasos se monitorizan para comprobar que se estn produciendo las reacciones qumicas buscadas, y una vez que se comprueba que la protena est bien anclada, se conecta a un sistema de flujo automatizado que la mantiene constantemente en contacto con una solucin salina. Una de las partes ms delicadas en cuanto a la construccin de un biosensor es la de mantener vivo el receptor, que no se degrade y que permanezca estable. Esto se subsana mantenindola en disolucin constante con un pH y una temperatura adecuados. Biosensores basados en dispositivos de ptica integrada Los biosensores basados en dispositivos de ptica integrada estn adquiriendo una gran importancia hoy en da debido a su alta sensibilidad, estabilidad mecnica, posibilidad de miniaturizacin e integracin en microsistemas y fabricacin a gran escala. Este tipo de biosensores se basa en el principio de modulacin del campo evanescente que ya se defini anteriormente. Antes de pasar a explicar su funcionamiento, merece la pena comentar que la ptica integrada es una tecnologa capaz de construir a escala micromtrica cualquier dispositivo ptico (como puede ser una gua de ondas o un espejo), de forma que un microchip pueda contener un sistema ptico completo. Debido a su alta sensibilidad, una de las configuraciones que se est estudiando es la basada en un interfermetro Mach-Zender (fig.3). Un Mach-Zender es un dispositivo en el que un haz de luz se divide en dos subhaces que luego se vuelven a unir. Si por algn motivo, en alguno de los dos caminos aparece algn fenmeno que genere un retardo de fase, cuando los haces vuelvan a juntarse, obtendremos un patrn de interferencia que puede traducirse en un cambio en la intensidad del haz original.

Camino 1 Haz original Haz final

Camino 2 Fig. 3: Interfero met ro Mach-Zender.

Los biosensores basados en interfermetros de esta clase se construyen haciendo crecer con Silicio una gua de ondas con la estructura del Mach-Zender sobre un cierto sustrato y anclando en uno de los brazos la sustancia receptora (fig. 4). Cuando, tras hacer pasar luz por el interior de la gua, tiene lugar una reaccin de reconocimiento molecular en la rama sensora del interfermetro se produce un cambio de fase entre las 22
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dos ramas, que se detecta como un cambio en el patrn de interferencia. La intensidad de este patrn depender, entre otras cosas, del incremento de masa en la rama de medida y ser funcin de la concentracin del analito en el medio. Obtenemos, as, un sensor directo y rpido para determinar cualquier sustancia de la que se disponga su molcula complementaria.
Sustrato Gu ia Zona sensora

Zona sensora

Gu ia Sustrato

Fig. 4. Vista superior y lateral del biosensor interfero metrico.

Conclusiones Las tcnicas de anlisis de laboratorio ms habituales, ya sean de contaminantes qumicos o sustancias biolgicas, son generalmente tediosas e indirectas. Contar con dispositivos de alta sensibilidad, porttiles y de medicin directa supondra un ahorro de tiempo y costes. Combinando componentes pticos y microelectrnicos con materiales biolgicos, es posible desarrollar biosensores basados en la tecnologas como la del silicio. En ellos la vida y la microelectrnica se alan para servir de base a unos dispositivos con mltiples aplicaciones, ya que cambiando la parte biolgica pueden medir desde contaminantes ambientales hasta variaciones genticas o contaminaciones en alimentos. Anlisis directos e inmediatos sobre pequeas muestras son las principales ventajas que ofrecen los ltimos biosensores desarrollados. De este modo, estamos ante un dispositivo muy potente que permite la deteccin de manera selectiva, directa (sin marcadores) y rpida (de segundos a minutos).

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