PRCTICA DE LABORATORIO N 15

AISLAMIENTO Y CUANTIFICACION DEL GLUCGENO HEPTICO

OBJETIVO
Determinar y cuantificar los niveles de glucgeno heptico de los pollos
durante los estados de ayuno y con dieta balanceada (normal).
MARCO TEORICO

El glucgeno es la forma principal de almacenaje de carbohidratos en los

animales, se encuentra en proporcin mayor en el hgado (hasta 6%) y en el
msculo, donde rara vez excede de 1%. Sin embargo, debido a su masa mayor, el
msculo almacena tres a cuatro veces la cantidad de glucgeno que tiene el
hgado como reserva. Al igual que el almidn, es un polmero ramificado de alfaglucosa .
el glucgeno es un polisacrido de la D-glucosa con enlaces alfa 1-4, sin
embargo, est ms ramificado, y su molcula es ms reducida que la
amilopectina; las ramificaciones aparecen cada 8 a 12 residuos de glucosa.
El glucgeno puede aislarse de los tejidos animales digirindolos con
disoluciones calientes de KOH en las que los enlaces no reductores alfa 1-4 y alfa
1-6 son estables. (5)
El peso molecular del glucgeno varia ampliamente segn el grado de
ramificacin, y el tamao global. En promedio se encuentra entre 2 y 5 millones.
FUNDAMENTO
El tejido heptico en presencia de una hidrlisis alcalina destruye a las protenas y
el glucgeno queda intacto. El glucgeno es precipitado por su baja solubilidad
con el alcohol, luego se resuspende el glucgeno y se cuantifica expresado en mg
de glucosa por gramo de tejido heptico (previa hidrlisis cida con cido sulfrico).
El cido Sulfrico del reactivo Antrona hidroliza al glucgeno en unidades de glucosa,
la cual es convertida en hidroximetil furfural por el mismo cido y reacciona con
antrona para dar un compuesto coloreado.

Reactivo de antrona en acido sulfrico

MATERIALES

Tubos de ensayo, pipetas, centrifuga, fotocolormetro

Hgado de dos pollos(uno de pollo con alimentacin normal y otro sometido a
ayuno durante 24 horas)
Solucin de hidrxido de Potasio (KOH) 30%
Alcohol Etlico (CH3CH2 OH) 95 %
Estandar de Glucosa 5 mg /100mL
Reactivo Antrona 0.2% en cido Sulfrico (H2SO4 ) concentrado

PROCEDIMIENTO
Se toman dos pollos, uno en ayunas y otro en estado normal de alimentacin.
Se les sacrifica, y se le extrae el hgado rpidamente y se coloca en bao de
hielo.
Separar y pesar 0.5 a 1.0 g de cada hgado picar finamente, trasvasar a un
homogenizador con 4 mL de solucin de hidrxido de potasio al 30%, y
llevar a Bao de agua hirviente hasta hidrlisis de los tejidos durante 30
minutos
Enfriar a chorro de agua fra y agregar 7 mL de etanol absoluto refrigerado
para precipitar
Centrifugar a 3,000 r.p.m. por 10 minutos
Decantar el sobrenadante y disolver el residuo (glucgeno) con 100 ml de
agua destilada

Un pollo en ayunas y un pollo comido

Disponer 6 tubos de ensayo y proceder de acuerdo al siguiente cuadro

1 blanco
2 ayunas
3 alimenta 4 estndar
Glucgeno ais (ml)
0.50
0.50
Patrn de glucosa (ml)
0.50
Agua destilada (ml)
2.00
1.50
1.50
1.50
Rect, antrona (ml)
4.00
4.00
4.00
4.00

5 estndar

6 estndar

1.00
1.50
4.00

1.50
1.50
4.00

El reactivo de antrona debe aadirse rpidamente, de tal manera que el chorro caiga en
el centro del tubo. Mezclar rpidamente, colocar los tubos en bao de agua hirviendo
durante 10 minutos, enfriar y Leer la absorbancia a 620 nm en el fotocolormetro.
Realizar los clculos correspondientes.

Calculos.
Determnanos las concentraciones de glucosa en los tubos estndar
Sabemos que un decilitro es 1dl= 100ml

5mg existen 100ml

Entonces

X 0.5ml

X=0.025mg de glucosa el estndar 4

5mg existen 100ml
Entonces

X 1.0ml

X=0.050mg de glucosa el estndar 5

5mg existen 100ml
Entonces

X 1.5ml

X=0.075mg de glucosa el estndar 6

Leer la absorbancia a 620 nm en el fotocolormetro

Tubos de muestra

absorvancias

Pollo en ayunas

0.2514

Pollo que comi

0.2696

Estndar 4

0.3630

Estndar 5

0.3740

Estndar 6

0.3999

Sabemos que se usara el estndar 4 porque contiene la misma concentracin

que el tubo de los pollos en estudio
Glucosa mg/dl = Abs. Desconocido * 5mg/dl
Abs. Estndar

g = P*F seria

=0.4485*5.0mg/dl =
0.4440

:101mg/dl

contraciones absorbancia
0,03462
0,2514
0,03713
0,2696
0,025
0,363
0,05
0,374
0,075
0,3999

Absorbancias Vs concentraciones de glucosa mg/ml

0.405
0.4
0.395
0.39
0.385
Series1

0.38

Linear (Series1)

0.375
0.37
0.365

y = 0.738x + 0.3421

0.36
0.355
0

0.02

0.04

0.06

0.08

CUESTIONARIO
1. Calcule de la concentracin de glucgeno en cada uno de las experiencias
(hgado del pollo con alimentacin normal y en ayunas) y exprselos en mg de
glucosa / g de tejido heptico.

2. Comprelos los valores obtenidos con los valores normales que indica en la
referencia (Indique: el ttulo, autor, edicin, captulo y pgina).
3. Mediante que reaccin qumica se puede diferenciar el almidn de glucgeno.
Escriba las estructuras qumica del almidn y del glucgeno.
4. Que funcin cumple el glucgeno en el organismo
5. KOH 30% en la experiencia.