Curso Cromatografia 2005

CURSOS BÁSICOS
TÉCNICAS CROMATOGRÁFICAS
¿ QUÉ ES LA CROMATOGRAFÍA ?
MICHAEL TSWETT REALIZÓ LA PRIMERA SEPARACIÓN EN COLUMNA

DE PIGMENTOS DE CLOROFILA, LLAMANDO A SU MÉTODO
“CROMATOGRAFÍA”
ES UN MÉTODO DE SEPARACIÓN DE ESPECIES QUÍMICAS PARA

IDENTIFICARLAS CUALITATIVA O CUANTITATIVAMENTE.
J. Chem. Ed. 36, 144, 1959

J. Chem. Ed. 44, 235, 1967
ELUYENTE COLUMNA O PLACA

(FASE MÓVIL) ELUATO
(FASE ESTACIONARIA)
APLICACIONES Y USOS
MEDICINA DEL
DEPORTE FARMACOLOGÍA
ANTI-DOPING
CROMATOGRAFÍA
INVESTIGACIÓN
INVESTIGACIÓN QUÍMICA Y
EXTRATERRESTRE BIOQUÍMICA
¿ QUÉ TIPOS DE ES LA CROMATOGRAFÍA EXISTEN?
CLASIFICACIÓN PRINCIPAL:
• CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA
• CROMATOGRAFÍA EN PAPEL Y CAPA FINA
LA INFORMACIÓN QUE NOS PROPORCIONA EL
CROMATOGRAMA
PARÁMETROS A CONSIDERAR
GASTO: RAPIDEZ DE LA FASE MOVIL EN

UNA COLUMNA (ml/min)
TIEMPO DE RETENCIÓN tRI: TIEMPO QUE TOMA

AL ELUYENTE TRANSPORTAR CUALQUIER
COMPONENTE HASTA EL DETECTOR
ANCHO DE PICO EN LA BASE WI: DISTANCIA DE

LA PROYECCIÓN DE DOS TANGENTES A
LOS PUNTOS DE INFLEXIÓN.
ALTURA DE PICO hi
ANCHO TOTAL A LA MITAD DEL PICO

FWHM
TIEMPO NETO DE RETENCIÓN (PICO i) = tRi – tM
FACTOR DE RETENCIÓN O DE CAPACIDAD (PICO i) ki = tRi – tM/ tM

CROMATOGRAMA
BANDA CON FORMA GAUSSIANA

Wi = 1.698 FWHM = 4 σi DONDE σ ES LA
DESVIACIÓN ESTANDAR
EFICIENCIA (N): MEDIDA DE LA RETENCIÓN RELATIVA

RESPECTO AL ANCHO DE SU PICO
2
⎛t ⎞ ⎛t ⎞ ⎛ t Ri ⎞
N = ⎜⎜ Ri ⎟⎟ = 16⎜⎜ Ri ⎟⎟ = 5.54⎜ ⎟
⎝ σi ⎠ ⎝ Wi ⎠ ⎝ FWHM ⎠
DEPENDE DE FACTORES DE CONSTRUCCIÓN, EMPAQUE DE

LA COLUMNA Y DE LA VELOCIDAD DE LA FASE MÓVIL
ENTRECRUZAMIENTO DE BANDAS:
RESOLUCIÓN Rs: MEDIDA CUANTITATIVA DEL GRADO DE

MEZCLADO DE DOS COMPUESTOS
t R2 − t R1 SEPARACIÓN DE PICOS
Rs = =
1 ANCHO PROMEDIO DE PICOS
( W2 + W1 )
2
DEPENDE DE LA ELECCIÓN DE LA FASE ESTACIONARIA,

FASE MÓVIL, TEMPERATURA Y LONGITUD DE LA FASE
ESTACIONARIA
CROMATOGRAMA
Rs= 0.5 Rs= 0.75
Rs= 1.0
Rs= 1.5
CROMATOGRAMA
EFECTOS DE LAS FASES MÓVILES Y ESTACIONARIAS:
Cambio de composición del eluyente Cambio de empaque de columna

TEORIAS DE LAS SEPARACIONES CROMATOGRÁFICAS
A) EXTRACCIONES.
EJEMPLO
[I2 ]CCl4
KD = = 7x10 2
[I2 ]H2O
C1
COEFICIENTE DE DISTRIBUCIÓN : K D =
C2
B) TEORÍA DE LOS PLATOS
SE HACE LA COMPARACIÓN DE UNA COLUMNA CROMATOGRÁFICA CON UNA ANTIGUA

COLUMNA DE DESTILACIÓN
SE CONCIBE A LA COLUMNA CROMATOGRÁFICA COMO UNA SERIE DE CAPAS ESTRECHAS

CONTIGUAS LLAMADAS PLATOS TEÓRICOS
DURANTE LA ELUCIÓN, SE PRODUCE UN EQUILIBRIO EN CADA PLATO DE LA MUESTRA

ENTRE LA FASE MÓVIL Y ESTACIONARIA (INFINITAMENTE RÁPIDO)
EL NÚMERO DE PLATOS TEÓRICOS SERÁ ENTONCES PROPORCIONAL A LA EFICIENCIA

2
L ⎛t ⎞ ⎛t ⎞ ⎛ t Ri ⎞
EFICIENCIA = N = NÚMERO DE PLATOS TEÓRICOS = = ⎜⎜ Ri ⎟⎟ = 16⎜⎜ Ri ⎟⎟ = 5.54⎜ ⎟
H ⎝ σi ⎠ ⎝ Wi ⎠ ⎝ FWHM ⎠
DONDE L ES LA LONGITUD DE LA COLUMNA Y H ES LA ALTURA DE PLATO
LA EFICIENCIA SERÁ ENTONCES INVERSAMENTE PROPORCIONAL AL ESPESOR (ALTURA)

DEL PLATO
C) TEORÍA CINÉTICA DE LA CROMATOGRAFÍA:
A DIFERENCIA DE LA TEORÍA DE LOS PLATOS, CONSIDERA QUE EL EQUILIBRIO NO ES

INFINITAMENTE RÁPIDO
LA FORMA DEL CROMATOGRAMA DEPENDE DE LA DIFUSIÓN DEL SOLUTO POR LA COLUMNA,

DE LA VELOCIDAD DE ELUCIÓN Y LOS CAMINOS POR LA FASE ESTACIONARIA.
SI CONSIDERAMOS TODOS LOS MECANISMOS ANTERIORES, SE DEDUCE LA ECUACIÓN

DE VAN DEEMTER
H = A + B/v + Cv
A, B Y C SON CONSTANTES DEPENDIENTES DE LA FASE ESTACIONARIA Y MÓVIL Y v ES LA

VELOCIDAD DE LA FASE MÓVIL (GASTO)
CONTRIBUCIÓN DEL PARÁMETRO A:
FALTA DE HOMOGENEIDAD EN LAS COLUMNAS PROVOCA

DIFUSIÓN EN REMOLINO
SE PRODUCE ENSANCHAMIENTO DE LAS BANDAS
PARA EVITAR LOS CANALES SE RECOMIENDA:

•EMPLEAR PARTÍCULAS REGULARES
• USAR PARTÍCULAS DE TAMAÑO PEQUEÑO
• USAR UN LECHO MÁS DELGADO
•EMPLEANDO UNA COLUMNA CAPILAR
•CONTRIBUCIÓN IMPORTANTE EN LA CL, NO TANTO EN CG
CONTRIBUCIÓN DEL PARÁMETRO B:
LAS MOLÉCULAS MIGRAN HACIA

ATRÁS Y HACIA DELANTE EN EL
SENTIDO DEL FLUJO
SI EL GASTO ES LENTO, HAY UNA ALTA

DIFUSIÓN LO QUE PROVOCA EL
ENSANCHAMIENTO
DE LA BANDA
CONTRIBUCIÓN DEL PARÁMETRO C:
LAS MOLÉCULAS DIFUNDE PERPENDICULARMENTE

A LA DIRECCIÓN DEL FLUJO
SE PRODUCE ENTONCES EL PROCESO DE ADSORCIÓN

Y DESORCIÓN CON LA FASE ESTACIONARIA
ESTOS PROCESOS REQUIEREN DE CIERTO TIEMPO PARA

REALIZARSE
SI EL GASTO ES MUY RÁPIDO, LA DIFUSIÓN SERÁ

INADECUADA LLEVANDO EL SOLUTO A
DIFERENTES DISTANCIAS, SE PRODUCE UN
ENSANCHAMIENTO DE LA SEÑAL.
SIMILARMENTE, SI EL PROCESO DE ADSORCIÓN

Y DESORCIÓN ES LENTO, A MAYOR GASTO,
MAYOR ENSANCHAMIENTO.
GRÁFICOS DE LOS FACTORES DE LA ECUACIÓN DE VAN DEEMTER:
HPLC CG
CUANTIFICACIÓN EN CROMATOGRAFÍA
LA PRECISIÓN Y LOS LÍMITES DE DETECCIÓN DEPENDEN EN GRAN MEDIDA DEL DETECTOR

UTILIZADO. SE PREFIEREN DETECTORES CUYA SEÑAL ES LINEAL RESPECTO A LA
CONCENTRACIÓN DE CADA COMPONENTE
TÉCNICAS DE CUANTIFICACIÓN:
SE PUEDE RECOLECTAR EL VOLUMEN DE

LA BANDA COMPLETA Y LLEVARLO A SU
ANÁLISIS POR SEPARADO
CUANTIFICACIÓN MEDIANTE TITULACIONES

ÁCIDO-BASE O REDOX
CUANTIFICACIÓN EN CROMATOGRAFÍA
CUANDO LA SEÑAL DE LA RESPUESTA ES LINEAL A LA

CONCENTRACIÓN, ESTA ÚLTIMA ES PROPORCIONAL AL
ÁREA BAJO LA CURVA DE RESPUESTA VS TIEMPO
UNA MANERA APROXIMADA DE MEDIR EL ÁREA BAJO LA CURVA

ES EMPLEANDO PAPEL MILIMÉTRICO Y CONTAR LOS
CUADROS
INTEGRADOR ELECTRÓNICO
CONSIDERACIÓN DEL TRIÁNGULO
CROMATOGRAFÍA DE GASES
TÉCNICA CROMATOGRÁFICA PARA LA SEPARACIÓN DE COMPUESTOS ORGÁNICOS E INORGÁNICOS

VOLÁTILES Y TÉRMICAMENTE ESTABLES
DEPENDIENDO DE LA FASE ESTACIONARIA, SE TIENE CROMATOGRAFÍA GAS-LÍQUIDO O

GAS SÓLIDO, LA FASE MÓVIL SIEMPRE SERÁ UN GAS
INSTRUMENTACIÓN DE LA CG:
REGULADOR
MANÓMETRO COMPUTADORA
DE FLUJO PUERTO DE INYECCIÓN
PARA RECOLECTAR
DATOS
CILÍNDRO
CON EL GAS
ACARREADOR
CROMATÓGRAFO DE GASES
CONTENIENDO SISTEMA DE INYECCIÓN,
COLUMNA Y DETECTOR
SISTEMA DE INYECCIÓN DE MUESTRA
JERINGA
SISTEMA DE INYECCIÓN DIRECTA DE MUESTRA:
SEPTUM
ENTRADA DE SE INYECTA LA MUESTRA CON UNA JERINGA A UN PUERTO DE
GAS ACARREADOR INYECCIÓN A TRAVÉS DE UN SEPTUM AUTO SELLABLE.
FIBRA DE EL PUERTO SE CALIENTA LO SUFICIENTE PARA QUE SE
VIDRIO VAPORIZE LA MUESTRA DE MODO CASI INSTANTÁNEO
BLOQUE
METÁLICO DE
CALENTAMIENTO
COLUMNA
SISTEMA DE INYECCIÓN DIRECTA DE SEPARACIÓN

JERINGA
DE LA MUESTRA:
SEPTUM
ENTRADA DE PARA COLUMNAS CAPILARES SE REQUIEREN MUESTRAS
GAS ACARREADOR
SALIDA DEL 99% DE 0.1 μl, PARA ESTO SE UTILIZA ESTE SISTEMA
DE LA MEZCLA DE INYECCIÓN.
GAS-MUESTRA
SE INYECTA 1 μl DE MUESTRA, SE MEZCLA CON EL
CÁMARA DE
VIDRIO VAPORIZACIÓN GAS ELUYENTE Y EL 99% DE LA MEZCLA ESCAPA POR
BLOQUE UNA SALIDA DE LA VÁLVULA. SOLO EL 1%
METÁLICO DE ENTRA A LA COLUMNA CAPILAR.
COLUMNA CALENTAMIENTO
CAPILAR
MUESTREADORES AUTOMÁTICOS
COLUMNAS PARA CROMATOGRAFÍA DE GASES:
A) COLUMNAS EMPACADAS
SE CONSTRUYEN CON TUBO DE ACERO INOXIDABLE,
NÍQUEL O VIDRIO
PAREDES
SOPORTE
EL DIÁMETRO VARÍA DE 1.6 A 9.5 mm Y LONGITUD
DE LA COLUMNA DE 3 m
SÓLIDO
SE EMPACA CON UN SOPORTE INERTE, USUALMENTE

SITIOS POR DONDE UNA TIERRA DIATOMÁCEA
PASA LA FASE MOVIL
PARA MUESTRAS MUY POLARES, SE REQUIERE

PRETRATAR EL SOPORTE PARA INACTIVAR
LOS SITIOS ADSORBENTES -OH
B) COLUMNAS CAPILARES
TIENEN UN DIÁMETRO INTERNO DE MENOS DE 1 mm

POLIIMIDA
SILICA FUNDIDA
SE CONSTRUYE CON SÍLICE FUNDIDA CON
PROTECTOR DE POLIIMIDA
DOS TIPOS: COLUMNAS EMPACADAS CON PARTÍCULAS

FASE
ESTACIONARIA SÓLIDAS Y COLUMNAS ABIERTAS
UNA VEZ OPTIMIZADOS AUMENTA LA RAPIDEZ DEL

ANÁLISIS Y EN OCASIONES SE MEJORA LA RESOLUCIÓN
C) INFLUENCIA DEL DIÁMETRO DE COLUMNA
EL DIÁMETRO INTERNO DE LA COLUMNA AFECTA

DIRECTAMENTE SU EFICIENCIA.
A MENOR DIÁMETRO, MAYOR EFICIENCIA Y RESOLUCIÓN
SIN EMBARGO, AUMENTA EL COEFICIENTE DE PARTICIÓN k,

AUMENTA EL TIEMPO DE RETENCIÓN Y EL TIEMPO
DE ANÁLISIS
SE PUEDE AUMENTAR ENTONCES SIN PROBLEMAS

EL GASTO CON PRÁCTICAMENTE NULA PÉRDIDA
DE EFICIENCIA.
d.i.=0.32 mm
d.i.=0.25 mm
D) INFLUENCIA EN LA LONGITUD DE LA COLUMNA
EL INCREMENTO DE LA LONGITUD DE LA COLUMNA INCREMENTA

EL NÚMERO DE PLATOS TEÓRICOS, Y ASÍ LA RESOLUCIÓN
SIN EMBARGO ESTO IMPLICA UN AUMENTO DE PRESIÓN EN

LA COLUMNA Y DEL TIEMPO DE ANÁLISIS
RESOLUCIÓN DIRECTAMENTE PROPORCIONAL AL CUADRADO

DE LA LONGITUD DE LA COLUMNA
TIEMPO DE RETENCIÓN DIRECTAMENTE PROPORCIONAL A

LA LONGITUD DELA COLUMNA (ANÁLISIS ISOTÉRMICO)
LA LONGITUD ÓPTIMA SERÁ LA MÁS CORTA QUE

PERMITA UNA ADECUADA EFICIENCIA
E) INFLUENCIA DE LA TEMPERATURA DE LA COLUMNA
SE REQUIERE UNA TEMPERATURA QUE PERMITA QUE LOS COMPONENTES SE ENCUENTREN

VAPORIZADOS
A MENOR TEMPERATURA MEJOR RESOLUCIÓN, PERO MAYOR TIEMPO DE RETENCIÓN.
A MAYORES TEMPERATURA MENOR RESOLUCIÓN Y SE PUEDE DEGRADAR LA FASE

ESTACIONARIA O BIEN LA MUESTRA
SE PUEDE REALIZAR UNA VARIACIÓN CONTROLADA DE LA TEMPERATURA PARA
MEJORAR LOS RESULTADOS DEL ANÁLISIS CROMATOGRÁFICO. SE PUEDEN VARIAR
LOS PARÁMETROS DE CONTROL PARA MEJOR LOS RESULTADOS
DETECTORES PARA CROMATOGRAFÍA DE GASES:
A) DETECTOR DE CONDUCTIVIDAD TÉRMICA

FILAMENTO
CALIENTE SE COLOCA UN FILAMENTO CALIENTE EN EL FLUJO
DE GAS
DESHECHO DESHECHO
SE IMPONE UNA CORRIENTE EN LOS FILAMENTOS,

SE PRODUCE UNA TEMPERATURA CONSTANTE
TERMOSTATO LA CONDUCTIVIDAD TÉRMICA DE LOS GASES HACEN

QUE LA TEMPERATURA DE LA CÁMARA CAMBIE
EFLUENTE DE
ENTRADA DE SE COMPARA LA TEMPERATURA DE EL ELUYENTE
LA COLUMNA
GAS DE REFERENCIA
(BLANCO) CONTRA UN BLANCO.
B) DETECTOR DE IONIZACIÓN TERMOIÓNICA
ELECTRODOS
SE QUEMA EL ELUYENTE EN UNA FLAMA DE H2,SE HACE

PASAR LA MUESTRA POR UNA CAMA DE SILICATO DE
CAMA DE SILICATO RUBIDIO A ALTA TEMPERATURA LO QUE GENERA
DE RUBIDIO
UN PLASMA DE IONES.
FLAMA DE H2
LOS IONES PASAN POR UNOS ELECTRODOS A POTENCIAL
ENTRADA DE
AIRE IMPUESTO QUE GENERAN CORRIENTE,
LA CONDUCTIVIDAD DE LOS IONES AUMENTA LA
ENTRADA DE
H2
CORRIENTE QUE SE REGISTRA.
ALTAMENTE SELECTIVO A P Y N
C) DETECTOR DE CAPTURA DE IONES
EL ELUYENTE PASA POR ENTRE DOS ELECTRODOS, UNO
COLECTOR
DE ELECTRONES DE LOS CUALES TIENE UN RADIOISÓTOPO (TRITIO O NÍQUEL 63)
QUE EMITE ELECTRONES DE ALTA ENERGÍA
AL PASO DEL GAS PORTADOR (GENERALMENTE N2), SE FORMA

LÁMINA UN PLASMA DE IONES POSITIVOS, RADICALES Y ELECTRONES
RADIOACTIVA
ELECTRODO
SE IMPONE UNA DIFERENCIA DE POTENCIAL EN ELECTRODOS
(COLECTOR DE ELECTRONES) QUE “COLECTA” LOS
ELECTRONES FORMADOS, SE TIENE LA LINEA BASE
AL PASAR UNA MUESTRA, ÉSTA PUEDE ABSORBER LOS

ELECTRONES GENERADOS, DISMINUYE LA CORRIENTE Y
SE TIENE UNA RESPUESTA
D) DETECTOR DE IONIZACIÓN DE LLAMA
ELECTRODOS SE QUEMA EL ELUYENTE EN UNA FLAMA DE H2,
CON SUFICIENTE ENERGÍA SE LOGRA LA IONIZACIÓN
DE LA MUESTRA
LOS IONES PASAN POR UNOS ELECTRODOS A POTENCIAL

IMPUESTO QUE GENERAN CORRIENTE,
FLAMA DE H2 LA CONDUCTIVIDAD DE LOS IONES AUMENTA LA
ENTRADA DE CORRIENTE QUE SE REGISTRA.
AIRE
ENTRADA DE EXCELENTE PARA COMPUESTOS ORGÁNICOS,
H2 INSENSIBLE A
CO, CO2, CS2, SO2, NH3, N2O,NO, NO2, SiF4 Y SiCl4
E) DETECTOR FOTOMÉTRICO DE FLAMA
SELECTIVO A COMPONENTES CONTENIENDO S Y P
REGIÓN DE SE USA UNA LLAMA DE H2 DE BAJA TEMPERATURA

EMISIÓN
QUE TRANSFORMA EL S EN S2 Y EL P EN ESPECIES DE HPO
FLAMA DE H2
ENTRADA DE SE TIENEN CARACTERIZADAS LAS BANDAS DE ABSORCIÓN
FILTRO
AIRE DE LUZ DE ESTOS COMPUESTOS
ENTRADA DE TUBO
H2 FOTOMULTIPLICADOR
SE EMITE LUZ Y SE CARACTERIZA LA ABSORBANCIA
REGISTRADA, UTIL EN ANÁLISIS DE CONTAMINANTES
F) DETECTOR DE EMISIÓN ATÓMICA
ARREGLO DE SE USA PARA IDENTIFICAR ELEMENTOS

DIODOS
REJA DE SE HACE PASAR LA MUESTRA POR UN PLASMA DE He,

DIFRACCIÓN SE ATOMIZA LA MISMA Y SE PRESENTA UN ESTADO
DE EXCITACIÓN ELECTRÓNICA
He
PLASMA EL REGRESO AL ESTADO BASAL IMPLICA EMISIÓN
EFLUYENTE DE PARTÍCULAS, EL ARREGLO DE DIODOS NOS
PERMITE REGISTRAR EL ESPECTRO DE EMISIÓN
PROPIO DE CADA ELEMENTO
ESPEJO
GENERADOR DE
MICROONDAS ORIFICIO
F) ESPECTRÓMETRO DE MASAS
INYECTOR INTERFASE
CUADRUPOLO PROVEÉ INFORMACIÓN IMPORTANTE SOBRE LA
ESTRUCTURA DE ESPECIES MOLECULARES
DETECTOR COMPLEJAS
SE IONIZA LA MUESTRA, SE UTILIZA LA RELACIÓN

MASA-CARGA, ACELERANDO LOS
DIVERSOS IONES MEDIANTE CAMPOS
COLUMNA FUENTE DE IONES SISTEMA DE
VACÍO ELÉCTRICOS (CUADRUPOLOS), PARA PASAR AL
ANALIZADOR.
G) ESPECTROSCOPÍA INFRARROJA DE TRANSFORMADA DE FOURIER
INYECTOR SE REALIZA EL ESPECTRO INFRARROJO DE LOS

ESPECTROFOTÓMETRO IR
COMPONENTES CONFORME ELUYEN
PRESENTA VARIAS DESVENTAJAS, COMO LA

NECESIDAD DE UNA GRAN LONGITUD DEL
PASO ÓPTICO LO QUE HACE QUE
TUBO DE RADIACIÓN SE ANALIZE SE ENCUENTRA MUY DIFUNDIDA
COLUMNA
NO SE OBTIENE ALTA EFICIENCIA
CROMATOGRAFÍA GAS-LÍQUIDO
A) COLUMNAS PARA CROMATOGRAFÍA G-L (FASE LÍQUIDA ESTACIONARIA)
DIVERSOS LÍQUIDOS PUEDEN EMPACARSE EN LAS COLUMNAS O FIJARSE EN
COLUMNAS CAPILARES MEDIANTE LA ADSORCIÓN A UN MATERIAL SÓLIDO INERTE
LA FASE LÍQUIDA ESTACIONARIA DEBE CUMPLIR DIVERSAS PROPIEDADES:

•AMPLIO INTERVALO DE TEMPERATURAS DE OPERACIÓN
•BAJA PRESIÓN DE VAPOR
•BUENA ESTABILIDAD TÉRMICA Y QUÍMICA
•QUE NO REACCIONE CON LOS COMPONENTES DE LA MUESTRA
B) INFLUENCIA DE LA POLARIDAD DE LA FASE ESTACIONARIA LÍQUIDA
LAS FASES ESTACIONARIAS SE PUEDEN DIVIDIR EN

POLARES Y NO POLARES
FASAS NO POLARES: INTERACCIÓN (RETENCIÓN) CON

LOS COMPONENTES VIA FUERZAS DE DISPERSIÓN,
USADOS PARA SEPARAR COMPONENTES NO POLARES.
EN GENERAL SON HIDROCARBUROS (EJ. ESCUALENO)
O BIEN ALQUIL SILICATOS
FASES POLARES: INTERACCIÓN (RETENCIÓN) CON

LOS COMPONENTES IÓNICOS VIA FUERZAS
DIPOLO-DIPOLO, IÓN DIPOLO, PUENTES DE HIDRÓGENO
EN GENERAL DIMETIL SILICATOS SUBSTITUIDOS Y
POLIÉTERES
CUANDO SE DESARROLLA UN EXPERIMENTO, SE DEBE

USAR PRIMERO UNA FASE ESTACIONARIA NO POLAR
Y SI NO SE ENCUENTRA SEPARACIÓN, PROBAR
CON UNA FASE ESTACIONARIA POLAR
CROMATOGRAFÍA GAS-SÓLIDO
ES POCO UTILIZADA EN LA ACTUALIDAD DEBIDO A QUE IMPLICA TIEMPOS DE RETENCIÓN

MUY AMPLIOS Y MUY POBRE REPRODUCIBILIDAD
SE USA EXCLUSIVAMENTE PARA EL ANÁLISIS DE MUESTRAS INORGÁNICAS (SEPARACIÓN

DE ISÓMEROS Y ANÁLISIS DE HIDROCARBUROS DE BAJA MASA MOLECULAR)
LAS FASES SÓLIDAS ESTACIONARIAS DEBEN TENER GRANDES AREAS SUPERFICIALES

HOMOGÉNEAS SIN NINGUNA ACTIVIDAD CATALÍTICA SOBRE LOS COMPONENTES DE LA
MUESTRA.
A) COLUMNAS ADSORVENTES
LAS MÁS UTILIZADAS, SON MALLAS MOLECULARES

INORGÁNICAS COMO ZEOLITAS
NATURALES O SINTÉTICAS (ESTRUCTURAS DE
ÓXIDOS DE ALUMINIO Y SILICIO)
ESTAS MALLAS CONSISTEN EN CAVIDADES

INTERCONECTADAS CON ABERTURAS DE
UNIFORMIDAD MUY PRECISA.
SE OBTIENE UNA AFINIDAD ESPECÍFICA

BASADA EN TAMAÑO Y FORMA MOLECULAR
LAS MOLÉCULAS DENTRO DE LOS POROS

SON ADSORBIDAS POR LAS FASES.
EJEMPLO DE PLANEACIÓN DE ANÁLISIS Y OPTIMIZACIÓN
PROBLEMA: SEPARAR UNA MUESTRA QUE CONTIENE FENOL, 2-METIL FENOL, 4-METIL FENOL,
5-METIL FENOL Y 2.5 DIMETIL FENOL
COLUMNAS DISPONIBLES:
COLUMNA 1: 3m x 4mm d.i. ESCUALENO, TEMPERATURA MÁX. DE OPERACIÓN 100°C
COLUMNA 2: 50m x 0.27mm d.i. 25% FENIL 75% METIL SILICON, OV1
COLUMNA 3: 50m x 0.35mm d.i. POLIETILENGLICOL, C20M
COLUMNA 4: 2:5m x 4mm d.i. 50% FENIL 50% METIL SILICÓN, OV-17
DETECTORES DISPONIBLES Y FASES MÓVILES:

DETECTOR 1: FLAMA FOTOMÉTRICA Y HELIO
DETECTOR 2: CONDUCTIVIDAD TÉRMICA E HIDRÓGENO
DETECTOR 3: FLAMA IONIZACIÓN Y HELIO
SE REGISTRA EL CROMATOGRAMA EN UN ANÁLISIS ISOTÉRMICO A 90°C
¿ CÓMO MEJORAR LA RESOLUCIÓN DE LOS DOS PRIMERO COMPONENTES Y TIEMPO

DE ANÁLISIS?
A) DISMINUIR TEMPERATURA DE ANÁLISIS ISOTÉRMICO

B) USAR TEMPERATURA CONTROLADA
C) INCREMENTAR TEMPERATURA DE ANÁLISIS ISOTÉRMICO
A) DECREMENTO DE LA TEMPERATURA DE ANÁLISIS ISOTÉRMICO B) TEMPERATURA CONTROLADA
C) AUMENTO DE LA TEMPERATURA DE ANÁLISIS ISOTÉRMICO

CROMATOGRAFÍA DE LÍQUIDOS
SÓLO EL 20% (APROX.) DE LOS COMPUESTOS CONOCIDOS PERMITEN SER ANALIZADOS POR
CROMATOGRAFÍA DE GASES. LIMITADA POR VOLATILIDAD E INESTABILIDAD TÉRMICA
LA HPLC (CROMATOGRAFÍA DE LÍQUIDOS DE ALTO RENDIMIENTO, HIGH PERFOMANCE

LIQUID CHROMATOGRAPHY) PUEDE SEPARAR MACROMOLÉCULAS, ESPECIES IÓNICAS,
PRODUCTOS NATURALES, POLÍMEROS, PROTEÍNAS, ETC. USANDO FASES MÓVILES LÍQUIDAS
LA HPLC PRESENTA MAYOR VARIEDAD DE FASES ESTACIONARIAS QUE LA CG.
RECIPIENTE PARA COMPUTADORA

FILTRO (ANÁLISIS DE DATOS)
ELUYENTE
INYECTOR
GUARDA
(COLUMNA DE SEGURIDAD)
BOMBA
COLUMNA ANALÍTICA
CONTROL DE
LA BOMBA DETECTOR
SISTEMA DE SUMINISTRO DE LA FASE MÓVIL
EL SISTEMA DE SUMINISTRO DE LA FASE MÓVIL DEBE CUMPLIR CIERTOS REQUISITOS:

* QUE PROVEA UN FLUJO CONSTANTE, LIBRE DE PULSOS
* QUE LA VELOCIDAD DE FLUJO SEA CONSTANTE (0.1 A 2ml POR MINUTO
* QUE ESTE HECHA DE UN MATERIAL INERTE AL ELUYENTE QUE SE VA A INYECTAR
ES IMPORTANTE QUE EL ELUYENTE SEA FILTRADA Y DESAIREADO ANTES DE SER
INYECTADO
A) BOMBA DE TIPO JERINGA
ES EL TIPO MÁS SIMPLE DE BOMBA PARA HPLC

PISTÓN
LA VELOCIDAD DEL FLUJO PUEDE SER CAMBIADA
MODIFICANDO LA VELOCIDAD DE LA BOMBA
EL CONTENEDOR PUEDE ALMACENAR VOLÚMENES

DE 200 HASTA 500 ML DE ELUYENTE
SE LOGRA UN FLUJO SIN PULSOS CON CAPACIDAD

PARA ALTAS PRESIONES (200-475 ATM)
CÁMARA DE
MOTOR PARA EMPUJAR ELUYENTE
EL PISTÓN ADECUADOS PARA ANÁLISIS EN COLUMNAS DE
PEQUEÑO CALIBRE
B) BOMBA DE PISTÓN SIMPLE

MOTOR DEL PISTÓN EL PISTÓN SE MUEVE HACIA ATRÁS, SE ABRE
PISTÓN LA VÁLVULA DE ENTRADA DEL ELUYENTE
SUCCIONANDO EL MISMO
EL PISTÓN SE MUEVE HACIA DELANTE, SE CIERRA

LA VÁLVULA DE ENTRADA Y SE ABRE LA DE SALIDA
COMPRIMIENDO EL VOLUMEN DE ELUYENTE Y
FORZÁNDOLO A ENTRAR AL SISTEMA
ÉMBOLO DE VÁLVULAS
MOVIMIENTO DE CONTROL
C) MEZCLA DE COMPONENTES PARA ELUYENTE: BOMBEO DE GRADIENTE
EXISTEN DOS TIPOS: DE MEZCLADO A ALTA PRESIÓN Y DE MEZCLADO A BAJA PRESIÓN
BOMBA 1
SOLVENTE 1
EN EL MEZCLADO A ALTA PRESIÓN, SE USA UNA

BOMBA POR CADA COMPONENTE DEL ELUYENTE
VARIANDO LA VELOCIDAD DE FLUJO DE CADA

SOLVENTE SE PUEDE CONTROLAR LA
COMPOSICIÓN DE ELUYENTE FINAL
MEZCLADOR
BOMBA 2
SOLVENTE 2
VÁLVULA
EN EL MEZCLADO A BAJA PRESIÓN SE USA
SOLVENTE 1 ELUYENTE
UNA SOLA BOMBA Y UNA VÁLVULA POR
SOLVENTE
EL TIEMPO DE APERTURA DE CADA VÁLVULA

DETERMINA LA COMPOSICIÓN DEL ELUYENTE
VÁLVULA MEZCLADOR BOMBA
SE DEBE ASEGURARSE DE USAR UN BUEN
MEZCLADOR PARA QUE EL ELUYENTE
SOLVENTE 2 SEA HOMOGÉNEO
SISTEMA DE INTRODUCCIÓN DE LA MUESTRA
VÁLVULA DE INYECCIÓN DE MUESTRA
ENTRADA DE SE INYECTA CON UNA JERINGA UN VOLUMEN

JERINGA CON ELUYENTE DE LA MUESTRA EN LA VÁLVULA, ENTRA
MUESTRA
A LA CÁMARA DE MUESTRA
CÁMARA DE
MUESTRA SE MUEVE A LLAVE DE LA VÁLVULA A LA
SALIDA DE POSICIÓN DE INYECCIÓN Y EL ELUYENTE
LLAVE DE LA ELUYENTE SE CONECTA A LA CÁMARA DE MUESTRA
VÁLVULA
EMPUJANDO ASÍ A LA MISMA
DESHECHO
DE MUESTRA
GUARDAS
LA GUARDA O COLUMNA DE SEGURIDAD SE COLOCA
ENTRE EL SISTEMA DE INYECCIÓN Y LA COLUMNA
ANALÍTICA
GUARDA
SE USA PARA AUMENTAR EL TIEMPO DE VIDA
DE LA COLUMNA ANALÍTICA REMOVIENDO
COLUMNA IMPUREZAS Y COMPUESTOS QUE DAÑEN LA
ANALÍTICA COLUMNA
CONTIENE LA MISMA FASE ESTACIONARIA QUE LA

COLUMNA ANALÍTICA
SE DEBE CAMBIAR DEL SISTEMA CON REGULARIDAD
COLUMNAS Y TIPOS DE SEPARACIÓN
MANUFACTURADAS USANDO ACERO INOXIDABLE
SE FABRICAN EN UNA AMPLIA VARIEDAD DE DIÁMETROS INTERNOS Y LONGITUDES

DEL VOLUMEN DE COLUMNA SE DERIVAN LOS DIFERENTES TIPOS DE HPLC QUE HAY:
* MÉTODOS EN DONDE EL ANALITO ELUYE A VOLÚMENES MENORES AL VOLUMEN DE LA
COLUMNA (EXCLUSIÓN POR TAMAÑO)
* MÉTODOS DONDE LOS ANALITOS ELUYEN A VOLÚMENES MAYORES AL VOLUMEN DE LA
COLUMNA
EL VOLUMEN DE LA COLUMNA PUEDE DIVIDIRSE EN:
VC= VS + VP + V0
DONDE VC ES EL VOLUMEN TOTAL DE LA COLUMNA, VS VOLUMNE OCUPADO POR EL SÓLIDO

DEL EMPAQUE DE LA COLUMNA, VP VOLUMEN DE LÍQUIDO EN LOS POROS DEL MATERIAL
DE EMPAQUE Y V0 VOLUMEN DE LÍQUIDO ENTRE LOS ESPACIOS DE LAS PARTÍCULAS
A) SÍLICE COMO FASE ESTACIONARIA: CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA-SÓLIDO
EL SÍLICE ES EL MÁS UTILIZADO COMO FASE

ESTACIONARIA EN HPLC DADAS LAS
VENTAJAS QUE PRESENTA:
•BARATO
•DISPONIBLES VARIOS TAMAÑOS, FORMAS,
•POROS Y ESTRUCTURA DE PARTÍCULA
•CONTIENE GRUPOS REACTIVOS Si-OH
SU PRINCIPAL DESVENTAJA ES QUE ES ALGO

SOLUBLE EN AGUA
SE PUEDE MODIFICAR QUÍMICAMENTE EL SÍLICE USADO PARA DARLE UNA SELECTIVIDAD
ESPECÍFICA A LA FASE ESTACIONARIA:
A) MODIFICACIÓN NEUTRA E HIDROFÓBICA (COLUMNA CDE SÍLICE C18 U ODS, LA MÁS USADA
B) MODIFICACIÓN NEUTRA E HIDROFÍLICA (GLICOFASE, PARA SEPARACIONES DE PROTEINAS
C) MODIFICACIÓN BÁSICA E HIDROFÍLICA (AMINOPROPILO, PARA SEPARACIONES DE AZUCARES

CROMATOGRAFÍA DE ADSORCIÓN
SE APROVECHAN LAS CARACTERÍSTICAS ADSORBENTES

DEL SÍLICE. GRACIAS A LOS GRUPOS
POLARES Si-OH, SE RETIENEN LOS
COMPONENTES MÁS POLARES
A PESAR DE ESTO, SE PUEDEN ADSORBER

IRREVERSIBLEMENTE CON EL TIEMPO AGUA
Y OTROS COMPUESTOS POLARES
SE USA UN ELUYENTE NO POLAR PARA EVITAR

INTERFERENCIAS CON LA FASE ESTACIONARIA
LA C. DE ADSORCIÓN ES ADECUADA PARA

SEPARAR MOLÉCULAS NO IONIZABLES
(POLÍMEROS, PROTEINAS)
E ISÓMEROS DE UN COMPUESTO
CROMATOGRAFÍA DE FASE INVERSA
ESTE ES EL TIPO MÁS UTILIZADO EN LA INVESTIGACIÓN. EN ESTE TIPO DE

CROMATOGRAFÍA LA FASE ESTACIONARIA ES MENOS POLAR QUE EL ELUYENTE,
POR LO QUE LOS COMPUESTOS MÁS POLARES SON LOS PRIMEROS EN SER ELUIDOS.
COMO COLUMNA SE USA SÍLICE MODIFICADO QUÍMICAMENTE LLAMADAS COLUMNAS

DE FASE ENLAZADA (BAJA LA POLARIDAD)
SE PUEDE CONTROLAR LA RETENCIÓN Y LA SELECTIVIDAD CAMBIANDO LA POLARIDAD DE

LA FASE ESTACIONARIA O BIEN EL ELUYENTE
VENTAJAS: DESVENTAJAS:
•AMPLIOS INTERVALOS DE POLARIDAD •EL SÍLICE MODIFICADO SOLO PUEDE
•ABUNDANCIA DE FASES ESTACIONARIAS USARSE EN INTERVALOS DE pH DE
•LOS SOLVENTES PARA LAS FASES MÓVILES 3-8
SON BARATOS •SE PUEDE PERDER LA CAPA MODIFICADA
*RÁPIDO EQUILIBRIO ENTRE LAS FASES ALTERANDO EL FUNCIONAMIENTO DE LA
ESTACIONARIA Y MÓVIL COLUMNA
*ANÁLISIS SIMPLE, RÁPIDO Y REPRODUCIBLE •EL MECANISMO TEÓRICO ES MUY
COMPLEJO Y NO ESTÁ TOTALMENTE
EXPLICADO
SE FORMA UNA CAPA ORGÁNICA SOBRE EL SÍLICE COMO SE MOSTRÓ ANTES, PARA FORMAR UNA
COLUMNA ODS CON GRUPOS ALQUILO DE 18 CARBONOS. SE PUEDEN ENLAZAR GRUPOS MÁS
CORTOS, CON C8 O MENOS. MIENTRAS MÁS LARGA SEA LA CADENA, AUMENTA EL TIEMPO
DE RETENCIÓN
COMO ELUYENTES EN ESTE TIPO DE CROMATOGRAFÍA SE USAN MEZCLAS DE AGUA (O BUFFERS)

CON OTROS SOLVENTES SOLUBLES AL AGUA, LOS MÁS USADOS SON METANOL, ACETONITRILO
Y TETRAHIDROFURANO. EL PODER DE ELUCIÓN AUMENTA A DISMINUIR LA POLARIDAD
SE PUEDE EVITAR LA IONIZACIÓN DE UNA MUESTRA USANDO EN EL ELUYENTE UN BUFFER
QUE IMPONGA EL pH
LA CROMATOGRAFÍA DE FASE INVERSA SE USA DE PREFERENCIA EN MUESTRAS SOLUBLES

AL AGUA, POR LO QUE SUS USOS SE EXTIENDEN A ANÁLISIS DE FARMACÉUTICA, MUESTRAS
BIOLÓGICAS, MUESTRAS AMBIENTALES, ALIMENTOS, BEBIDAS, ETC
CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IÓNICO
CON UNA FASE MÓVIL ADECUADA, EL SÍLICE PUEDE

ACTUAR COMO UN INTERCAMBIADOR IÓNICO
SUPONGAMOS QUE SE TIENE UN IÓN DE MUESTRA RNH3+, AL PASAR POR EL SÍLICE SE INTERCAMBIA
EN LA SUPERFICIE EL H+ POR EL CATIÓN RNH3+, PARA POSTERIORMENTE INTERCAMBIARSE
POR EL CATIÓN DE LA FASE MÓVIL
H+ RNH3+
RNH3+ NH4+
INFLUENCIA DE LA FUERZA IÓNICA DEL ELUYENTE
SI AUMENTA LA FUERZA IÓNICA DEL ELUYENTE SE PRESENTA UNA COMPETENCIA ENTRE LOS
IONES DEL ELUYENTE Y LA MUESTRA, POR LO QUE LOS PRIMEROS DESPLAZAN CON MAYOR
FACILIDAD A LOS ÚLTIMOS DISMINUYENDO LOS TIEMPOS DE RETENCIÓN
CROMATOGRAFÍA POR EXCLUSIÓN DE TAMAÑO
ESTA ESTÁ COMPUESTA POR LA CROMATOGRAFÍA DE PERMEACIÓN EN GEL Y LA DE

FILTRACIÓN EN GEL, SE USA SOBRETODO EN MUESTRAS INSOLUBLES EN AGUA
EN CADA CASO, LAS MOLÉCULAS DE LA MUESTRA SE SEPARAN POR TAMAÑO
LAS MOLÉCULAS GRANDES NO PUEDEN ENTRAR A LOS POROS DEL MATERIAL DE LA COLUMNA
SIENDO ELUIDOS PRIMERO, LAS PEQUEÑAS QUE SI ENTRAN SE ELUYEN AL FINAL
SE DEBE REALIZAR UNA CURVA DE CALIBRACIÓN DE LOS TAMAÑOS A SEPARAR

USANDO UNA CURVA DE log MM (LOGARITMO DE MASA MOLECULAR VS VOLUMEN DE ELUYENTE)
Y ESTÁNDARES DE DIFERENTES MM.
DETECTORES
A) DETECTOR ULTRAVIOLETA VISIBLE
FILTRO O ELUENTE DE
MONOCROMADOR LA COLUMNA ES EL MÁS COMUN ACOPLADO A HPLC, SE USA
CUANDO LOS COMPONENTES ABSORBEN
RADIACIÓN UV-VISIBLE, COMO COMPUESTOS
AROMÁTICOS, ALQUENOS, MOLÉCULAS
CON ENLACES C-O, C-N, C-S. PUEDEN SER
DE LONGITUD DE ONDA FIJA
O VARIABLE (ARREGLO DE DIODOS)
FUENTE
DETECTOR
DE RADIACIÓN
CELDA DE
FLUJO
B) DETECTOR DE FLUORESCENCIA
MONOCROMADOR FOTOMULTIPLICADOR
1000 VECES MÁS SENSITIVA QUE EL

ESPECTRO UV-VISIBLE, PARA COMPUESTOS
O DERIVADOS QUE PRESENTAN PROPIEDADES
FLUORESCENTES.
MONOCROMADOR SE HACE PASAR LUZ A UNA LONGITUD DE
ONDA PARA EXITAR ELECTRONES DE LA
MUESTRA, LA RADIACIÓN EMITIDA ES
DETECTADA EN TÉRMINOS DEL ÁNGULO
ELUENTE CELDA DE
FLUJO
FUENTE DE RESPECTO A LA FUENTE.
READIACIÓN
(LÁMPARA DE
Xe)
C) DETECTOR DE ÍNDICE DE REFRACCIÓN
CELDA DE
LA MUESTRA
LENTES LENTES SE MIDE LA DIFERENCIA EN EL ÍNDICE DE
RECOMBINADOR REFRACCIÓN ENTRE EL ELUENTE Y UNA
REFERENCIA DEL SOLVENTE PURO.
SE ESPERA QUE NINGÚN COMPONENTE
REFRACTE CERCA DE LA REFERENCIA.
NO ES MUY SENSITIVO.
SEPARADOR FOTOMULTIPLICADOR
CELDA DE
REFERENCIA
D) DETECTOR AMPEROMÉTRICO
ENTRADA DE
POTENCIOSTATO ELUENTE
SE USAN PARA DETECTAR ESPECIES
ELECTROACTIVAS. SE IMPONE UN POTENCIAL
FIJO Y SE REGISTRA LA CORRIENTE ENTRE
DOS ELECTRODOS. LA CORRIENTE CAMBIA
AL PASAR POR ENTRE LOS ELECTRODOS
LA MUESTRA, LA CUAL SUFRE UNA REACCIÓN
CONTRAELECTRODO REDOX.
ELECTRODO DE ELECTRODO DE
REFERENCIA TRABAJO
EJEMPLO: SEPARACIÓN DE UNA MUESTRA ORGÁNICA
SE DESEA SEPARAR UNA MUESTRA QUE CONTIENE 4 HIDROCARBUROS AROMÁTICOS DE

IMPORTANCIA AMBIENTAL, NAFTALENO, FLUORENO, ANTRACENO Y PIRENO, ¿CUÁL
ES LA MEJOR TÉCNICA)
•PERMEACIÓN POR GEL

•FASE INVERSA
•INTERCAMBIO IÓNICO
ELECCIÓN DE COLUMNA, LAS COLUMNAS DISPONIBLES SON:
•GEL DE SÍLICE SIN MODIFICAR

•C18, FASE ENLAZADA
•FASE ENLAZADA, AMONIO CUATERNARIO
ELECCIÓN DEL DETECTOR, LOS DETECTORES DISPONIBLES SON:
•UV-VISIBLE
•AMPEROMÉTRICO
•ÍNDICE DE REFRACCIÓN
ELECCIÓN DEL ELUYENTE, ENSAYO Y ERROR

DE LA SELECCIÓN DEL ELUYENTE, CAMBIAR SU FUERZA PARA MEJORAR LA RESOLUCIÓN

CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA Y EN PAPEL
LA SEPARACIÓN NO SOLO SE PUEDE LLEVAR A CABO EN COLUMNAS, LA FASE ESTACIONARIA

PUEDE SER UNA PEQUEÑA CAPA (mm DE ESPESOR) SOBRE LA SUPERFICIE DE
UNA LÁMINA SOPORTE (CAPA FINA) O EN UNA LÁMINA DE PAPEL DE CELULOSA.
EN LA PLACA SE AGREGAN UNAS GOTAS DE MUESTRA DISUELTA EN ELUYENTE A CIERTA

DISTANCIA DE LA BASE. SE DEJA QUE SEQUE. POSTERIORMENTE SE SUMERGE LA BASE
DE LA PLACA EN FASE MÓVIL, LA CUAL ASCIENDE POR EFECTO DE CAPILARIDAD,
ALCANZANDO A LA MUESTRA SEPARANDO SUS COMPONENTES

Curso Cromatografia 2005

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CURSOS BÁSICOS

MICHAEL TSWETT REALIZÓ LA PRIMERA SEPARACIÓN EN COLUMNA

ES UN MÉTODO DE SEPARACIÓN DE ESPECIES QUÍMICAS PARA

J. Chem. Ed. 36, 144, 1959

ELUYENTE COLUMNA O PLACA

GASTO: RAPIDEZ DE LA FASE MOVIL EN

TIEMPO DE RETENCIÓN tRI: TIEMPO QUE TOMA

ANCHO DE PICO EN LA BASE WI: DISTANCIA DE

ANCHO TOTAL A LA MITAD DEL PICO

TIEMPO NETO DE RETENCIÓN (PICO i) = tRi – tM

FACTOR DE RETENCIÓN O DE CAPACIDAD (PICO i) ki = tRi – tM/ tM

BANDA CON FORMA GAUSSIANA

EFICIENCIA (N): MEDIDA DE LA RETENCIÓN RELATIVA

DEPENDE DE FACTORES DE CONSTRUCCIÓN, EMPAQUE DE

RESOLUCIÓN Rs: MEDIDA CUANTITATIVA DEL GRADO DE

DEPENDE DE LA ELECCIÓN DE LA FASE ESTACIONARIA,

Rs= 0.5 Rs= 0.75

Cambio de composición del eluyente Cambio de empaque de columna

B) TEORÍA DE LOS PLATOS

SE HACE LA COMPARACIÓN DE UNA COLUMNA CROMATOGRÁFICA CON UNA ANTIGUA

SE CONCIBE A LA COLUMNA CROMATOGRÁFICA COMO UNA SERIE DE CAPAS ESTRECHAS

DURANTE LA ELUCIÓN, SE PRODUCE UN EQUILIBRIO EN CADA PLATO DE LA MUESTRA

EL NÚMERO DE PLATOS TEÓRICOS SERÁ ENTONCES PROPORCIONAL A LA EFICIENCIA

DONDE L ES LA LONGITUD DE LA COLUMNA Y H ES LA ALTURA DE PLATO

LA EFICIENCIA SERÁ ENTONCES INVERSAMENTE PROPORCIONAL AL ESPESOR (ALTURA)

C) TEORÍA CINÉTICA DE LA CROMATOGRAFÍA:

A DIFERENCIA DE LA TEORÍA DE LOS PLATOS, CONSIDERA QUE EL EQUILIBRIO NO ES

LA FORMA DEL CROMATOGRAMA DEPENDE DE LA DIFUSIÓN DEL SOLUTO POR LA COLUMNA,

SI CONSIDERAMOS TODOS LOS MECANISMOS ANTERIORES, SE DEDUCE LA ECUACIÓN

A, B Y C SON CONSTANTES DEPENDIENTES DE LA FASE ESTACIONARIA Y MÓVIL Y v ES LA

CONTRIBUCIÓN DEL PARÁMETRO A:

FALTA DE HOMOGENEIDAD EN LAS COLUMNAS PROVOCA

SE PRODUCE ENSANCHAMIENTO DE LAS BANDAS

PARA EVITAR LOS CANALES SE RECOMIENDA:

CONTRIBUCIÓN DEL PARÁMETRO B:

LAS MOLÉCULAS MIGRAN HACIA

SI EL GASTO ES LENTO, HAY UNA ALTA

CONTRIBUCIÓN DEL PARÁMETRO C:

LAS MOLÉCULAS DIFUNDE PERPENDICULARMENTE

SE PRODUCE ENTONCES EL PROCESO DE ADSORCIÓN

ESTOS PROCESOS REQUIEREN DE CIERTO TIEMPO PARA

SI EL GASTO ES MUY RÁPIDO, LA DIFUSIÓN SERÁ

SIMILARMENTE, SI EL PROCESO DE ADSORCIÓN

GRÁFICOS DE LOS FACTORES DE LA ECUACIÓN DE VAN DEEMTER:

LA PRECISIÓN Y LOS LÍMITES DE DETECCIÓN DEPENDEN EN GRAN MEDIDA DEL DETECTOR

SE PUEDE RECOLECTAR EL VOLUMEN DE

CUANTIFICACIÓN MEDIANTE TITULACIONES

CUANDO LA SEÑAL DE LA RESPUESTA ES LINEAL A LA

UNA MANERA APROXIMADA DE MEDIR EL ÁREA BAJO LA CURVA

TÉCNICA CROMATOGRÁFICA PARA LA SEPARACIÓN DE COMPUESTOS ORGÁNICOS E INORGÁNICOS

DEPENDIENDO DE LA FASE ESTACIONARIA, SE TIENE CROMATOGRAFÍA GAS-LÍQUIDO O

SISTEMA DE INYECCIÓN DIRECTA DE SEPARACIÓN

SE EMPACA CON UN SOPORTE INERTE, USUALMENTE

PARA MUESTRAS MUY POLARES, SE REQUIERE

TIENEN UN DIÁMETRO INTERNO DE MENOS DE 1 mm

DOS TIPOS: COLUMNAS EMPACADAS CON PARTÍCULAS

UNA VEZ OPTIMIZADOS AUMENTA LA RAPIDEZ DEL

EL DIÁMETRO INTERNO DE LA COLUMNA AFECTA

A MENOR DIÁMETRO, MAYOR EFICIENCIA Y RESOLUCIÓN

SIN EMBARGO, AUMENTA EL COEFICIENTE DE PARTICIÓN k,

SE PUEDE AUMENTAR ENTONCES SIN PROBLEMAS

D) INFLUENCIA EN LA LONGITUD DE LA COLUMNA

EL INCREMENTO DE LA LONGITUD DE LA COLUMNA INCREMENTA