AUTOMATIZACIN EN QUMICA ANALTICA 1. Introduccin. 2. Definiciones y conceptos 3. Objetivos de la automatizacin en Qumica Analtica 4.

Automatizacin de las distintas etapas del proceso analtico 5. 6. 7. Analizadores automticos. Clasificacin Analizadores continuos. Anlisis por inyeccin en flujo. Sensores qumicos

Bibliografa
M. Valcrcel, M. D. Luque de Castro. Automatic Methods of Analysis. Elsevier. Amsterdam. 1988. M. Valcrcel, M. S. Crdenas. Automatizacin y Miniaturizacin en Qumica Analtica. Springer-Verlag Ibrica. Barcelona. 2000. P.B. Stockwell. Automatic Chemical Analysis. Taylor & Francis. Londres 1996. M. Valcrcel, M. D. Luque de Castro. Anlisis por inyeccin en Flujo. Monte de Piedad y Caja de Ahorros de Crdoba. 1984

INTRODUCCIN
La AUTOMATIZACIN, sustitucin parcial o total de la participacin humana en el proceso de medida qumica, es una TENDENCIA, hoy consolidada, en Qumica Analtica. TENDENCIAS DE LA QUMICA ANALTICA AUTOMATIZACIN

MINIATURIZACIN

SIMPLIFICACIN

Ejemplo: recorte de prensa EL PAS, mircoles 17 de noviembre de 2004 ES EXTRAO EXPLORAR UN MUNDO QUE VES SLO COMO UN PUNTITO EN EL CIELO

OBJETIVOS
Conocer la terminologa utilizada en el mbito general de la automatizacin Ser capaz de evaluar crticamente las ventajas e inconvenientes derivados de la sustitucin de la participacin humana en los procesos analticos. Conocer las posibilidades de automatizacin de las diferentes etapas del proceso de medida qumica. Conocer las distintas configuraciones de los analizadores, comerciales o no, diseadas para tratar de llevar a cabo el proceso analtico de forma totalmente automtica: analizadores discontinuos, analizadores continuos y sensores.

DEFINICIONES Y CONCEPTOS (1)

Mecanizacin
Produccin de movimiento en lugar del operador humano Empleo de mecanismos para reemplazar, mejorar o extender el esfuerzo humano Toma de decisiones
IN TE LI GE NC

OPERADOR HUMANO
O RZ UE SF E ID NT SE OS

MECANIZACIN

INSTRUMENTACIN

IA

SISTEMAS AUTOMTICOS

AUTOMATIZACIN
Sistema de retroalimentacin feed back

DEFINICIONES Y CONCEPTOS (3)

PROCESO
ANALIZADOR INSTRUMENTO APARATO

DISPOSITIVO

TCNICA

DEFINICIONES Y CONCEPTOS
Instrumentacin
Produccin y suministro de informacin

Sistema utilizado para observar, medir o comunicar una propiedad que reemplaza o mejora la intervencin humana

empleo del instrumento:

Automatizacin
Empleo combinado de dispositivos, aparatos e instrumentos para sustituir mejorar o ampliar el esfuerzo, los sentidos y la inteligencia humanos en el desarrollo de un proceso Toma de decisiones
IN TE LI GE NC IA

OPERADOR HUMANO
FU ES Z ER O ID NT SE OS

MECANIZACIN

INSTRUMENTACIN

SISTEMAS AUTOMTICOS

AUTOMATIZACIN
Sistema de retroalimentacin feed back

DEFINICIONES Y CONCEPTOS (4)

TCNICA
PROCESO DE MEDIDA QUMICA
OPERACIONES PREVIAS MEDIDA Y TRANSDUCCIN DE LA SEAL TOMA Y TRATAMIENTO DE DATOS MAYOR NIVEL DE CONCRECIN

MTODO PROCEDIMIENTO

OBJETIVOS DE LA AUTOMATIZACIN EN QUMICA ANALTICA

OBJETIVOS VENTAJAS INCONVENIENTES

INFORMACIN Produccin de ms y mejor informacin Rentabilizar al mximo los datos analticos generados CALIDAD Mejorar las propiedades analticas: precisin, exactitud, sensibilidad, selectividad. PRODUCTIVIDAD Aumentar la frecuencia de muestreo Reducir el consumo de muestra y reactivo. CAMPO de APLICACIN Hacer factible una tcnica o mtodo FACTOR HUMANO Reduccin de errores y costes debido al factor humano Mayor seguridad Estmulo personal

Menor control de Qumico sobre el proceso Sobrevaloracin de las posibilidades de automatizacin Restricciones legales Prdida de flexibilidad de herramientas y procesos

AUTOMATIZACIN DE LAS DISTINTAS ETAPAS DEL PROCESO ANALTICO

El PROCESO DE MEDIDA QUMICA (PMQ)

Operaciones previas
MUESTREO TRATAMIENTO de MUESTRA REACCIN ANALTICA MEDIDA y TRANSDUCCIN de la SEAL ANALTICA ADQUISICIN y TRATAMIENTO de DATOS

OPERACIONES PREVIAS ALTERNATIVAS

ROBOTS SENSORES TCNICAS CONTINUAS DE SEPARACIN INTRODUCCIN DIRECTA DE MUESTRAS

NUEVOS TIPOS DE ENERGA (ultrasonidos, microondas, lser) ANALIZADORES DE PROCESOS MDULOS DE TRATAMIENTO MUESTRA

MUESTREADORES AUTOMTICOS

Reactivo Jeringa de reactivo BRAZO MECNICO Jeringa de muestra Desecho Jeringa 1 2 3 4 Disolucin de lavado Desecho 1.
MUESTRA DISOLUCIN de LAVADO

Aspiracin de un volumen de muestra. Introduccin de la muestra en la copa del analizador. Aspiracin de la disolucin de lavado. Descarga al desecho.

2. 3. 4.

AUTOMATIZACIN de las DOS LTIMAS ETAPAS

Salida A/D
Registrador

Toma y tratamiento de datos

Micropocesador

Ordenador

Lectura Registro Envo a unidad central Toma y tratamiento de datos Lectura Registro Envo a unidad central

Ordenador

Control de parmetros instrumentales

AUTOMATIZACIN de las DOS LTIMAS ETAPAS

FUENTE

MONOCROMADOR

DETECTOR

AMPLIFICADOR

A/D

A/D

A/D

A/D

D/A INTERFASE PASIVA IMPRESORA

INTERFASE ACTIVA

ORDENADOR
TRATAMIENTO DE DATOS

SISTEMAS DE GESTIN DE LA INFORMACIN EN EL LABORATORIO: LIMS (Laboratory Information Management Systems) Sistema informtico integrado que combina la adquisicin de datos, su anlisis,la generacin de informes y funciones de gestin del laboratorio

Analizador 1

Instrumento 2 telfono

INTERNET Base de datos cientfico tcnicos

RED

Ordenador adquisicin datos Analizador 2 Instrumento 1 Base de datos Organizacin Base de datos Cliente

ANALIZADORES AUTOMTICOS: CLASIFICACIN

Segn

GRADO DE AUTOMATIZACIN

AUTOMTICOS SEMIAUTOMTICOS

Segn TIPOS DE ANALIZADORES Segn

TRANSPORTE DE MUESTRA/REACTIVOS

DISCONTINUOS CONTINUOS ROBOTIZADOS

MUESTRA

Lquidos DE Slidos Gases

Segn

DISEO

Comerciales No Comerciales

ANALIZADORES AUTOMTICOS
Muestra Reactivo Mezcla Tiempo Detector

Manualmente

Analizador discontinuo (tipo cinta)

Analizador continuo

Muestras balanza Robot reactivos

Analizador robotizado
Detector/ ordenador

ANALIZADOR DISCONTNUO SECUENCIAL

(No requieren manipulacin. Esta automatizado incluso el cierre y apertura)

Reactivos en rotor central

Pipetas para muestra y reactivos

Cubetas de reaccin Muestras (en rotor o en cinta)

Brazo de transporte

ANALIZADOR DISCONTINUO
Bandeja de reactivos

Cubeta

ANALIZADORES ROBOTIZADOS

www.strobotics.com

www.mwg-biotech.com

COMPONENTES DE UN ANALIZADOR FIA

Tubos (tefln o PVC; = 0.5-0.8 mm) Conectores

Bomba Peristltica

Coil de reaccin INYECCIN

CARGA

Loop o bucle de inyeccin

Vlvula de inyeccin de dos posiciones (6 vas)

10

COMPONENTES DE UN ANALIZADOR FIA (2) CELDAS DE FLUJO

Voltametra/amperometra celda de capa fina A, R W R espectrofotometra

fluorimetra

W Bioanalytical Systems, Inc. www.bioanalytical.com

ANALIZADORES DE INYECCIN EN FLUJO (FIA; Flow Injection Analysis)

Muestra Portador Bomba

Vlvula

Detector (con celda de flujo)

Registrador / ordenador T tr

Respuesta

M
ta t

tiempo

11

PRINCIPIOS DEL FIA

El FIA se basa en una combinacin de tres principios: 1. Inyeccin de la muestra 2. Dispersin controlada de la zona de muestra inyectada 3. Control reproducible del tiempo transcurrido desde la inyeccin hasta la deteccin Fenmenos de transporte que contribuyen a la dispersin: 1. Conveccin, para adaptarse a las condiciones de flujo laminar 2. Difusin
Flujo laminar

Difusin axial

Difusin radial

COEFICIENTE DE DISPERSIN, D

Coeficiente de dispersin: D = C / Cmax

La seal obtenida en un sistema FIA es el resultado de dos procesos que se producen simultneamente: 1. Proceso fsico: Dispersin 2. Proceso qumico: reaccin analtica Ninguno de los dos procesos alcanza el equilibrio

FIA: MTODO CINTICO DE TIEMPO FIJO

12

Parmetros instrumentales que afectan a D 1. Volumen de muestra inyectada, S(L). Al aumentar S disminuye D 2. Dimensiones de los tubos entre la vlvula de inyeccin y la celda de flujo: Dimetro interno (=0.5 mm) y longitud,L (cm)
Al aumentar L aumenta D

3. Caudal, Q (mL/min). Al aumentar Q disminuye D Debe tenerse en cuenta el efecto de D sobre: 1. La sensibilidad 2. La velocidad de muestreo f(anchura de pico)
CLASIFICACIN DE SISTEMAS FIA SEGN D

S= 60 L Q=1.5 mL/min

Sistemas con

Dispersin limitada Dispersin media Dispersin alta Dispersin reducida

D = 1-2 D =2-10 D > 10 D<1

(FIA como transporte) (FIA con conversin) (se necesita dilucin) (con preconcentracin)

FIA con DISPERSIN LIMITADA (D = 1-2)

bomba M D residuos Para mantener dispersin limitada debe limitarse la distancia entre inyector y detector

portador

1
5 min.

Zn 213,9 nm

D b
1 1,3 2

Se utiliza dispersin limitada: 1. 2. Medidas con electrodos selectivos (pH). Medidas de conductividad Inyeccin automtica de muestra en instrumentos de absorcin atmica, ICP.

0.5

10 s

S
0

Modo normal de aspiracin Sistema FIA

13

FIA CON DISPERSIN MEDIA (D = 2-10)

Se utilizan cuando el analito debe reaccionar con diferentes reactivos Para formar un producto detectable (FIA con conversin) Se obtienen los tpicos Fiagramas Con concentraciones en el mximo que corresponderan al 50% - 10% de las introducidas originalmente en El sistema Para obtener dispersin media se debe insertar un coil de reaccin. En ocasiones se desarrollan sistemas multicanal, con varios puntos de confluencia de distintas corrientes de reactivos entre el inyector y el detector

FIA CON DISPERSIN MEDIA - FIA MONOCANAL Determinacin espectrofotomtrica de ClHg(SCN)2 + 2 ClHg(SCN)2 Fe3+ SCN- + Fe3+ desecho HgCl2 + 2 SCNFe(SCN)2+

Volumen inyectado: 30 L Velocidad de muestreo: 120 muestras/hora

14

FIA con CONVERSIN (FIA multicanal) Ejemplo en el que se aprovechan efectos de discriminacin cintica
SCN- + 5-Br-PADAP + Oxidante
ml/min Portador acuoso 5-Br-PADAP Dicromato 0,81 0,80 0,23 M (50l) 2 MH+

Producto coloreado
(metaestable)

mezcla
30 cm

reaccin D
60 cm 570 nm

residuos

Seal del analito

Respuesta del detecto

Patrones
mol/l

No-fumadores Fumadores fumadores

Seal de fondo
(background)

10 mAbs
tiempo 0,25 A 10 min Barrido

SISTEMAS FIA - GENERACIN DE HIDRUROS

Muestra Gas (al atomizador) Separador gas/lquido Gas de purga Lquido (desecho)

Carrier HX NaBH4

Generacin de hidruros: As3+, Sb3+, Sn4+ Atomizacin: AsH3 , SbH3 , SnH4

BH4-

AsH3 , SbH3 , SnH4

As, Sb, Sn

Reacciones laterales/interferencias: Descomposicin del reactivo(NaBH4) en medio cido Me2+ (Ni, Cu, Co) AsH3, SbH3, SnH4
BH4HX

Me0 (lento) As, Sb, Sn + nH2

Me0

15

FIA CON DISPERSIN ALTA Da lugar a una gran dilucin de la muestra inyectada

Para obtener D alto: inyectar un pequeo volumen de muestra y utilizar Tubos de mezcla entre inyector y detector largos.

Se utiliza para procesar muestras muy concentradas, diluyndolas en el sistema hasta que la concentracin del analito quede dentro del intervalo de respuesta lineal del detector.

Dilisis

SISTEMAS DE ACONDICIONAMIENTO DE LA MUESTRA ON-LINE

Corriente donora Corriente aceptora

FIA CON DISPERSIN REDUCIDA

SISTEMAS CON PRECONCENTRACIN Y ACONDICIONAMIENTO DE LA MUESTRA ON-LINE

Intercambio inico Muestra Eluyente F

Columna con cambiador inico

16

SISTEMA FIA CON EXTRACCIN LQUIDO-LQUIDO EN CONTINUO

La muestra (S) se inyecta en una corriente de portador acuoso (Aq) que se une en (a) con una corriente de fase orgnica (Org). La mezcla de ambas se produce en (b, segmentador). En un separador (c) se descarta la fase acuosa y la fase orgnica se conduce a una celda de flujo (F).

S Aq Org
desecho

desecho

a b c

La eleccin de los materiales de los distintos componentes y su orientacin son crticos. Debe tenerse en cuenta que la fase acuosa se adhiere al vidrio y la orgnica se adhiere al tefln. En el segmentador la fase orgnica entra por un tubo de vidrio y se adhiere a un tubo de tefln (1)

SISTEMA FIA CON EXTRACCIN LQUIDO-LQUIDO EN CONTINUO

SEGMENTADOR org aq

SEPARADOR con forma de T fase orgnica mas densa que la acuosa

Una fina tira de tefln (2) sirve de gua para la fase Org a travs de la T de vidrio desecho

SEPARADOR DE MEMBRANA Si la fase orgnica es menos densa que la acuosa org Membrana de tefln
desecho

2 org

aq

org

La membrana de tefln permite que slo la fase Org penetre a travs de sus poros hidrofbicos. La fase Aq se descarta.

17

SISTEMAS DE FLUJO DETENIDO (STOPPED-FLOW) T R

DETECTOR

Los sistemas de flujo detenido se basan en parar una porcin del bolo de muestra en la celda de flujo. Si la reaccin de transformacin del analito no alcanza el equilibrio de camino al detector, se puede obtener una porcin de la curva cintica a medida que el producto de reaccin (amarillo) se va acumulando en la celda de flujo. Finalmente, se restaura el flujo y la muestra se impulsa hacia el deshecho, recuperndose la lnea de base. Cuando se inyecta la muestra, se pone en marcha un reloj electrnico (T). En estos sistemas se seleccionan tanto el tiempo que transcurre desde la inyeccin de la muestra hasta que se detiene el flujo (tiempo de retardo), como el tiempo de parada.

SISTEMAS DE FLUJO DETENIDO (STOPPED-FLOW) (2) El analito (rojo) se dispersa en la corriente de reactivo (azul) en el camino al detector mientras que el producto (amarillo) se va formando. Por tanto es esencial que el tiempo de retardo sea reproducible en los diferentes ensayos. Se mide la pendiente del fiagrama durante el tiempo de parada.

ANALYTE

BLANK

DELAY TIME

Tiempo de retardo

FLOW

18

SENSORES QUMICOS

Esquema general de un sensor qumico

ELEMENTO DE RECONOCIMIENTO TRANSDUCTOR ELECTRNICA

Un sensor es un dispositivo que responde de forma directa, continua, rpida, selectiva y reversible a los cambios de concentracin de una especie qumica en una muestra compleja, idealmente sin tratamiento previo de la misma. Consta de un elemento de reconocimiento molecular (que produce una interaccin selectiva (especfica) con el analito), en contacto fsico con un transductor.

Elementos de reconocimiento molecular empleados en el desarrollo de sensores

Componentes de reconocimiento molecular

Biticos

Abiticos

Bioafinidad

Biocatalticos

Reactivos inmunolgicos

Nucletidos ADN/ARN

Enzimas

Clulas Tejidos

Cambiadores lquidos

Ligandos neutros

Membranas slidas

Polmeros Molecularmente impresos

19

analito

Proceso de reconocimiento selectivo

Transduccin Energa

Electroqumicos

pticos

Piezoelctricos (de masa)

Trmicos

Amperomtrico

Potenciomtrico Conductimtrico

Respuesta-Procesamiento de datos Secuencia de procesos en la operacin de un sensor qumico. Se resumen los distintos tipos de transductor que pueden ser utilizados

SENSORES POTENCIOMTRICOS DE GASES Son celdas electroqumicas compuestas por: 1. Un electrodo de membrana sensible a un in y un electrodo de referencia, en contacto con un electrolito interno. 2. Una membrana polimrica permeable a gases, que separa el electrolito interno de la disolucin de prueba.
Electrodo de referencia Electrodo selectivo Electrolito interno
123,4 mV

Disolucin de prueba Analito CO2 SO2 NO2 H2 S

Membrana permeable a gases

Reaccin en electrolito interno CO2 + 2 H2O SO2 + 2 H2O 2NO2 + 3H2O H2S + 2H2O HCO3- + H3O+ HSO3- + H3O+ NO2- + NO3- + 2H3O+ S2- + 2H3O+

Electrodo selectivo Electrodo vidrio (pH) Electrodo vidrio (pH) Electrodo vidrio (pH) o electrodo de NO3Electrodo de Ag2S

20

SENSORES POTENCIOMTRICOS DE GASES. Sensor de CO2

Membrana de vidrio sensible a H+ CO2(aq) + H2O

CO2(g) CO2(aq)

HCO3-(aq) + H+(aq)

Electrolito interno
(NaHCO3/NaCl)

Membrana polimrica Microporosa (PTFE) Aire atrapado Disolucin de prueba

Funcin de respuesta del sensor de CO2

CO2(aq)
Dlon. de prueba Poros membrana

CO2(g)

Electrolito interno

CO2(aq)

Equilibrio global: CO2(aq) + H2O

Dlon. de prueba, x

HCO3-(aq) + H+(aq)
Electrolito interno, i

CO2(aq) + H2O
Keq =

HCO3-(aq) + H+(aq)

(aH+)i [HCO3-]i [CO2]x

[HCO3-] i cte.

(aH+)i =

Keq [HCO3-] i

[CO2]x

Respuesta del sensor de CO2 E = C + 0.05916 log (aH+)i E = C + 0.05916 log

Keq [HCO3-]i

[CO2]x

E = L + 0.05916 log [CO2]x

BIOSENSORES POTENCIOMTRICOS. Sensor de Urea (NH2)2CO

Ureasa

2 NH3 + CO2

Transductor (Electrodo selectivo) pH NH4+ Capa de enzima inmovilizada Mtodos de inmovilizacin del enzima Encapsulacin en membranas de dilisis Inclusin en gel de poliacrilamida Inclusin + enlace covalente En cido poliacrlico Entrecruzamiento con albmina (glutaraldehido)

Interferencias Control pH (tampn dil.) K+ (Na+)

Tiempo de respuesta 1 min 35 s

Rango de linealidad 510-5-10-3 M 510-5-10-1 M

Estabilidad del sensor 10 d. 21 d. >30 d. >60 d.

21

SENSORES AMPEROMTRICOS. Sensor de oxgeno de Clark Proceso catdico: O2 + 2 H+ + 2 eProceso andico: 2 Ag(s) + 2 Cl-(aq)

-600 Eap./ mV

3.25 i./ A

H2O2 2AgCl(s) + 2 e-

Electrolito interno (KCl) nodo de Ag/AgCl Ctodo de Pt Membrana de Polmero (PTFE)

Caractersticas de respuesta Corriente de difusin estacionaria: i = nFA D Co* q

= espesor de la membrana = porosidad de la memb. q = factor de tortuosidad

Tiempo de respuesta: test. = 2 2 (D/q) test 20 50 s

SENSORES AMPEROMTRICOS ENZIMTICOS 1. Basados en el empleo de enzimas oxidasas Seal (i/ A) Eapl = cte

SH2 + O2
SH2 + E(FAD)

S + H2O2
E(FADH2) + S E(FAD) + H2O2 Reaccin electrdica

1. Medida del perxido de hidrgeno generado

transductor

E(FADH2) + O2 H2O2

O2 + 2 H+ + 2 e-

Enzima inmovilizada

2. Empleo de un mediador de transferencia electrnica (Med)

(el O2 se sustituye por un aceptor de electrones no fisiolgico)

e-

Medred

E(FAD)

E ox

SH2

SH2

Medox

E(FADH2)

Ered

Sensor Enzima y mediador

inmovilizados

Disolucin

22

SENSORES AMPEROMTRICOS ENZIMTICOS 2. Basados en el empleo de enzimas deshidrogenasas E S + NADH + H+ DIFICULTADES Cintica lenta Mecanismo complejo Selectividad Estabilidad Reproducibilidad

SH2 + NAD+

NADH

electrodo

NAD+

2e-

H+

EMPLEO DE MEDIADORES DE TRANSFERENCIA ELECTRNICA

Medred

NAD+
E

SH2

SH2

Medox

NADH

Electrodo

Disolucin

23