TECNICAS HISTOLOGICAS

Son los diferentes procedimientos, que se usan para mantener, en lo posible, el

aspecto de las estructuras histolgicas del organismo vivo, transformndolas
en delgados cortes coloreados que puedan posteriormente ser observados al
microscopio.
ETAPAS

FIJACION
DESHIDRATACION
ACLARAMIENTO
INFILTRACION E INCLUSION
SECCION O CORTE
COLORACION
MONTAJE

FIJACION
En este procedimiento se introduce el tejido en sustancias que retardan sus
alteraciones y conservan su configuracin normal
FORMALDEHIDO AL 10%
DESHIDRATACION
Consiste en introducir el tejido fijado en frascos de alcohol absoluto a
concentraciones ascendentes y tiempos determinados, para eliminar el agua.
ACLARAMIENTO
Este paso sustituye el alcohol por el xilol (vuelve transparente al tejido), que es
un liquido miscible con la parafina.
INFILTRACION E INCLUSION
Es la formacin del bloque de parafina (mediante la inclusin del tejido en
esta) recibiendo el nombre de taco
SECCION O CORTE
Consiste en cortar el tejido en secciones lo suficientemente delgadas para
permitir el paso de la luz, el corte se realiza con un micrtomo
MONTAJE Y TINCION

Los cortes se colocan sobre un portaobjetos y luego se tien mediante

coloraciones hidrosolubles que permiten diferenciar los diversos componentes
celulares

Mejor respuesta: El microscopio electrnico de transmisin trabaja de manera similar al

microscopio de luz excepto que usa electrones en lugar de haces luminosos. Necesita una muestra
cortada en porciones de grosor minsculo para que al baarla con electrones muchos de ellos
puedan atravesarla (otros sern reflejados, desviados o absorbidos) y se forme una imagen con
ellos en una pantalla sensible colocada del otro lado.
En cambio el de barrido se basa tambin en arrojar electrones sobre la muestra, pero con la
diferencia de que dicha muestra se cubre antes de una minscula capa de metal que permite que
dichos electrones se reflejen y se dirigan a un detector que mide la intensidad y direccin de dichos
electrones, gracias a esto la muestra no tiene que ser tan delgada y la imagen que resulta, a pesar
de no tener tanto aumento como el de transmisin tiene mejor detalle y permite apreciar mejor
muestras en tres dimensiones.

Mejor respuesta: Todos estos microscopios dejan la optica atrs para imponerse con la
electrnica. tanto el microscopio electronico de transmision y barrido utilizan un haz de electrones
que atraviesan la muestra, es lo que hace que su poder de aumento y resolucin sea mil veces
mayor que uno ptico que solo utiliza lentes.
MET (Microscopio electrnico de Transmisin): Este microscopio utiliza un fuerte haz de electrones
que atraviesa una muestra determinada. El sistema electrnico de este microscopio hace toma dos
tipos de muestras, los electrones que pasan a travs de la muestra y los que rebotan, as solo se
pueden obtener imgenes a dos colores, a pesar de que posteriormente se le aadan coloraciones
para realizar esas fotos tan bonitas de los libbros. El resultado de estas fotos son como cortes de
las muestras, lisos y sin profundidad pero con una alta definicin.
MEB (Microscopio electrnico de Barrido): Su funcionamiento es muy parecido al anterior pero su
maquinaria es mas complicada y mas aparatosa. Este microscopio crea un barrido de la muestra,
es decir, es como una onda que recorre la superficie de la muestra y recrea una imagen perfecta
en 3 dimensiones. Es muy utlizado para las investigaciones criminalisticas en el anlisis de balistica
por ejemplo. Las imgenes tambien se observan en blanco y negro.

Mejor respuesta: El MICROSCOPIO ELECTRNICO DE TRANSMISIN (TEM) :

- Se utiliza para ver secciones o cortes de tejidos.
- Dirige un haz de electrones hacia el objeto que se desea aumentar; una parte de los electrones
rebotan o son absorbidos por el objeto y otros lo atraviesan formando una imagen aumentada de la
muestra.
- Para utilizar un TEM debe cortarse la muestra en capas finas con un grosor entre 50 a 200
nanmetros. Dicha muestra se coloca en una redecilla que se untroduce en el tubo con una pieza
alagargada que se introduce por un lateral
- Para el funcionamiento de este microscopio se utiliza un haz de electrones, obtenido desde una
lmpara especial de tungsteno.
- El tubo tiene vaco en su interior, para impedir que nada dificulte el paso de los electrones. Un
fallo en este vaco ocasiona la aparicin de cuerpos extraos en el visor.
- Luego de ser enfocados por las lentes electromagnticas, los electrones inciden sobre la muestra,
formando la imagen que se obtiene en blanco y negro, la cual puede proyectarse sobre una
pantalla especial o pelcula fotogrfica.
- El TEM examina partes grandes de la muestra.
- Otiene imgenes en dos dimensiones, que luego pueden ser plasmadas en fotografas.
- ste es el tipo de microscopio electrnico ms utilizado en investigacin, ya que obtiene muy
buenos resultados y tiene gran potencia.
MICROSCOPIO ELECTRNICO DE BARRIDO (SEM):
- Permite la observacin de superficies sin la necesidad de realizar cortes microscpicos,
explorando la superficie de la imagen punto por punto.
- Su funcionamiento se basa en recorrer la muestra con un haz muy concentrado de electrones, de
forma parecida al barrido de un haz de electrones por la pantalla de una televisin.
- Los electrones del haz pueden dispersarse de la muestra o provocar la aparicin de electrones
secundarios, ambos son recogidos y contados por un dispositivo electrnico situado a los lados de
la muestra. Cada punto ledo de la muestra corresponde a un pxel en un monitor de televisin.
Cuanto mayor sea el numero de electrones contados por el dispositivo, mayor ser el brillo del pxel
en la pantalla.
- Se genera una imagen con apariencia tridimensional, que permite estimar parmetros celulares
como tamao y forma, dndole ventajas en este sentido sobre el TEM.
- Las desventajas del SEM es su menor capacidad de aumento ya que slo puede a unas 100000

veces y tambin tiene una resolucin 1000 veces menor que el TEM. Eso y que slo permite ver el
exterior de la muestra.
- Tambin se han desarrollado otro tipo de microscopio electrnico: microscopio electrnico de
barrido y transmisin el cual combina los elementos de un SEM y un TEM, pudiendo mostrar los
tomos individuales de un objeto.

Mejor respuesta: Un microscopio ptico es un microscopio basado en lentes pticas. El

desarrollo de este aparato suele asociarse con los trabajos de Anton van Leeuwenhoek. Los
microscopios de Leeuwenhoek constaban de una nica lente pequea y convexa, montada sobre
una plancha, con un mecanismo para sujetar el material que se iba a examinar (la muestra o
espcimen). Este uso de una nica lente convexa se conoce como microscopio simple, en el que
se incluye la lupa, entre otros aparatos pticos
Un microscopio electrnico es un microscopio que utiliza electrones en vez de fotones o luz visible
para formar imgenes de objetos diminutos. Los microscopios electrnicos permiten alcanzar una
capacidad de aumento muy superior a los microscopios convencionales (hasta 500.000 aumentos
comparados con los 1000 aumentos de los mejores microscopios pticos) debido a que la longitud
de onda de los electrones es mucho menor que la de los fotones.
uno optico como su nombre lo indica usa lentes para aumentar
uno electronico usa un rayo de electrones q rebota en los objetos de acuerdo a esa informacion la
pantalla crea una imagen del objeto
uno optico aumenta hasta 1000 mientras q uno elctronico parece ser q 90000 veces
Microscopio ptico: el microscopio consta de un tubo en cuyos extremos se sitan dos lentes:
1) Ocular, lente prxima al ojo
2) Objetivo, lente cercana al objeto de estudio
Platina: plataforma donde se coloca el portaeobjetos con la muestra. La fuente luminosa es la luz
natural, normalmente bombilla, antiguamente se usaban espejos. Tambin hay lentes que
condensan la luz. Todo el soporte se denomina estatipo. Hay dos tipos de tornillos que van a
permitirnos un perfecto enfoque: tornillo micrometrico y tornillo macromtrico.

El nmero de aumentos total es el producto de los aumentos del ocular y objetivo. Los objetivos,
normalmente 4, se colocan en el revlver, con aumentos generalmente de 3, 10, 30 y 100. El
aumento del ocular suele ser x10 o x15.
Todas las lentes tienen algn defecto, son las conocidas aberraciones. Tipos de aberraciones:
- Esfrica: no es posible enfocar homogneamente por toda la superficie.
- Cromtica: aparecen alteraciones en el contorno de los objetos observados.
1) Microscopio ptico de luz ordinaria. La calidad de la imagen observada depende de varios
parmetros, pero sobre todo del poder de resolucin = capacidad del microscopio de ver la
distancia entre dos puntos del objetivo. A mayor calidad del microscopio mayor poder de
resolucin. El poder de resolucin depende del ngulo de la luz incidente y de otro factor.
Existen varios tipos en funcin de la orientacin de la luz que utilizamos, y dependiendo tambin
del tipo de microorganismo que queramos observar:
- Microscopio ptico de campo claro: el ms utilizado, observamos en l un fondo luminoso, color
claro pero en el organismo tenemos un ligero color oscuro (vemos las sombras). Si la luz no
encuentra obstculos en su camino, se divisa el campo claro.
- Microscopio ptico de campo oscuro: al contrario, el fondo es de color oscuro pero lo que
observamos, es decir, el microorganismo est claro. Se consigue colocando en el condensador una
anilla que permite el paso de unos rayos de luz que sern enviados, reflejados, de tal manera que
si no encuentran nada no entran en el objetivo, no se ve nada.
Microscopio ptico de contraste de fases: Las estructuras internas de las clulas presentan
diferentes ndices de refraccin, y tambin diferente al medio que les rodea, con lo cual es con
estas diferencias con las que funciona el microscopio de contraste de fases. Se emplean objetivos
de fase y condensadores especiales, que hacen lo contrario que los normales.
Lla luz ordinaria al pasar por este condensador se desfasa si no encuentra nada en su camino,
campo claro. Pero si estas ondas desfasadas se encuentran con algo, se desfasan an ms en
funcin del ndice de refraccin. Este fenmeno no es un campo oscuro, es gris pero con diferentes
tonalidades en funcin de la estructura. Para el caso de las bacterias, al haber pocos orgnulos
este microscopio resulta muy poco til. En cambio, con las levaduras o los hongos filamentosos se
produce una mejora notable en la observacin. La utilizacin ms comn para cada uno de estos
tipos es la siguiente:
- CAMPO CLARO: su ampliacin mxima til son 1000-2000. La muestra, aparece teida o no del
color del colorante utilizado. Se usa generalmente para ver caractersticas morfolgicas de
bacterias, hongos, algas y protozoos.
- CAMPO OSCURO: su ampliacin mxima til son 1000-2000. La muestra aparece brillante, sobre
un fondo oscuro (generalmente no se tie). Se usa para ver microorganismos que muestran alguna
caracterstica morfolgica en estado vivo y en suspensin. (flagelos o cpsida por ejemplo).
- FLUORESCENCIA: su ampliacin mxima til son 1000-2000. En la muestra se ven bacterias

brillantes y coloreadas, con el color del compuesto fluorescente. Estos compuestos transforman la
luz,

Para su accion se debe colocar la muestra en un tubo de vacio(sin aire) y hacer correr en el mismo
un haz de electrones.
Por medio de electroimanes(Reemplazan a las lentes del microscopio optico) actuar sobre los
electrones, para asi producir una imagen aumentada.
En el MET(MICROSCOPIO ELECTRONICO DE TRANSMISION) los electrones atraviesan el
preparado y son leidos sobre una placa fluorescente.
En el MEB(MICROSCOPIO ELECTRONICO DE BARRIDO) los electrones no pasar el preparado y
rebotan sobre el mismo siendo estos leidos por un detector que lo transforma en imagen.Se llama
de barrido pues se "barre" un haz de electrones sobre el preparado. Asemeja a como se lo hace en
una fotocopiadora.