Documentos de Académico
Documentos de Profesional
Documentos de Cultura
Farmacopea Argentina Primer Volumen
Farmacopea Argentina Primer Volumen
ARGENTINA
OCTAVA EDICIN
VOLUMEN
I
FARMACOPEA
ARGENTINA
OCTAVA EDICIN
FARMACOPEA
ARGENTINA
OCTAVA EDICIN
Presidente de la Nacin
Dra. Cristina Fernndez de Kirchner
Jefe de Gabinete de Ministros
Dr. Anibal Fernndez
Ministro de Salud de la Nacin
Dr. Juan Lus Manzur
Secretara de Polticas, Regulacin e Institutos
Dr. Gabriel Eduardo Yedlin
Administracin Nacional de Medicamentos, Alimentos y Tecnologa Mdica
Dr. Carlos A. Chiale
Instituto Nacional de Medicamentos
FARMACOPEA
ARGENTINA
OCTAVA EDICIN
VOLUMEN
I
COMISIN PERMANENTE
FARMACOPEA ARGENTINA
Comisin Permanente de la Farmacopea Argentina
PRESIDENTE: Dr. Carlos A. Chiale
DIRECTOR EJECUTIVO: Bioq. y Farm. Hctor Giuliani
SECRETARA TCNICA:
Farm. Melina I. Assalone
Farm. Melina A. Dal Mas
Farm. Mara Celeste De Angelis
VOCALES:
Dr. Sem M. Albnico
Dr. Arnaldo Luis Bandoni
Dr. Pablo Bazerque
Dr. Mario A. Copello
Dr. Juan M. Dellacha
Dr. Teodoro S. Kaufman
Dr. Eloy Mandrile
Dr. Rubn Manzo
Dra. Mara Teresa Pizzorno
Dr. Edgardo Poskus
Dr. Modesto Rubio
Dr. Norberto A. Terragno
FARMACOPEA ARGENTINA
OCTAVA EDICIN
Primer Volumen
Prlogo
Presentacin
Objetivos
Consideraciones Generales
Mtodos Generales de Anlisis
Textos de Informacin General
Cuarto Volumen
Subcomisiones Tcnicas, composicin
Reactivos y Soluciones
Segundo Volumen
Especificaciones de Reactivos
Soluciones
Reguladoras
Colorimtricas
Indicadoras
Tercer Volumen
Subcomisiones Tcnicas, composicin
de Reactivos
Lmites
Apartado de Fitoterpicos
Tablas
Apartado de Hemoderivados
ndice alfabtico
PRLOGO
La Farmacopea Argentina o Codex Medicamentarius Argentino es el cdigo oficial donde se describen las
drogas, medicamentos y productos mdicos necesarios o tiles para el ejercicio de la medicina y la farmacia,
especificando lo concerniente al origen, preparacin , identificacin, pureza, valoracin y dems condiciones
que aseguran la uniformidad y calidad de las propiedades de los mismos.
La farmacopea no es esttica sino que mantiene un continuo estado de actualizacin convirtindose en un
tratado que construye calidad de la mano con los adelantos tecnolgicos en constante revisin.
Lejos quedaron los tiempos de los primeros intentos para la reglamentacin y control de drogas y
medicamentos en nuestro pas; se remontan al 9 de abril de 1822. En esta fecha el Gobernador Martn
Rodrguez y su Ministro de Gobierno, Bernardino Rivadavia, mediante un decreto, reglamentaron el ejercicio de
la Medicina y la Farmacia, estableciendo que la elaboracin de las medicinas en las boticas ser en todo
arreglada a la Farmacopea Espaola cuarta edicin . La influencia de la cultura francesa en la formacin
mdico farmacutica de aquella poca, hizo que se adoptara posteriormente la Farmacopea Francesa.
Desde su fundacin en 1856, la Asociacin Farmacutica Bonaerense, entidad origen de la actual Academia
Nacional de Farmacia y Bioqumica, trabaj afanosamente para elaborar una Farmacopea Nacional, llegando
a proponer a las autoridades dos proyectos, el de Miguel Puiggari en 1881 y el de Estanislao Zubieta, publicado
en 1880 con el nombre: Formulario Original y Magistral o F armacopea Argentina. Aunque no l legaron a
oficializarse en el ao, estos antecedentes sirvieron para apresurar la decisin del Poder Ejecutivo Nacional de
satisfacer esa sentida necesidad.
Muchos nombres de notables investigadores, cientficos y docentes, han quedado ligados a la elaboracin de
las sucesivas ediciones demostrando que un calificado recurso humano sera el sostenedor a travs del tiempo
del proyecto Farmacopea
As comenz la historia que se convirti en una palpable realidad y hoy se traduce en una Comisin
Permanente y 21 subcomisiones tcnicas integradas por aproximadamente 300 profesionales quienes son los
artfices del actual proyecto que ubica a la Argentina entre los pases que concientemente saben y proclaman
que la Farmacopea establece estndares de calidad para los medicamentos contribuyendo de esta manera a
velar por la salud de la poblacin.
Presidente
Farmacopea Argentina
PRESENTACIN
En el ao 2003 se public un primer volumen con el propsito de completar anual e ininterrumpidamente
con otros tres volmenes la Sptima Edicin. Si bien se cumpli con el objetivo, debido al tiempo transcurrido,
a la actualizacin de los equipos tcnicos de la Autoridad Sanitaria, habindose incorporado la Administracin
Nacional de Medicamentos, Alimentos y Tecnologa Mdica al Sistema de Inspecciones PIC/S (Pharmaceutical
Inspection Cooperation Scheme), siendo Autoridad Reguladora Nacional de Medicamentos de Referencia de la
Organizacin Panamericana de la Salud y teniendo en cuenta los avances cientficos y tecnolgicos, hemos
credo conveniente presentar a sta como una nueva Edicin.
Esta Octava Edicin que, por lo tanto incluye las actualizaciones del volumen publicado de la Sptima
Edicin y los volmenes: segundo, tercero y cuarto, son el resultado del trabajo de actualizacin y revisin
constante realizado por los profesionales que componen la Comisin Permanente y las subcomisiones asesoras,
convocados especficamente con la finalidad de dotar a nuestro pas de un material de referencia acorde con los
ms modernos requisitos en la materia.
Esta Edicin en su conjunto, es el fruto de una rigurosa evaluacin de las temticas presentes en distintas
farmacopeas, monografas, mtodos analticos, disposiciones reglamentarias, trabajos cientficos y experiencias
personales del grupo de expertos.
Gracias a l a reflexin, el debate y el dilogo permanente con las subcomisiones tcnicas, la Comisin
Permanente ha e stablecido los criterios y metodologas que aseguran la calidad de los medicamentos,
entendiendo que el aseguramiento de su calidad es un pilar bsico y prioritario para mejorar la salud de la
poblacin. En esta tarea se ha sentido acompaada por un sinnmero de interlocutores y ha di sfrutado del
estmulo generado por los propios deseos de lograr un producto acorde con la responsabilidad que comparte.
Es por ello que confiamos en que la continuidad del dilogo sea la base ms slida para lograr la excelencia
de este emprendimiento que constituye uno de sus mayores compromisos con la sociedad.
Director Ejecutivo
Farmacopea Argentina
FARMACOPEA ARGENTINA
OBJETIVOS
La finalidad principal de la Farmacopea Argentina es contribuir a pr omover la salud de la
poblacin, estableciendo parmetros de calidad para los productos empleados en la elaboracin de
medicamentos. Las normas y especificaciones contenidas en esta publicacin constituyen un elemento
de consulta indispensable para la Autoridad Sanitaria, para los elaboradores, para los profesionales
de la salud, investigadores y docentes, todos ellos involucrados en el aseguramiento de la calidad de
los medicamentos para su empleo seguro por parte del paciente.
Sin embargo, construir la calidad de los medicamentos ya sea determinando las especificaciones y
los controles de calidad que deben cumplirse, as como los lmites de impurezas y los productos de
degradacin, etc., es una e sforzada tarea que slo pueda llevarse adelante en virtud del trabajo
mancomunado de distintos sectores nucleados por una perspectiva sanitaria compartida.
Farmacuticos, Qumicos, Bioqumicos, Ingenieros y Mdicos, contribuyen con su idoneidad en forma
permanente para asegurar esas premisas.
Secretara Tcnica
Farmacopea Argentina
Revisores Tcnicos
Farm. Compagnucci, Mara Eugenia; Gear,
Jorgelina; Bioq. Martinez, Andrea Vernica;
Martinez, Valeria Soledad.
Agradecimientos
Dra. Silvia Boni, Farm. Patricia Zubata, Dra. Silvia
Lavaselli, Farm. Soledad Risso Patrn y Sra.
Giovanna Sibay Nughes por su colaboracin en el
captulo 1050. Formas Farmacuticas.
Farm. Mnica Cordera y Farm. Isabel E. Rivadulla
por su colaboracin en el captulo 1015. Buenas
prcticas de almacenamiento, distribucin y
transporte.
Lic. Ana Mara Chan y Mara Jos Arrechea por su
colaboracin en el captulo 345. Ensayo de
Salmonella/fraccin microsomal (Test de Ames)
para deteccin de mutagenicidad.
A los Laboratorios que colaboraron en la presente
Edicin.
FARMACOPEA ARGENTINA
OCTAVA EDICIN
PRIMER VOLUMEN
NDICE GENERAL
Consideraciones Generales
Mtodos Generales de Anlisis
<10> - Anlisis estadstico de resultados de
ensayos biolgicos
<300> - Electroforesis
<310> - Ensayo de disgregacin
<320> - Ensayo de disolucin
<330> - Ensayo de endotoxinas bacterianas
<80> - Conservantes
<100> - Cromatografa
<700> - Polarografa
<710> - Sales de bases orgnicas nitrogenadas
<720> - Termmetros
<730> - Titulacin con nitrito
<740> - Uniformidad de unidades de
dosificacin
<745> - Vacunas de uso humano
<750> - Valoracin de esteroides
<760> - Valoracin iodomtrica de antibiticos
beta-lactmicos
<770> - Valoracin microbiolgica de
antibiticos
<780> - Volumetra
Textos de Informacin General
<1005> - Agua Calidad Farmacutica
<1013> - Buenas prcticas de dispensacin en
la farmacia oficinal comunitaria y
hospitalaria
<1015> - Buenas prcticas de almacenamiento,
distribucin y transporte
<1020> - Buenas prcticas de fabricacin para
elaboradores, importadores/
exportadores de medicamentos
<1025> - Buenas prcticas para la manipulacin
de medicamentos citostticos
endovenosos en centros asistenciales
<1027> - Buenas prcticas de preparacin de
medicamentos magistrales
<1030> - Criaderos de pollos libres de
patgenos especificados para la
produccin y control de calidad de las
vacunas
<1035> - Equivalencia entre medicamentos
<1040> - Estudios de estabilidad
<1050> - Formas farmacuticas
CONSIDERACIONES GENERALES
CONSIDERACIONES GENERALES
La Farmacopea es el texto oficial que codifica
los principios activos, excipientes y productos
farmacuticos y contiene las especificaciones que
stos deben cumplir para demostrar su calidad y
resguardar la salud de la poblacin.
Generalidades
La Farmacopea Argentina en su Octava Edicin,
a diferencia de las anteriores, est compuesta por
cuatro volmenes. El ttulo de la obra puede
abreviarse como FA 8 y reemplaza a las ediciones
anteriores. C uando se emplea la sigla FA, sin
ningn otro agregado, la misma se refiere a la FA 8
durante el tiempo que esta Farmacopea permanezca
en vigencia. Estas consideraciones generales se
aplicarn a l as monografas, captulos generales u
otros textos incluidos en esta Farmacopea.
La expresin Oficial significa de la
Farmacopea Argentina y se refiere a cu alquier
ttulo, sustancia, preparacin o ensayo incluido en
las monografas y captulos.
Las iniciales FA, acompaando al nombre
oficial en el rtulo de un producto, indica que el
mismo cumple con las especificaciones de la
Farmacopea Argentina, aunque esto no constituye
una certificacin por parte de la misma.
El uso del ttulo de una monografa supone que
la sustancia, preparacin o p roducto as designado
se ajusta a l as especificaciones de la monografa
correspondiente. Tales referencias en los textos de
la Farmacopea se indican mediante el ttulo de la
monografa en letra cursiva.
Tanto las monografas como los captulos
generales pueden contener excepciones a es tas
Consideraciones Generales, las mismas sern
sealadas explcitamente, al igual que el
procedimiento a seguir en cada caso. Para destacar
la existencia de excepciones, se agregar la
expresin: A menos que se especifique de otro
modo. A simismo, en caso de ausencia de una
excepcin explcita, las expresiones debern
interpretarse como se indica en este documento.
Los ensayos y valoraciones descriptos son los
mtodos oficiales sobre los cuales se fundamentan
las especificaciones de la Farmacopea.
Para evitar repetir instrucciones comunes a un
ensayo determinado, en las monografas, se
establecen los requisitos en forma abreviada,
indicando el nombre del captulo correspondiente
con un nmero de orden asignado entre los
smbolos <y>, como por ej. <100>. Cromatografa,
intermedios.
Los lmites expresados en las
definiciones de las monografas y en las
especificaciones
de
los
ensayos,
independientemente de que stos estn expresados
en porcentajes o valores absolutos, son valores
significativos hasta el ltimo dgito.
En los procedimientos volumtricos, se
establece el peso de la sustancia analizada que
equivale a cad a mililitro del valorante
estandarizado. E n estos casos, se entiende que el
nmero de cifras significativas en la concentracin
del valorante corresponde al nmero de cifras
significativas en el peso de la sustancia analizada.
Se debern hacer las correcciones con respecto al
blanco para todas las valoraciones volumtricas
segn corresponda (ver 780. Volumetra).
Cuando el resultado deba calcularse con
referencia a l a sustancia seca, se har uso de las
condiciones de secado que se indiquen en el ensayo
Prdida por secado en la monografa. Cuando el
resultado se calcule con referencia a la sustancia
anhidra, el contenido de agua ser determinado por
el mtodo descripto en la monografa bajo el
subttulo Agua.
Actualizaciones
Se considera una actualizacin total cuando
todo el texto reemplaza al de la edicin anterior; por
ej., <590>. Lmite de metales pesados,
identificndose con un asterisco en el ndice
alfabtico (*) y, en el ttulo del texto actualizado, se
encontrar la leyenda Actualizacin total. Se
considera una actualizacin parcial cuando slo
una parte del texto ha sido modificada,
identificndose con un asterisco en el ndice
alfabtico (*) y, en el ttulo del texto actualizado, se
encontrar la leyenda Actualizacin parcial. E n
este ltimo caso se encontrar subrayado el
fragmento del texto que ha sido actualizado.
Armonizaciones
El PWG (Pharmacopoeial Working Group) es
uno de los Grupos de Trabajo de la Red
Panamericana de Armonizacin de Reglamentacin
Farmacutica, conformado por la Farmacopea
Argentina -FA -, Farmacopea Brasilea FB-,
Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos
-FEUM- y Farmacopea de los Estados Unidos
-USP-.
El plan de trabajo del PWG fortalece el
intercambio cientfico tecnolgico entre las
farmacopeas, facilita el intercambio de informacin,
de expertos y fomenta las actividades conjuntas que
contribuyan a mejorar la calidad de los productos
farmacuticos en la regin de las Amricas. E l
objetivo de la armonizacin es lograr la obtencin
Fcilmente soluble
Soluble
Moderadamente soluble
Poco soluble
Muy poco soluble
Prcticamente insoluble
Identificacin
Los ensayos de la Farmacopea que figuran
despus del subttulo Identificacin no estn
destinados a proporcionar una confirmacin
completa de la estructura qumica o composicin
del producto; su objeto es confirmar que el producto
se ajusta a l a descripcin dada en el rtulo del
envase. C uando un producto no satisface los
requisitos de un ensayo de identificacin descripto,
indica que el mismo no cumple con las
especificaciones. Otros ensayos o especificaciones
en la monografa a menudo contribuyen a establecer
o confirmar la identidad del producto ensayado.
Ensayos y valoraciones
Los ensayos y las valoraciones descriptas en
esta Farmacopea constituyen los mtodos oficiales
de anlisis. El analista podr emplear ensayos
alternativos, previamente validados, si demuestran
otorgar ventajas desde el punto de vista de la
exactitud, precisin, sensibilidad, selectividad o
simplifican el procedimiento sin modificar los
atributos anteriores. S in embargo, en caso de
indecisin o litigio, los ensayos descriptos en esta
Farmacopea sern los definitivos.
La concentracin de impurezas establecida en
ciertos ensayos se expresa entre parntesis como
porcentaje o partes por milln (ppm). E n el caso
que corresponda, el cumplimiento de este ensayo
ser necesario para establecer la conformidad de un
producto.
Los materiales volumtricos, pesas y balanzas
debern ajustarse a las especificaciones establecidas
en los captulos <620>. Materiales volumtricos y
<690>. Pesas y balanzas.
Cuando en un ensayo o v aloracin se indique
que se debe examinar una cierta cantidad de
sustancia o un nmero exacto de unidades de
dosificacin, la cantidad especificada representa un
nmero mnimo que se elige nicamente para
facilitar la manipulacin analtica. Esto de ninguna
manera limita la cantidad total de material a
emplear.
Procedimientos
En todos los ensayos descriptos en esta
Farmacopea, se deber cumplir estrictamente con
las Buenas Prcticas de Laboratorio (BPL).
De 1 a 10
De 10 a 30
De 30 a 100
De 100 a 1.000
De 1.000 a 10.000
Ms de 10.000
La utilizacin de las siguientes expresiones,
empleadas en ensayos descriptos en la FA se
refieren a:
Blanco: cuando se indique que se deben hacer
las correcciones necesarias por medio de una
determinacin con un control, tal determinacin se
har empleando las mismas cantidades de los
reactivos tratados de igual manera que la solucin o
mezcla que contiene la sustancia bajo valoracin o
ensayo, pero omitiendo dicha sustancia.
Bao de agua: cuando se indique el empleo de
bao de agua, se emplear un bao de agua a
ebullicin salvo que se indique una temperatura
distinta.
Bao de vapor: cuando se indique el empleo de
bao de vapor, podr emplearse la exposicin al
vapor vivo fluente u otra forma de calor regulado, a
una temperatura equivalente a la del vapor fluente.
Cepas microbianas: cuando se cita una cepa
microbiana y se la identifica por el nmero de
catlogo ATCC (American Type Culture
Collection) o de otra coleccin similar, la cepa
especfica se emplear directamente o, si se
subcultiva, se emplearn no ms de cinco pasajes a
partir de la cepa original.
Comparacin de color: cuando se indique una
comparacin visual de color o de turbidez, debern
emplearse tubos de comparacin de fondo plano
(tubos de Nessler) cuyas medidas internas se
correspondan lo ms estrechamente posible. Para la
comparacin del color, los tubos en posicin
vertical debern ser observados longitudinalmente a
lo largo del tubo con una fuente de luz difusa sobre
un fondo blanco, mientras que para la comparacin
de
turbidez
debern
ser
observados
transversalmente, colocados sobre un fondo oscuro,
con ayuda de una fuente luminosa que los ilumine
lateralmente.
Cuantitativamente y en etapas: cuando se
indique que una solucin debe ser diluida
cuantitativamente y en etapas, una porcin medida
con exactitud ser disuelta en agua u otro solvente
en la proporcin indicada en uno o ms pasos. La
eleccin del material volumtrico a e mplearse
deber tener en cuenta los errores relativamente
grandes que generalmente se asocian a materiales
volumtricos
de
volumen
pequeo
(ver
620. Materiales volumtricos).
ELABORACIN
DE PRODUCTOS FARMACUTICOS
La elaboracin de productos farmacuticos
deber realizarse observando los principios de
<1020>. Buenas prcticas de fabricacin para
elaboradores,
importadores/exportadores
de
medicamentos y el producto resultante deber
cumplir con los requisitos tcnicos establecidos en
esta Farmacopea.
ENVASES
Smbolo
Unidad
Nombre
Smbolo
Longitud
metro
Masa
kilogramo
Kg
Tiempo
segundo
Definicin
El metro es la longitud del camino recorrido por la luz en
el vaco durante un intervalo de tiempo igual a
1/299.792.458 de segundo.
El kilogramo es igual a la masa del patrn internacional
del kilogramo.
El segundo es la duracin de 9.192.631.770 de la
Corriente elctrica
amperio
Temperatura
termodinmica
kelvin
Cantidad de sustancia
mol
Mol
Intensidad luminosa
Iv
candela
Cd
Unidad
Valor en unidades SI
Nombre
Smbolo
min
Minuto
1 min = 60 s
Hora
1 h = 60 min = 3.600 s
Da
1d = 24 h = 86.400 s
ngulo plano
Grado
1 = (/180) rad
Volumen
Litro
1 l = 1 dm3 = 10-3 m3
Masa
Tonelada
1 t = 103 kg
Frecuencia de giro
Tiempo
rpm
15
10
12
10
10
10
10
10
Prefijo
Smbolo
Factor
10-1
deci
10
-2
centi
10
-3
mili
10
-6
micro
10
-9
nano
10
-12
pico
10
-15
femto
10
-18
atto
exa
peta
tera
giga
mega
kilo
hecto
da
deca
Prefijo
Smbolo
Unidad
Nombre
Smbolo
Nombre
Smbolo
Expresin en
unidades SI bsicas
Nmero de onda
1/m
m-1
Longitud de onda
micrmetro
10-6m
nanmetro
Nm
10-9m
Expresin en
otras unidades SI
Frecuencia
hertz
Hz
s-1
rea
A, S
metro cuadrado
m2
m2
Volumen
metro cbico
m3
m3
1 ml = 1 cm3 = 10-6m3
kilogramo por
metro cbico
kg/m3
kg m-3
1g/ml=1g/cm3=103kg/m3
Velocidad
m/s
m s-1
Fuerza
newton
m kg s2
Densidad
(concentracin de masa)
1 dina=1g cm s-2=105N
1 kp = 9,80665 N
1 dina/cm2 =10-1Pa=10-1 N m-2
1atm = 101.325 Pa = 101,325 kPa
Presin
pascal
Pa
m-1 kg s-2
N m-2
1 mmHg = 133,322387 Pa
1 Torr = 133,322368 Pa
1 psi = 6,894757 kPa
Viscosidad absoluta
Viscosidad cinemtica
Energa
Potencia
pascal segundo
metro cuadrado
por segundo
joule
Pa s
m-1 kg s-1
m2/s
m2 s-1
m2 km s-2
watio
m2 km s-3
gray
Gy
volt
Resistencia elctrica
Cantidad de electricidad
1 P = 10-1 Pa s = 10-1 N s m2
N s m-2
3
1 cP = 1 mPa s
-1
Pa s m kg
N m s kg-1
Nm
1 cal = 4,1868 J
-1
Nms
Js
m2 s-2
J kg-1
1 rad = 10-2 Gy
m2 kg s-3 A-1
W A-1
ohm
m2 kg s-3 A-2
V A-1
coulomb
As
Actividad de un
radionucedo
becquerel
Bq
s-1
Concentracin molar
molaridad
mol/dm3
(flujo de radiacin)
Dosis absorbida
(energa radiante)
Potencial elctrico
(fuerza electromotriz)
-1
INTRODUCCIN
1.1 Diseo general y precisin
Principios generales
3.1.2
Ensayos de rutina
3.1.3
Clculos y restricciones
Introduccin
3.2.2
Anlisis de varianza
3.2.4
Criterios de validez
3.2.5
3.2.6
Valores perdidos
Introduccin
3.3.2
3.3.3
Anlisis de varianza.
Criterios de validez
3.3.5
Tabulacin de resultados
4.2.2
Criterios de validez
4.2.3
4.2.4
Ensayos no vlidos
EJEMPLOS
5.1 Modelo de lneas paralelas
5.1.1
5.1.2
5.1.3
5.2.1
5.2.2
6.2.2
6.2.3
6.2.4
TABLA
7.1 Distribucin F
7.2 Distribucin t
7.3 Distribucin 2
7.4 Distribucin
GLOSARIO DE SIMBOLOS
1 INTRODUCCIN
Este captulo proporciona una gua para el diseo de los ensayos biolgicos especificados en la Farmacopea
Argentina (FA) y para el anlisis de sus resultados. Puede ser empleado por personas cuya especialidad no es la
estadstica pero tienen la responsabilidad del anlisis e interpretacin de resultados de estos ensayos a menudo
sin la ayuda y consejo de un estadstico. Los mtodos de clculo descriptos en el presente captulo no son obligatorios para analizar los ensayos biolgicos que constituyen en s mismos una parte obligatoria de la FA. Pueden
usarse mtodos alternativos siempre que no sean menos confiables que los descriptos en este documento. Existe
una gran variedad de programas de computacin disponibles y pueden ser tiles dependiendo de la disponibilidad
y de la habilidad del analista.
Se debera asegurar el asesoramiento de un experto en estadstica cuando: la investigacin o desarrollo de
nuevos productos requiera un adecuado diseo y un anlisis estadstico especfico; cuando se requiera analizar
amplias curvas dosis-respuesta no lineales, por ejemplo en inmunoensayos; o cuando no se puedan cumplimentar
las restricciones impuestas al diseo en este captulo, por ejemplo igual nmero de dosis igualmente espaciadas.
1.1 Diseo general y precisin
Se describen mtodos biolgicos para la valoracin de ciertas sustancias y preparaciones cuya potencia no
puede determinarse adecuadamente mediante anlisis qumicos o fsicos. El principio aplicado, siempre que sea
posible a lo largo de estos ensayos, es el de comparacin con una preparacin estndar de forma que se determina
qu cantidad de la sustancia, que se va a examinar, produce el mismo efecto biolgico que una cantidad dada, la
Unidad, de la preparacin estndar. Es una condicin esencial de dichos mtodos biolgicos, que los ensayos
sobre la preparacin estndar y sobre la sustancia a examinar se realicen al mismo tiempo y bajo condiciones tan
idnticas como sea posible. Para algunos ensayos (por ejemplo determinacin de ttulo de un virus) la potencia
de la muestra no se expresa relativa a un estndar.
Cualquier estimacin de potencia obtenida a partir de un ensayo biolgico est sometida a un error aleatorio
debido a l a variabilidad inherente de las respuestas biolgicas y los clculos de errores deben realizarse, si es
posible, a partir de los resultados de cada ensayo incluso cuando se usa el mtodo oficial. Por lo tanto a continuacin se describen mtodos para el diseo de ensayos y el clculo de sus errores. En cualquier caso antes de
adoptar un mtodo estadstico deben realizarse ensayos preliminares, en cantidad suficiente, para descubrir la
aplicabilidad de este mtodo. El intervalo de confianza para potencias dadas es una indicacin de la precisin
con la cual la potencia ha sido estimada en el ensayo. Se calcula teniendo en cuenta el diseo experimental y el
tamao de la muestra. En ensayos biolgicos normalmente se escogen lmites de confianza del 95 por ciento. Se
usan mtodos matemticos para calcular estos lmites de forma que se justifique la expectativa de que hay una
probabilidad (confianza) del 95 por ciento de que estos lmites incluyan la verdadera potencia.
Los lmites de confianza de la potencia constituyen un indicador de la precisin con la que se ha calculado la
potencia en el ensayo, que esta precisin sea aceptable para la FA depende de los requisitos establecidos en la
monografa de la preparacin.
Los trminos media y desviacin estndar se usan en este documento segn se definen en los libros de
texto de estadstica actuales.
Los trminos potencia declarada, potencia asignada, potencia asumida, relacin de potencias y
potencia estimada se usan en esta seccin para indicar los siguientes conceptos:
- potencia declarada: en el caso de un producto formulado es un valor nominal asignado a partir del conocimiento de la potencia de la materia prima; en el caso de una materia prima es la potencia estimada por el fabricante.
- potencia asignada: es la potencia de una preparacin estndar.
- potencia asumida: es la potencia de la preparacin que se va a examinar y que forma la base del clculo de
las dosis que podran ser equipotentes con las dosis que se van a usar de la preparacin estndar.
- relacin de potencias de una preparacin desconocida: es la relacin de dosis equipotentes de la preparacin estndar y de la preparacin desconocida bajo las condiciones del ensayo.
- potencia estimada: es la potencia calculada a partir de los datos del ensayo.
La Seccin 8. Glosario de smbolos es una tabla de los usos ms importantes de smbolos a lo largo de este
captulo. Cuando el texto hace referencia a smbolos no mostrados en esta seccin o usa un smbolo para designar un concepto diferente, ste se define en esa parte del texto.
Cuando el analista sospecha que no se cumplen las condiciones 2 y/o 3, una transformacin de la respuesta
y a ln y, o a y o a y2 puede conducir a un mejor cumplimiento de estas condiciones. Debern consultarse
libros de texto de estadstica para otras transformaciones.
La transformacin de y en y es til cuando las observaciones siguen una distribucin Poisson, es decir cuando se obtienen por conteo.
La transformacin de y en y2 puede ser til si, por ejemplo, la dosis parece ser ms proporcional al
rea de una zona de inhibicin que a la medida del dimetro de esa zona.
El analista debe decidir sobre el tipo de transformacin adecuada para cada tipo de ensayo biolgico cuando
ste se est poniendo a punto en su laboratorio. Cuando las condiciones 2 y/o 3 parecen no cumplirse durante un
ensayo rutinario de este tipo, el analista no debe adoptar otra transformacin a menos que est convencido de
que este incumplimiento de los requisitos no es casual, sino que es debido a un cambio sistemtico de las condiciones experimentales, en este caso debe repetirse el ensayo preliminar antes de adoptar una nueva transformacin para los ensayos rutinarios.
Una categora distinta la forman los ensayos en los que no puede medirse la respuesta en cada una de las unidades experimentales, sino que solamente puede contarse la fraccin de unidades que responden a cada tratamiento. Esta categora se trata en la Seccin 4.
3.1.2 Ensayos de rutina
Cuando los ensayos se hacen de forma rutinaria, es raro que se cumplan de forma sistemtica las condiciones
1 a 3 debido a que el nmero limitado de observaciones por ensayo probablemente tenga influencia en la sensibilidad del anlisis estadstico. Afortunadamente, los estadsticos han demostrado que, en ensayos balanceados
simtricamente, las desviaciones pequeas en la homogeneidad de varianza y en la normalidad no afectan de
forma grave los resultados del ensayo. La aplicacin de los modelos estadsticos slo necesita cuestionarse si
una serie de ensayos muestran una validez dudosa, entonces puede ser necesario realizar nuevas series de investigaciones preliminares como se discute en la Seccin 3.1.1.
Otras dos condiciones necesarias dependen del modelo estadstico a usar:
A - Para modelo de lneas paralelas (ver Figura 3.2.1.-I)
4A - La relacin entre el logaritmo de la dosis y la respuesta puede representarse por una lnea recta en el intervalo de dosis usadas.
5A - Para cualquier preparacin desconocida en el ensayo, la lnea recta es paralela a la del estndar.
B - Para modelo de relacin de pendientes (ver Figura 3.3.1.-I)
4B - La relacin entre la dosis y la respuesta puede representarse por una lnea recta, para cada preparacin,
en el intervalo de dosis usadas.
5B - Para cualquier preparacin desconocida en el ensayo la lnea recta intersecta, al eje y, a la dosis cero en
el mismo punto que la lnea recta de la preparacin estndar (es decir, la funcin respuesta, de todas las preparaciones analizadas en el ensayo, tienen que tener el mismo punto de interseccin, en el eje y, que la funcin respuesta del estndar).
Las condiciones 4A y 4B slo se pueden verificar en los ensayos en los que se hayan analizado al menos tres
diluciones de cada preparacin. El empleo de un ensayo con menos diluciones puede estar justificado cuando la
experiencia haya demostrado que la linealidad y el paralelismo o igual interseccin se cumplen regularmente.
Despus de recolectar los datos y antes de calcular la potencia relativa de cada preparacin se debe realizar un
anlisis de varianza con la finalidad de comprobar el cumplimiento de las condiciones 4A y 5A o 4B y 5B. Para
esto, el total de las sumas de cuadrados se subdivide en cierto nmero de sumas de cuadrados correspondientes a
cada una de las condiciones que se deben cumplir. La suma de cuadrados remanente representa el error experimental residual con la cual la ausencia o existencia de fuente de variacin relevante se pueden comparar mediante una serie de valores de razones F.
Cuando se ha establecido la validez, la potencia de cada preparacin desconocida con respecto al estndar
puede calcularse y expresarse como una relacin de potencias o convertirse en alguna unidad relevante en la
preparacin bajo ensayo, por ejemplo, una unidad internacional. Tambin pueden estimarse los lmites de confianza a partir de cada serie de datos del ensayo.
Si no se cumple alguna de las cinco condiciones (1, 2, 3, 4A y 5A o 1, 2, 3, 4B y 5B) los mtodos de clculo
descriptos aqu no son vlidos y debe realizarse un estudio especial del diseo del ensayo.
El analista no debera adoptar otra transformacin a menos que haya evidenciado que el no cumplimiento de
los requisitos no es accidental sino debido a un cambio o variacin sistemtica de las condiciones experimentales. En este caso se debe repetir el ensayo descripto en la Seccin 3.3.1 antes de adoptar una nueva transformacin en los ensayos de rutina.
En ensayos de rutina desarrollados para comparar preparaciones similares un nmero excesivo de ensayos no
vlidos, debido a ausencia de paralelismo o de linealidad, denota probablemente diseos con replicaciones inadecuadas. Normalmente esta falta de adecuacin se debe a un reconocimiento incompleto de todas las fuentes de
variabilidad que afectan al ensayo, lo cual puede producir una subestimacin del error residual que conducira a
razones F grandes.
No siempre es posible tener en cuenta la totalidad de las posibles fuentes de variacin dentro de un e nsayo
simple (por ejemplo, variaciones da a da). En un caso as, los intervalos de confianza de ensayos repetidos
sobre la misma muestra pueden no superponerse satisfactoriamente y se debe poner especial cuidado en la interpretacin de los intervalos de confianza individuales. Para obtener una estimacin ms confiable del intervalo de
confianza puede ser necesario desarrollar varios ensayos independientes y combinar stos en una nica potencia
estimada y un intervalo de confianza (ver Seccin 6).
Con la finalidad de controlar la calidad de los ensayos de rutina es recomendable guardar copia de los valores
estimados de la pendiente de regresin y del valor estimado del error residual en las cartas control.
Un error residual excepcionalmente alto puede indicar algn problema de tipo tcnico. ste debera ser
investigado, y si se puede evidenciar algn error analtico en el ensayo, debera ser repetido. Un error residual
inusualmente alto puede indicar la presencia de un valor atpico ocasional o de una observacin aberrante. Se
rechaza una respuesta que es cuestionable debido a una falla en el cumplimiento del procedimiento durante el
desarrollo del ensayo. Si se descubre un valor aberrante despus de que las respuestas ya han sido registradas,
que puede ser adjudicable a irregularidades del ensayo, su omisin puede estar justificada. La exclusin arbitraria o el mantenimiento de una respuesta aparentemente atpica puede ser una fuente grave de sesgo. En general
el rechazo de observaciones solamente porque un ensayo para valores atpicos sea significativo, es desaconsejable.
Un error residual excepcionalmente bajo puede ocurrir alguna vez y ser causa de que los valores de la
razn F excedan los valores crticos. En tal caso puede estar justificado reemplazar el error residual estimado, a
partir del ensayo individual, por un error residual medio obtenido de datos histricos registrados en las cartas
control.
3.1.3 Clculos y restricciones
Conforme a los principios generales de buen diseo, se imponen normalmente las tres siguientes restricciones
en el diseo del ensayo. stas presentan ventajas tanto para facilitar el cmputo como para mejorar la precisin.
a) cada preparacin en el ensayo debe ser contrastada con el mismo nmero de dosis.
b) en el modelo de lneas paralelas, el cociente entre las dosis adyacentes debe ser constante para todos los
tratamientos en el ensayo (progresin geomtrica); en el modelo de relacin de pendientes, el intervalo entre
dosis adyacentes debe ser constante para todos los tratamientos en el ensayo (progresin aritmtica).
c) debe haber un nmero igual de unidades experimentales para cada tratamiento.
Si se utiliza un diseo que cumple estas restricciones los clculos son sencillos. Las frmulas se encuentran
en las Secciones 3.2 y 3.3. Se recomienda el uso de aplicaciones informticas (software) que hayan sido desarrolladas para esta finalidad particular. Existen varios programas que pueden fcilmente manejar todos estos diseos de ensayo descriptos en las monografas correspondientes. No todos los programas emplean las mismas
frmulas y algoritmos, pero deben llevarnos a los mismos resultados.
Los diseos de ensayo que no cumplan las restricciones sealadas arriba pueden ser igualmente posibles y correctos, pero las frmulas que precisan son demasiado complicadas para ser descriptas en este texto.
Las formulas para los diseos restringidos dadas en el texto pueden ser empleadas por ejemplo para crear
programas ad hoc en una planilla de clculos. Se pueden emplear los ejemplos de la Seccin 5 para comprobar si
tales programas dan resultados correctos.
3.2 Modelo de lneas paralelas
3.2.1 Introduccin
En la Figura 3.2.1.-I se representa el modelo de lneas paralelas. El logaritmo de las dosis se representa en el
eje de abscisas y las respuestas en el eje de ordenadas. Las respuestas individuales a cada tratamiento se sealan
con puntos negros. Las dos lneas son las relaciones calculadas ln(dosis)-respuesta para el estndar y para la
preparacin desconocida.
Respuesta (y)
Estndar
Desconocido
ln dosis (x)
Cruzado triple
Grupo de unidades
Tiempo I
Tiempo II
Tiempo I
Tiempo II
S1
T2
S1
T3
S2
T1
S2
T2
T1
S2
S3
T1
T2
S1
T1
S3
T2
S2
T3
S1
Ver ejemplo en Statistical Methods in Biological Assay; B. J. Finney 2da ed. 1964, pag. 265 a 299.
cada tratamiento es aplicado un nmero igual de veces. No debe procederse al empleo de las frmulas en cualquier otra situacin.
Aparte de algunos ajustes del trmino debido al error el anlisis bsico de datos procedentes de un ensayo es
el mismo para diseos completamente aleatorizados, en bloque aleatorizado y en cuadrado latino. Las frmulas
para ensayos cruzados, no se ajustan enteramente a este esquema.
Habiendo considerado los puntos discutidos en la Seccin 3.1 y habiendo transformado las respuestas, si fuera
necesario, debe hacerse la media de los valores para cada tratamiento y cada preparacin como se muestra en la
Tabla 3.2.3.-I. Tambin deben calcularse los contrastes lineales los cuales se relacionan con las pendientes de las
lneas (ln dosis-respuesta). En la Tabla 3.2.3.-II se muestran tres frmulas adicionales que son necesarias para la
realizacin del anlisis de varianza.
Tabla 3.2.3.-I. Frmulas aplicables al modelo de lneas paralelas con d dosis de cada preparacin
Estndar
Preparacin 1
(T)
Preparacin 2
(U, etc.)
S1
T1
U1
S2
T2
U2
...
...
...
...
Sd
Td
Ud
Total de la preparacin
PS = S1+S2++Sd
PT = T1+T2++Td
PU = U1+U2++Ud
Contraste lineal
LS = 1S1+2S2++dSd (d+1) Ps
n
d
HL =
12n
d3 d
K =
n( PS + PT + ...) 2
hd
Grados de Libertad
(gl)
SCprep= HP (PS2+PT2+) K
h1
Preparaciones
Regresin lineal
h1
Desviacin de la linealidad
h (d - 2)
SC reg =
1
H L ( LS + LT + ...) 2
h
hd - 1
Tratamientos
(*)
Suma de Cuadrados
(SC)
Grados de Libertad
(gl)
Suma de Cuadrados
(SC)
n1
Columnas (**)
n1
Completamente Aleatorizado
Error Residual
Total
(***)
hd (n 1)
Aleatorizado en bloques
(hd 1) (n 1)
Cuadrado latino
(hd 2) (n 1)
nhd - 1
SCtotal = ( y y ) 2
(*)
La variacin total de la respuesta causada por los diferentes tratamientos se subdivide ahora, como se muestra
en la Tabla 3.2.3.-III, en las sumas de cuadrados obtenidos a p artir d e los valores de las Tablas 3.2.3.-I y
3.2.3.-II. La suma de cuadrados debida a la no linealidad se puede calcular nicamente si se incluyen por lo
menos tres dosis por preparacin en el ensayo.
El error residual del ensayo se obtiene restando las variaciones de las fuentes de variacin, permitidas para el
diseo, de la variacin total de la respuesta (Tabla 3.2.3.-IV). En esta tabla y representa la media de todas las
respuestas registradas en el ensayo. Se ha de hacer notar que para el cuadrado latino el nmero de respuestas
replicadas (n) es igual al nmero de filas, columnas o tratamientos (dh).
El anlisis de varianza se completa ahora como sigue. Cada suma de cuadrados se divide por el correspondiente nmero de grados de libertad para dar los cuadrados medios (CM).
El F calculado es el cociente entre el cuadrado medio de cada fuente de variacin y el cuadrado medio del
error residual (s2). La significacin de esos valores (conocida como razn F) se evala mediante el empleo de la
Tabla 7.1.
calculado
I = ln
(dosis 2)
(dosis 1)
= ln dosis 2 ln dosis 1
(3.2.5.-1)
La pendiente comn b, para ensayos con d dosis de cada preparacin, se obtiene a partir de la frmula
b=
H L ( L S + LT + ...)
I n h
(3.2.5.-2)
M T' =
PT PS
d b
M T'
(3.2.5.-3)
La potencia estimada es una estimacin puntual de la verdadera potencia y los lmites de confianza pueden
calcularse por la frmula (3.2.5.-4)
M T' sup
= CM T' (C 1)(CM T'2 + 2V )
M T' inf
Donde
C=
SC reg
SC reg s 2 t 2
V=
SC reg
b2d n
(3.2.5.-4)
(3.2.5.-5)
(3.2.5.-6)
Los valores de t se obtienen a partir de la Tabla 8.2 para p = 0,05 y grados de libertad igual a los del error residual.
La potencia estimada y los lmites de confianza, asociados a ella, se calculan multiplicando los antilogaritmos de M T' ; M T' superior y M T' inferior por la potencia supuesta AT.
Potencia estimada = RT = antilog M T' AT
(3.2.5.-7)
(3.2.5.-8)
(3.2.5.9)
Si las soluciones existentes no son equipotentes en base a potencias asumida y asignada es necesario un factor
de correccin.
3.2.6 Valores perdidos
En un ensayo equilibrado, un accidente sin ninguna relacin con los tratamientos aplicados puede llevar a la
prdida de una o ms respuestas, por ejemplo debido a la muerte de un animal. Si se considera que el accidente
no est relacionado de ninguna manera con la composicin de la preparacin administrada, los clculos exactos
pueden an realizarse pero las frmulas son necesariamente ms complicadas y solamente se pueden dar dentro
del marco de trabajo de los modelos lineales generales. No obstante, existe un mtodo aproximado que mantiene
la simplicidad del diseo equilibrado sustituyendo la respuesta perdida por un valor calculado. La prdida de
informacin se tiene en cuenta disminuyendo los grados de libertad de la suma total de cuadrados y para el error
residual en una unidad y empleando una de las frmulas proporcionadas ms adelante para el valor perdido. Se
debe tener en mente que ste es slo un mtodo aproximado y que debe ser preferido el mtodo exacto.
Si se pierde ms de una informacin se puede emplear la misma frmula. El procedimiento consiste en hacer
una estimacin grosera para todos los valores perdidos excepto uno y emplear la propia frmula apropiada para
ste, empleando todos los valores restantes incluidas las estimaciones groseras. Incluir el valor calculado. Continuar de forma similar calculando un valor para la primera aproximacin grosera. Despus de calcular todos los
valores perdidos de la misma manera se repite el ciclo completo desde el principio, empleando en cada clculo el
valor estimado o calculado ms reciente para todas las respuestas a las que se est aplicando la frmula. Se contina hasta que dos ciclos consecutivos dan los mismos valores, normalmente la convergencia es rpida.
Siempre que el nmero de valores reemplazados sea pequeo con relacin al nmero total de observaciones
en el experimento completo (digamos inferior al 5 %), la aproximacin implicada en este reemplazo y la reduccin de grados de libertad por el nmero de valores perdidos as reemplazados es normalmente bastante satisfactoria. Sin embargo, el anlisis debe ser interpretado con gran cuidado, especialmente si existe una preponderancia de valores perdidos en un tratamiento o bloque, y se debe consultar a un especialista en estadstica si se encuentra alguna caracterstica inusual.
Diseo completamente aleatorizado.
En un ensayo completamente aleatorizado, el valor perdido puede ser sustituido por la media aritmtica de las
otras respuestas al mismo tratamiento.
Diseo en bloques aleatorizados.
El valor perdido y' se obtiene aplicando la ecuacin:
y' =
(3.2.6.-I)
en la que B ' es la suma de las respuestas del bloque que contiene el valor perdido,
correspondiente y G ' es la suma de todas las respuestas registradas en el ensayo.
donde
k = n.
(3.2.6.-II)
B' y C ' son las sumas de las respuestas en la fila y columna que contiene el valor perdido. En este caso
Diseo cruzado.
Cuando accidentalmente se produce una prdida de valores en un diseo cruzado, se debe consultar un libro
de estadstica (por ejemplo, D. J. Finney, ver Seccin 10), ya que las frmulas apropiadas dependen de las combinaciones particulares de tratamientos.
3.3 Modelo de relacin de pendientes
3.3.1 Introduccin
Este modelo es apropiado, por ejemplo, para algunos ensayos microbiolgicos cuando la variable independiente es la concentracin de un factor de crecimiento esencial por debajo de la concentracin ptima del medio.
El modelo se ilustra en la Figura 3.3.1.-I
Respuesta (y)
dosis (x)
Estndar
Desconocido
Las dosis se representan en el eje de abscisas y las respuestas se representan en el eje de ordenadas. Las respuestas individuales a cada tratamiento se sealan con puntos negros. Las dos lneas son las relaciones dosisrespuesta calculadas para la preparacin estndar y para la desconocida bajo el supuesto de que ambas se cortan
en el cero de dosis. A diferencia del modelo de lneas paralelas, las dosis no se transforman a logaritmos.
Al igual que en el caso de un ensayo basado en el modelo de lneas paralelas, es importante que la potencia
asumida est cerca de la verdadera potencia y preparar diluciones equipotentes de las preparaciones desconocida
y del estndar (si es posible). Cuanto ms prxima est la potencia asumida del desconocido a la verdadera potencia, ms cerca estarn las dos lneas. La relacin de las pendientes representa la verdadera potencia del
desconocido, relativa a su potencia asumida. Si la pendiente de la preparacin desconocida es mayor que la del
estndar, la potencia ha sido subestimada y los clculos indicarn una potencia estimada superior a la potencia
asumida. De la misma manera, si la pendiente del desconocido es menor que la del estndar, la potencia ha sido
sobrestimada y los clculos indicarn una potencia estimada inferior a la potencia asumida.
En un ensayo todas las respuestas deben ser examinadas para que satisfagan las condiciones 1, 2 y 3 de la
Seccin 3.1. El anlisis de varianza que ha de desarrollarse rutinariamente se describe en la Seccin 3.3.3, por lo
que el cumplimiento de las condiciones 4B y 5B de la Seccin 3.1 puede ser examinado.
3.3.2 Diseo del ensayo
El empleo del anlisis estadstico presentado ms adelante, impone las siguientes restricciones al ensayo:
a) El estndar y las preparaciones a ensayar tiene que ser analizadas en el mismo nmero de diluciones
igualmente espaciadas;
b) Un grupo extra de unidades experimentales que no reciben tratamiento pueden ser examinadas (los blancos);
c) Tiene que haber un nmero igual de unidades experimentales para cada tratamiento.
Como ya se sealo en la Seccin 3.1.3 los diseos de ensayo que no cumplen estas restricciones pueden ser
posibles y correctos, pero los anlisis estadsticos sencillos presentados aqu no son aplicables y ha de solicitarse
el consejo de un experto o emplearse un programa apropiado.
Un diseo con dos dosis por preparacin y un blanco, diseo cero comn (h2 + 1)es normalmente preferido, ya que permite una mayor precisin juntamente con la posibilidad de revisar la validez dentro de las restricciones mencionadas arriba. Sin embargo, una relacin lineal no puede ser siempre asumida como vlida por
debajo de dosis cero. Se puede adoptar, con una pequea prdida de precisin, un diseo sin blancos. En este
caso se prefiere tres dosis por preparacin, diseo cero comn (h3), al de dos dosis por preparacin. Estas
dosis son, as, dadas como sigue:
1) El estndar se da en una dosis alta, prxima, pero sin exceder la dosis mxima que da una respuesta media
sobre el tramo recto de la lnea dosis-respuesta.
2) Las otras dosis estn uniformemente espaciadas entre la dosis ms alta y la dosis cero.
3) Las preparaciones desconocidas se dan en las dosis correspondientes, basndose en la potencia asumida del
material.
Puede emplearse un diseo completamente aleatorizado, un diseo en bloques aleatorizados o un diseo en
cuadrado latino tal como se describe en la Seccin 3.2.2. El empleo de cualquiera de estos diseos necesita un
ajuste de la suma de cuadrados del error como se describe para el anlisis basado en el modelo de rectas paralelas. Se describe ms adelante el anlisis de un ensayo de una o ms preparaciones desconocidas frente a un
estndar.
3.3.3 Anlisis de varianza
3.3.3.1 Diseo (hd + 1)
Las respuestas se analizan como se describe en la Seccin 3.1 y si es necesario se transforman. Las respuestas son entonces promediadas sobre cada tratamiento y cada preparacin como se indica en la Tabla 3.3.3.1-I.
Adicionalmente se calcula la respuesta media de los blancos (B).
La suma de cuadrados en el anlisis de varianza se calcula como se indica en las Tablas 3.3.3.1-I a 3.3.3.1-III.
La suma de cuadrados debida a no linealidad puede ser calculada slo si han sido incluidas al menos tres dosis de
cada preparacin en el ensayo. El error residual se obtiene restando las variaciones de las fuentes de variacin
contempladas en el diseo de la variacin total de la respuesta (Tabla 3.3.3.1-IV).
El anlisis de varianza se completa ahora como sigue. Cada suma de cuadrados se divide por el correspondiente nmero de grados de libertad para dar los cuadrados medios (CM).
El F calculado es el cociente entre el cuadrado medio de cada fuente de variacin y el cuadrado medio del
error residual (s2). La significacin de esos valores (conocida como razn F) se evala mediante el empleo de la
Tabla 7.1.
calculado
Tabla 3.3.3.1.-I.
Frmulas aplicables al modelo de Relacin de pendientes con d dosis para cada preparacin y un blanco
Estndar
Preparacin 1
(T)
Preparacin 2
(U, etc.)
S1
T1
U1
S2
T2
U2
...
Sd
Td
Ud
Total de la preparacin
PS = S1+S2++Sd
PT = T1+T2++Td
PU = U1+U2++Ud
Contraste lineal
LS =1S1+2S2++dSd
LT = 1T1+2T2++dTd
LU = 1U1+2U2++dUd
Valor de la interseccin
Valor de la pendiente
bS =2LS - (d + 1)PS
bT = 2LT - (d + 1)PT
bU = 2LU - (d + 1)PU
GS =S12 +
+ Sd
No linealidad (*)
J S = GS
3b
PS
3 S
d
d d
(*)
GT =T1 + +
2
J T = GT
Td2
GU = U12 + + Ud2
2
PT
3b
3 T
d
d d
J U = GU
PU
3 b
3 U
d
d d
HB =
nhd 2 nhd
hd hd + 4d + 2
2
HI =
n
4d 2d 2 2d
a=
a S + aT + ...
2
h( d d )
K =
n( B + PS + PT + ...) 2
hd + 1
Grados de Libertad
(gl)
Suma de Cuadrados
(SC)
Regresin
Blancos
SCBlancos = HB (B a) 2
Interseccin
No linealidad (*)
Tratamientos
(*)
h-1
h (d - 2)
hd
Grados de Libertad
(g)
Suma de Cuadrados
(SC)
n1
Columnas (**)
n1
Completamente Aleatorizado
Error Residual
(***)
Aleatorizado en bloques
Cuadrado latino
(hd+1) (n 1)
hd (n 1)
(hd 1) (n 1)
nhd + n - 1
Total
( y y)
(*)
(3.3.5.1.-1)
La pendiente del estndar, y anlogamente para cada una de las otras preparaciones, se calcula a partir de la
frmula (3.3.5.1.-2) con su correspondiente LS, LT, LU
b' S =
6 LS 3d (d + 1)a '
2d 3 + 3d 2 + d
(3.3.5.1.-2)
b 'T
b' S
(3.3.5.1.-3)
la cual ha de ser multiplicada por AT, la potencia asumida de la preparacin a ensayar, para determinar la potencia
estimada RT. Si el paso entre dosis adyacentes no fuera idntico para el estndar y la preparacin desconocida, la
potencia tiene que ser multiplicada por IS /IT. Ntese que a diferencia del anlisis de lneas paralelas, no se calculan antilogaritmos.
El intervalo de confianza para R'T se calcula a partir de
Donde
C=
b' S
(3.3.5.1.-4)
2
2 2
b' S s t V1
K'= (C 1) V2
V1 y V2 estn relacionados con la varianza y covarianza del numerador y del denominador de R'T. Se pueden
obtener a partir de
V1 =
6
3
+
n(2d + 1) d (d + 1) 2(2d + 1) + hd (d 1)
V2 =
3d (d + 1)
(3d + 1)(d + 2) + hd (d 1)
(3.3.5.1.-5)
(3.3.5.1.-6)
V1 =
(3.3.5.2.-1)
1
6
3
+
nd (2d + 1) d + 1 h(d 1)
(3.3.5.2.-2)
3(d + 1)
3(d + 1) + h(d 1)
(3.3.5.2.-3)
V2 =
4.1 Introduccin
En ciertos ensayos es imposible o excesivamente laborioso medir el efecto sobre cada unidad experimental en
una escala cuantitativa. En cambio, un efecto (respuesta) tal como la muerte o sntomas de hipoglucemia, se
pueden observar como que ocurren o no ocurren en cada unidad y el resultado depende del nmero de unidades en las cuales ocurre. Tales ensayos se llaman cuantales o del todo-o-nada.
La situacin es muy similar a lo descripto para ensayos cuantitativos en la Seccin 3.1, pero en lugar de n
respuestas separadas para cada tratamiento se registra un valor nico, esto es, la fraccin de unidades en cada
grupo de tratamiento que muestra una respuesta. Cuando estas fracciones son representadas frente al logaritmo
de las dosis la curva resultante tiende a ser sigmoidea ms que lineal. Se emplea una funcin matemtica que
represente esta curvatura sigmoidea para estimar la curva dosis-respuesta. La funcin ms comnmente empleada es la funcin de distribucin normal acumulada. Esta funcin tiene ventajas tericas y es quiz la mejor eleccin si la respuesta es un reflejo de la tolerancia de las unidades. Si la respuesta tiende ms a depender de un
proceso de crecimiento, se prefiere el modelo de distribucin logstica, aunque entre los dos modelos la diferencia en el resultado es muy pequea.
Los estimadores de mxima verosimilitud de la pendiente y localizacin de las curvas se pueden determinar
nicamente aplicando un procedimiento iterativo. Existen muchos procedimientos que conducen al mismo resultado, pero difieren en eficiencia debido a la velocidad de convergencia. Uno de los mtodos ms rpidos es la
optimizacin directa de la funcin de mxima verosimilitud, lo cual puede ser fcilmente realizado con programas de computacin que contengan un procedimiento interno elaborado con esta finalidad. Desafortunadamente,
la mayora de estos procedimientos no proporcionan una estimacin del intervalo de confianza y la tcnica de
obtencin es demasiado complicada para ser descripta aqu. L a tcnica descripta a co ntinuacin no es la ms
rpida pero ha sido elegida por su simplicidad comparada con las otras alternativas. Puede ser empleada en ensayos en los que una o ms preparaciones se comparan al estndar en los que adems han de cumplimentarse las
siguientes condiciones:
1) La relacin entre el logaritmo de la dosis y la respuesta se puede representar por una curva de distribucin normal acumulada.
2) Las curvas para el estndar y para la preparacin muestra son paralelas, es decir, tienen una forma idntica y pueden diferir solamente en su localizacin horizontal.
3) En teora, naturalmente no hay respuesta a dosis extremadamente bajas y no hay respuesta a dosis extremadamente altas.
4.2
Mtodo de probitos
La curva sigmoidea se puede transformar en una recta sustituyendo cada respuesta, esto es la proporcin de
respuestas positivas por grupo, por el correspondiente valor de la distribucin normal estndar acumulada. Este
valor, a menudo llamadonormito, toma valores tericos entre - a + . Tiempo atrs se propona aadir 5 a
cada normito para obtener probito. Esto facilitaba los clculos hechos a mano ya que se evitaban los valores
negativos. Con la llegada de las computadoras la necesidad de sumar 5 a los normitos ha desaparecido. El trmino mtodo de normitos sera ms apropiado para el mtodo descripto a continuacin. No obstante, ya que el
termino anlisis de probitos est tan ampliamente difundido se mantendr dicho trmino en el texto por razones
histricas.
Una vez que las respuestas han sido linealizadas, debiera ser posible aplicar el anlisis de lneas paralelas como se describe en la Seccin 3.2. Desafortunadamente, la validez de condicin de homogeneidad de la varianza
para cada dosis no se cumple. La varianza es mnima para normito = 0 y crece para valores tanto positivos como
negativos del normito. Por tanto, es necesario dar ms peso a las respuestas en la parte media de la curva y menos peso en las partes ms extremas de la misma. Este mtodo, el anlisis de varianza, la estimacin de la potencia y del intervalo de confianza se describen a continuacin.
4.2.1 Tabulacin de resultados
La Tabla 4.2.1.-I se emplea para introducir datos en las columnas indicadas por nmeros:
(1)
Dosis del estndar o de la preparacin desconocido
(2)
Nmero n de unidades sometidas a ese tratamiento.
(3)
Nmero de unidades r que dan respuesta positiva al tratamiento.
(4)
Logaritmo x de la dosis.
(5)
Proporcin p = r / n de respuestas positivas por grupo.
El primer ciclo empieza aqu.
(6)
La columna Y se completa con ceros en la primera iteracin.
(7)
El valor correspondiente a = (Y) de la funcin de distribucin normal estndar acumulada
(ver Tabla 7.4).
Las columnas (8) a (10) se calculan con las siguientes frmulas:
Z=
(8)
(9)
e Y
w=
/2
(4.2.1.-1)
y =Y +
(10)
(4.2.1.-2)
p
z
n z2
2
(4.2.1.-3)
Las columnas (11) a (15) se pueden calcular fcilmente a partir de las columnas (4), (9) y (10) como wx, wy,
wx2, wy2 y wxy respectivamente y la sumatoria de cada una de las columnas (10) a (15) se calcula separadamente
para cada una de las preparaciones.
Las sumas calculadas en la Tabla 4.2.1.-I se transfieren a las columnas (1) a (6) de la Tabla 4.2.1.-II y se calculan seis columnas adicionales (7) a (12) como sigue.
Tabla 4.2.1.-I Primer tabla de trabajo
(1)
dosis
.
.
.
(2)
n
.
.
.
(3)
r
.
.
.
(4)
x
.
.
.
(5)
p
.
.
.
(6)
Y
.
.
.
(7)
.
.
.
(8)
Z
.
.
.
(9)
y
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
etc.
(10)
w
.
.
.
=
.
.
.
=
(11)
wx
.
.
.
=
.
.
.
=
(12)
wy
.
.
.
=
.
.
.
=
(13)
wx2
.
.
.
=
.
.
.
=
(14)
wy2
.
.
.
=
.
.
.
=
(15)
wxy
.
.
.
=
.
.
.
=
S
T
etc.
(1)
w
(2)
wx
(3)
wy
(4)
wx2
(5)
wy2
(6)
wxy
(7)
Sxx
(8)
Sxy
(9)
Syy
(10)
(11)
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
=
.
.
.
=
.
.
.
.
.
.
.
.
.
(7)
S xx = wx 2
( wx) 2
w
(4.2.1.-4)
(8)
S xy = wxy
( wx)( wy )
w
(4.2.1.-5)
(12)
a
.
.
.
(9)
S yy = wy 2
( wy ) 2
w
(4.2.1.-6)
(10)
x=
wx
w
(4.2.1.-7)
(11)
y=
wy
w
(4.2.1.-8)
S xy
(4.2.1.-9)
S xx
a = y bx
(4.2.1.-10)
La columna (6) de la primera tabla de trabajo puede ser ahora sustituida por Y = a + bx y el ciclo se va repitiendo hasta que la diferencia entre dos ciclos se ha hecho pequea (por ejemplo, la mxima diferencia de Y entre
dos ciclos consecutivos es inferior a 10 8).
4.2.2 Criterios de validez
Antes de calcular las potencias e intervalos de confianza, debe ser evaluada la validez del ensayo. Si se han
incluido al menos tres dosis para cada preparacin, las desviaciones de la linealidad se pueden medir como sigue:
aadir una columna 13 a la Tabla 4.2.1.-II y completarla segn la expresin:
S yy
S xy2
S xx
(4.2.2.-1)
El total de columna es una medida de las desviaciones de la linealidad y se distribuye, aproximadamente, como una 2 con N 2h grados de libertad. La significacin de este valor puede establecerse con la Tabla 7.3 o con
una adecuada subrutina en un programa de computacin. Si el valor es significativo a un nivel de probabilidad
de 0,05, el ensayo debe probablemente ser rechazado (ver Seccin 4.2.4).
Cuando el ensayo anterior no indica desviacin significativa de regresin lineal, se contrastan las desviaciones del paralelismo, a un nivel de significacin del 0,05, con:
2 =
S xy2
S xx
( S xy ) 2
S xx
(4.2.2.-2)
M T' =
aT aS
b
(4.2.3.-1)
donde
y
C=
V =
(4.2.3.-2)
b 2 S xx
b S xx s 2 t 2
2
w
S
w
T
1
1 + e Y
(4.3.-1)
e Y
(1 + e Y ) 2
(4.3.-2)
Z=
= 1 e e
Z = e Y e
efectiva (ED50), pero ya que no es necesario expresar esta dosis relativa a un estndar, las frmulas son ligeramente diferentes.
[NOTA: se puede incluir opcionalmente un estndar con objeto de validar el ensayo. Normalmente el ensayo
se considera vlido si el valor calculado ED50 del estndar est suficientemente cercano al valor asignado ED50.
El significado de "suficientemente cercano", en este contexto, depende de los requerimientos especificados en la
monografa.]
La tabulacin de las respuestas para las preparaciones desconocidas y opcionalmente para el estndar, se hace
como se describe en la Seccin 4.2.1. La prueba de linealidad es como se describe en la Seccin 4.2.2. Para este
tipo de ensayo no es necesario una prueba de paralelismo. La ED50 de la preparacin desconocida T y anlogamente de las otras muestras se obtiene, como se describe en la Seccin 4.2.3, con las siguientes modificaciones
en las frmulas 4.2.3.-1 y 4.2.3.-2.
M T' =
CM T' (C 1) x T
donde
V=
aT
b
(4.5.-1)
(C 1)(V S xx + C ( M T' + x T ) 2 )
(4.5.-2)
w
T
Media
Estndar S
S2
25
19
21
20
24
24
23
25
25
24
23
S1
13
14
18
14
14
16
13
16
14
18
15
S3
34
32
33
29
28
32
33
28
33
35
31,7
T1
14
12
15
12
14
14
17
13
16
13
14
Preparacin T
T2
20
18
23
24
19
23
22
24
22
25
22
Figura 5.1.1-I
S
45
45
40
40
40
35
35
35
30
30
30
25
25
25
20
20
20
15
15
15
10
10
10
N de reticulocitos
45
T3
27
26
29
32
30
32
29
31
32
31
29
U1
17
15
16
20
18
17
17
15
19
17
17,1
Preparacin U
U2
25
28
27
25
29
26
27
24
25
26
26,2
U3
34
37
35
36
35
40
39
37
39
39
37,1
LS = 16,7
PT = 65,9
LT = 15,9
PU= 80,4
LU = 20,0
HP =
10
= 3,333333
3
HL =
120
=5
24
K = 51840
El anlisis de varianza se puede ahora completar con las frmulas de las Tablas 3.2.3.-III y 3.2.3.-IV. Este se
muestra en la Tabla 5.1.1.-II.
Tabla 5.1.1.-II. Anlisis de varianza
Fuente de
variacin
Grado de
libertad
Suma de
cuadrados
Cuadrado
medio
Razn F
Probabilidad
Preparaciones
376,8614
188,4307
Regresin
4611,2667
4611,2667
1137,3768
0,0000
No paralelismo
47,2333
23,6165
5,8250
0,0043
No linealidad
6,2386
2,0795
0,5129
0,6745
Tratamientos
5041,6
Error Residual
81
328,4
Total
89
4,0543
5370
El anlisis confirma una regresin lineal altamente significativa. La falta de paralelismo es tambin significativa (p = 0,0043). La preparacin U es por tanto rechazada y el anlisis se repite utilizando nicamente la preparacin T y la preparacin estndar. El valor K es ahora 30645,6.
Tabla 5.1.1.-III. Anlisis de varianza
Fuente de
variacin
Grado de
libertad
Suma de
cuadrados
Cuadrado
medio
Razn F
Probabilidad
Preparaciones
24,0636
24,0600
Regresin
2656,9000
2656,9000
585,6070
0,0000
No paralelismo
1,6000
1,6000
0,3527
0,5551
No linealidad
0,8364
0,4182
0,0922
0,9120
Tratamientos
2683,4
Error Residual
54
245,0
Total
59
2928,4
4,5370
El anlisis sin la preparacin U cumple los requerimientos con respecto a la regresin, linealidad y paralelismo por lo tanto la potencia puede ser calculada. Aplicando las frmulas de la Seccin 3.2.5 se obtiene:
Para la pendiente comn
b=
5 (16,7 + 15,9)
= 7,4148
ln 3 10 2
El ln de la relacin de potencias es
M T' =
C=
65,9 69,7
= 0,1707
3 7,4184
2656,9
= 1,0069
2656,9 4,5370 2,005 2
V =
2656,9
= 1,6093
7,4184 2 3 10
Tomando antilogaritmos encontramos una relacin de potencias de 0,8430 con lmites de confianza, del 95
por ciento, de 0,7250 y 0,9780.
Multiplicando por la potencia asumida de la preparacin T resulta una potencia de 1686 UI/ml con lmites de
confianza, del 95 por ciento, de 1450 y 1956 UI/ml.
5.1.2 Ensayo mltiple de cinco dosis con diseo completamente aleatorizado
Ensayo in vitro de tres vacunas de hepatitis B frente a un estndar
De cada una de las vacunas y del estndar se prepararon tres series independientes de cinco diluciones, en
progresin geomtrica (al medio). Despus de algunos pasos adicionales en el procedimiento del ensayo, se
midieron las absorbancias. Los resultados se muestran en la Tabla 5.1.2.-I.
Tabla 5.1.2.-I. Densidades pticas
Dilucin
Estndar S
Preparacin T
Preparacin U
Preparacin V
1:16000
0,043
0,045
0,051
0,097
0,097
0,094
0,086
0,071
0,073
0,082
0,082
0,086
1:8000
0,093
0,099
0,082
0,167
0,157
0,178
0,127
0,146
0,133
0,145
0,144
0,173
1:4000
0,159
0,154
0,166
0,327
0,355
0,345
0,277
0,268
0,269
0,318
0,306
0,316
1:2000
0,283
0,295
0,362
0,501
0,665
0,576
0,586
0,489
0,546
0,552
0,551
0,624
1:1000
0,514
0,531
0,545
1,140
1,386
1,051
0,957
0,866
1,045
1,037
1,039
1,068
Es conocido que los logaritmos de las densidades pticas tienen una relacin lineal con los logaritmos de las
dosis. E n la Tabla 5.1.2.-II figuran las respuestas medias de las densidades pticas logaritmicamente transformadas.
Tabla 5.1.2.-II. Medias de las transformaciones ln de las absorbancias
S1
-3,075
T1
-2,343
U1
-2,572
V1
-2,485
S2
-2,396
T2
-1,789
U2
-2,002
V2
-1,874
S3
-1,835
T3
-1,073
U3
-1,305
V3
-1,161
S4
-1,166
T4
-0,550
U4
-0,618
V4
-0,554
S5
-0,635
T5
0,169
U5
-0,048
V5
0,047
LS = 6,109
PT = -5,586
LT = 6,264
PU =-6,544
LU = 6,431
PV =-6,027
LV = 6,384
HP =
3
= 0,6
5
HL =
36
= 0,3
120
K = 111,52
Figura 5.1.2.-I
S
0,5
-1
-1,5
-2
-2,5
ln (absorbancia)
-0,5
-3
-3,5
0,5
0
-1
-1,5
-2
-2,5
ln (absorbancia)
-0,5
-3
-3,5
El anlisis de varianza ya puede ser completado con las frmulas de las Tablas 3.2.3.-III y 3.2.3.-IV. El resultado se presenta en la Tabla 5.1.2.-III.
Tabla 5.1.2.-III. Anlisis de varianza
Fuente de
variacin
Grado de
libertad
Suma de
cuadrados
Cuadrado
medio
Razn F
Probabilidad
Preparaciones
4,475
1,492
Regresin
47,58
No paralelismo
0,0187
47,58
7126
0,000
0,006
0,933
0,434
No linealidad
12
0,0742
Tratamientos
19
52,152
0,006
0,926
0,531
Error Residual
40
0,267
Total
59
52,42
0,0067
Una regresin altamente significativa y un desvo de paralelismo y linealidad no significativa, confirma que
las potencias pueden ser calculadas satisfactoriamente. Aplicando las frmulas de la Seccin 3.2.5 dan:
b=
M T' =
5,586 (9,108)
= 0,7752
5 0,90848
C=
47,58
= 1,00057
47,58 0,0067 2,0212
V =
47,58
= 3,8436
0,90852 5 3
Tomando antilogaritmos se calcula una relacin de potencias de 2,171 con lmites de confianza, del 95 por
ciento, de 2,027 y 2,327. Todas las muestras tienen una potencia asignada de 20 g protena/ml y por tanto una
potencia de 43,4 g protena/ml se encuentra para la preparacin desconocida T con lmites de confianza, del 95
por ciento, de 40,5 y 46,5 g protena/ml.
El mismo procedimiento se sigue para estimar la potencia y los lmites de confianza de las otras preparaciones ensayadas. Los resultados se muestran en la Tabla 5.1.2.-IV.
Tabla 5.1.2.-IV
Potencia final estimada e intervalos de confianza del 95% del ensayo de vacunas (en g protena/ml)
Lmite inferior
Estimacin
Lmite superior
Vacuna T
40,5
43,4
46,5
Vacuna U
32,9
35,2
37,6
Vacuna V
36,8
39,4
42,2
5.1.3 Ensayo de dos dosis con diseo de cuadrado latino y sin replicacin
Ensayo de Ocitocina usando rgano aislado
Tabla 5.1.3.-I Disposiciones de tratamientos (Cuadrado latino)
Columnas
Filas
S1
S2
T1
T2
S2
T1
T2
S1
T1
T2
S1
S2
T2
S1
S2
T1
La preparacin estndar se administr en dosis de 0,001UI/ml y 0,003 UI/ml. Se prepararon dosis equivalentes de las preparaciones T basndose en una potencia supuesta de 10 UI/ml. Cada uno de los cuatro tratamientos
se aplic una vez en cada fila y una vez en cada columna.
Tabla 5.1.3.-II Medida de contraccin del tero en milmetros.
Media de las filas (R)
Columnas
Filas
26
31
20
33
27,50
31,5
18
29
23
25,375
17
22
16
28
20,75
24
14
24
16
19,50
Media de las
columnas (C)
24,625
21,25
22,25
25,00
Media
Preparacin T
T1
T2
17,75
27,00
35
30
Contraccin (mm)
25
20
S
T
15
10
5
0
Figura 5.1.3.- I
Las frmulas de las Tablas 3.2.3.-I y 3.2.3.-II proporcionan:
PS= 48,375
LS = 4,4375
PT = 44,75
LT = 4,625
HP = 2
HL =
48
=8
6
K= 8672,265625
El anlisis de varianza ya puede ser completado con las frmulas de las Tablas 3.2.3.-III y 3.2.3.-IV. El resultado se muestra en la Tabla 5.1.3.-IV.
Tabla 5.1.3.-IV Anlisis de varianza
Fuente de
variacin
Suma de
cuadrados
Cuadrado
medio
13,1406
13,1406
Regresin
328,5156
No paralelismo
0,1406
Tratamientos
341,7969
113,9323
Filas
171,5469
Columnas
39,7969
Preparaciones
Grado de
libertad
Razn F
Probabilidad
328,5156
512,8248
0,0000
0,1406
0,2195
0,6560
57,1823
89,2637
0,0000
13,2656
20,7081
0,0014
Error Residual
3,8436
0,6406
Total
15
556,9843
37,1323
El anlisis de varianza demostr diferencias significativas entre las filas y las columnas. Esto indica el aumento de precisin conseguido mediante el uso de un diseo cuadrado latino en lugar de un diseo completamente aleatorizado.
La regresin altamente significativa y el desvo del paralelismo no significativo, confirman que el ensayo es
vlido y se calcula la potencia aplicando las frmulas de la Seccin 3.2.5.
b=
8 (4,4375 + 4,625)
= 8,2491
ln 3 4 2
44,75 48,375
2 8,2491
0,2197
328,5156
328,5156 0,6406 5,9878
V
328,5156
4 2 (8,2491) 2
1,0118
0,6035
0,2223 0,1217
Tomando antilogaritmos se calcula una relacin de potencias de 0,8028 con lmites de confianza, del 95 por
ciento, de 0,7089 y 0,9043. Multiplicando por la potencia asumida de 10 UI/ml resulta una potencia de 8,028
UI/ml con lmites de confianza de 7,089 y 9,043 UI/ml.
5.2 Modelo de relacin de pendientes
5.2.1 Ensayo completamente aleatorizado con diseo (2 3 +1)
Ensayo de Factor VIII
Se lleva a cabo un ensayo cromognico de actividad de concentrado de factor VIII. Se preparan tres diluciones independientes en progresin aritmtica, por duplicado, tanto para el estndar como para la preparacin desconocida. Adems se prepara un blanco. Se realizan dos rplicas de cada dilucin y se usa el promedio de estas
como respuesta a cada tratamiento. Potencia asumida 250 UI/vial.
Tabla 5.2.1-I Promedio de Absorbancias
Blanco
Estndar (S)
S1
Media
241
245
243,0
1,5
474
509
491,5
S2
mUI/ml
3,0
714
754
734,0
Desconocido (T)
S3
T1
4,5
946
976
961,0
1,5
487
486
486,5
Figura 5.2.1-I
T2
mUI/ml
3,0
790
745
767,5
T3
4,5
992
1034
1013,0
PT = 2267
LS = 4842,50
LT = 5060,5
aS = 1556,00
aT = 1375
bS = 939,00
bT = 1053
GS = 1703849,25
GT = 1851907,5
JS = 40,042
JT = 210,042
HB = 0,923076923
HI = 0,023809523
a = 244,25
K = 6302032,071
El anlisis de varianza ya puede ser completado con las frmulas de las Tablas 3.3.3.1.-III y 3.3.3.1.-IV. El
resultado se muestra en la Tabla 5.2.1.-II.
Tablas 5.2.1.-II Anlisis de varianza
Fuente de
variacin
Grado de
libertad
Suma de
cuadrados
Cuadrado
medio
Razn F
Probabilidad
Regresin
926687,8068
463343,9034
861,3460
0,0000
Blancos
1,4423
1,4423
0,0027
0,9600
Interseccin
390,0119
390,0119
0,7250
0,4227
0,4649
0,6463
No linealidad
500,1680
250,0840
Tratamientos
927579,4290
154596,5715
537,938
Error Residual
3765,5000
Total
13
931344,9290
Una regresin altamente significativa y desviaciones no significativas de linealidad e interseccin indica que
puede ser calculada la potencia. Adems se observa el cumplimiento de blancos.
Aplicando las frmulas de la Seccin 3.3.5 se obtiene:
a ' = 243,5769
6 4842,50 9 4 243,5769
= 241,5028
2 27 + 9 3 + 3
6 5060,50 9 4 243,5769
= 257,0742
2 27 + 9 3 + 3
RT' = 1,0645
C=
241,50282
= 1,0044
241,5028 537,938 2,36462 0,0852
2
Se calcula una relacin de potencias de 1,0645 con lmites de confianza, del 95 p or ciento, de 1,0037 y
1,1295. Como la preparacin analizada tiene una potencia asumida de 250 UI/vial, por lo tanto su potencia estimada es de 266,12 UI/vial con lmites de confianza de 250,92 UI/vial y 282,37 UI/vial. Ntese que a diferencia
del anlisis de lneas paralelas no se calculan los antilogaritmos.
Estndar
Preparacin T
II
II
II
7,5
18,0
18,0
15,1
16,8
15,4
15,7
15,0
22,8
24,5
23,1
24,2
20,2
18,6
22,5
30,4
30,4
28,9
27,4
24,2
23,1
30,0
35,7
36,6
34,4
37,8
27,4
27,0
S4
40
35
rea de precipitacin anular (mm)
Preparacin U
S3
30
25
20
15
S1
T1
S2
T3
T2
U3
T4
U4
U2
U1
10
5
0
Figura 5.2.2.-I
Una representacin grfica de los datos no muestra hechos inusuales. Aplicando las frmulas de las Tablas
3.3.3.1.-I y 3.3.3.1.-II se obtiene:
PS = 108,2
PT = 103,85
PU = 85,8
LS = 301,1
LT = 292,1
LU = 234,1
aS = 141,0
aT = 116,7
aU = 139,8
bS = 61,2
bT = 64,95
bU = 39,2
GS = 3114,3
GT = 2909,4
GU = 1917,3
JS = 0,223
JT = 2,227
JU = 0,083
HI = 0,00925926
a' = 11,0416667
K = 14785,7704
y el anlisis de varianza se completa con las frmulas de las Tablas 3.3.3.1.-III y 3.3.3.1.-IV. Esto se muestra en
la Tabla 5.2.2.-II.
Grado de
libertad
Regresin
Interseccin
Suma de
cuadrados
Cuadrado
medio
Razn F
1087,66519
362,55065
339,497525
0,0000
3,47388889
1,7369444
1,62647939
0,2371
0,84425
0,79055794
0,5943
No linealidad
5,0655
Tratamientos
11
1096,20458
Error Residual
12
12,815
Total
23
1109,01958
Probabilidad
1,06791667
Una regresin altamente significativa y desviaciones no significativa de linealidad e interseccin indica que
puede ser calculada la potencia.
Pendiente del estndar
Pendiente T es
Pendiente de U es
bS' =
6 301,1 60 11,0416667
= 6,35611
180
bT' =
6 292,1 60 11,0416667
= 6,05611
180
bU' =
6 234,1 60 11,0416667
= 4,12277
180
Esto proporciona una relacin de potencias de 0,95280 para la vacuna T y 0,64863 para la vacuna U.
C=
6,356112
= 1,00561
6,35611 1,06791667 2,179 2 0,4444
2
El contenido HA por dosis se puede determinar multiplicando las razones de potencias y lmites de confianza
por la potencia asumida, 15 g/dosis. Los resultados estn dados en la Tabla 5.2.2.-III
Tabla 5.2.2.-III Estimacin de potencia HA (g/dosis)
Lmite inferior
Potencia estimada
Lmite superior
Vacuna T
13,4
14,3
15,3
Vacuna U
8,9
9,7
10,6
Dos ensayos pueden ser considerados mutuamente independientes cuando la ejecucin de uno no afecta las
probabilidades de los posibles resultados del otro. Esto implica que los errores aleatorios en la totalidad de los
factores esenciales que influyen sobre el resultado (por ejemplo, diluciones del estndar y de la preparacin que
se va a examinar, la sensibilidad del indicador biolgico) en un ensayo, tienen que ser independientes de los
correspondientes errores aleatorios en el otro. Los ensayos, en das sucesivos, usando las diluciones originales y
retenidas del estndar no son ensayos independientes.
Existen diversos mtodos para combinar los resultados de ensayos independientes, cuanto ms aceptable sea
tericamente el mtodo ms difcil ser de aplicar. A continuacin se describen tres (6.2.3 6.2.4 y 6.3) mtodos
simples de aproximacin, se pueden utilizar otros, siempre que se cumplan las condiciones necesarias.
Cuando se combinan potencias de ensayos provenientes de modelo de lneas paralelas las mismas deben ser
transformadas a logaritmos (M) y cuando provienen de ensayos de modelo relacin de pendientes, las potencias
(R) se usan como tal. Ya que los modelos de lneas paralelas son ms comunes que los basados en el modelo de
relacin de pendientes, el smbolo M que denota el logaritmo de la potencia se usa en las frmulas de esta seccin. En ensayos de relacin de pendientes se usan las mismas formulas y R, pero corregidas por la potencia
asumida en cada ensayo previo a la combinacin..
6.2 Combinacin ponderada de resultados de ensayos
Este mtodo se puede usar siempre que se cumplan las siguientes condiciones:
1 - las estimaciones de la potencia derivan de ensayos independientes;
2 - para cada ensayo, C est prximo a 1 (inferior a 1,1);
3 - el nmero de grados de libertad de los errores residuales individuales no es inferior a 6, pero preferiblemente es mayor de 15.
4 - las potencias individuales estimadas forman un conjunto homogneo (ver Seccin 6.2.2).
Cuando estas condiciones no se cumplen est mtodo no se puede aplicar. Entonces puede utilizarse el mtodo descripto en la Seccin 6.3 para obtener la mejor estimacin de la potencia media.
6.2.1 Clculo de los coeficientes de ponderacin
Se asume que los resultados de cada uno de los n ensayos han sido analizados para dar n valores de M con
los lmites de confianza asociados. Para cada ensayo se obtiene la longitud del intervalo de confianza logartmico, L, restando el lmite inferior del superior. El peso W para cada valor de M se calcula a partir de la ecuacin
6.2.2.-I, en la que t tiene el mismo valor que el utilizado para el clculo de los lmites de confianza.
W=
4t 2
L2
(6.2.1.-I)
2 = W (M M ) 2
(6.2.2.-1)
donde
M =
WM
W
Si el 2 calculado es inferior al valor tabulado correspondiente con (n'1) grados de libertad las potencias son
homogneas y tendrn sentido calcular la potencia media y los lmites de confianza por el mtodo de la Seccin
6.2.3.
Si el valor calculado de este estadstico es superior al valor tabulado, las potencias son heterogneas. Esto
significa que la variacin entre las estimaciones individuales de M es mayor que la que se podra predecir a partir
de las estimaciones de los lmites de confianza, esto es, que existe una variabilidad significativa entre los ensayos. Bajo estas circunstancias la condicin 4 no se cumple y las ecuaciones de la Seccin 6.2.3 ya no se pueden
aplicar. En cambio se pueden usar las frmulas de la Seccin 6.2.4.
WM
W
(6.2.3.-1)
El error estndar del ln (potencia media) se calcula como la raz cuadrada de la inversa del peso total:
1
SM =
(6.2.3.-2)
y se obtienen los lmites de confianza aproximados a partir de los antilogaritmos de los valores dados por
(6.2.3.-3)
M t sM
donde el nmero de grados de libertad de t es igual a la suma del nmero de grados de libertad de los cuadrados
medios del error de los ensayos individuales.
6.2.4 Media ponderada y lmites de confianza basados en la variacin intra e inter ensayo
Cuando los resultados de varios ensayos repetidos se combinan, el valor 2 puede ser significativo. Se considera entonces que la variacin observada tiene dos componentes:
- La variacin intra ensayo
sM2 =
sM2 =
1
W
(M M )
n' (n'1)
donde M es la media no ponderada. La primera componente vara de ensayo a ensayo mientras que la ltima es
comn para todo M.
Para cada M se calcula entonces un coeficiente de ponderacin como sigue
W'=
1
s + sM2
2
M
(M M )
n' (n'1)
M t sM
(6.3.-1)
(6.3.-2)
Donde t tiene (n'-1) grados de libertad. El nmero n' de estimaciones de M normalmente es pequeo, y por
tanto, el valor de t es bastante grande.
6.4 Ejemplo de potencia media ponderada y lmites de confianza de ensayos de lneas paralelas
En la Tabla 6.4.-I se recogen seis estimaciones independientes de la potencia de la misma preparacin, junto
con sus lmites de confianza del 95 % y el nmero de grados de libertad de sus varianzas del error. Cumplen las
condiciones 1, 2 y 3 de la Seccin 6.2. Los ln de las potencias y los pesos se calculan como se describe en la
Seccin 6.2.
Tabla 6.4.-I Potencia estimada e intervalos de confianza de seis ensayos independientes
Potencia estimada
(UI/vial)
Lmite inferior
(UI/vial)
Lmite superior
(UI/vial)
Grados de
libertad
ln
Potencia M
Peso
W
18,367
18,003
18,064
17,832
18,635
18,269
17,755
17,415
17,319
17,253
17,959
17,722
19,002
18,610
18,838
18,429
19,339
18,834
20
20
20
20
20
20
9,8183
9,7983
9,8017
9,7887
9,8328
9,8130
3777,7
3951,5
2462,5
4003,0
3175,6
4699,5
Se evala la homogeneidad de las potencias estimadas con la frmula 6.2.2.-1 la cual da un 2 de 4,42 con 5
grados de libertad. Esto es, no significativo (p = 0,49) por lo que se cumplen todas las condiciones.
La potencia media ponderada se calcula con la frmula 6.2.3.-1, resulta 9,8085.
La frmula 6.2.3.-2 da una desviacin estndar de 0,00673 y lmites de confianza, del 95 %, de 9,7951 y
9,8218 que se calculan con la frmula 6.2.3.-3 donde t tiene 120 grados de libertad.
Al tomar los antilogaritmos se obtiene una potencia de 18187 IU/vial con lmites de confianza de 17946
UI/vial y 18431 IU/vial.
6.5 Ejemplo de potencia media ponderada y lmites de confianza de ensayos de relacin de pendientes con
igual potencia asumida
En la Tabla 6.5.-I se especifican seis estimaciones independientes de potencia de la misma preparacin, con
igual potencia asumida (250UI/vial), la potencia corregida por potencia asumida con sus lmites de confianza del
95% y el nmero de grados de libertad de la varianza del error. Cumplen las condiciones 1,2 y 3 de la Seccin
6.2.
Tabla 6.5.-I Potencia estimada y peso de cuatro ensayos independientes
Potencia estimada
R
260,768
260,656
250,792
260,068
270,000
240,800
1,043072
1,042624
1,003168
1,040272
1,080000
0,963200
Grados de libertad
7
7
7
7
7
7
Peso
W
492,826
315,215
423,044
566,024
320,000
350,100
Se evala la homogeneidad de las potencias estimadas con la formula 6.2.2.-1 la cual da un 2 de 2,8584 con
5 grados de libertad, esto es no significativo, el 2 de tabla es 11,070 por lo que se cumplen todas las condiciones.
La potencia media ponderada se calcula con la frmula 6.2.3.-1, multiplicada por la potencia supuesta resulta
ser 257,25 UI/ vial.
La frmula 6.2.3.2 da una desviacin estndar de 0,02013 y los limites de confianza, del 95%, obtenidos por
la formula 6.2.3.3, donde t tiene 42 g rados de libertad, dan un resultado de 247,08 UI/vial y 267,41 UI/ vial
cuando se multiplican por la potencia supuesta.
7 TABLAS
Las tablas de esta seccin proporcionan un listado de valores crticos para los nmeros de grados de libertad
ms frecuentes. Si un valor crtico no est en la lista debe buscarse en tablas ms completas. Muchos programas
de ordenador incluyen funciones estadsticas y se recomienda su uso en lugar de las tablas de esta seccin.
7.1 Distribucin F
Si un valor observado es mayor que el valor de la tabla se considera que es significativo (lneas superiores,
p=0,05) y muy significativo (lneas inferiores, p=0,01). gl 1 es el nmero de grados de libertad del numerador y
gl 2 es el nmero de grados de libertad del denominador.
Tabla 7.1 Niveles de significacin de la relacin de varianzas (F)
1
2
gl
10
12
15
20
10
4,965
10,044
4,103
7,559
3,708
6,552
3,478
5,994
3,326
5,636
3,217
5,386
3,072
5,057
2,978
4,849
2,913
4,706
2,845
4,558
2,774
4,405
2,538
3,909
12
4,747
9,330
3,885
6,927
3,490
5,953
3,259
5,412
3,106
5,064
2,996
4,821
2,849
4,499
2,753
4,296
2,687
4,155
2,617
4,010
2,544
3,858
2,296
3,361
15
4,543
8,683
3,682
6,359
3,287
5,417
3,056
4,893
2,901
4,556
2,790
4,318
2,641
4,004
2,544
3,805
2,475
3,666
2,403
3,522
2,328
3,372
2,066
2,868
20
4,351
8,096
3,493
5,849
3,098
4,938
2,866
4,431
2,711
4,103
2,599
3,871
2,447
3,564
2,348
3,368
2,278
3,231
2,203
3,088
2,124
2,938
1,843
2,421
25
4,242
7,770
3,385
5,568
2,991
4,675
2,759
4,177
2,603
3,855
2,490
3,627
2,337
3,324
2,236
3,129
2,165
2,993
2,089
2,850
2,007
2,699
1,711
2,169
30
4,171
7,562
3,316
5,390
2,922
4,510
2,690
4,018
2,534
3,699
2,421
3,473
2,266
3,173
2,165
2,979
2,092
2,843
2,015
2,700
1,932
2,549
1,622
2,006
50
4,034
7,171
3,183
5,057
2,790
4,199
2,557
3,720
2,400
3,408
2,286
3,186
2,130
2,890
2,026
2,698
1,952
2,563
1,871
2,419
1,784
2,265
1,438
1,683
3,841
6,635
2,996
4,605
2,605
3,782
2,372
3,319
2,214
3,017
2,099
2,802
1,938
2,511
1,831
2,321
1,752
2,185
1,666
2,039
1,571
1,878
1,000
1,000
gl
7.2 Distribucin t
Si un valor observado es superior al tabulado, se considera que es significativo (p = 0,05) y muy significativo
(p = 0,01).
Tabla 7.2 Niveles de significacin de t (valores absolutos)
gl
p =0,05
p =0,01
gl
p =0,05
p =0,01
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
12
14
16
18
20
12,706
4,303
3,182
2,776
2,571
2,447
2,365
2,306
2,262
2,228
2,179
2,145
2,120
2,101
2,086
63,656
9,925
5,841
4,604
4,032
3,707
3,499
3,355
3,250
3,169
3,055
2,977
2,921
2,878
2,845
22
24
26
28
30
35
40
45
50
60
70
80
90
100
2,074
2,064
2,056
2,048
2,042
2,030
2,021
2,014
2,009
2,000
1,994
1,990
1,987
1,984
1,960
2,819
2,797
2,779
2,763
2,750
2,724
2,704
2,690
2,678
2,660
2,648
2,639
2,632
2,626
2,576
7.3 Distribucin 2
Si un valor observado es superior a uno tabulado, se considera que es significativo (p=0,05) y muy significativo (p=0,01).
Tabla 7.3 Niveles de significacin de
gl
p =0,05
p =0,01
gl
p =0,05
p =0,01
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
3,841
5,991
7,815
9,488
11,070
12,592
14,067
15,507
16,919
18,307
6,635
9,210
11,345
13,277
15,086
16,812
18,475
20,090
21,666
23,209
11
12
13
14
15
16
20
25
30
40
19,675
21,026
22,362
23,685
24,996
26,296
31,410
37,652
43,773
55,758
24,725
26,217
27,688
29,141
30,578
32,000
37,566
44,314
50,892
63,691
X
0,00
0,05
0,10
0,15
0,20
0,25
0,30
0,35
0,40
0,45
0,50
0,55
0,60
0,65
0,70
0,75
0,80
0,85
0,90
0,95
0,500
0,520
0,540
0,560
0,579
0,599
0,618
0,637
0,655
0,674
0,691
0,709
0,726
0,742
0,758
0,773
0,788
0,802
0,816
0,829
1,00
1,05
1,10
1,15
1,20
1,25
1,30
1,35
1,40
1,45
1,50
1,55
1,60
1,65
1,70
1,75
1,80
1,85
1,90
1,95
0,841
0,853
0,864
0,875
0,885
0,894
0,903
0,911
0,919
0,926
0,933
0,939
0,945
0,951
0,955
0,960
0,964
0,968
0,971
0,974
2,00
2,05
2,10
2,15
2,20
2,25
2,30
2,35
2,40
2,45
2,50
2,55
2,60
2,65
2,70
2,75
2,80
2,85
2,90
2,95
0,977
0,980
0,982
0,984
0,986
0,988
0,989
0,991
0,992
0,993
0,994
0,995
0,995
0,996
0,997
0,997
0,997
0,998
0,998
0,998
s2
s2 = Estimacin de la varianza residual dada por el cuadrado medio del error en anlisis de varianza
t = Estadstico de Student (Tabla 7.2.)
v11, v12, v22 = Multiplicadores de (co)varianza para el numerador y el denominador del cociente m en el teorema de Fieller
w = Coeficiente de ponderacin
x = ln (dosis)
y = Respuesta individual o respuesta transformada
A = Potencias asumidas de las preparaciones a ensayar cuando se preparan las dosis
B = Respuesta media de los blancos en los ensayos de relacin de pendiente
C = Estadstico usado en el clculo de intervalos de confianza: C=1/1 g
C1,......, Cn = Respuesta media de cada columna en el diseo de cuadrado latino
D1, D2 = Respuesta media a tiempo 1 o a tiempo 2 en el diseo cruzado doble
F = Relacin de dos estimaciones independientes de varianza que sigue una distribucin F (Tabla 7.1)
GS, GT... = Valores de los tratamientos utilizados en el anlisis de varianza para ensayos de relacin de pendientes
HP, HL = Multiplicadores utilizados en el anlisis de varianza para ensayos de lneas paralelas
HB, HI = Multiplicadores utilizados en el anlisis de varianza para ensayos de relacin de pendientes
I = En ensayos de lneas paralelas, ln del cociente entre dosis adyacentes. En ensayos de relacin de pendientes, el intervalo entre dosis adyacentes
JS, JT = Valores de linealidad utilizados en el anlisis de varianza para ensayos de relacin de pendientes
K = Trmino de correccin usado en el clculo de sumas de cuadrados en el anlisis de varianzas
L = Logaritmo de la longitud del intervalo de confianza
LS, LT,... = Contrastes lineales del estndar y de las preparaciones ensayadas
M' = Logaritmo de la relacin de potencia para una preparacin ensayadas
N = Nmero total de tratamientos en el ensayo (= dh)
PS, PT,... = Suma de las respuestas medias del estndar (S1 +S2 + ..Sd ) y de cada preparacin ensayada
R = Potencia estimada para una preparacin ensayada
R' = Relacin de potencia para una preparacin ensayada
R1,...,Rn = Respuesta media de cada fila l a n en un diseo de cuadrado latino o de cada bloque en un diseo
de bloques aleatorizados
S = Preparacin estndar
Actualizacin total
Tcnica
CDB
ATD
ATG
ATM
MPC
Propiedad medida/estudiada
cambios de energa (absorcin o liberacin de calor)
diferencia de temperaturas entre muestra y referencia
masa (variacin en el peso de la muestra)
deformacin (variacin en las dimensiones fsicas)
cambios visuales (morfolgicos o de color)
Durante los anlisis, las propiedades medidas por cada mtodo son registradas en funcin de la
temperatura y/o el tiempo, permitiendo, para las cuatro primeras tcnicas presentadas, la visualizacin de los
barridos en grficos cuya interpretacin contribuye en gran medida a la elaboracin de las conclusiones.
La informacin producida por los grficos antedichos, se resume en la Tabla 2, excepto para el Anlisis
Trmico Diferencial, cuyas aplicaciones varan segn las caractersticas de los aparatos.
Tabla 2.
Informacin
Calor especfico
CDB
SI
ATG
ATM
en
polmeros
Temperatura de fusin
SI
SI
SI
SI
SI
SI
SI
SI
SI
SI
SI
SI
SI
SI
SI
SI
SI
SI
SI
SI
SI
SI
SI
SI
SI
Tm = T0
SI
SI
SI
en
polmeros
SI
SI
RT02
x2 1
H f
F
en la cual:
Tm = temperatura de la muestra en cualquier
punto de equilibrio durante la fusin (en K)
T0 = temperatura de fusin del componente
principal puro (en K)
R = constante de los gases (8,134 J/K mol)
Hf = calor molar de fusin de la muestra
x2 = fraccin molar de la impureza eutctica
en la muestra completamente fundida
F = fraccin fundida
Esta ecuacin permite obtener parmetros de
fusin tales como:
Tf , Temperatura de Fusin (Punto de Fusin),
cuando F = 1
T0, surge de la extrapolacin de la funcin
cuando x2 = 0
Hf, surge de la integracin del rea de la
endoterma de fusin
y permite adems calcular la Pureza Eutctica
Pureza Eutctica = (1- x2) 100 moles %
(sobre sustancia tal cual)
En la frmula anterior se observa que la
disminucin del punto de fusin es directamente
proporcional a la fraccin molar de la impureza.
Los resultados de estas determinaciones son
suficientemente exactos cuando las impurezas no
exceden aproximadamente el 1,5% en moles. Las
impurezas de sntesis y de degradacin, entre otras,
guardan cierta similaridad con el producto final y
generalmente no presentan problemas de
solubilidad en el material fundido, siendo, en estos
casos, a travs de un comportamiento eutctico,
globalmente cuantificables por esta tcnica
Las impurezas no eutcticas no son evaluables a
travs de CDB. Su efecto puede ser incluso el de
aumentar el punto de fusin.
Ejemplos de
impurezas no e utcticas son los cristales mixtos y
las soluciones slidas.
A las sustancias que presentan simultneamente
ms de un estado polimrfico no se les determina la
pureza, a menos que se conviertan completamente
en la modificacin estable durante la fusin.
Acido para eliminar el carbono inorgnico Acido clorhdrico diluido, cido fosfrico o
cualquier otro cido que se pueda emplear para
dicho propsito, en suficiente cantidad de Agua
para realizar mediciones, para obtener la
concentracin especificada por el fabricante del
aparato.
Procedimiento - Emplear el mtodo, analtico
apropiado segn el aparato. Sumergir el recipiente
para la muestra, antes de ser empleado en una
mezcla de perxido de hidrgeno al 30 % y cido
ntrico diluido (1:1), lavando finalmente con Agua
para realizar mediciones. Lavar la microjeringa
con una mezcla constituida por una solucin de
hidrxido de sodio (1 en 20) y etanol anhidro (1:1)
o cido clorhdrico diluido (1 en 4), lavando
finalmente con Agua para realizar mediciones.
Calibrar el aparato con la Solucin estndar de
biftalato de potasio o la recomendada por el
fabricante del aparato, emplear el procedimiento
sugerido por el fabricante.
Es recomendable que el aparato se instale en la
lnea de produccin del agua a ensayar. De no ser
as, llevar a cabo este ensayo en un rea libre de
solventes orgnico u otras sustancias que afecten el
resultado del ensayo. Realizar las mediciones
inmediatamente despus de la recoleccin de la
muestra.
MEDICIN DEL CARBONO ORGNICO
POR SUSTRACCIN DEL CARBONO
INORGNICO DEL CARBONO TOTAL
De acuerdo con los procedimientos del ensayo
establecidos por el fabricante del aparato, inyectar
en el dispositivo de inyeccin un volumen de
muestra apropiado en relacin con la cantidad de
carbono a d eterminar y descomponer el carbono
orgnico e i norgnico presentes en la muestra.
Detectar el dixido de carbono generado y calcular
la cantidad de carbono total, emplear para ello un
PM: 452,37
PM: 792,84
6( AM / AE )
en la cual AM es la absorbancia de la solucin
muestra y AE la absorbancia de la solucin estndar.
El porcentaje total de colorantes subsidiarios no
debe ser mayor a 6 %.
Contenido de colorante total Titulacin con TiCI3 - Mtodo III. Cada
mililitro de TiCl3 0,1 N equivale a 0,03964 g de
C37H34N2O9S3Na2. Contiene no menos de 85,0 %.
Valoracin espectrofotomtrica Concentracin: 0,006 mg por ml. Determinar la
absorbancia a l a longitud de onda de mxima
absorcin, aproximadamente a 630 nm. Contiene
no menos de 85,0 %.
AZUL PATENTE V (CI 42051)
C54H62N4O14S4Ca
PM: 1.159,4
PM:879,87
PM: 466,36
PM:867,7
PM:604,5
PM:496,42
PM:534,4
PM:576,63
PM:808,86
6( AM / AE )
en la cual AM es la absorbancia de la solucin
muestra y AE la absorbancia de la solucin estndar.
El porcentaje total de colorantes subsidiarios no
debe ser mayor a 6 %.
Contenido de colorante total Tilulacin con TiCI3 - Mtodo III. Cada
mililitro de TiCl3 0,1 N equivale a 0,0404 g de
C37H34N2Na2O10S3. Contiene no menos de 85 %.
Valoracin espectrofotomtrica Concentracin: 0,006 mg por ml. Determinar la
absorbancia a l a longitud de onda de mxima
absorcin, aproximadamente a 625 nm. Contiene
no menos de 85,0 %.
Concentracin: 0,006 mg por ml. Determinar la
absorbancia a l a longitud de onda de mxima
absorcin, aproximadamente a 625 nm. C ontiene
no
menos
de
85,0 %.
Actualizacin parcial
70. CONDUCTIVIDAD
La resistividad elctrica de una solucin
acuosa es por definicin la resistencia en corriente
alterna medida en ohms entre las caras opuestas de
un cubo de un centmetro de lado de una solucin
acuosa a una temperatura especificada.
La conductividad , de una solucin es por
definicin la funcin inversa de la resistividad .
La resistencia R, de un conductor de seccin
transversal A, y longitud L, est dada por la
siguiente expresin:
R=
o sea,
R=
L
A
1 L
1 L
=
RA
A
C =
L
A
Tabla.
Solucin
estndar
Normalidad
aproximada de la
solucin
0,01
0,001
Temperatura
C
Conductividad
S cm-1
0
18
25
0
18
25
773,6
1.220,5
1.408,8
77,69
127,54
146,93
C = RKCl KCl
en la cual RKCl es la resistencia medida, en
megaohms, y KKCl es la conductividad de la
solucin estndar de cloruro de potasio empleada,
expresada en S cm-1.
La medida de la constante de la celda
conductimtrica C, deber estar comprendida dentro
del 2 % del valor indicado.
Determinacin de la conductividad de la
solucin a ensayar - Luego de calibrar el aparato
con una de las soluciones estndar, enjuagar la
celda conductimtrica varias veces con agua libre
de dixido de carbono y al menos dos veces con la
solucin muestra a 25,0 0,1 C o a la temperatura
especificada en la monografa correspondiente.
Proceder con las sucesivas mediciones segn como
se especifique en la monografa correspondiente.
mantiene a 25 1 C, comenzar a agitar vigorosamente la muestra y observar peridicamente la conductividad. Cuando el cambio en la conductividad (debido
a la captacin del dixido de carbono atmosfrico) es
menor que el valor neto de 0,1 S/cm durante 5 minutos, registrar la conductividad.
5. Si la conductividad no es mayor que
2,1 S/cm, el agua cumple con los requisitos del ensayo de conductividad. Si la conductividad es mayor
que 2,1 S/cm, proceder con la Etapa 3.
ETAPA 3
6. Realizar este ensayo dentro de los 5 minutos
aproximadamente de la determinacin de la conductividad en el Paso 5, mientras se mantiene la temperatura de la muestra a 25 1 C. Agregar una solucin
saturada de cloruro de potasio a la misma muestra de
agua (0,3 ml por cada 100 ml de muestra), y determinar el pH con una exactitud de 0,1 unidades de pH,
segn se indica en 250. Determinacin del pH.
7. Empleando la Tabla 2. Etapa 3. Requisitos
de conductividad y pH, determinar el lmite de la
conductividad al valor de pH medido. Si la conductividad medida en el Paso 4 no es mayor que los requisitos de conductividad para el pH determinado en el
Paso 6, el agua cumple con los requisitos para el
ensayo de conductividad. Si la conductividad medida
es mayor que este valor o el pH se encuentra fuera del
intervalo entre 5,0 y 7,0, el agua no cumple con los
requisitos para el ensayo de conductividad.
Requisito de conductividad
(S/cm)*
0,6
0,8
0,9
1,0
1,1
1,3
1,4
1,5
1,7
1,8
1,9
55
60
65
70
75
80
85
90
95
100
2,1
2,2
2,4
2,5
2,7
2,7
2,7
2,7
2,9
3,1
80. CONSERVANTES
Los conservantes son sustancias auxiliares que
se agregan a l as preparaciones oficiales para
protegerlas de la contaminacin microbiana.
Cualquier agente antimicrobiano puede exhibir
propiedades conservantes, sin embargo, se debe
tener en cuenta que todos los agentes
antimicrobianos tiles son sustancias txicas.
Para evitar efectos adversos, la concentracin de
los conservantes en el producto terminado debe
ser la concentracin mnima que presenta el efecto
antimicrobiano buscado y considerablemente ms
baja que la concentracin txica en seres
humanos.
En ningn caso se debe emplear un
conservante para prevenir contaminaciones
debidas a malas prcticas de elaboracin.
Se establecen a co ntinuacin los ensayos de
Eficacia y Contenido.
EFICACIA
Los siguientes ensayos se emplean para
demostrar la eficacia de los conservantes
agregados a p roductos sean o no estriles,
envasados en envases multidosis. En el caso de
productos no estriles, se han agregado para
inhibir el crecimiento de microorganismos que
hubieran sido introducidos accidentalmente
durante o despus del proceso de elaboracin,
mientras que en los productos estriles, ya sean
parenterales, ticos, nasales u oftlmicos, deben
tambin
inhibir
el
crecimiento
de
microorganismos que pudieran introducirse
durante las extracciones repetidas de las dosis
individuales.
Estos ensayos se aplican solamente al
producto en el envase original antes de su empleo.
Microorganismos de ensayo Emplear
cultivos de los siguientes microorganismos
[NOTA: pueden emplearse cultivos provenientes
de otras colecciones que posean las mismas
caractersticas]:
Candida albicans (ATCC N 10231)
Aspergillus niger (ATCC N 16404)
Escherichia coli (ATCC N 8739)
Pseudomonas aeruginosa (ATCC N 9027)
Staphylococcus aureus (ATCC N 6538)
Adems de los microorganismos mencionados,
se pueden incluir otros, especialmente si dichos
microorganismos pueden introducirse durante el
empleo del producto.
Medios - Para el cultivo inicial de los
microorganismos se debe seleccionar un medio
Fenol
Parabenos
Polietilenglicol al 5 % (peso
molecular entre 15.000 y 20.000)
sobre soporte de tierra silcea
calcinada y lavada con cido.
Polietilenglicol al 5 % (peso
molecular entre 15.000 y 20.000)
sobre soporte de tierra silcea
calcinada y lavada con cido.
Polietilenglicol al 5 % (peso
molecular entre 15.000 y 20.000)
sobre soporte de tierra silcea
calcinada y lavada con cido.
Dimetilpolisiloxano al 5 % sobre
soporte de tierra silcea calcinada y
lavada con cido.
Alcohol benclico
Solucin del estndar interno - Transferir
aproximadamente 380 mg de fenol a u n matraz
aforado de 200 ml. Disolver en 10 ml de metanol,
completar con agua a volumen y mezclar.
Preparacin
estndar
Transferir
aproximadamente 180 mg de alcohol benclico,
exactamente pesados, a un matraz aforado de
100 ml.
Disolver en 20,0 ml de metanol,
completar a volumen con Solucin del estndar
interno y mezclar.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatgrafo
volmenes
iguales
(aproximadamente 5 l) de la Preparacin
estndar y la Preparacin muestra, registrar los
cromatogramas y medir las respuestas de los picos
para el alcohol benclico y el fenol en el
cromatograma de la Preparacin estndar,
designndolas P1 y P2, respectivamente. Del
mismo
modo,
determinar
los
valores
correspondientes p1 y p2, para la Preparacin
muestra.
Calcular el contenido de alcohol
benclico (C7H8O), en mg por ml, en la muestra,
por la frmula siguiente:
100 (C / V )( p1 / p 2 )(P2 / P1 )
en la cual C es la concentracin, en mg por ml, de
alcohol benclico en la Preparacin estndar y V
es el volumen de muestra, en ml, empleado para
preparar 100 ml de la Preparacin muestra.
Clorobutanol
[NOTA: mantener el inyector a 180 C y el
detector a 220 C].
Dimensiones de la
columna
1,8 m 3 mm
Caudal
(ml/min)
50
Temperatura de
la columna (C)
140
1,8 m 2 mm
20
110
1,2 m 3 mm
50
145
1,8 m 2 mm
20
150
C (L / D )(RM / RE )
en la cual C es la concentracin, en mg por ml, de
clorobutanol, calculado sobre la sustancia anhidra,
en la Preparacin estndar, L es la cantidad
declarada, en mg, de clorobutanol en cada ml de
la muestra, D es la concentracin, en mg por ml,
de clorobutanol en la Preparacin muestra,
considerando el volumen de muestra tomado y el
grado de dilucin y RM y RE son los cocientes
entre las respuestas de los picos de clorobutanol y
benzaldehdo obtenidos a partir de la Preparacin
muestra
y
la
Preparacin
estndar,
respectivamente.
Fenol
Solucin del estndar interno - Transferir
1 ml de alcohol benclico a u n matraz aforado de
500 ml, completar con metanol a volumen y
mezclar.
Preparacin
estndar
Transferir
aproximadamente 75 mg de fenol, exactamente
pesados, a un matraz aforado de 100 ml, disolver
en 7,5 ml de metanol y agregar 20,0 ml de
Solucin del estndar interno. Completar con
agua a volumen y mezclar.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatgrafo
volmenes
iguales
(aproximadamente 3 l) de la Preparacin
estndar y la Preparacin muestra, registrar los
cromatogramas y medir las respuestas de los picos
de fenol y de alcohol benclico en el
cromatograma de la Preparacin estndar,
designndolos P1 y P2, respectivamente. Del
mismo
modo,
determinar
los
valores
correspondientes a p1 y p2, para la Preparacin
muestra. Calcular el contenido de fenol (C6H6O),
en mg por ml, en la muestra, por la frmula
siguiente:
100(C / V )( p1 / p 2 )(P2 / P1 )
en la cual C es la concentracin, en mg por ml, de
fenol en la Preparacin estndar y V es el
volumen de muestra, en ml, empleado para
preparar 100 ml de la Preparacin muestra.
Metilparabeno y propilparabeno
Solucin del estndar interno - Transferir
aproximadamente 200 mg de benzofenona a un
matraz aforado de 250 ml, completar a volumen
con ter y mezclar.
10(C M / V )( p1 / p3 )(P3 / P1 )
10(C P / V )( p 2 / p3 )(P3 / P2 )
Actualizacin parcial
20,0 g
5,0 g
40 ml
960 ml
5,0 g
5,0 g
1,0 g
10,0 g
75,0 g
15,0 g
0,025 g
1.000 ml
Mezclar
y
luego
calentar,
agitando
frecuentemente. Calentar a ebullicin durante
1 minuto hasta lograr disolucin.
pH despus de la esterilizacin: 7,4 0,2.
V. Agar Baird-Parker
Digerido pancretico de casena ..
Extracto de carne vacuna
10,0 g
5,0 g
Extracto de levadura
Cloruro de litio
Agar .
Glicina .
Piruvato de sodio .
Agua
1,0 g
5,0 g
20,0 g
12,0 g
10,0 g
950 ml
10,0 g
5,0 g
10,0 g
5,0 g
5,0 g
10,0 g
16,0 g
25,0 g
1.000 ml
20,0 g
1,4 g
10,0 g
13,6 g
0,3 g
10,0 ml
1.000 ml
10,0 g
10,0 g
1,5 g
1,5 g
10,0 ml
15,0 g
1.000 ml
20,0 g
1,4 g
10,0 g
15,0 g
10,0 ml
1.000 ml
3,0 g
5,0 g
5,0 g
1.000 ml
2,5 g
2,5 g
1,0 g
10,0 g
30,0 g
1.000 ml
3,0 g
5,0 g
5,0 g
10,0 g
5,0 g
10,0 g
80 mg
20,0 g
12,5 mg
1.000 ml
3,5 g
5,0 g
7,5 g
7,5 g
5,0 g
3,0 g
80 mg
13,5 g
2,5 g
6,8 g
800 mg
1.000 ml
5,0 g
5,0 g
5,0 g
Dextrosa ...
Fosfato de sodio ...
Sulfato ferroso .
Indicador de sulfito de bismuto ...
Agar .
Verde brillante .
Agua
5,0 g
4,0 g
300 mg
8,0 g
20,0 g
25 mg
1.000 ml
10,0 g
10,0 g
10,0 g
10,0 g
1,0 g
200 mg
5,0 g
200 mg
13,0 g
25 mg
1.000 ml
10,0 g
2,0 g
15,0 g
10,0 g
400 mg
65 mg
1.000 ml
40,0 g
10,0 g
15,0 g
1.000 ml
15,0 g
20,0 g
10,0 g
5,0 g
1,0 g
0,5 g
2 mg
15,0 g
100 mg
25,0 mg
1.000 ml
7,0 g
3,0 g
5,0 g
10,0 g
1,5 g
0,03 g
0,002 g
13,0 g
1.000 ml
10,0 g
5,0 g
20,0 g
2,0 g
8,0 g
15 mg
1.000 ml
15,0 g
10,0 g
0,5 g
0,5 g
0,01 g
0,12 g
13,9 g
1.000 ml
0,1 g
0
0
1
1
1
1
2
2
2
2
2
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
0
0
1
1
2
2
2
3
3
3
3
0
1
0
1
0
1
2
0
1
2
3
23
38
43
75
93
150
210
240
460
1.100
> 1.100
7
10
20
20
30
50
80
100
200
300
-
129
180
210
280
390
510
640
1400
2.400
4.800
-
Medio selectivo
Agar Vogel-Johnson
Agar Manitol-Sal
Agar Baird-Parker
Coloracin de Gram
Cocos positivos (en racimos)
Cocos positivos (en racimos)
Cocos positivos (en racimos)
Caractersticas
morfolgicas de
las colonias
Generalmente verdosas
Generalmente incoloras
o amarillentas
Generalmente verdosas
Fluorescencia a la
luz ultravioleta
Prueba de oxidasa
Coloracin de Gram
Verdosas
Positiva
Bacilos negativos
Amarillenta
Positiva
Bacilos negativos
Azul
Positiva
Bacilos negativos
Caractersticas morfolgicas
de las colonias
Pequeas, transparentes, incoloras o de color rosado a
blanco opaco (frecuentemente circundadas por un halo
de un color rosado a rojo).
Rojas, con o sin centro negro.
Negras o verdes
1,0 g o 1,0 ml
0,1 g o 0,1 ml
0,01 g o 0,01 ml
+
+
+
+
+
Ms de 102
Menos de 102 y ms de 10
Menos de 10 y ms de 1
Menos de 1
Tabla 7. Asignacin del contenido lmite de microorganismos para productos farmacuticos no estriles, segn
su va de administracin (Disp. ANMAT 7352/99)
Recuento de aerobios
viables totales
Enterobacteriaceae
por g o ml
Categora
Vas de
administracin
1.1
1.2
Inhalatoria
10
Nasal, tica,
rectal, tpica y
vaginal
10
Hongos y
levaduras
Ausencia en 1 g o ml*
Grmenes revivificables
Enterobacteriaceae
Pseudomonas aeruginosa
Staphylococcus aureus
Enterobacteriaceae
Pseudomonas aeruginosa
Staphylococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa**
Staphylococcus aureus
3
Oral
10
10
10
Escherichia coli
Salmonella spp
* Anaerobios sulfitorreductores para productos cuyas materias primas se consideren fuentes de contaminacin.
** Pseudomonas aeruginosa solamente para formas farmacuticas lquidas.
3
100. CROMATOGRAFA
La cromatografa es un mtodo por el cual las
sustancias se separan mediante un proceso de
migracin diferencial en un sistema que consta de
dos fases. Una fase que fluye continuamente en una
direccin dada (fase mvil) y otra que permanece
fija (fase estacionaria). En estos sistemas los
componentes de una mezcla pueden presentar
diferentes movilidades debido a d iferencias en la
capacidad de adsorcin, particin, solubilidad,
presin de vapor, tamao molecular o carga. Los
mecanismos de separacin son: adsorcin,
disolucin y particin, filtracin y permeacin o
tamices moleculares, intercambio inico.
Las tcnicas aplicadas mediante los distintos
mecanismos-mencionados empleados en esta
Farmacopea son: Cromatografa en columna,
Cromatografa en papel, Cromatografa en capa
delgada, Cromatografa de gases, Cromatografa
lquida de alta eficacia y Cromatografa de
exclusin.
La Cromatografa de adsorcin se basa en la
separacin de un soluto entre la fase estacionaria
constituida por un adsorbente, como por ej.,
almina activada, slica gel y resinas de intercambio
inico y la fase mvil constituida por el solvente de
elusin.
La Cromatografa de particin se basa en la
distribucin selectiva del soluto entre la fase
estacionaria y la fase mvil. Se clasifica en
cromatografa de particin en fase normal y
cromatografa de particin en fase reversa. En la
cromatografa de particin en fase normal las
sustancias a separar se distribuyen entre dos
lquidos inmiscibles uno de los cuales es ms polar,
acta como fase estacionaria y se encuentra
adsorbido sobre un soporte slido, brindando una
gran superficie de contacto a la fase mvil menos
polar. En la cromatografa de particin en fase
reversa la fase estacionaria es menos polar que la
fase mvil.
El grado de particin de un compuesto dado
entre las dos fases lquidas se expresa por su
coeficiente de particin o de distribucin y puede
modificarse variando la composicin de la fase
mvil. En el caso de compuestos que se disocian, la
distribucin se puede controlar modificando, entre
otras propiedades, el pH, la constante dielctrica y
la fuerza inica.
La Cromatografa de intercambio inico se
emplea para separar compuestos ionizables y
solubles en agua. Las fases estacionarias empleadas
son generalmente resinas orgnicas sintticas. Las
resinas de intercambio catinico contienen sitios
(t 2 t 0 )
(t1 t 0 )
t
N = 16
W
N = 5,54
W1 / 2
R=
t 2 t1
1 / 2(W2 + W1 )
k=
(t n t 0 )
t0
100
SR =
X
(x
n 1
F=
W0, 05
2f
1.000 AP
en la cual P es el peso molecular asignado de la
aflatoxina correspondiente y es la absortividad
molar para cada aflatoxina en la mezcla de
benceno y acetonitrilo (98:2). Los valores de P y
se encuentran en la Tabla 1.
Tabla 1.
P
312
314
328
330
19.800
20.900
17.100
18.200
Mtodo II
Determinacin de aflatoxinas por
cromatografa lquida
Este mtodo se emplea para determinar
aflatoxinas en formas farmacuticas de uso oral y
tpica sin tratamiento trmico antes de la
administracin.
Sistema cromatogrfico - Emplear un equipo
para cromatografa de lquidos equipado con un
detector de fluorescencia capaz de proveer una
excitacin de 360 nm y una emisin de 440 nm y
una columna 15 cmx 4 mm con fase estacionaria
constituida por octadecilsilano qumicamente
unido a partculas de slice porosa de 5 m de
dimetro.
Mantener
la
columna
a
aproximadamente 30 C.
El caudal es de
aproximadamente 1,0 ml por minuto.
Fase mvil - Agua, acetonitrilo y metanol
(40:10:10) filtrado y desgasificado. H acer los
ajustes necesarios (ver Aptitud del sistema en 100.
Cromatografa).
Solucin madre del estndar - Proceder segn
se indica en Mtodo I.
Solucin estndar - Transferir alcuotas de
cada una de las Soluciones madre del estndar
valoradas a matraces apropiados y preparar una
solucin concentrada que contenga 300 ng por ml
de B1, 50 ng por ml de B2, 150 ng por ml de G1 y
50 ng por ml de G2 empleando una mezcla de
benceno y acetonitrilo (98:2).
Evaporar a
sequedad en estufa de vaco a 6 0 C y diluir el
residuo con 1 ml de acetonitrilo. Transferir las
alcuotas indicadas en la Tabla 2 de esta solucin
a matraces aforados de 10 ml, llevar a volumen
con acetonitrilo para obtener las soluciones
indicadas en la Tabla 2.
(PCV ) Sm
en la cual P es el volumen, en l, de Solucin
estndar sembrado, C es la concentracin de
aflatoxina en la Solucin estndar (B1 y G1 1 g
por ml y B2 y G2 0,5 g por ml), V es el volumen,
en l, de la dilucin final del residuo, S es el
volumen de Solucin muestra sembrado y m es el
peso del residuo en g.
Tabla 2.
Soluciones estndar
diluidas
Alcuota
(l)
A
B
C
270
180
90
B1
81
4,5
27
Concentracin de aflatoxinas
(g por ml)
B2
G1
13,5
40,5
9
27
4,5
13,5
G2
13,5
9,
f =PV
en la cual P es la cantidad de agua tomada, en mg,
y V es el volumen de reactivo de Karl Fischer, en
ml, consumido para la titulacin del agua.
Para la determinacin de cantidades de agua
menores a 1 %, el reactivo puede estandarizarse
con tartrato de sodio segn se indica a
continuacin. Transferir una cantidad apropiada
de metanol al frasco de titulacin seco y titular el
solvente con reactivo de Karl Fischer hasta
alcanzar el punto final. Agregar rpidamente 150
a 350 mg de tartrato de sodio (C4H4Na2O6.2H2O)
exactamente pesados, y titular hasta alcanzar el
punto final. Calcular el factor de equivalencia, f,
correspondiente a la cantidad de agua, en mg, por
ml de reactivo, por la frmula siguiente:
f = 2(18,02 230,08)(P V )
en la cual 18,02 y 230,08 son los pesos
moleculares del agua y del tartrato de sodio
dihidratado, respectivamente, P es el peso, en mg,
de tartrato de sodio dihidratado y V es el volumen,
en ml, de reactivo consumido para la titulacin del
agua.
Procedimiento - En general, la titulacin de
agua con reactivo de Karl Fischer debera llevarse
a cabo a l a misma temperatura que se hizo la
estandarizacin y evitando la humedad
atmosfrica. El aparato se equipa con un resistor
variable en el circuito y este resistor se manipula
para mantener un voltaje constante entre los dos
electrodos de platino sumergidos en la solucin a
ser titulada, midindose la variacin de intensidad
de corriente (titulacin amperomtrica a voltaje
constante). Durante la titulacin, la intensidad de
corriente en el circuito vara notablemente, pero
vuelve al valor original en pocos segundos. Al
final de la titulacin, la corriente permanece fija
en un valor durante un tiempo generalmente
mayor a 30 segundos. Este estado se designa
como el punto final de la titulacin.
Adicionalmente, el reactivo de Karl Fischer
proporciona un i ndicador visual del punto final,
dado el color caracterstico que produce el exceso
de iodo en la solucin que se est titulando.
(Vf
P )100
Ver Titulacin
f = f 10 V
en la cual f es el factor del reactivo de Karl
Fischer empleado en la titulacin y V es el
volumen, en ml, de Solucin estndar de aguametanol consumido en la titulacin.
Procedimiento - Cuando se emplea el mtodo
amperomtrico a voltaje constante, en la titulacin
por retorno, la aguja del microampermetro est
fuera de escala durante la presencia de exceso de
reactivo y vuelve rpidamente a la posicin
original cuando el sistema alcanza el punto final.
Cuando se emplea el mtodo potenciomtrico
a intensidad de corriente constante, en la titulacin
por retorno, la aguja del milivoltmetro est en la
posicin original durante la presencia de exceso
de reactivo.
Finalmente aparece un voltaje
definido cuando la titulacin alcanza el punto
final.
Transferir una cantidad apropiada de metanol
al frasco de titulacin seco y titular el solvente
con reactivo de Karl Fischer hasta alcanzar el
punto final. Pesar exactamente una cantidad de
muestra con un contenido de agua estimado entre
5 y 30 mg, transferirla rpidamente al frasco de
titulacin y disolver con agitacin. Agregar un
exceso, exactamente medido, de reactivo de Karl
Fischer y titular la solucin con la Solucin
estndar de agua-metanol, con agitacin enrgica,
hasta el punto final.
En el caso de una muestra insoluble, reducir a
polvo fino rpidamente, pesar exactamente una
cantidad apropiada, transferir rpidamente al
frasco de titulacin y agregar un exceso,
exactamente medido, de reactivo de Karl Fischer.
Despus de agitar entre 5 y 30 minutos, evitando
[(Vf V f ) / P]100
[C 10,72 P]100
100 (V2 V1 ) P
en la cual P es el peso, en g, de la muestra a
ensayar, V1 es el volumen, en ml, de agua
obtenido en la primera destilacin y V2 es el
volumen total, en ml, de agua obtenido en las dos
destilaciones.
2 DRM RE
en la cual D es el factor de dilucin, expresado como
una fraccin, empleado en la preparacin de la
Solucin muestra y RM y RE son los cocientes entre
las respuestas de los picos de alcohol y del estndar
interno obtenidos a partir de Preparacin muestra y
la
Preparacin
estndar,
respectivamente.
[ ]t = 100a / lc
en la cual [] es la rotacin especfica a la longitud
de onda , t es la temperatura a la que se realiza la
lectura, a es la rotacin observada en grados, l es el
paso de la celda en decmetros y c es la
concentracin del analito, en g por 100 ml. P or lo
tanto, [] es 100 veces el valor medido, en grados,
[ ]25D
Para algunas sustancias, especialmente lquidos
de composicin compleja, como por ej., aceites
esenciales, la rotacin ptica se expresa en funcin
de la rotacin observada, a, medida bajo las
condiciones
definidas
en
la
monografa
correspondiente.
La polarimetra puede realizarse empleando
aparatos que detectan la rotacin angular de modo
visual (al igualar la intensidad de luz sobre dos
campos) o mediante un sistema fotoelctrico,
siendo esta ltima ms exacta y precisa que la
medicin visual.
El empleo de longitudes de onda menores, como
por ej., las lneas de la lmpara de mercurio a 578,
546, 436, 405 y 365 nm en un polarmetro
fotoelctrico, puede proporcionar ventajas en
cuanto a la sensibilidad, con la consiguiente
reduccin de la concentracin del analito. En
general, la rotacin ptica observada a 436 nm, es
aproximadamente el doble y a 365 nm
aproximadamente tres veces la observada con la
lnea D del sodio. La reduccin de la concentracin
del analito requerida para la medicin, a veces
puede realizarse al convertir la sustancia a e nsayar
en una que tenga una rotacin ptica
significativamente mayor.
Rotacin especfica - Se calcula a p artir de la
rotacin ptica observada en la solucin muestra,
obtenida segn se especifica en la monografa
correspondiente. Cuando se emplea un polarmetro
fotoelctrico se hace una sola medicin, corregida
por el blanco de solvente. C uando se emplea un
k = dt
en la cual es la viscosidad, en centipoise, del
lquido de viscosidad conocida, d es la densidad
relativa del lquido empleado a 20 C (ver 160.
Determinacin de la densidad relativa) y t es el
tiempo, en segundos, para que el lquido escurra de
la marca superior a la marca inferior.
[NOTA: cuando un viscosmetro se repara, debe
calibrarse nuevamente.
An las reparaciones
menores
causan,
frecuentemente,
cambios
significativos en el valor de su constante, k].
Determinacin de la viscosidad mediante el
Viscosmetro de Tubo Capilar La
determinacin de la viscosidad se efecta a una
temperatura de 20,0 0,1 C, a menos que se
especifique de otro modo en la monografa
correspondiente.
El ensayo no es vlido si dos lecturas
consecutivas difieren ms de 1 %. La media de tres
lecturas, como mnimo, da el tiempo de vertido del
lquido desconocido.
Se calcula la viscosidad absoluta, , en
centipoise, mediante la frmula siguiente:
= kdt
en la cual k es la constante del aparato, d es la
densidad del lquido desconocido y t es el tiempo de
escurrimiento del lquido desconocido.
Procedimiento (ver Figura) Llenar el
viscosmetro por el tubo L, con una cantidad
suficiente del lquido desconocido a 20 C, a menos
que se especifique de otro modo en la monografa
correspondiente, para llenar el bulbo A. Asegurar
que el nivel del lquido en el bulbo B, est por
debajo del orificio de ventilacin del tubo M.
Sumergir el viscosmetro en un bao de agua a
20,0 0,1C, a menos que se especifique de otro
modo en la monografa correspondiente.
Mantenerlo en posicin vertical y dejar reposar
durante 30 minutos para establecer el equilibrio
trmico. Cerrar el tubo M, y elevar el nivel del
lquido en el tubo N, hasta que se site a 8 mm
aproximadamente por encima de la marca E.
Mantener el lquido en este nivel, cerrando el tubo
N, y abriendo el tubo M. Abrir el tubo N, y medir
mediante un cronmetro, con una aproximacin de
1/5 segundo, el tiempo necesario para que el nivel
del lquido descienda de la marca E a la marca F.
1
1 M 1
. 2 2
4. .h R A RB
=k
Volumen declarado
(ml)
0,5
1,0
2,0
5,0
10,0
20,0
30,0
50,0 o ms
Tabla.
ndice de perxidos esperado
0 - 12
2,00 - 5,00
12 - 20
1,20 - 2,00
20 - 30
0,80 - 1,20
30 - 50
0,500 - 0,800
50 - 90
0,300 - 0,500
n=
seni
senr
t1 = t 2 + K (760 b )
en la cual t1 es la temperatura corregida, t2 es la
temperatura observada, b es la presin
baromtrica, en mm Hg, durante la destilacin y K
es el factor de correccin indicado en la Tabla, a
menos que se especifique de otro modo en la
monografa correspondiente.
Mtodo II
Aparato - Emplear un aparato similar al
especificado para el Mtodo I, excepto que el
baln de destilacin es de 200 ml, con un cuello
de 17 a 19 cm de largo y 20 a 22 mm de dimetro
interno.
Procedimiento - Proceder segn se indica en
Mtodo I, pero colocaren el baln 100 ml del
lquido a destilar.
<100
0,04
100 a 140
0,045
140 a 190
0,05
190 a 240
0,055
>240
0,06
Actualizacin parcial
pH x = pH r +
(E x E r )
k
Solucin muestra.
Posteriormente, llenar el
recipiente con esta solucin y efectuar la medicin
del pH. Emplear agua para solubilizar o diluir la
muestra para las determinaciones del pH.
Cuando sea suficiente un valor aproximado de
pH, se pueden emplear indicadores y/o papeles
indicadores (ver Indicadores, Papeles y Papeles
indicadores).
Tetraoxalato
de potasio
0,05 M
Biftalato de
potasio
0,05 M
Fosfato
equimolar
0,05 M
Tetraborato
de sodio
0,01 M
Hidrxido de calcio,
saturado a 25 C
10
1,67
4,00
6,92
9,33
13,00
15
1,67
4,00
6,90
9,28
12,81
20
1,68
4,00
6,88
9,23
12,63
25
1,68
4,01
6,86
9,18
12,45
30
1,68
4,02
6,85
9,14
12,29
35
1,69
4,02
6,84
9,10
12,13
40
1,69
4,04
6,84
9,07
11,98
45
1,70
4,05
6,83
9,04
11,84
50
1,71
4,06
6,83
9,01
11,71
55
1,72
4,08
6,83
8,99
11,57
60
1,72
4,09
6,84
8,96
11,45
t c = 0,00016 N (T t )
en la cual tc, representa la correccin que debe
agregarse al punto de fusin observado, N el
nmero de grados de la columna del termmetro
principal emergente del bao, T la temperatura al
terminar la fusin y t la temperatura registrada por
el termmetro auxiliar. La correccin se agrega a
la lectura del termmetro principal.
Cuando se trata de muestras que funden a
temperatura elevada, la determinacin es ms
exacta si el capilar no se introduce en el bao de
calefaccin hasta que ste se encuentre a u na
temperatura de 10 C por debajo del punto de
fusin esperado. Esto es necesario cuando la
sustancia pueda descomponerse al calentarla largo
tiempo.
Los lquidos empleados como baos de
calefaccin apropiados son la vaselina lquida o
Actualizacin total
Mtodo de tamizado
180
150
125
90
75
45
80
100
120
170
200
325
180 m
150 m
125 m
90 m
75 m
45 m
*ASTM E 11 US: American Society for Testing and Materials Specification E 11 U.S. Standard Sieve Series.
300. ELECTROFORESIS
Las partculas cargadas, disueltas o dispersas en
una solucin electroltica migran hacia el electrodo
de polaridad opuesta, bajo la accin de un campo
elctrico.
En la electroforesis en gel, el desplazamiento de
las partculas se retarda por las interacciones con la
matriz de gel que constituye el medio de migracin
y se comporta como un tamiz molecular. Las
interacciones entre las fuerzas elctricas y la
tamizacin molecular dan lugar a una velocidad de
migracin diferencial segn el tamao, la forma y la
carga de las partculas.
Las diferentes
macromolculas presentes en una mezcla migran a
diferentes velocidades durante el proceso
electrofortico, debido a sus propiedades
fisicoqumicas,
separndose
en
fracciones
concretas.
Las separaciones electroforticas se pueden
realizar sin soporte, como por ej., en la
electroforesis capilar en solucin libre o en medios
estabilizantes como placas de capa delgada,
pelculas y geles.
ELECTROFORESIS DE LIBRE MIGRACIN
O FRONTAL
Este mtodo se emplea fundamentalmente para
determinar
movilidades
electroforticas
experimentalmente y se caracteriza por brindar
medidas directas y reproducibles.
Se aplica
principalmente a sustancias de alto peso molecular
y poco difundibles. Las bandas se localizan en
principio mediante un mtodo fsico como
refractometra o conductimetra. Luego de la
aplicacin de un campo elctrico definido durante
un tiempo exactamente medido, se observa la
ubicacin de las nuevas bandas obtenidas. Las
condiciones operativas deben ser tales que permitan
obtener tantas bandas como componentes haya en la
muestra.
ELECTROFORESIS SOBRE UN SOPORTE O
ELECTROFORESIS DE ZONA
Este mtodo requiere el empleo de cantidades de
muestra reducidas.
Existen diferentes tipos de soportes, como
papel, gel de agar, acetato de celulosa, almidn,
agarosa, metacrilamida y gel mixto. La naturaleza
del soporte introduce numerosos factores que
modifican la movilidad:
a) debido a las sinuosidades de los canalculos
del soporte, la distancia recorrida aparentemente es
menor que la real;
macromolculas.
Las concentraciones de
acrilamida que se pueden emplear se encuentran
dentro de ciertos lmites ya que a altas
concentraciones los geles se rompen con mayor
facilidad y su manejo es ms dificultoso.
Cuando el tamao de poro disminuye, la
velocidad de migracin de la molcula a travs del
gel decrece. La resolucin para un p roducto
determinado se puede optimizar ajustando el
tamao de poro del gel o modificando la
concentracin de acrilamida. Por lo tanto, las
caractersticas fsicas de un gel determinado
dependen de su contenido de acrilamida y de
bisacrilamida.
Adems de la composicin del gel, el estado de
la molcula constituye un factor importante que
afecta la movilidad electrofortica.
Para las
protenas, la movilidad electrofortica depende del
pK de los grupos cargados y del tamao de la
molcula; siendo afectada tambin por la
naturaleza, concentracin y pH de la solucin
reguladora, la temperatura, la intensidad del campo
elctrico aplicado y la naturaleza del material del
soporte.
Electroforsis en gel de poliacrilamida con
desnaturalizacin
Este mtodo se emplea para el anlisis de
monmeros polipeptdicos de peso molecular
comprendido entre 14.000 y 100.000.
La electroforesis en gel de poliacrilamida con
desnaturalizacin, empleando dodecilsulfato de
sodio (SDS-PAGE), es la tcnica electrofortica
ms empleada para la evaluacin de la calidad de
productos proteicos.
De modo general, la
electroforesis analtica de protenas se realiza en
geles de poliacrilamida en condiciones en las que se
asegure la disociacin de las protenas en sus
subunidades
polipeptdicas
individuales,
limitndose los procesos de agregacin. Se emplea
frecuentemente para disociar las protenas antes de
la aplicacin en el gel, el dodecilsulfato de sodio
(SDS), un detergente aninico fuerte, en
combinacin con calor.
Los polipptidos
desnaturalizados se unen al SDS, adquieren carga
negativa y presentan una relacin carga/masa
constante, independientemente del tipo de protena
considerada. La cantidad de SDS es casi siempre
proporcional al peso molecular del polipptido y es
independiente de su secuencia ya que los complejos
SDS-polipptido migran a travs de los geles de
poliacrilamida con movilidades que dependen del
tamao del polipptido.
Las movilidades electroforticas de los
complejos SDS-polipptido resultantes presentan
siempre la misma relacin funcional con los pesos
moleculares.
La migracin de los complejos
SDS-polipptido se efecta hacia el nodo, a u na
velocidad superior para los complejos de peso
molecular ms bajo que para aqullos con peso
molecular alto. De este modo, es posible estimar el
peso molecular de una protena a partir de su
movilidad relativa en un mtodo SDS-PAGE
calibrado, siendo la presencia de una nica banda
en dicho gel un criterio de pureza.
Las eventuales modificaciones del esqueleto
polipptidico,
como
por
ej.,
una
O- o N-glicosilacin, tiene un impacto significativo
sobre el peso molecular aparente de la protena ya
que el SDS no se une del mismo modo a los grupos
glucdicos que a los grupos polipptidicos, por lo
que en este caso no se mantiene constante la
relacin carga/masa.
Condiciones reductoras - La asociacin de las
subunidades polipptidicas y la estructura
tridimensional de las protenas se mantiene
fundamentalmente por la existencia de enlaces
disulfuro. Uno de los objetivos de la separacin
SDS-PAGE en condiciones reductoras es la ruptura
de esta estructura por reduccin de los enlaces
disulfuro.
La desnaturalizacin y disociacin
completa de las protenas por tratamiento con
2-mercaptoetanol o ditiotreitol (DTT) da lugar a un
desdoblamiento de la cadena polipptidica, seguido
de la formacin de un complejo con el SDS. En
estas condiciones, el peso molecular de las
subunidades polipptidicas se puede calcular por
regresin lineal en presencia de patrones con pesos
moleculares apropiados.
Condiciones no r eductoras - Para algunos
anlisis no es aconsejable la disociacin completa
de la protena en subunidades peptdicas. Si no se
emplean
agentes
reductores
como
el
2-mercaptoetanol o DTT, los enlaces covalentes
disulfuro permanecen intactos mantenindose la
forma oligomrica de la protena. Los complejos
SDS-protena oligomrica migran ms lentamente
que sus subunidades SDS-polipptido. Adems, las
protenas no reducidas no se pueden saturar
completamente con SDS y por lo tanto, no pueden
unirse al detergente en una proporcin de masa
constante. Esto hace que la determinacin del peso
molecular de estas molculas por SDS-PAGE sea
ms difcil que los anlisis de los polipptidos
totalmente desnaturalizados, ya que es necesario
que tanto las protenas patrn como las protenas de
la muestra presenten configuraciones similares para
que se puedan comparar. Sin embargo, la obtencin
en el gel de una sola banda coloreada es un criterio
de pureza.
CARACTERSTICAS DE LA
ELECTROFORESIS EN GEL CON SISTEMA
REGULADOR DISCONTINUO
El mtodo electrofortico ms usado para la
caracterizacin de mezclas complejas de protenas
se basa en el empleo de un sistema regulador
discontinuo consistente en dos geles contiguos pero
distintos: un gel inferior, llamado gel de separacin
o de resolucin, y otro superior, gel de apilamiento.
Estos dos geles presentan porosidad, pH y fuerzas
inicas diferentes. Adems se emplean iones con
diferentes movilidades inicas en el gel y en la
solucin reguladora. La discontinuidad del sistema
provoca una concentracin de las muestras de
mayor tamao en el gel de apilamiento y por lo
tanto se mejora la resolucin. Cuando se aplica la
corriente elctrica, se desarrolla un gradiente de
potencial negativo a t ravs de la solucin muestra
que conduce a l as protenas hacia el gel de
apilamiento. Los iones glicinato contenidos en la
solucin reguladora empujan a las protenas hacia el
gel de apilamiento. Se forma rpidamente una zona
de frente mvil cuya cabecera est constituida por
iones cloruro de alta movilidad, seguidos de iones
glicinato ms lentos en la cola. Se produce un
gradiente de alto voltaje localizado entre los frentes
inicos de cabeza y cola, provocando que los
complejos SDS-protena se concentren en una zona
muy estrecha (apilamiento) y migren entre las fases
de cloruro y glicinato. Independientemente del
volumen de muestra aplicado, el conjunto de
complejos SDS-protena se condensa en una regin
muy estrecha y penetran en el gel de separacin en
forma de banda estrecha, bien definida y de alta
densidad proteica. El gel de apilamiento, de tamao
de poro, grande, no retarda la migracin de la
mayora de las protenas y acta principalmente
como medio anticonvectivo. En la interfase de
ambos geles, las protenas experimentan un
incremento brusco de retardo electrofortico debido
al menor tamao de poro del gel de resolucin.
Una vez que se encuentran en este gel, las protenas
continan avanzando lentamente por el efecto de
tamizacin molecular que ejerce la matriz. Los
iones glicinato migran por delante de las protenas,
por lo que stas se mueven en un medio de pH
uniforme formado por el tris(hidroximetil)aminometano y la glicina. La tamizacin molecular hace
que la separacin de los complejos SDS-polipptido
se base en sus correspondientes pesos moleculares.
PREPARACIN DE GELES DE
POLIACRILAMIDA SDS VERTICALES CON
SISTEMA REGULADOR DISCONTINUO
Preparacin de los geles
10
15
20
25
30
40
50
2,6
5,3
7,9
10,6
13,2
15,9
21,2
26,5
(1)
1,0
2,0
3,0
4,0
5,0
6,0
8,0
10,0
1,3
2,5
3,8
5,0
6,3
7,5
10,0
12,5
SDS 10 % (3)
0,05
0,1
0,15
0,2
0,25
0,3
0,4
0,5
PSA 10 % (4)
0,05
0,1
0,15
0,2
0,25
0,3
0,4
0,5
TEMED (5)
0,004
0,008
0,012
0,016
0,02
0,024
0,032
0,04
2,3
4,6
6,9
9,3
11,5
13,9
18,5
23,2
(1)
1,3
2,7
4,0
5,3
6,7
8,0
10,7
13,3
1,3
2,5
3,8
5,0
6,3
7,5
10,0
12,5
SDS 10 % (3)
0,05
0,1
0,15
0,2
0,25
0,3
0,4
0,5
PSA 10 % (4)-
0,05
0,1
0,15
0,2
0,25
0,3
0,4
0,5
TEMED (5)
0,003
0,006
0,009
0,012
0,015
0,018
0,024
0,03
1,9
4,0
5,9
7,9
9,9
11,9
15,9
19,8
(1)
1,7
3,3
5,0
6,7
8,3
10,0
13,3
16,7
1,3
2,5
3,8
5,0
6,3
7,5
10,0
12,5
SDS 10 % (3)
0,05
0,1
0,15
0,2
0,25
0,3
0,4
0,5
PSA 10 % (4)
0,05
0,1
0,15
0,2
0,25
0,3
0,4
0,5
0,002
0,004
0,006
0,008
0,01
0,012
0,016
0,02
1,6
3,3
4,9
6,6
8,2
9,9
13,2
16,5
2,0
4,0
6,0
8,0
10,0
12,0
16,0
20,0
6%
Agua
Solucin de acrilamida
8%
Agua
Solucin de acrilamida
10 %
Agua
Solucin de acrilamida
TEMED
(5)
12 %
Agua
Solucin de acrilamida
(1)
1,3
2,5
3,8
5,0
6,3
7,5
10,0
12,5
(3)
0,05
0,1
0,15
0,2
0,25
0,3
0,4
0,5
PSA 10 % (4)-
0,05
0,1
0,15
0,2
0,25
0,3
0,4
0,5
TEMED (5)
0,002
0,004
0,006
0,008
0,01
0,012
0,016
0,02
SDS 10 %
10
15
20
25
30
40
50
Agua
1,4
2,7
3,9
5,3
6,6
8,0
10,6
13,8
Solucin de
acrilamida (1)
2,3
4,6
7,0
9,3
11,6
13,9
18,6
23,2
1,2
2,5
3,6
5,0
6,3
7,5
10,0
12,5
SDS 10 % (3)
0,05
0,1
0,15
0,2
0,25
0,3
0,4
0,5
PSA 10 % (4)-
0,05
0,1
0,15
0,2
0,25
0,3
0,4
0,5
TEMED (5)
0,002
0,004
0,006
0,008
0,01
0,012
0,016
0,02
Agua
1,1
2,3
3,4
4,6
5,7
6,9
9,2
11,5
Solucin de
acrilamida (1)
2,5
5,0
7,5
10,0
12,5
15,0
20,0
25,0
1,3
2,5
3,8
5,0
6,3
7,5
10,0
12,5
SDS 10 % (3)
0,05
0,1
0,15
0,2
0,25
0,3
0,4
0,5
PSA 10 % (4)-
0,05
0,1
0,15
0,2
0,25
0,3
0,4
0,5
TEMED (5)
0,002
0,004
0,006
0,008
0,01
0,012
0,016
0,02
14 %
15 %
10
Agua
0,68
1,4
2,1
2,7
3,4
4,1
5,5
6,8
Solucin de
acrilamida (1)
0,17
0,33
0,5
0,67
0,83
1,00
1,3
1,7
0,13
0,25
0,38
0,5
0,63
0,75
1,0
1,25
SDS 10 % (3)
0,01
0,02
0,03
0,04
0,05
0,06
0,08
0,1
PSA 10 % (4)-
0,01
0,02
0,03
0,04
0,05
0,06
0,08
0,1
TEMED (5)
0,001
0,002
0,003
0,004
0,005
0,006
0,008
0,01
4 - PSA 10 %: solucin de persulfato de amonio al 10 %. El persulfato de amonio forma los radicales libres que
inducen la polimerizacin de la acrilamida y la bisacrilamida. Esta solucin se descompone lentamente y debe
renovarse cada semana.
5 - TEMED: tetrametiletilendiarnina.
6 - Tris pH 6,8 (1,0 M): solucin reguladora tris-clorhdrico de pH 6,8 (1,0 M) - Disolver 60,6 g de
tris(hidroximetil)aminoetano en 400 ml de agua. Ajustar a pH 6,8 con cido clorhdrico y completar a 5 00 ml
con agua.
Procedimiento
Comprimidos no r ecubiertos - Colocar un
comprimido en cada uno de los seis tubos de la
cesta, agregar los Discos e iniciar el movimiento
vertical, emplear agua a 37,0 2,0 C como medio
de inmersin y un tiempo de 30 minutos, a menos
que se especifique de otro modo en la monografa
correspondiente.
Transcurrido dicho tiempo,
levantar la cesta del lquido y observar los
comprimidos: todos los comprimidos deben haberse
disgregado completamente. Si slo uno de los
comprimidos no se disgregara completamente,
repetir el ensayo con seis comprimidos adicionales:
los comprimidos cumplen con el ensayo si todos los
comprimidos
adicionales
se
disgregan
completamente.
Comprimidos con cubiertas simples - Proceder
segn se indica para Comprimidos no recubiertos.
Poner en funcionamiento el aparato durante
Unidades ensayadas
6
6
E3
12
Criterios de aceptacin
Cada unidad no debe ser menor de Q + 5 %.
El promedio de 12 unidades (E1 + E2) debe ser igual o mayor de
Q y ninguna unidad menor de Q 15 %.
El promedio de 24 unidades (E1 + E2 + E3) debe ser igual o
mayor de Q, no ms de 2 unidades menores de Q 15 % y
ninguna unidad menor de Q 25 %.
Unidades ensayadas
6
6
E3
12
Criterios de aceptacin
Cada unidad no debe ser menor de Q + 10 %.
La cantidad promedio disuelta (E1 + E2) debe ser igual o mayor
de Q + 5 %.
La cantidad promedio disuelta (E1 + E2 + E3) debe ser igual o
mayor de Q.
MDV = LE C /
en la cual LE representa el lmite de endotoxina y C
la concentracin del principio activo en la solucin
a ensayar o reconstituido, que segn las
especificaciones del elaborador puede estar dada en:
- mg por ml, s el lmite de endotoxina
especificado en la monografa es en UE/mg.
- UI/ml, si el lmite de endotoxina especificado
en la monografa es en UE/UI.
Cuando en la monografa, el lmite de
endotoxina especificado es en UE/ml, se debe
dividir el lmite de endotoxina por (que es la
sensibilidad del lisado, en UE/ml, declarada en el
rtulo).
anti log( e / f )
/ anti log( d / f )
50 % ni mayor de 200 % de m o m,
calculada por la media aritmtica de la
concentracin de endotoxina de la
solucin (b) luego de sustrada la media
aritmtica de la concentracin de
endotoxina de la solucin (a),
calculando
el
porcentaje
de
recuperacin dividiendo el resultado de
la sustraccin anterior por m o m y
multiplicando por 100.
El resultado de la muestra ensayada es aceptable
si la concentracin de endotoxina de cada uno de
los duplicados es menor que m o m en UE/ml.
Si los resultados no son coincidentes, como por ej.,
si la concentracin de una de las soluciones es
menor y la otra mayor que este lmite, debe
repetirse el ensayo. La muestra ensayada cumple
con los requisitos del ensayo si ambas soluciones,
en la repeticin, cumplen con el lmite del ensayo.
Los resultados deben ser expresados en las unidades
de endotoxinas lmite especificadas (UE/mg, UE/ml
o UE/UI).
Interpretacin - La muestra cumple con los
requisitos del ensayo si la concentracin de
endotoxina es menor que la especificada en la
monografa correspondiente.
Tabla 1
Cepa
Mutacin opern
histidina
TA 97a
hisD6610
TA 98
hisD3052
TA 100
his G46
TA 102
hisG428
TA 1535
his G46
TA 1538
hisD3052
Reversin
Corrimiento de
armazn
Corrimiento de
armazn
Sustitucin
Transicin
/transversin
Sustitucin
Corrimiento de
armazn
bio uvrB
LPS
Plsmido
Delecin
rfa
pKM101
Delecin
rfa
pKM101
Delecin
rfa
pKM101
Tipo salvaje
rfa
pKM101, pAQ1
Delecin
rfa
Delecin
rfa
Soluciones
Cada ensayo debe realizarse con una misma
partida de reactivos, soluciones, medios y agar.
Preparacin de soluciones
A menos que se indique de otro modo las
soluciones y los medios se esterilizarn en
autoclave. El tiempo total de tratamiento, a 121 C,
depender del volumen total a esterilizar.
I. Solucin de glucosa al 10 %
D-glucosa (Dextrosa).................................100 g
Agua destilada c.s.p..................................1 litro
Agregar la D-glucosa a 700 ml de agua.
Mezclar hasta que la solucin sea lmpida.
Completar a volumen con agua destilada.
Fraccionar en volmenes superiores a 20 ml.
Autoclavar. Conservar en heladera.
II. Solucin de biotina al 0,01 %
D-biotina....................................................10 mg
Agua destilada..........................................100 ml
Calentar el agua (aproximadamente a 40 C) y
disolver la D-biotina. Esterilizar por filtracin a
travs de membrana filtrante de 0,22 m.
Conservar en heladera.
III. Solucin de histidina al 0,5 %
L-histidina . HCl . H2O............................500 mg
Agua destilada..........................................100 ml
Disolver la histidina en el agua destilada.
Autoclavar y conservar en heladera.
IV. Solucin de histidina/biotina 0,5 mM
D-biotina..................................................124 mg
L-histidina . HCl . H2O..............................96 mg
Agua destilada............................................1 litro
Calentar el agua (aproximadamente a 40 C) y
disolver la D-biotina y la histidina. Esterilizar por
filtracin a travs de membrana filtrante de
0,22 m. Conservar en heladera.
V. Solucin reguladora de fosfato de sodio 0,2 M
pH 7,4
NaH2PO4.....24 g
Na2HPO4 . 2H2O....35,6 g
Agua destilada c.s.p....1 litro
Disolver las sales en un volumen reducido de
agua y luego completar a volumen final. Ajustar el
pH a 7,4 0,2. Esterilizar en autoclave. Conservar
en heladera.
VI. Cofactores para la mezcla S9
D-glucosa-6-fosfato.....................................1,6 g
Nicotinamida adenina dinucletido fosfato
(NADP).3,5 g
Cloruro de magnesio...................................1,8 g
Cloruro de potasio.......................................2,7 g
Fosfato dibsico de sodio......................12,8 g
Fosfato monobsico de sodio......................2,8 g
Agua destilada c.s.p....................................1 litro
Agregar a 900 ml de agua los ingredientes uno a
uno, disolviendo por completo cada uno antes de
agregar el siguiente. Completar a volumen con
agua.
Esterilizar por filtracin a travs de
membrana filtrante de 0,22 m.
Conservar a
-20 C.
VII. Solucin de ampicilina al 0,8 %
Ampicilina...............................................800 mg
Agua destilada..........................................100 ml
Disolver la ampicilina en el agua caliente
(aproximadamente 40 C). Esterilizar por filtracin
a travs de membrana filtrante de 0,22 m.
Conservar en heladera.
VIII. Solucin de tetraciclina al 0,8 %
Tetraciclina..............................................800 mg
Agua destilada:Etanol (1:1)......................100 ml
Disolver la tetraciclina en la mezcla de agua
destilada:etanol (1:1). Esterilizar por filtracin a
travs de membrana filtrante de 0,22 m.
Conservar en envase inactnico en heladera.
IX. Solucin de cristal violeta al 0,1 %
Cristal violeta..........................................100 mg
Agua destilada..........................................100 ml
Disolver el cristal violeta en el agua. Conservar
en envase inactnico en heladera.
X. Soluciones madres de mutgenos control
Solucin de 2-aminoantraceno: 25 mg por ml en
dimetil sulfxido.
Solucin de Azida sdica: 10,0 mg por ml en
agua destilada.
Solucin de 9-aminoacridina: 10 mg por ml en
dimetil sulfxido.
Solucin de Nitrofurantona: 20 mg por ml en
dimetil sulfxido.
Solucin de Mitomicina C: 1 mg por ml en agua
destilada.
Solucin de 4-Nitroquinolina-N-xido: 20 mg
por ml en dimetil sulfxido.
Se pueden emplear otros mutgenos de probada
accin sobre la cepa de inters.
Las soluciones madres de los mutgenos deben
ser preparadas extremando las medidas de
seguridad dado la peligrosidad de las sustancias que
se manipulan. Trabajar solamente bajo campana de
TA97a, TA98 y
TA100
TA102
5 g de 2-Amino antraceno
En el caso del 2-Amino antraceno es necesario ensayar en ausencia y presencia del sistema exgeno de
activacin metablica ya que adquiere actividad mutagnica al ser metabolizado.
Tabla 3. Control positivo (sin activacin metablica)
Cepa
TA97a
50 g de 9-Aminoacridina (clorhidrato.hidrato)
TA98 y TA1538
5 g de Nitrofurantona
TA100 y TA1535
5 g de Azida sdica
TA102
0.5 g de Mitomicina C
Los mutgenos que figuran en esta tabla tienen actividad mutagnica per se.
Se pueden emplear otros mutgenos de probada accin sobre la cepa de inters.
Sistema exgeno de activacin metablica
El sistema de activacin metablica utilizado
habitualmente consiste en el sobrenadante de la
fraccin obtenida a 9.000 G con un homogenato de
hgado de rata (fraccin microsomal S-9) que ha
sido previamente inducida con una mezcla de
bifenilos policlorados de las que se encuentran
comercialmente disponibles, o con una mezcla de
fenobarbital y -naftoflavona. Una vez obtenida la
fraccin microsomal S-9, se fracciona y se conserva
a -80 C.
Mezcla S-9
En el momento de emplearlos se descongela un
volumen de S-9 de acuerdo a las necesidades del
ensayo y el volumen equivalente de mezcla de
cofactores (ver soluciones y medios). Se prepara la
mezcla
S9:
habitualmente
se
emplean
concentraciones entre 5 y 30 % v/v de fraccin
microsomal en solucin de cofactores. La eleccin
depender del tipo de producto a ensayar.
Registro de los resultados
Se completar una planilla por cada una de las
Soluciones de
comparacin
A
B
C
D
E
F
G
H
I
J
K
L
M
N
O
P
Q
R
S
T
Partes de cloruro
cobaltoso (SC)
0,1
0,3
0,1
0,3
0,4
0,3
0,5
0,2
0,4
0,4
0,5
0,8
0,1
0,0
0,1
0,2
0,2
0,3
0,2
0,5
Partes de cloruro
frrico (SC)
0,4
0,9
0,6
0,6
1,2
1,2
1,2
1,5
2,2
3,5
4,5
3,8
2,0
4,9
4,8
0,4
0,3
0,4
0,1
0,5
Partes de sulfato
cprico (SC)
0,1
0,3
0,1
0,4
0,3
0,0
0,2
0,0
0,1
0,1
0,0
0,1
0,1
0,1
0,1
0,1
0,1
0,2
0,0
0,4
Partes de agua
4,4
3,5
4,2
3,7
3,1
3,5
3,1
3,3
2,3
1,0
0,0
0,3
2,8
0,0
0,0
4,3
4,4
4,1
4,7
3,6
Actualizacin parcial
0,50 g
Cloruro de sodio
2,50 g
Glucosa monohidrato
5,50 g
5,00 g
L-Cistina ...
0,50 g
0,75 g
Tioglicolato de sodio*..
0,50 g
2,50 g
1.000 ml
5,50 g
5,00 g
15,0 g
Tioglicolato de sodio * .
0,50 g
1,00 ml
1.000 ml
por
Acido
15,0 g
Almacenamiento
SOLUCIONES DE LAVADO Y
DILUCION
Solucin A - Disolver 1 g de peptona de carne
en agua purificada hasta obtener 1 litro, si es
necesario filtrar o centrifugar para obtener una
solucin transparente. Ajustar a p H 7,1 0,2,
envasar en recipientes apropiados y esterilizar
utilizando un procedimiento validado. [NOTA:
cuando la Solucin A deba ser empleada para
realizar el ensayo de esterilidad de una muestra de
antibiticos del tipo penicilina, cefalosporina,
cefamicina
o
monobactmico;
agregar
aspticamente una cantidad de betalactamasa
estril a la Solucin A, suficiente para inactivar el
antibitico residual en las membranas despus que
la solucin muestra haya sido filtrada].
Solucin D - Agregar 1 ml de polisorbato 80
por cada litro de Solucin A cuando la muestra
contiene lecitina o aceite o en los ensayos para
determinar la esterilidad de las partes internas de
dispositivos estriles por filtracin a travs de
membrana. Ajustar a pH 7,1 0,2. Transferir a
los envases y esterilizar.
Solucin K Peptona de carne ... 5,00 g
Extracto de carne .. 3,00 g
Polisorbato 80 ... 10,0 g
Agua purificada c.s.p. ... 1.000 ml
pH despus de la esterilizacin: 6,9 0,2.
Distribuir en recipientes apropiados y esterilizar.
ENSAYO DE VALIDACIN
Antes de efectuar un ensayo de esterilidad de
un producto dado, se deber demostrar la ausencia
de actividad bacteriosttica y fungisttica del
mismo a travs del procedimiento que se describe
a continuacin.
Este procedimiento deber
efectuarse cada vez que se cambia alguna
condicin del ensayo o cuando exista un cambio
significativo en la composicin del producto.
Preparar cultivos diluidos de bacterias y
hongos de al menos los microorganismos
indicados en la Tabla 1 e incubar en las
condiciones especificadas, para obtener una
concentracin final de cada uno de los
microorganismos empleados no mayor de
100 UFC por ml.
Es recomendable incluir al menos una cepa
aislada y caracterizada del ambiente de
fabricacin.
Ensayo de validacin del mtodo de filtracin
por membrana
Filtrar la cantidad de muestra especificada en
las Tablas 2, 3 y 4. Lavar la membrana, con hasta
tres porciones de 100 ml de la solucin de lavado
inoculando el lavado final con no ms de
100 UFC de los microorganismos de prueba.
Repetir el lavado en otro filtro en el que no hubo
pasaje de muestra (control positivo). Colocar cada
membrana o mitad de la membrana en 100 ml del
medio de cultivo especificado o agregar el medio
especificado al dispositivo que contiene la
membrana. Repetir el procedimiento para los
microorganismos y los medios especificados en la
Tabla 1 e incubar a l a temperatura apropiada y
bajo las condiciones sealadas, por un perodo no
menor de 5 das.
Si el crecimiento de los microorganismos en el
medio de cultivo fuera visualmente comparable al
observado en el control positivo, en adelante
efectuar el ensayo de esterilidad en las mismas
condiciones.
Si no fuera visualmente comparable al
observado en el control positivo, el producto
posee
propiedades
bacteriostticas
y/o
fungistticas. Repetir aumentando nmero y
volumen de lavados hasta un mximo de 5 d e
500 ml cada uno, y/o cambiando el tipo de
membrana,
y/o
empleando
un
agente
neutralizante. Si no se logr el desarrollo de los
microorganismos inoculados, proceder efectuando
el ensayo de esterilidad empleando el mtodo
ensayado ms exigente.
Tabla 1
Medio
Microorganismos de prueba
Medio Tioglicolato
Caldo Tioglicolato
Alternativo (4)
Caldo Digerido de
Casena - Soja
Incubacin
Temperatura
Condiciones
30 - 35 C
30 - 35 C
30 - 35 C
30 - 35 C
20 - 25 C
20 - 25 C
Aerbicas
Anaerbicas
Aerbicas
20 - 25 C
(1) Como alternativa al Staphylococcus aureus, puede emplearse Bacillus subtilis ATCC 6633.
(2) Como alternativa a Pseudomonas aeruginosa, puede utilizarse Kocuria rhizophila ATCC 9341.
(3) Como alternativa a Clostridium sporogenes y en caso de no ser requerido un esporoformador, puede
utilizarse Bacteroides vulgatus ATCC 8482.
(4) Utilizar para test de esterilidad de dispositivos mdicos que contienen tubos de pequeo dimetro.
NOTA:
PUEDEN
UTILIZARSE
CEPAS
ATCC
O
SUS
OTRAS
COLECCIONES
DE
CULTIVOS
MICROBIANOS
RECONOCIDAS INTERNACIONALMENTE.
EQUIVALENTES
PERTENECIENTES
A
INTERNACIONALES
O
NACIONALES
Antibiticos slidos
Envases de < 5 g
Envases de 5 g
Graneles y mezclas
20
6
Ver Granel de productos slidos
Productos no inyectables
200
> 200
10
Dispositivos mdicos
100
> 100 - 500
> 500
Todos
20% 4 (el que sea mayor)
2% 10 (el que sea mayor)
* Si el contenido de un envase es suficiente para inocular los dos medios, esta columna indica el nmero
de envases
Tabla 3. Cantidades para productos lquidos
Contenido del envase (ml)
<1
1 - 40
>40 - 100
>100
Antibiticos (lquidos)
< 50 mg
50 mg - < 300 mg
300 mg - 5 g
>5 g
Antibiticos
Algodn, gasa
Suturas y otros materiales
Descartables
Dispositivos mdicos
Contenido completo
Mitad del contenido pero no menos de 50 mg
150 mg
500 mg
150 mg
100 mg
Envase completo
Dispositivo completo
Espesor
Subdivisin
(mm)
Tiras de
5 0,3 cm
< 0,5 mm
0,5 a 1 mm
0,5 a 1 mm (pared)
Moldeados
> 1 mm
Piezas de hasta
5 0,3 cm
Elastmeros
> 1 mm
No subdividir
Lminas
Tubos
Secciones de
5 0,3 cm
Reactividad
Ninguna
Dbil
Leve
Moderada
Severa
Reactividad
Ninguna
Leve
Media
Moderada
Severa
Valor
Ausencia de eritema
Formacin de edema
Valor
Ausencia de edema
Va
Velocidad de inoculacin
(ml/s)
50 ml
IV*
0,1
50 ml
IV
0,1
Solucin inyectable de
polietilenglicol 400
10 g
IP*
Vehculos de la droga
(si corresponde)
50 ml
50 ml
IV
IP
0,1
_
Aceite vegetal
50 ml
IP
*IV = I ntravenosa (solucin acuosa de muestra y blanco); *IP = I ntraperitoneal (solucin oleosa de
muestra y blanco).
Tabla 6. Ensayo intracutneo.
Extracto o blanco
Muestra
200
Blanco
200
Valor
Ninguno
Hasta 0,5 mm
0,6 1,0 mm
1,1 2,0 mm
Figura 2. Impactador.
Tabla. Componentes del impactador (ver figura 2).
Cdigo
Elemento
Garganta
Cuello
Tubo de conexin
Descripcin
Adaptador de caucho modelado para la unin con el
disparador
Baln modificado
Entrada: junta cnica esmerilada hembra
Salida: junta cnica esmerilada macho
Adaptador de vidrio modificado
Entrada: junta cnica esmerilada hembra
Salida: junta cnica esmerilada macho
Parte inferior: tubo de vidrio calibrado: dimetro interno
Tubo de vidrio de paredes delgadas: dimetro externo
Baln modificado
Entrada: junta cnica esmerilada hembra
Salida: junta cnica esmerilada hembra
Tubo de vidrio de pared media: unin cnica esmerilada
macho
Codo y parte recta superior: dimetro exterior
Parte recta inferior: dimetro exterior
Dimensiones
(mm)
50 ml
29/32
24/29
24/29
24/29
14
17
100 ml
24/29
14/23
14/23
13
8
28/13
Junta de silicona
28/11
Cdigo
Elemento
Difusor
Descripcin
Arandela de politetrafluoroetileno
Rosca de vidrio: paso de rosca
Salida lateral (salida hacia la bomba de vaco): dimetro
interior mnimo
Porta-filtros modificados, de polipropileno, unido al extremo
del tubo mediante un tubo de politetrafluoroetileno
Disco circular de acetal con 4 orificios dispuestos en un
crculo de 5,3 mm de dimetro y una clavija para separacin
del chorro en el centro
Dimetro de la clavija
Altura de resalte de la clavija
Erlenmeyer
Junta cnica esmerilada hembra
Dimensiones
(mm)*
28/11
28
11
Figura 2
10
2
2
250 ml
24/29
Las medidas de las juntas esmeriladas corresponden a las designadas por ISO (internacional Organization for
Standarization).
deben
cumplir
con
los
Tabla.
Lmite de desviacin
del peso promedio
(%)
10
7,5
5
Actualizacin parcial
LMITES DE ADITIVOS
ADITIVOS
LMITES (%)
ftalato de bis(2-etilhexilo)
octanoato de cinc (2-etilhexanoato de cinc)
40
1
10
CARACTERSTICAS
Polvo, perlas, grnulos o lminas translcidas de
espesor variable, incoloras o de color amarillo plido.
IDENTIFICACIN - [NOTA: si es necesario,
cortar el material a ensayar en trozos de tamao
apropiado.]
A 2,0 g del material a ensayar agregar 200 ml de
ter libre de perxidos y calentar a reflujo durante
8 horas. Separar el residuo (B) y la solucin (Solucin A) por filtracin.
Evaporar la Solucin A a sequedad bajo presin
reducida en un bao de agua a 30 C. Disolver el
residuo en 10 ml de tolueno (Solucin A1). Disolver
el residuo B en 60 ml de dicloruro de etileno, calentando en un bao de agua a reflujo y filtrar. Agregar la solucin gota a gota y con agitacin enrgica
a 600 ml de heptano calentando a una temperatura
menor a la temperatura de ebullicin. Filtrar la
mezcla en caliente a travs de un filtro caliente para
separar el material insolubilizado (B1) de la solucin orgnica. Dejar enfriar, separar el precipitado
(B2) formado y filtrar a travs de un filtro de vidrio
sinterizado de porosidad media, previamente pesado.
A - Absorcin infrarroja <460>. Disolver el
material insolubilizado B1 en 30 ml de tetrahidrofurano y agregar, en pequeas porciones con agitacin, 40 ml de etanol. Separar el precipitado (B3)
por filtracin y secar al vaco a una temperatura no
mayor de 50 C sobre pentxido de fsforo o cloruro de calcio anhidro. Disolver unos pocos mg del
precipitado B3 en 1 ml de tetrahidrofurano. Colocar
algunas gotas de la solucin obtenida sobre una
placa de cloruro de sodio y evaporar a sequedad
entre 100 y 105 C. Registrar el espectro de absorcin infrarroja y comparar con el espectro obtenido
con poli(cloruro de vinilo) SR-FA.
B - Aplicar la siguiente tcnica cromatogrfica.
Fase estacionaria - Emplear una placa para
cromatografa en capa delgada (ver 100. Cromatografa) recubierta con gel de slice para cromatografa de 0,25 mm de espesor.
Fase mvil - Tolueno.
Solucin estndar - Disolver 0,8 g de ftalato de
bis(2-etilhexilo) SR-FA en tolueno y diluir a 10 ml
con el mismo solvente.
Solucin muestra - Solucin A1.
Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
placa 5 l de cada solucin. Dejar secar las aplicaciones y desarrollar los cromatogramas hasta que el
frente del solvente haya recorrido aproximadamente
tres cuartos de la longitud de la placa. Retirar la
placa de la cmara, marcar el frente del solvente y
dejarla secar. Examinar bajo luz ultravioleta a
Amidas y estearatos
Fase estacionaria - Emplear una placa para
cromatografa en capa delgada (ver 100. Cromatografa) recubierta con gel de slice para cromatografa con indicador de fluorescencia de 0,25 mm
de espesor.
Fase mvil 1 - 2,2,4-Trimetilpentano y etanol
(75:25).
Fase mvil 2 - Hexano.
Fase mvil 3 - Cloruro de metileno y metanol
(95:5).
Solucin estndar Q - Disolver 20 mg de cido
esterico en 10 ml de cloruro de metileno.
Solucin estndar R - Disolver 40 mg de oleamida en 20 ml de cloruro de metileno.
Solucin estndar S - Disolver 40 mg de erucamida en 20 ml de cloruro de metileno.
Solucin muestra - Solucin S24 preparada en
Antioxidantes no fenlicos.
Revelador 1 - Solucin de 2,6-Dicloro-fenolindofenol sdico al 0,2 % en etanol.
Revelador 2 - Solucin de cido fosfomolbdico
al 4 % en etanol.
LMITES DE ADITIVOS
ADITIVOS
Aditivos antioxidantes
butilhidroxitolueno
tetrakis [3-(3,5-di-ter-butil-4 hidoxifenil)propionato] de pentaeritritilo
1,3,5-tris(3,5-di-ter-butil-4-hidroxibencil)-s-triazina-2,4,6-(1H,3H,5H)triona
3-(3,5-di-ter-butil-4-hidroxifenil)propionato de octadecilo
3,3-bis(3-ter- butil-4-hidroxifenil)butirato de etileno
disulfuro de dioctadecilo
2,2,2,6,6,6-hexa-ter-butil-4,4,4-[(2,4,6-trimetil-1,3,5-bencenotriil)trismetileno]trifenol
2,2-bis(octadeciloxi)-5,5-espirobi(1,3,2-dioxafosforinano)
3,3-tiodopropionato de didodecilo
3,3- tiodipropionato de dioctadecilo
fosfito de tris(2,4-di-ter-butilfenilo)
P-EPQ
copolmero de succinato de dimetilo y (4-hidroxi-2,2,6,6-tetrametilpiperidin-1-il)etanol
El total de de aditivos antioxidante enumerados anteriormente
Otros aditivoshidrocalcita
alcanoamidas
LMITES (%)
0,125
0,3
0,3
0,3
0,3
0,3
0,3
0,3
0,3
0,3
0,3
0,1
0,3
0,3
0,5
0,5
LMITES (%)
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
4
0,2
Aditivos
Fase estacionaria - Emplear una placa para
cromatografa en capa delgada (ver 100. Cromatografa) recubierta con gel de slice para cromatografa de 0,25 mm de espesor.
Fase mvil 1 - Hexano.
Fase mvil 2 - Cloruro de metileno y metanol
(95:5).
Solucin muestra - Transferir 2,0 g del material
a ensayar y 5 ml de cloroformo a un recipiente de
Residuo de ignicin - <270>. No debe ser ma10 ml de paredes gruesas de vidrio tipo I II (ver
yor de 200 ppm, determinado sobre 10 g.
430. Envases de vidrio). Cerrar el mismo con un
Polietileno de alta densidad para envases destapn de goma recubierto con politetrafluoretileno.
tinados a preparaciones de uso parenteral
Colocar el recipiente en un bao de agua a 85 C
El polietileno de alta densidad que cumple con
durante 2 horas. Retirarlo, invertirlo y dejarlo enlos siguientes requisitos es apropiado para la fabrifriar. Decantar la solucin clorofrmica transparencacin de envases y tapones destinados a preparate.
ciones de uso parenteral.
Solucin estndar - Disolver 20 mg de disulfuEl polietileno de alta densidad (tambin llamado
ro de dioctadecilo y 20 mg de bis[3,3-bis(3de "baja presin") es obtenido por polimerizacin
ter-butil-4-hidroxifenil)butirato] de etileno en clorode etileno a baja presin en presencia de catalizadoformo y diluir a 10 ml con el mismo solvente.
res.
Revelador - Solucin de cido fosfomolbdico
al 4 % en alcohol.
LMITES DE ADITIVOS Y ESTABILIZANTES
ADITIVOS
Estabilizantes puede contener no mas de tres de los siguientes estabilizantes:
butilhidroxitolueno
Tetrakis [3-(3,5-di-ter-butil-4-hidroxifenil)propionato de pentaeritritilo
3-(3,5-di-ter-butil-4-hidroxifenil)propionato de octadecilo
3,3-bis(3-ter-butil-4-hidroxifenil)butirato de etileno
2,2,2,6,6,6-hexa-ter-butil-4,4,4-[(2,4,6-trimetil-1,3,5-bencenotriil)trismetileno] trifenol
2,2-bis(octadeciloxi)-5,5-espirobi [1,3,2-dioxafosforinano]
3,3-tiodipropionato de didodecilo
3,3-tiodipropionato de dioctadecilo
Aditivos
estearato de calcio o estearato de cinc o una mezcla de ambos
CARACTERISTICAS
Polvo, perlas, grnulos o lminas translcidas de
espesor variable. Es prcticamente insoluble en
agua, etanol, hexano y metanol; soluble en caliente
en hidrocarburos aromticos. Se ablanda a tempe-
LMITES (%)
0,125
0,2
0,2
0,2
0,2
0,2
0,2
0,2
0,5
IDENTIFICACION
A - Absorcin infrarroja <460>. A 250 mg del
material a ensayar agregar 10 ml de tolueno y ca-
CARACTERSTICAS
Polvo, perlas, grnulos o lminas translcidas de
espesor variable. El polipropileno es prcticamente
insoluble en agua, etanol y metanol; es tambin prcticamente insoluble en hexano el cual disuelve polmeros residuales de bajo peso molecular; ligeramente
soluble en decalina, tetralina, tolueno y xileno a ebullicin. Se ablanda a temperaturas por encima de
150 C. Se quema con una llama azul.
IDENTIFICACIN
Absorcin infrarroja <460>. A 250 mg del material a ensayar agregar 10 ml de tolueno y calentar a
reflujo durante aproximadamente 15 minutos. Colocar
unas gotas de la solucin caliente sobre una placa de
cloruro de sodio y evaporar el solvente a 80 C. Los
mximos de absorcin en el espectro obtenido corresponden en posicin e intensidad relativa a los del
espectro obtenido con polipropileno SR-FA. Los
espectros de copolmeros y mezclas deben presentar
un mximo adicional aproximadamente a 720 cm-1.
[NOTA: si el material a ensayar se presenta en forma
de lminas, el espectro puede determinarse directamente sobre un trozo de tamao apropiado].
LMITES (%)
0,3
0,3
0,3
0,3
0,3
0,3
0,3
0,3
0,125
0,2
debe presentar una mancha que corresponde a la mancha en el cromatograma de la Solucin estndar A.
Pulverizar sobre la segunda placa con Revelador 1
y luego con Revelador 2. El cromatograma de la Solucin muestra debe presentar las manchas que corresponden a las manchas en los cromatogramas de las
Soluciones estndar A, B, D y J. Pulverizar sobre la
placa con Revelador 3 y calentar la placa a 120 C
hasta que las manchas aparezcan en los cromatogramas de estas Soluciones estndar F, G y H. El cromatograma de la Solucin muestra debe presentar manchas que corresponden a las presentes en los cromatogramas de estas Soluciones estndar.
Pulverizar sobre la tercera placa con Revelador 4 y
calentar a 120 C hasta que las manchas aparezcan en
los cromatogramas de las Soluciones estndar. Las
manchas aparecen rpidamente en los cromatogramas
de las Soluciones estndar A, B, C, D, E, F, G y H. La
mancha en el cromatograma de la Solucin estndar 1
aparece ms lentamente. El cromatograma de la Solucin muestra no debe presentar ms de tres manchas y
stas corresponden a las manchas en los cromatogramas de las Soluciones estndar A, B, C, D, E, F, G o
H; puede mostrar tambin una mancha que corresponde a la mancha en el cromatograma de la Solucin
estndar 1. Las manchas en el cromatograma de la
Solucin muestra no deben ser ms intensas que las
manchas correspondientes en los cromatogramas de
las Soluciones estndar.
[NOTA: en el cromatograma de la Solucin muestra, cualquier mancha cercana al frente del solvente
empleado para el primer desarrollo no debe tenerse en
cuenta (polmeros de bajo peso molecular relativo)].
Cromo - (ver 440. Espectrofotometra de absorcin y emisin atmica).
Solucin madre del estndar - Disolver una cantidad de dicromato de potasio, equivalente a 0,283 g de
K2Cr2O7, en agua y diluir a 1 litro con el mismo solvente (100 ppm de Cr).
LMITES (%)
0,125
0,2
0,2
0,2
0,2
0,2
0,5
0,5
0,2
CARACTERSTICAS
Perlas, grnulos o, luego de ser transformado,
lminas translcidas o tubos de espesor variable.
Es prcticamente insoluble en agua, etanol, metanol
y hexano. Sin embargo el hexano disuelve los
polmeros residuales de bajo peso molecular. Soluble en hidrocarburos aromticos calientes. Se quema con una llama azul. La temperatura a la cual el
material se ablanda vara con el contenido de acetato de vinilo; siendo aproximadamente de 100 C
para materiales de bajo contenido y de aproximadamente 70 C para materiales cuyo contenido es
de 30 %.
IDENTIFICACIN - [NOTA: si es necesario,
cortar el material en trozos de tamao apropiado].
Absorcin infrarroja <460>. A 250 mg del material a ensayar agregar 10 ml de tolueno y calentar
a reflujo durante aproximadamente 15 minutos.
Colocar unas gotas de la solucin obtenida sobre
una placa de cloruro de sodio y evaporar el solvente
a 80 C. El espectro obtenido debe presentar los
siguientes mximos de absorcin que corresponden
al acetato de vinilo: 1.740; 1.375; 1.240; 1.020 y
610 cm-1 y mximos que corresponden al etileno en
las posiciones siguientes: 2.920 a 2.850; 1.470;
1.460; 1.375; 730 y 720 cm-1. El espectro obtenido
debe ser, adems, idntico al obtenido con la sustancia de referencia. [NOTA: si el material a ensayar est en forma de lminas, el espectro puede
determinarse directamente sobre un trozo de tamao
apropiado.]
ENSAYOS - [NOTA: si es necesario, cortar el
material en trozos de tamao apropiado.]
Solucin indicadora - Disolver en alcohol
100 mg de azul de bromotimol, 20 mg de rojo de
metilo y 200 mg de fenolftalena. Diluir a 100 ml
con el mismo solvente y filtrar.
Solucin S1 - Transferir 2,0 g del material a ensayar a un erlenmeyer de vidrio al borosilicato de
boca esmerilada. Agregar 80 ml de tolueno y calentar a reflujo con agitacin constante durante
90 minutos. Dejar enfriar a 60 C y agregar 120 ml
de metanol con agitacin constante. Filtrar la solucin a travs de un filtro de vidrio sinterizado de
porosidad media. Lavar el erlenmeyer y el filtro
con 25 ml de una mezcla de 40 ml de tolueno y
60 ml de metanol, agregar el lavado al filtrado y
diluir a 250 ml con la misma mezcla de solventes.
Solucin S2 - Transferir 25 g del material a ensayar a un erlenmeyer de vidrio al borosilicato de
boca esmerilada. Agregar 500 ml de Agua para
Inyectables y calentar a reflujo durante 5 horas.
Dejar enfriar y decantar la solucin. Reservar una
porcin de la solucin para el ensayo Aspecto de la
solucin S2 y filtrar el resto a travs de un filtro de
el frente del solvente haya recorrido aproximadamente 10 cm empleando Fase mvil 1. Retirar la
placa de la cmara y dejarla secar. Pulverizar sobre
la placa con Revelador y calentar a 120 C durante
unos minutos para intensificar las manchas. Cualquier mancha que corresponda a cido esterico en
el cromatograma de la Solucin muestra no debe ser
ms intensa que la mancha principal en el cromatograma de la Solucin estndar A.
Desarrollar la segunda placa hasta que el frente
del solvente haya recorrido aproximadamente
13 cm empleando Fase mvil 2. Retirar la placa de
la cmara y dejarla secar. Desarrollar nuevamente
hasta que el frente del solvente haya recorrido
aproximadamente 10 cm empleando Fase mvil 3.
Retirar la placa de la cmara y dejarla secar. Pulverizar sobre la placa con Revelador. Calentar en una
estufa a 120 C hasta que las manchas aparezcan.
Cualquier mancha que corresponda a erucamida u
oleamida en el cromatograma de la Solucin muestra no debe ser ms intensa que las manchas correspondientes en los cromatogramas de las Soluciones
estndar B y C.
Antioxidantes fenlicos
Sistema cromatogrfico - Emplear un equipo
para cromatografa de lquidos de un detector ultravioleta ajustado a 280 mm y una columna de
25 cm 4,6 mm con fase estacionaria constituida
por octadecilsilano qumicamente unido a partculas
de slice porosa de 5 m de dimetro. El caudal es
de aproximadamente 1,5 ml por minuto.
Fase mvil - Emplear una de las dos mezclas
siguientes:
Fase mvil 1 - Acetonitrilo, tetrahidrofurano y
agua (60:30:10).
Fase mvil 2 - Metanol, 2-propanol y agua
(50:45:5).
Solucin estndar A - Disolver 25 mg de butilhidroxitolueno, 40 mg de 2,22",6,66"-hexater-butil-4,4',4"-[(2,4,6-trimetil-1,3,5-bencenotriil) trismetilen]trifenol, 40 mg de tetrakis
[3-(3,5-di-ter-butil-4-hidroxifenil)propionato] de
pentaeritritilo
y
40 mg
de
3-(3,5-di-ter-butil-4-hidroxifenil) prioponato de
octadecilo en 10 ml de una mezcla de acetonitrilo y
tetrahidrofurano (50:50). Diluir 2 ml de esta solucin a 50 ml con el mismo solvente.
Solucin estndar B - Disolver 40 mg de
3-(3,5-di-ter-butil-4-hidroxifenil) propionato
de
oetadecilo y 40 mg de fosfito de tris(2,4-di-terbutilfenilo) en 10 ml de cloruro de metileno. Diluir
2 ml de esta solucin a 50 ml con el mismo solvente.
Solucin muestra A - Evaporar a sequedad,
aplicando vaco y a 45 C, 50 ml de Solucin S1.
CARACTERSTICAS
El envase debe ser suficientemente transparente
para permitir un examen visual apropiado de su
contenido antes y despus de ser llenado con sangre
y debe ser suficientemente flexible para ofrecer una
mnima resistencia durante el llenado y vaciado
bajo condiciones normales de uso. El envase no
debe contener ms de 5 ml de aire.
VALORACION
Transferir de 250 mg a 1 g del material a ensayar, segn el contenido de acetato de vinilo del
copolmero a ensayar, a un erlenmeyer de vidrio al
borosilicato de boca esmerilada de 300 ml. Agregar
40 ml de xileno. Calentar a reflujo con agitacin
durante 4 horas. Dejar enfriar, con agitacin continua, hasta que comience la precipitacin. Agregar
lentamente 25,0 m1 de una solucin de hidrxido
de potasio alcohlico preparada disolviendo 6,6 g
de hidrxido de potasio en 50 ml de agua y diluyendo a 1 litro con etanol. Calentar a reflujo con
agitacin durante 3 horas. Dejar enfriar con agitacin continua, lavar el refrigerante con 50 ml de
agua y agregar al erlenmeyer 30,0 ml de cido
sulfrico 0,1 N. Transferir el contenido del erlenmeyer a un vaso de precipitados de 400 ml. Lavar
el erlenmeyer con dos porciones de 50 ml de una
solucin de sulfato de sodio anhidro al 20 % y tres
porciones de 20 ml de agua. Agregar todos los
lavados al vaso de precipitados que contiene la
solucin inicial. Titular el exceso de cido sulfrico con hidrxido de sodio 0,1 N, determinando el
punto final potenciomtricarnente (ver 780. Volumetra). Realizar una determinacin con un blanco
y hacer las correcciones necesarias. Cada mililitro
de cido sulfrico 0,1 N es equivalente a 8,609 mg
de acetato de vinilo.
Envases plsticos estriles para sangre
humana o hemoderivados
Los envases plsticos para la recoleccin, almacenamiento, procesamiento y administracin de
sangre humana y hemoderivados se fabrican de uno
ENSAYOS
Solucin S1.- Llenar el envase con 100 ml de
Solucin fisiolgica libre de piretgenos (SR) estril. Cerrar el envase y calentarlo en autoclave,
manteniendo la temperatura a 110 C durante
30 minutos.
Si el envase a ensayar contiene una solucin anticoagulante, vaciarlo previamente, y lavarlo con
250 ml de Agua para Inyectables a 20 1 C en
varias porciones, descartando los lavados.
Solucin S2 - Introducir en el envase un volumen de Agua para Inyectables igual al volumen de
solucin de anticoagulante. Cerrar el envase y
calentarlo en autoclave manteniendo la temperatura
a 110 C durante 30 minutos. Enfriar, agregar suficiente cantidad de Agua para Inyectables como
para llenar el envase hasta su capacidad nominal.
Si el envase a ensayar contiene una solucin anticoagulante, vaciarlo previamente y lavarlo segn
se indic anteriormente para la Solucin S1.
Resistencia a variaciones de temperatura Colocar el envase en una cmara apropiada la cual
posee una temperatura inicial entre 20 y 23 C.
Enfriarlo rpidamente a una temperatura de 80 C
y mantenerlo a esa temperatura durante 24 horas.
Elevar la temperatura a 50 C y mantenerla durante
12 horas. Dejar enfriar a temperatura ambiente. El
envase deber cumplir con los ensayos para la Resistencia a la centrifugacin, Resistencia al estiramiento, Fuga, Permeabilidad al vapor de agua,
Vaciado bajo presin y Velocidad de llenado, siguiendo las tcnicas descriptas en este captulo.
Resistencia a la centrifugacin Solucin indicadora - Disolver, con calentamiento suave, 50 mg de azul de bromofenol en
3,73 ml de hidrxido de sodio 0,02 M y diluir a
100 ml con agua. Procedimiento - Introducir en el envase un volumen de agua acidificada, por el agregado de 1 ml
de solucin de cido clorhdrico diluido, en cantidad suficiente para alcanzar su capacidad nominal.
Envolver el envase con un papel absorbente impregnado con Solucin indicadora diluida 1 en 5.
Secar y centrifugar durante 10 minutos a 5.000 g.
No se debe producir ninguna fuga, revelada por el
papel indicador, ni ninguna distorsin permanente.
Resistencia al estiramiento - Introducir en el
envase un volumen de agua acidificada por el agregado de 1 ml de solucin de cido clorhdrico diluido, en suficiente cantidad para alcanzar su capacidad nominal. Suspender el envase por el dispositivo de sujecin desde el extremo opuesto al tubo de
salida, aplicar a lo largo del eje del tubo una fuerza
de 20 N (2,05 kgf). Mantener la traccin durante
5 segundos. Repetir el ensayo aplicando la fuerza a
cada una de las partes que se emplean para llenar y
vaciar el envase. No deber producirse rotura o
deterioro apreciable.
Ensayo de fuga - Colocar el envase, que se ha
sometido al ensayo de Resistencia al estiramiento,
entre dos placas recubiertas con papel absorbente
impregnado con Solucin indicadora diluida 1 en 5,
empleada en el ensayo de Resistencia a la centrifugacin y secar. Aplicar, progresivamente, una
fuerza a las placas de forma que la presin interna
del envase alcance 67 kPa en el trmino de
1 minuto. Mantener la presin durante 10 minutos.
No se debe percibir ninguna seal de fuga sobre el
papel indicador.
Permeabilidad al vapor de agua - Para envases que contienen solucin anticoagulante, llenar
con un volumen de Solucin fisiolgica (SR), similar a la cantidad de sangre a contener.
Para el caso de los envases vacos, llenar con la
mezcla de solucin de anticoagulante indicada y
Solucin fisiolgica (SR). Cerrar el envase, pesarlo
y almacenarlo a 5 1 C en una atmsfera con una
humedad relativa de 50 5 % durante 21 das. Al
final de este perodo la prdida de peso no deber ser
mayor de 1 %.
Solucin reguladora B0- A 30,0 ml de la Solucin reguladora madre agregar 20,0 ml de agua.
Solucin reguladora C0 - A 15,0 ml de la Solucin reguladora madre agregar 85,0 ml de agua.
Solucin A1 - Mezclar 3,0 ml de Solucin reguladora A0 y 12,0 ml de agua.
Solucin B1 - Mezclar 4,0 ml de Solucin reguladora-B0 y 11,0 ml de agua.
Solucin C1 - Mezclar 4,75 ml de Solucin reguladora C0 y 10,25 ml de agua.
Procedimiento - Transferir 1,4 ml de la Solucin S2 a cada uno de tres tubos de centrfuga. Al
tubo I agregarle 0,1 ml de Solucin reguladora A0,
al tubo II agregarle 0,1 ml de Solucin reguladora
B0 y al tubo III agregarle 0,1 ml de Solucin reguladora C0. Agregar a cada tubo 0,02 ml de sangre
humana fresca heparinizada, mezclar bien y calentar en un bao de agua a 30 1 C durante
40 minutos. Emplear sangre recolectada 3 horas
antes como mximo o sangre recolectada con solucin anticoagulante de citrato-fosfato-dextrosa
24 horas antes como mximo.
A los tubos I, II y III agregar 1,5 ml de Solucin
A1, Solucin B1 y Solucin C1, respectivamente. Al
mismo tiempo y de la misma manera, preparar otros
tres tubos, reemplazando Solucin S2 por agua,
estos tubos servirn como control. Centrifugar
simultneamente los tubos a ensayar y los de control a exactamente 2500 g en la misma centrfuga
horizontal durante 5 minutos. Determinar las absorbancias, con un espectrofotmetro apropiado, en
celdas de 1 cm, a la longitud de onda de 540 nm,
empleando la Solucin reguladora madre como
blanco. Calcular el porcentaje de hemlisis por la
frmula siguiente:
Aexp
A100
100
Piretgenos <340> - Inyectar 10 ml de la Solucin S1 por cada kg de peso del conejo. La Solucin
S1 debe cumplir con los requisitos establecidos.
Reactividad biolgica <380> - Realizar el ensayo segn se indica en 380. Ensayo de reactividad
biolgica in vitro.
Acondicionamiento
Los envases estn contenidos en sobres protectores. Al separarse el envase de su sobre protector,
el mismo no debe evidenciar fugas ni crecimiento
de microorganismos. El sobre protector debe ser
suficientemente resistente para soportar la manipulacin normal.
El sobre protector debe estar sellado de tal manera que no pueda abrirse y cerrarse nuevamente sin
evidenciar la rotura del mismo.
Rotulado - Debe cumplir con las normas vigentes.
Envases plsticos vacos estriles de poli(cloruro de vinilo) plastificado para sangre
humana o hemoderivados
ENSAYOS
Debern cumplir con los ensayos para Envases
plsticos estriles para sangre humana o hemoderivados y con los siguientes ensayos para detectar
materia extrable.
Solucin de referencia - Transferir Agua para
Inyectables a un erlenmeyer de vidrio al borosilicato y calentar en autoclave a 110 C durante
30 minutos.
Sustancias reductoras - Inmediatamente despus de la preparacin de la Solucin S2, transferir
al erlenmeyer al borosilicato una cantidad correspondiente al 8 % de la capacidad nominal del envase. Simultneamente preparar un blanco empleando
un volumen igual de la Solucin de referencia recientemente preparada en otro erlenmeyer de vidrio
al borosilicato. A cada solucin agregar 20,0 ml de
permanganato de potasio 0,002 M y 1 ml de cido
sulfrico diluido. Dejar reposar durante 15 minutos
protegido de la luz.
A cada solucin agregar 0,1 g de ioduro de potasio. Dejar reposar durante 5 minutos protegido de
la luz y titular inmediatamente con tiosulfato de
sodio 0,01 N, empleando 0,25 ml de almidn (SR)
como indicador. La diferencia entre las dos titulaciones no debe ser mayor de 2,0 ml.
Acidez o alcalinidad - A un volumen de Solucin S2, equivalente al 4 % de la capacidad nominal
del envase, agregarle 0,1 ml de fenoftalena (SR).
La solucin permanece incolora. Agregar 0,4 ml de
una solucin de hidrxido de sodio 0,01 M. La
Tipo de
vidrio
I
II-III
IV
Tabla 2.
Capacidad
nominal (ml)
N de envases
3
> 3 30
> 30
no menor de 10
no menor de 5
No menor de 3
Volumen de solucin
empleado para la
titulacin (ml)
25
50
100
Tipo III
20
17,6
Tabla 3. Continuacin
Capacidad del envase correspondiente al 90 %
del volumen de derrame promedio
(ml)
> 2 y 5
> 5 y 10
> 10 y 20
> 20 y 50
> 50 y 100
> 100 y 200
> 200 y 500
> 500
Tipo I y II
Tipo III
1,3
1
0,8
0,6
0,5
0,4
0,3
0,2
13,2
10,2
8,1
6,1
4,8
3,8
2,9
2,2
50
45
40
35
30
15
25
20
15
13
12
10
[NOTA: cualquier envase de tamao intermedio a los mencionados anteriormente debe tener una transmisin
igual o menor que la del envase de tamao inmediato superior en la Tabla 4.]
cE I M / I E
A = log(1 / T ) = log(I 0 / I )
donde Io es la intensidad de radiacin incidente e I
es la intensidad de radiacin transmitida.
De acuerdo con la ley de Lambert-Beer, la
absorbancia es proporcional al paso ptico, d, de la
capa absorbente atravesada por la radiacin y a l a
concentracin, c, del analito:
A = kdc
La constante de proporcionalidad, k, asume
distintas denominaciones segn las unidades en que
d y c son expresadas:
Absortividad (a): es la absorbancia de una
solucin cuya concentracin, c, es de 1 g por litro,
medida en una celda de paso ptico, d, de 1 cm.
a = A / cd
Coeficiente de extincin especfica [E(1 %,
1 cm)]: es la absorbancia de una solucin cuya
concentracin, c, es de 1 %, medida en una celda de
paso ptico, d, de 1 cm,
E (1%,1cm ) = A / cd = 10a
Absortividad molar (): es la absorbancia de
una solucin cuya concentracin es 1 mol por litro,
medida en una celda de paso ptico, d, de 1 cm.
Puede calcularse como el producto de la
absortividad por el peso molecular, PM, del analito.
= aPM
Longitud de onda (nm)
235
257
313
350
Tabla.
E (1 %, 1 cm)
124,5
144,0
48,6
106,6
Tolerancia mxima
122,9 a 126,2
142,4 a 145,7
47,0 a 50,3
104,9 a 108,2
475. ESTERILIZACIN
Ver 475. Esterilizacin en Apartado de Productos Mdicos en Volumen III.
Tabla.
Lmite de impurezas orgnicas voltiles
Lmite
(ppm)
Benceno
2
Cloroformo
60
1,4-Dioxano
380
Cloruro de metileno
600
Tricloroetileno
80
Mtodo II
Sistema cromatogrfico - Emplear un equipo
para cromatografa de gases con un detector de
ionizacin a la llama, una precolumna de slice de
5 m x 0,53 mm desactivada con fenilmetilsiloxano
y una columna de slice fundida de
30 m x 0,53 mm recubierta con una fase
estacionaria
constituida
por
94 %
de
dimetilpolisiloxano y 6 % de cianopropilfenil
polisiloxano (los porcentajes se refieren a la
sustitucin molar), de 3,0 m de espesor,
empleando una jeringa hermtica para gases
previamente calentada y 1 ml del espacio libre
superior. Mantener el inyector y el detector a
aproximadamente 140 y 260 C, respectivamente.
Programar la temperatura de la columna del
siguiente modo: mantener a 40 C durante
20 minutos, aumentar rpidamente hasta 240 C y
mantener a es ta temperatura durante 20 minutos.
Se emplea helio como gas transportador con una
velocidad lineal de aproximadamente 35 cm por
segundo.
[NOTA: pueden emplearse aparatos de
muestreo de espacio libre superior que transfieren
automticamente una cantidad medida del espacio
libre superior del vial a la columna.]
Solucin estndar - Preparar segn se indica
para la Solucin estndar en Mtodo I. Transferir
5 ml de la solucin a un vial equipado con un
septo y precinto metlico que contenga 1 g de
sulfato de sodio anhidro y sellar el vial. Calentar
el vial a 80 C durante 60 minutos.
Solucin muestra - Transferir 100 mg de
muestra, exactamente pesados, a un vial. Agregar
5,0 ml de agua o el solvente especificado en la
monografa correspondiente y 1 g de sulfato de
sodio anhidro. Tapar con un septo y precintar.
Calentar el vial a 8 0 C durante 60 minutos o el
tiempo
especificado
en
la
monografa
correspondiente.
Procedimiento - Proceder segn se indica en
Mtodo I.
Mtodo III
Sistema cromatogrfico y Procedimiento Proceder segn se indica en Mtodo II, pero sin
emplear una jeringa hermtica para gases
previamente calentada y 1 ml del espacio libre
superior.
Solucin estndar y Solucin muestra Proceder segn se indica en Mtodo I.
Aptitud del sistema (ver 100.
Cromatografa) - Cromatografiar la Solucin
estndar, registrar los cromatogramas y medir las
respuestas de los picos segn se indica en
Procedimiento: la resolucin, R, no debe ser
menor de 3 y la desviacin estndar relativa para
inyecciones repetidas no debe ser mayor de 15 %.
Mtodo IV
Emplear este mtodo para determinar la
presencia de cloruro de metileno en comprimidos
recubiertos. El lmite de cloruro de metileno es
500 g por da, en base a l a dosis diaria mxima
declarada en el rtulo.
Sistema cromatogrfico - Proceder segn se
indica en Mtodo III, pero inyectar 1 ml de
muestra del espacio libre superior, empleando una
jeringa hermtica para gases previamente
calentada. [NOTA: puede emplearse un aparato
de muestreo de espacio libre superior que
automticamente transfiere una cantidad medida
de muestra del espacio libre superior del vial a la
columna.]
Solucin madre del estndar - Transferir
3,8 l, exactamente medidos, equivalentes a 5 mg
de cloruro de metileno a un matraz aforado de
1 litro, diluir a volumen con agua libre de
sustancias orgnicas y mezclar.
Solucin estndar - [NOTA: realizar una
incisin en la cubierta de los comprimidos antes
de preparar la solucin.]
Transferir varios
comprimidos enteros, equivalente a 1 g, a un
matraz aforado con tapn de vidrio. Transferir
20 ml de Solucin madre del estndar al matraz,
insertar el tapn con firmeza, colocar en un bao
ultrasnico hasta que los comprimidos se
desintegren completamente y centrifugar la
[NOTA:
emplear
solucin
reguladora
previamente equilibrada a u na temperatura de
37,0 0,5 C.] Descartar el medio cido del vaso
y agregar al mismo 1 litro de solucin reguladora
de fosfato de pH 6,8, preparada mezclando cido
Tabla de aceptacin 1.
Nivel
Unidades ensayadas
Criterios
N1
12
N2
N3
Tabla de aceptacin 2.
Nivel
Unidades ensayadas
Criterios
Na1
12
Na2
Na3
Tabla de aceptacin 3.
Nivel
Unidades ensayadas
Nb1
Nb2
12
Nb3
Criterios
adicin. Agregar las primeras gotas muy lentamente con agitacin constante para evitar una reaccin
violenta. Interrumpir el calentamiento si el desprendimiento de gases es excesivo. Cuando la
reaccin ha terminado, calentar cuidadosamente,
rotando el generador de arsina ocasionalmente, para
evitar que algunas porciones de la muestra queden
adheridas a l as paredes del generador de arsina.
Mantener las condiciones de oxidacin durante la
digestin agregando pequeas cantidades de solucin de perxido de hidrgeno al 30 %, cada vez
que la mezcla se tome de color marrn o se oscurezca. Continuar la digestin hasta que la materia
orgnica se destruya y se desprendan abundantes
vapores de trixido de azufre y que la solucin sea
incolora o pr esente solamente un color amarillo
plido. Enfriar y agregar cuidadosamente 10 ml de
agua, mezclar y evaporar nuevamente hasta que
aparezcan vapores fuertes. Si fuera necesario, repetir el procedimiento para eliminar cualquier traza de
perxido de hidrgeno. Enfriar, lavar las paredes
del generador de arsina con 10 ml de agua y diluir
con agua a 35 ml.
Procedimiento - Proceder segn se indica en
Procedimiento para el Mtodo I.
Interferencias qumicas - Los metales o las sales de metales como el cromo, cobalto, cobre, mercurio, molibdeno, nquel, paladio y plata, pueden
interferir con la formacin de arsina. El antimonio
que forma estibina produce una interferencia positiva en el desarrollo del color con dietilditiocarbamato de plata (SR). Cuando se sospecha la presencia
de antimonio, el color rojo que se produce en las
dos soluciones de dietilditiocarbamato de plata,
puede ser comparado a l a longitud de onda de
mxima absorcin entre 535 y 540 nm con un colormetro apropiado ya que a esta longitud de onda
la interferencia debida a la estibina es despreciable.
Elemento
Calcio
Potasio
Sodio
Actualizacin total
[NOTA: siempre que en una monografa individual aparezca la denominacin Solucin estndar
de plomo sin ninguna especificacin de concentracin, se debe emplear la Solucin estndar de plomo (10 ppm).]
Mtodo I
Solucin reguladora de acetato pH 3,5 - Disolver 50 g de acetato de amonio en 100 ml de cido
clorhdrico 6 N, ajustar a pH 3,5, si fuera necesario,
con hidrxido de amonio 6 N o cido clorhdrico
6 N y diluir con agua a 200 ml.
Solucin estndar - Transferir 2 ml de Solucin
estndar de plomo (10 ppm), correspondientes a
20 g de Pb, a un tubo de Nessler de 50 ml y diluir
con agua a 25 ml. Ajustar a pH entre 3,0 y 4,0 con
cido actico 1 N o hidrxido de amonio 6 N, empleando papel indicador de pH, diluir con agua a
40 ml y mezclar.
Solucin muestra - Transferir 25 ml de la solucin preparada para el ensayo segn se indica en la
monografa correspondiente a un tubo de Nessler de
50 ml. Alternativamente, cuando se indique en la
monografa correspondiente, emplear el volumen de
cido indicado, disolver la cantidad en g de muestra, calculada por la frmula siguiente:
2,0/(1.000L)
en la cual L es el Lmite de metales pesados, en
porcentaje. Diluir a 25 ml con agua y ajustar a pH
entre 3,0 y 4,0 con cido actico 1 N o hidrxido de
amonio 6 N, empleando papel indicador de pH,
diluir a 40 ml con agua y mezclar.
Solucin control - Transferir 25 ml de una solucin preparada segn se indica para la Solucin
muestra a un tercer tubo de Nessler de 50 ml y
agregar 2,0 ml de Solucin estndar de plomo
(10 ppm). Ajustar a pH entre 3,0 y 4,0 con cido
actico 1 N o hidrxido de amonio 6 N, empleando
papel indicador de pH, diluir a 40 ml con agua y
mezclar.
Procedimiento - A cada uno de los tubos que
contienen la Solucin estndar, la Solucin muestra
y la Solucin control, respectivamente, agregar
1,2 ml de tioacetamida-glicerina bsica (SR) y 2 ml
de Solucin reguladora de acetato de pH 3,5, diluir
a 50 ml con agua, mezclar, dejar reposar durante
5 minutos y observar longitudinalmente sobre una
superficie blanca: el color de la solucin obtenida a
partir de la Solucin muestra no debe ser ms oscuro que el de la obtenida a partir de la Solucin
estndar y la intensidad del color de la Solucin
Capacidad
(ml)
5
10
10
25
25
50
100
DEFINICIONES
Gas blanco - Gas o mezcla de gases empleado para realizar el ajuste de cero en la calibracin
de los instrumentos analticos.
Gas estndar - Gas o mezcla de gases empleado para realizar el ajuste de la escala en la
calibracin de los instrumentos analticos.
SUSTANCIAS DE REFERENCIA
Dixido de Carbono SR-FA CO2 (PM: 44,0) - [124-38-9] - Contiene no menos de
99,995 % v/v de CO2, menos de 5 ppm de
Monxido de Carbono y menos de 25 ppm de
Oxgeno.
Monxido de Carbono SR-FA CO (PM: 28,0) - [630-08-0] - Contiene no menos de
99,97 % v/v de CO.
Monxido de Nitrgeno SR-FA - NO (PM: 30,0) - [10102-43-9] - Contiene no menos
de 98,0% v/v de NO.
Nitrgeno SR-FA - N2 - (PM: 28,01) [7727-37-9] - Contiene no menos de 99,999 %
v/v de N2, menos de 0,5 ppm de Monxido de
Carbono y Dixido de Carbono y menos de
5 ppm de Oxgeno.
Oxido Nitroso SR-FA - N2O - (PM: 44,01) [10024-97-2] Contiene no menos de
99,99 % v/v de N2O, menos de 1 ppm de
Monxido de Nitrgeno y menos de 1 ppm de
Monxido de Carbono.
Oxgeno SR-FA- O2 - (PM: 32,00) - [778244-7] - Contiene no menos de 99,99 % v/v de O2,
menos de 100 ppm de Nitrgeno y Argn, menos
de 10 ppm de Dixido de Carbono y menos de
0,5 ppm de Monxido de Carbono.
Mezcla que contenga 300 ppm v/v de Dixido
de Carbono SR-FA en Nitrgeno SR-FA - Se
emplea para la determinacin de Dixido de Carbono en Oxgeno por analizador infrarrojo.
Mezcla que contenga 300 ppm v/v de Dixido
de Carbono SR-FA en xido Nitroso SR-FA - Se
emplea para la determinacin de Dixido de Carbono en xido Nitroso por cromatografa de
gases.
Mezcla que contenga 5 ppm v/v de Monxido
de Carbono SR-FA en Nitrgeno SR-FA - Se
emplea para la determinacin de Monxido de
Carbono en Oxgeno por analizador infrarrojo.
Mezcla que contenga 5 ppm v/v de Monxido
de Carbono SR-FA en xido Nitroso SR-FA - Se
emplea para la determinacin de Monxido de
Carbono en xido Nitroso por cromatografa de
gases.
Mezcla que contenga 2 ppm de Monxido de
Nitrgeno SR-FA en Nitrgeno SR-FA- Se em-
Filtro
partculas
Convertidor
Filtro de O3
Generador de O3
Fotomultiplicador
Control
NO NO+NO2 NO2
se lleve a cabo en forma cuantitativa, la concentracin de ozono debe ser muy superior de
2 ppm, mxima cantidad de xidos de nitrgeno permitidos en la muestra.
gases, separadas por un diafragma metlico. Ambas cmaras contienen Dixido de Carbono SRFA o Monxido de Carbono SR-FA, segn se
proceda al ensayo de uno u otro gas en la muestra.
La absorcin de radiacin infrarroja produce
calor y consecuentemente un aumento de presin
en las cmaras del detector. Debido a que la
absorcin de energa radiante por parte del Dixido o Monxido de Carbono contenido en la celda
Entrada gas
Fuente IR
Detector
Cmaras de anlisis y referencia
Celda de
referencia Fuente IR
Celda de
muestra
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
Envase de gas
Regulador de presin
Vlvula de aguja
Llave de conmutacin
Tubo detector
Bomba dosificadora
Extremo abierto atmsfera
Figura 3
El envase que suministra el gas debe estar conectado a un regulador de presin adecuado y a
una vlvula de aguja. Conectar a la vlvula aguja
un tubo flexible provisto de una llave de conmutacin. Purgar el sistema con la llave 4 en la
posicin de purga (7) y ajustar el flujo del gas
bajo anlisis a un valor apropiado.
dad del color sobre la escala graduada. Si el resultado obtenido es negativo, el tubo detector debe
ser verificado con un gas de calibrado que contenga la sustancia a detectar.
La bomba dosificadora 6 puede reemplazarse
eventualmente por un caudalmetro apropiado.
No utilizar el tubo detector para ms de una
determinacin.
Tipos de tubos
Tubo detector de Aceite - Contiene filtros adsorbentes y soportes adecuados para el indicador
cido sulfrico. El valor mnimo indicado es
0,1 mg/m3 con una desviacin estndar relativa
mxima de 30 %.
[NOTA: debido a la gran diversidad de aceites
para compresores, es necesario verificar la reactividad de los tubos detectores de aceites frente al
aceite usado. La informacin sobre la reactividad
de diversos aceites se da en el folleto suministrado con el tubo.]
Tubo detector de Amonaco - Contiene filtros
adsorbentes y soportes adecuados para el indicador azul de bromofenol. El valor mnimo indicado
es 5 ppm con una desviacin estndar relativa
mxima de 10 %.
Tubo detector de Cloro - Contiene filtros adsorbentes y soportes adecuados para el indicador
o-toluidina. El valor mnimo indicado es 0,5 ppm
con una desviacin estndar relativa mxima de
10 %.
Tubo detector de Dixido de Azufre - Contiene filtros adsorbentes y soportes adecuados para
La contrainmunoelectroforesis es un mtodo
cuantitativo rpido que permite establecer gradientes de concentracin de antgeno externo y anticuerpo externo en un campo elctrico segn sus
diferentes cargas. Las diluciones de un estndar de
calibracin y las diluciones de la preparacin muestra se introducen en una fila de orificios en el gel y
en una fila de orificios opuesta a la primera se introduce una cantidad conocida del reactivo correspondiente. E l ttulo de la preparacin muestra ensayada se puede considerar como la dilucin ms
elevada que da lugar a lnea de precipitacin.
Existen diversas modificaciones de la inmunoelectroforesis cruzada y de los mtodos de electroinmunoensayo.
Otras tcnicas combinan la separacin de los
antgenos segn su tamao molecular y sus propiedades serolgicas.
Visualizacin y caracterizacin de las lneas
de inmunoprecipitacin
Estas pueden realizarse mediante tinciones selectivas o no selectivas, por fluorescencia, mediante
marcacin enzimtica e isotpica o por otras tcnicas apropiadas. Los mtodos de tincin selectiva
son los empleados, habitualmente, para la caracterizacin de sustancias no proteicas en los precipitados.
En los geles traslcidos, como los de agar o agarosa, la lnea de precipitacin es visible claramente,
siempre que la concentracin de cada uno de los
reactivos sea la apropiada.
VALIDACIN DEL MTODO
Criterios de validacin
El mtodo inmunoqumico cuantitativo solo es
vlido si:
1) El antgeno o anticuerpo no discrimina entre
preparacin muestra y estndar.
2) El mtodo no se ve afectado por otros componentes de la preparacin muestra o de sus excipientes, que pueden variar de una muestra a otra.
Estos componentes pueden incluir concentraciones
elevadas de otras protenas, sales, conservantes o
actividad proteoltica contaminante.
3) El lmite de cuantificacin es inferior al criterio de aceptacin indicado en la monografa correspondiente.
4) La precisin de la valoracin es tal que la varianza de los resultados corresponde a la exigencia
establecida en la monografa correspondiente.
puede
Osmolalidad
real
Peso de ClNa
Descenso
crioscpico
Presin osmtica
(mosmol/kg)
(g)
(C)
KPa 0 C
KPa 38 C
100
0,3087
0,186
227
259
200
0,6259
0,372
454
517
300
0,9463
0,558
681
776
400
1,2684
0,744
908
1.035
500
1,5916
0,930
1.136
1.294
600
1,9147
1,116
1.363
1.552
700
2,2380
1,302
1.590
1.811
PVt
Va n
PV
Va
en la cual P es el recuento de partculas promedio
obtenido a partir de las porciones ensayadas, V es
el volumen, en ml, de la unidad ensayada y Va es
el volumen, en ml, de cada porcin analizada.
Muestras
de
unidades
individuales
(inyectables de gran volumen) - Promediar los
recuentos obtenidos para dos o ms alcuotas de
5 ml tomadas de la muestra. Calcular el nmero
de partculas en cada mililitro del inyectable
analizado por la frmula siguiente:
P
V
en la cual P es el recuento de partculas promedio
para una muestra individual de 5 ml o de mayor
volumen y V es el volumen, en ml, de la porcin
tomada.
Interpretacin El inyectable cumple con los requisitos del
ensayo si el nmero promedio de partculas
presentes en las unidades ensayadas no es mayor
al valor indicado en la Tabla 1.
10 m
6.000 por unidad
25 por unidad
25 m
600 por unidad
3 por ml
Figura.
Micrmetro - Emplear un micrmetro de
platina certificado, con graduaciones de 10 m.
Aparatos de filtracin - Emplear un embudo
filtrante apropiado para el volumen a ensayar, con
un dimetro mnimo de aproximadamente 21 mm.
El embudo debe ser de plstico, vidrio acero
inoxidable. Colocar el filtro sobre una criba de
acero inoxidable o una placa de vidrio sinterizado
para que acte como difusor del filtrado. El
aparato de filtracin est equipado con una fuente
de vaco, un dispensador de solvente capaz de
entregar solvente filtrado a travs de un filtro
(DEOR DMP )
100
DMP
empleando
alcohol
isoproplico
filtrado.
Finalmente, empleando el dispositivo de enjuague
a presin, enjuagar el aparato con agua destilada o
desionizada y filtrada.
Retirar una membrana filtrante de su envase
empleando una pinza limpia de punta roma.
Emplear agua destilada o desionizada y filtrada
para lavar ambos lados del filtro. Armar el
aparato de filtracin con el difusor en la base y
colocar el filtro sobre el difusor. Colocar el
embudo en la parte superior de la base y fijarlo en
su lugar.
Preparacin muestra
Proceder segn se indica en Preparacin
muestra en Recuento de partculas por bloqueo de
luz.
Preparaciones lquidas - Para inyectables de
pequeo volumen con un volumen mayor o igual
a 25 ml, ensayados individualmente, y para
inyectables de gran volumen, se debe realizar el
ensayo sobre todo el volumen de la unidad. Para
inyectables de gran volumen o i nyectables de
pequeo volumen donde el volumen de cada
unidad es mayor o igual a 25 ml se deben ensayar
menos de diez unidades seleccionadas en base a la
definicin de un plan de muestreo estadstico.
Mezclar y suspender las partculas en cada unidad
invirtiendo veinte veces su contenido. Abrir las
unidades de manera de generar el menor nmero
posible de partculas. Para productos con un
volumen menor a 25 ml, abrir y combinar el
contenido de diez o ms unidades en un envase
limpio. Filtrar las unidades de gran volumen en
forma individual.
Se
pueden filtrar
individualmente las unidades de pequeo volumen
mayor o igual a 25 ml.
Mediante el empleo del embudo de filtracin
transferir el volumen total de una solucin
combinada o una unidad individual y aplicar
vaco. Si se va a em plear el procedimiento de
recuento parcial (ver Procedimiento de recuento
parcial en Recuento de Partculas), no dejar que
el volumen del lquido en el embudo filtrante se
encuentre por debajo de la mitad del volumen del
embudo entre cada uno de los llenados. [NOTA:
emplear un embudo filtrante apropiado al
volumen de la solucin si se va emplear el
procedimiento de recuento parcial. Esto es
necesario para asegurar la distribucin pareja de
las partculas sobre la membrana]. Despus de
agregar la ltima porcin de la solucin, comenzar
a lavar las paredes del embudo filtrante aplicando
en forma circular agua destilada o desionizada y
filtrada y dejar de lavar antes que el volumen
llegue por debajo de un cuarto del nivel de
llenado. Mantener el vaco hasta haber filtrado
25 m.
Para inyectables de gran volumen,
calcular el nmero de partculas, por ml, para la
unidad ensayada, por la frmula siguiente:
P
V
en la cual P es el nmero total de partculas
contadas y V es el volumen de la solucin, en ml.
Para inyectables de pequeo volumen, calcular el
nmero de partculas, por unidad, por la frmula
siguiente:
P
n
en la cual P es el nmero total de partculas
contadas y n es el nmero de unidades
combinadas.
Procedimiento de recuento parcial Si se realizara un recuento parcial de partculas
sobre una membrana, el operador debe, en primer
lugar, asegurarse de que se realice una
distribucin homognea de partculas en la
membrana.
Esto es evaluado barriendo
rpidamente para buscar agregados de partculas.
No debe observarse ningn agregado. Contar las
partculas mayores o iguales a 10 m en el CR en
el borde del rea de filtracin as como en el
centro de la membrana. El nmero de partculas
mayores o iguales a 1 0 m en el CR con el
recuento total ms alto de partculas no es ms del
doble del CR con el recuento ms bajo de
partculas. Rechazar un filtro que no cumpla estos
criterios y preparar otro si se emplea un
procedimiento de recuento parcial, o analizar esta
membrana por el mtodo de recuento total.
El nmero normal de CR contados para un
recuento parcial es 20. Si se desea un intervalo de
confianza ms pequeo con respecto al resultado,
puede contarse un nmero de campos y partculas
mayor. Contar todas las partculas que tengan un
dimetro mayor o igual a 10 m y mayor o igual a
25 m dentro del CR y aqullas que estn en
contacto con el lado derecho del crculo del CR.
No contar las partculas fuera del CR. Ignorar
aqullas que tocan el lado izquierdo del crculo de
CR. La lnea divisoria entre el lado derecho y el
izquierdo del crculo del CR es el filamento
vertical. [NOTA: determinar el tamao de la
partcula sin cambiar el aumento o la iluminacin
del microscopio].
Para realizar un recuento parcial de partculas
sobre una membrana, comenzar en el borde
derecho del centro del rea de filtracin y empezar
a contar los CR adyacentes. Cuando se llega al
PAt
ApV
en la cual P es el nmero de partculas contadas,
At es el rea de filtracin de la membrana en mm2,
Ap es el rea parcial contada en mm2, en base al
nmero de campos reticulares contados y V es el
Volumen de solucin filtrada, en ml. Para una
solucin combinada (para unidades de inyectables
de pequeo volumen que contengan menos de
25 ml) o para una sola unidad de un inyectable de
pequeo volumen, calcular el nmero de
partculas por unidad, por la frmula siguiente:
PAt
Ap n
en la cual n es el nmero de unidades contadas y
los otros trminos son los definidos anteriormente.
Para todos los tipos de productos, si el material
ensayado ha sido diluido para que disminuya la
viscosidad, el factor de dilucin debe tomarse en
cuenta al calcular el resultado final del ensayo.
Interpretacin
El inyectable cumple con los requisitos del ensayo
si el nmero de partculas promedio presente en
enumerados en la Tabla 2.
10 m
3.000 por unidad
12 por ml
25 m
300 por unidad
2 por ml
Balanzas analticas
Balanzas de precisin
Desde
1 g
1 mg
Sensibilidad
Valor nominal
1 mg
2 mg
5 mg
10 mg
20 mg
50 mg
100 mg
200 mg
500 mg
1g
2g
5g
10 g
20 g
50 g
100 g
200 g
500 g
1 kg
2 kg
Hasta
0,1 mg
0,1 g
Capacidad mxima
Hasta
500 g
5.000 g
debe
obtenerse
El
valor
de
n-1
experimentalmente para cada balanza (realizando
no menos de diez pesadas) y es independiente de
la cantidad pesada, pero s depende de la
instalacin, del manipuleo, de la variacin de las
condiciones ambientales y tambin del material
del recipiente de pesada.
Para la calibracin de balanzas analticas
deben emplearse pesas Clase E2 y para balanzas
de precisin pesas Clase E2 o Clase F1.
Las pesas deben estar acompaadas de sus
correspondientes certificados de calibracin. Las
tolerancias para ambas Clases han sido
establecidas por la Organizacin Internacional de
Metrologa Legal (OIML).
Clase E2
Tolerancia en mg
0,006
0,006
0,006
0,008
0,010
0,012
0,015
0,020
0,025
0,030
0,040
0,050
0,060
0,080
0,10
0,15
0,30
0,75
1,5
3,0
Clase F1
Tolerancia en mg
0,020
0,020
0,020
0,025
0,030
0,040
0,050
0,060
0,080
0,10
0,12
0,15
0,20
0,25
0,30
0,5
1,0
2,5
5
10
Tabla continuacin.
Valor nominal
5 kg
Calse E2
Tolerancia en mg
7,5
Sensibilidad de la balanza
0,001mg
0,01 mg
0,1 mg
1 mg
0,01 g
0,1 g
Clase F2
Tolerancia en mg
25
[NOTA: Las balanzas deber ser instaladas de manera tal de evitar las vibraciones y/o oscilaciones].
700. POLAROGRAFIA
La polarografa es un mtodo electroqumico
que proporciona informacin cualitativa y
cuantitativa de sustancias electro-reducibles y
electro-oxidables, basado en la medicin del flujo
de corriente resultante de la electrlisis de una
solucin en un microelectrodo polarizable, en
funcin del voltaje aplicado. El intervalo de
concentraciones para las sustancias que se analizan
es de 10-2 a 10-5 M.
Esta medicin puede realizarse por polarografa
de corriente directa o de pulsos. A menos que se
especifique de otro modo, emplear la tcnica de
corriente directa:
POLAROGRAFIA DE CORRIENTE
DIRECTA
En la polarografa de corriente directa
convencional, la corriente se mide continuamente
mientras se aplica un potencial variable en forma
lineal. Esta corriente se compone de dos elementos:
el primero es la corriente de difusin, producida por
la sustancia que experimenta la reduccin u
oxidacin en el electrodo de trabajo y que es
directamente proporcional a l a concentracin de
esta sustancia; y el segundo es la corriente
capacitiva, relacionada con la carga de la doble
capa electroqumica.
Un polargrafo emplea un electrodo de goteo de
mercurio (EGM) capaz de proporcionar un flujo
constante de pequeas gotas de mercurio, de
tamao reproducible, que fluyen del orificio de un
tubo capilar conectado a un reservorio de mercurio,
y un electrodo de referencia, generalmente de
calomel saturado (ECS), el cual debe ser de
superficie grande.
Al aplicar el voltaje inicial, se observa el flujo
de una muy pequea corriente residual; a medida
que el voltaje aplicado vara; dicho flujo presenta
mnimas variaciones, hasta que la sustancia bajo
valoracin experimenta la reduccin u oxidacin.
Al principio la corriente aumenta gradualmente y
luego lo hace de manera casi lineal con el voltaje
hasta alcanzar un valor limitante. En la porcin
ascendente inicial de la onda polarogrfica, el
aumento del flujo de corriente se corresponde con
una disminucin de la concentracin de las especies
electroactivas en la superficie del electrodo. A
medida que el voltaje y la corriente crecen, la
concentracin de las especies reactivas disminuye
an ms hasta alcanzar un valor mnimo en la
superficie del electrodo. La corriente est limitada
por la velocidad a la cual las especies reaccionantes
pueden difundir desde el seno de la solucin hasta
id = 708nD1 2 m 2 3t 1 6 c
en la cual id es la corriente mxima en
microamperios, n es el nmero de electrones
requeridos por molcula de sustancia electroactiva,
D es el coeficiente de difusin en cm2 por segundo,
m es la velocidad de flujo de mercurio del EGM en
mg por segundo, t es el tiempo de cada de la gota
en segundos y c es la concentracin del analito en
milimoles por litro.
Los polargrafos modernos, capaces de efectuar
polarografa por muestreo, estn equipados con
registradores para determinar la corriente durante la
ltima porcin de la vida de la gota, registrando
slo las corrientes mximas y evitando las
oscilaciones debidas al crecimiento de la gota.
Para aparatos en los que la corriente se mide con
galvanmetros, las ondas con perfil de diente de
sierra corresponden a o scilaciones cercanas a la
corriente promedio, mientras que si se emplean
registradores que operan en modo amortiguado, la
medida de la corriente es el promedio de las
oscilaciones. Para los polarogramas obtenidos de
esta manera, la id, dada por la ecuacin de Ilkovic es
la corriente promedio en microamperios observada
durante la vida de la gota, cuando el coeficiente 708
es reemplazado por 607.
1 2 2
donde E es la altura del pulso. La altura del pico
es directamente proporcional a l a concentracin a
velocidades de barrido y alturas de pulso constante.
Esta tcnica es muy sensible (pueden determinarse
concentraciones del orden de 10-7 M) y proporciona
mejor resolucin entre ondas poco espaciadas.
720. TERMOMETROS
Para seleccionar un termmetro, deben considerarse
las condiciones bajo las cuales habr de emplearse.
En la Tabla 1, Tabla 2 y Tabla 3 se especifican las
caractersticas de algunos termmetros tiles para
los ensayos farmacopeicos.
Graduaciones (C)
1
1
1
1
Graduaciones (C)
0,2
0,2
0,2
0,2
0,2
Graduaciones (C)
0,1
0,1
0,1
0,1
0,1
0,1
0,2
0,2
(100
A P
A
) > 10
se
especifique de otro modo en la monografa
correspondiente, los requisitos para la uniformidad
se cumplen si la cantidad de principio activo en no
menos de nueve de las diez unidades de
dosificacin determinada empleando el mtodo de
Uniformidad de peso o Uniformidad de contenido
se encuentra dentro del intervalo de 85,0 a 115,0 %
del valor declarado, ninguna unidad est fuera del
intervalo de 75,0 a 125,0 % del valor declarado y la
desviacin estndar relativa es menor o igual a
6,0 %.
Si dos o t res unidades de dosificacin estn
fuera del intervalo de 85,0 a 115,0 % del valor
declarado, pero no fuera del intervalo de 75,0 a
125,0 % del valor declarado, si la desviacin
estndar relativa es mayor a 6,0 % o si ambas
condiciones prevalecen, ensayar veinte unidades
adicionales. Los requisitos se cumplen si no ms de
tres unidades de las treinta unidades de dosificacin
estn fuera del intervalo de, 85,0 a 115,0 % del
valor declarado, ninguna unidad est fuera del
intervalo de 75,0 a 125,0 % del valor declarado y la
desviacin estndar relativa no es mayor a 7,8 %.
AEROSOLES DOSIFICADORES [NOTA: una
unidad de dosificacin se define como el lquido
(2CM ) / (B 1)
en la cual C es la concentracin, en mg por ml, de
Sustancia de referencia en la Solucin estndar, M
es la potencia, en g por mg o unidades, de la
Sustancia de referencia, B es el volumen, en ml, de
tiosulfato de sodio 0,01 N empleado en la
Titulacin del blanco e I es el volumen, en ml, de
tiosulfato de sodio 0,01 N empleado en la
Inactivacin y titulacin. Calcular la potencia de la
muestra por la frmula dada en la monografa
correspondiente.
Solvente1
Concentracin final
Amoxicilina
Agua
1,0 mg por ml
Ampicilina
Agua
1,25 mg por ml
Ampicilina sdica
Solucin reguladora N 1
1,25 mg por ml
Bencilpenicilina potsica
Solucin reguladora N 1
Bencilpenicilina sdica
Solucin reguladora N 1
Cloxacilina sdica
Agua
1,25 mg por ml
Ciclacilina
Agua
1,0 mg por ml
Dicloxacilina sdica
Solucin reguladora N 1
1,25 mg por ml
Feneticilina potsica
Solucin reguladora N 1
Fenoximetilpenicilina potsica
Solucin reguladora N 1
Meticilina sdica
Solucin reguladora N 1
1,25 mg por ml
Nafcilina sdica
Solucin reguladora N 1
1,25 mg por ml
Oxacilina sdica
Solucin reguladora N 1
1,25 mg por ml
A menos que se especifique de otro modo, las Soluciones reguladoras son las soluciones de fosfato de potasio
definidas en Diluyentes y medios en 770. Valoracin microbiolgica de antibiticos. No se requiere su
esterilizacin antes de usar.
Actualizacin parcial
Clculos
Tabla para el registro de respuestas.
P1
P2
P3
Pd
M1
M2
M3
Md
A
B
.
.
.
n
N
RA
RB
.
.
.
Rn
S1
S2
S3
Sn
T1
T2
T3
Tn
Estndar
(S)
S1
S2
Sd
Ps= S1 + S2 + + Sd
Ls= 1S1 + 2S2 + + dSd
1/2 (d+1) Ps
Muestra 1
(T)
T1
T2
Td
P T= T 1 + T 2 + + T d
Muestra 2
(U)
U1
U2
Ud
P U= U 1 + U 2 + + U d
12n
HL = 3
d d
n
Hp =
d
n(PS + PT + ...)
K=
hd
Grados de libertad
(g)
Suma de cuadrados
(SC)
h1
h1
h (d 2)
hd1
Grados de libertad
(g)
Suma de Cuadrados
(SC)
n 1
SCbloques=
Columnas (**)
n 1
SC
=
col .
Comp.
Aleatorizado
Error
Residual
Aleat. En Bloques
Cuadrado latino
( R + ... + R ) / hd K
hd ( C + ... + C ) K
A
2
1
hd ( n 1)
SCresidual
= SCtot SCtrat
( hd 1)( n 1)
( hd 2 )( n 1)
( nhd 1)
TOTAL
SC
=
tot
G2 / N
(*) No se calcula para el diseo completamente aleatorizado. R es la media de respuestas para cada bloque o fila.
(**) Solo se calcula para el diseo cuadrado latino.
El cuadrado medio de cada una de las fuentes de variacin se calcula como el cociente entre la Suma de Cuadrados (SC) y
sus correspondientes grados de libertad.
El F calculado es el cociente entre el Cuadrado Medio (CM) de la fuente de variacin y el Cuadrado Medio del Error
(CMerror= s2).
Fcalculado =
P
I = Log 2 = LogP2 LogP1
P1
b=
M 'T =
PT PS
db
V=
H L (LS + LT + ...)
Inh
C=
SC reg
b 2 dn
SC reg .
SC reg . s 2 t 2
M Sup = C M T + (C 1) C ( M T ) 2 + 2 V
M Inf = C M T (C 1) C ( M T ) 2 + 2 V
ANOVA
Modelo de Rectas Paralelas
SI
Desv. Paralelismo=
Signif.
NO
NO
Regresin =
Signif.
SI
SI
Desv. Linealidad =
Signif.
NO
SI
Dif. e/ Bloques =
Signif.
NO
Aceptar el ensayo y el
clculo de potencia
Repetir el ensayo y
ajustar la Pot. supuesta
Rechazar
el ensayo
Curva Dosis-Respuesta:
Tabla para el registro de respuestas.
P1
P2
P3
Pd
A
B
.
.
.
n
RA
RB
.
.
.
Rn
S1
S2
S3
Sd
Grados de libertad
(g)
Suma de cuadrados
(SC)
Desviacin de Linealidad
d 2
Tratamientos
d 1
SCtrat . = Ti 2 / ni G 2 / N
Error
(d 1)(n 1)
Total
dn 1
SCtotal = Y 2 G 2 / N
Regresin lineal
S xy = X i Ti ( ni xi Ti ) / N
S xx = ni xi2 ( ni xi ) / N
2
Glosario
A-B--N: Rplicas o bloques segn corresponda al diseo estadstico.
b : Pendiente de la regresin lineal en los logaritmos de las dosis.
C: Estadstico empleado para el clculo de los Intervalos de Confianza
CM: Cuadrado medio: cociente entre la Suma de Cuadrados de la fuente de variacin y sus grados de libertad.
d: Nmero de niveles de dosis para cada preparacin.
dh: Nmero total de tratamientos en la valoracin.
F: Estadstico a comparar con el valor tabulado en tablas de distribucin F de Ficher para los grados de libertad
correspondientes al numerador y denominador del estadstico F calculado.
Fcalculado =
G2/N: (yi)2/N
s = s2
S1,,Sn: Respuesta media para cada preparacin de Estndar.
s2: Estimador de la varianza por el Cuadrado Medio del Error en el ANOVA.
t: Estadstico de Student.
T1,,Tn: Respuesta media para cada preparacin muestra.
Ti: Sumatoria de respuestas para la dosis i en curva dosis-respuesta.
V: Coeficiente de la Varianza para el clculo de los lmites de confianza.
x: Logaritmo de la dosis.
y: Respuesta individual o su transformacin.
Amikacina (T)
Solucin muestra
Dosis intermedia
(g de actividad
Unidades por ml)
Concentracin
final por ml
Perodo de
uso
Diluyente final
Agua
1 mg
14 das
Agua
10 g
Anfotericina B (DP)
Dimetilsulfxido
1 mg
Mismo da
B. 10
1,0 g
100 U
Mismo da
B. 1
1,0 U
Bleomicina (DP)
B. 16
2U
14 das
B. 16
0,04 U
Candicidina (T)
Dimetilsulfxido
1 mg
Mismo da
Agua
0,06 g
Capreomicina (T)
Agua
1 mg
7 das
Agua
100 g
Carbenicilina (DP)
B. 1
1 mg
14 das
B. 1
20 g
Cefalotina (DP)
B. 1
1 mg
5 das
B. 1
1,0 g
Cicloserina (T)
Agua
1 mg
30 das
Agua
50 g
Cloranfenicol (T)
1 mg
30 das
Agua
2,5 g
Clortetraciclina (T)
1 mg
4 das
Agua
0,06 g
Cloxacilina (DP)
B. 1
1 mg
7 das
B. 1
5,0 g
1 mg
Mismo da
B. 6
1,0 g
Colistina (DP)
1 mg
14 das
B. 6
1,0 g
Democlociclina (T)
1 mg
4 das
Agua
0,1 g
Dihidroestreptomicina (DP)
B. 3
1 mg
30 das
B. 3
1,0 g
Dihidroestreptomicina (T)
Agua
1 mg
30 das
Agua
30 g
Doxiciclina (T)
1 mg
5 das
Agua
0,1 g
Eritromicina (DP)
1 mg
14 das
B. 3
1,0 g
Estreptomicina (T)
agua
1 mg
30 das
Agua
30 g
Gentamicina (DP)
Solucin muestra
Dosis intermedia
(g de actividad
Unidades por ml)
Concentracin
final por ml
Perodo de
uso
Diluyente final
B. 3
1 mg
30 da
B. 3
0,1 g
Gramicidina (T)
Alcohol al 95 %
1 mg
30 das
Alcohol al 95 %
0,04 g
Kanamicina (T)
Agua
1 mg
30 das
Agua
10,0 g
Metaciclina (T)
Agua
1 mg
7 das
Agua
0,06 g
Nafcilina(DP)
B. 1
1 mg
2 das
B. 1
2,0 g
Natamicina (DP)
Dimetilsulfxido
1 mg
Mismo da
B. 10
5,00 g
Neomicina (DP)
B. 3
1 mg
14 das
B. 3
1,0 g
Neomicina (T)
B. 3
100 g
14 das
B. 3
1,0 g
Netilmicina (DP)
B. 3
1 mg
7 das
B. 3
0,1 g
Nistatina (DP)
Dimetilformamida
1.000 U
Mismo da
B. 6
20 U
Novobiocina (DP)
1 mg
5 das
B. 6
0,5 g
Oxitetraciclina (T)
1 mg
4 das
Agua
0,24 g
Paromomicina (DP)
B. 3
1 mg
21 das
B. 3
1,0 g
Penicilina G (DP)
[B. 1]
1.000 U
4 das
B. 1
1,0 Ug
Polimixina B (DP)
Agua; B. 6
10.000 U
14 das
B. 6
10 Ug
Rolitetraciclina (T)
Agua
1 mg
1 da
Agua
0,24 g
Sisomicina (DP)
B. 3
1 mg
14 das
B. 3
0,1 g
Tetraciclina (T)
1 mg
1 da
Agua
0,24 g
Ticarcilina (DP)
B. 1
1 mg
1 da
B. 1
5,0 g
Tobramicina (T)
Agua
1 mg
14 das
Agua
2,5 g
Solucin madre
Antibitico y tipo de
valoracin [Difusin
en placa (DP)
o Turbidimtrico (T)]
Troleandomicina (T)
Vancomicina (DP)
Solucin muestra
Dosis intermedia
(g de actividad
Unidades por ml)
Concentracin
final por ml
Perodo de
uso
Diluyente final
1 mg
Mismo da
Agua
25 g
Agua
1 mg
7 das
B. 4
10 g
NOTAS B indica solucin reguladora y el nmero siguiente se refiere a las soluciones reguladoras de fosfato de potasio definidas en este captulo.
Para anfotericina B, colistimetato sdico y nistatina, preparar las soluciones de la Sustancia de referencia y la Solucin muestra simultneamente.
Para anfotericina B, diluir adicionalmente la Solucin madre con dimetilsulfxido hasta obtener una serie de soluciones cuya concentracin intermedia sea de
20 g por ml antes de hacer las soluciones muestra. La Solucin muestra debe contener la misma cantidad de dimetilsulfxido que las soluciones de la
Sustancia de referencia.
Para bacitracina cinc, cada una de las diluciones del estndar debe contener la misma cantidad de cido clorhdrico que la Solucin muestra.
Para la valoracin turbidimtrica de neomicina, diluir la Solucin madre de 100 g por ml cuantitativamente con Solucin reguladora N 3 hasta obtener una
solucin que tenga una concentracin equivalente a 25,0 g de neomicina por ml. Para cada Solucin muestra agregar 5,0 ml de cido clorhdrico 0,01 N a
cada matraz aforado, diluir a volumen con Solucin reguladora N3 y mezclar para obtener una serie de soluciones cuya concentracin intermedia sea de
1,0 g de neomicina por ml.
Para nistatina, diluir adicionalmente la Solucin madre con dimetilformamida hasta obtener una concentracin intermedia de 400 Unidades por ml antes de
hacer las Soluciones muestra. Las Soluciones muestra deben contener la misma cantidad de dimetilformamida que las Soluciones estndar. Emplear material
inactnico de vidrio.
Para Polimixina B, preparar la Solucin madre mediante el agregado de 2 ml de agua por cada 5 mg de Sustancia de referencia.
Tabla 2. Organismos de ensayo para antibiticos valorados segn el procedimiento indicado en la Tabla 1.
Antibitico
Organismo de Ensayo
Nmero ATCC *
Amikacina
Staphylococcus auerus
29.737
Anfotericina B
Saccaromyces cerevisiae
9.763
Bacitracina
Micrococcus luteus
10.240
Bleomicina
Mycobacterium smegmatis
Candicidina
Saccaromyces cerevisiae
9.763
Capreomicina
Klebsiella pneumoniae
10.031
Carbenicilina
Pseudomonas aeruginosa
25.619
Cefalotina
Staphylococcus auerus
29.737
Cicloserina
Staphylococcus auerus
29.737
Cloranfenicol
Escherichia coli
10.536
Clortetraciclina
Staphylococcus auerus
29.737
Cloxacilina
Staphylococcus auerus
29.737
Colistimetato sdico
Bordetella bronchiseptica
4.617
Colistina
Bordetella bronchiseptica
4.617
Democlociclina
Staphylococcus auerus
29.737
Dihidroestreptomicina (DP)
Bacillus subtilis
6.633
Dihidroestreptomicina (T)
Klebsiella pneumoniae
10.031
Doxiciclina
Staphylococcus auerus
29.737
Eritromicina
Micrococcus luteus
9.341
Espectinomicina
Escherichia coli
10.536
Estreptomicina (T)
Klebsiella pneumoniae
10.031
Gentamicina
Staphylococcus epidermidis
12.228
Gramicidina
Streptococcus faecium
10.541
Kanamicina
Staphylococcus auerus
29.737
Metaciclina
Staphylococcus auerus
29.737
Nafcilina
Staphylococcus auerus
29.737
Neomicina (DP)
Staphylococcus epidermidis
12.228
Neomicina (T)
Klebsiella pneumoniae
10.031
Netilmicina
Staphylococcus epidermidis
12.228
Nistatina
Saccaromyces cerevisiae
2.601
607
Tabla 2 - continuacin. Organismos de ensayo para antibiticos valorados segn el procedimiento indicado en
la Tabla 1.
Antibitico
Organismo de Ensayo
Nmero ATCC *
Novobiocina
Staphylococcus epidermidis
12.228
Oxitetraciclina
Staphylococcus auerus
29.737
Paromomocina
Staphylococcus epidermidis
12.228
Penicilina G
Staphylococcus auerus
29.737
Polimixina B
Bordetella bronchiseptica
4.617
Rolitetraciclina
Staphylococcus auerus
29.737
Sisomicina
Staphylococcus epidermidis
12.228
Tetraciclina
Staphylococcus auerus
29.737
Tobramicina
Staphylococcus auerus
29.737
Troleandomicina
Klebsiella pneumoniae
10.031
Vancomicina
Bacillus subtilis
6.631
American Type Culture Collection, 12.301 Parklawn drive, Rockville, MD 20852, EEUU.
Pueden emplearse tambin otras cepas de coleccin de caractersticas equivalentes, como ser:
NCTC (National Collection of Type Cultures), Central Publish Health Laboratory, Colindone Av, London NW
95HT, Inglaterra.
NCYC (National Collection of Yeast Cultures), Brewing Industry Research Fundation, Nutfield, Redhill RH 14
HY, Surrey, Inglaterra.
NCIB (National Collection of Industry Bacteria), Torry Research Station, PO Box 31, 135 AbbeyRoad,
Aberdeen AB) 8 DG, Escocia.
Medio
Temp.
Tiempo
(horas)
Dilucin de la susp.
original (25 % T)
Bacillus subtilis
(6.633)
32
32 a 35
5 das
(esporas)
Bordetella bronchiseptica
(4.617)
32 a 35
24 das
Escherichia coli
(10.536)
32 a 35
Klebsiella pneumoniae
36 a 37,5
Organismo de ensayo y
N ATCC
Cantidad
(ml por 100 ml)
Medio
Antibiticos analizados
5
8
1:20
10
0,1
Colistimetato sdico,
Colistina, Polimixina B
24das
1:20
0,7
Cloranfenicol
16 a 24
1:25
0,05
Capreomicina
0,1
Estreptomicina,
Dihidroestreptomicina
Troleandomicina
39
Neomicina
11
1,5
Eritromicina
Dihidroestreptomicina
Vancomicina
(10.031)
Micrococcus luteus
(9.341)
32 a 35
24
Micrococcus luteus
(10.240)
32 a 35
24
0,3
Bacitracina
Mycobacterium
smegmatis
(607)
36
36 a 37,5
48
35
Bleomicina
Pseudomonas aeruginosa
(25.619)
36 a 37,5
24
1:25
10
0,5
Carbenicilina
Saccharomyces cerevisiae
(9.763)
19
29 a 31
48
1:30
13
0,2
Candicidina
19
Anfotericina B
1:40
Staphylococcus epdermidis
(12.228)
Streptococcus faecium
(10.541)
Medio
Temp.
Tiempo
(horas)
19
29 a 31
48
32 a 35
24
32 a 35
36 a 37,5
24
16 a 18
Dilucin de la susp.
Original (25 % T)
1:20
1:14
Medio
Cantidad
(ml por 100 ml)
Antibiticos analizados
19
Nistatina
0,1
Cefalotina, Cloxacilina
0,3
Nafcilina
Penicilina G
0,1
Amikacina,
Clortetraciclina,
Democlociclina,
Doxiciclina,
Metaciclina,
Oxitetraciclina,
Rolitetraciclina, Tetraciclina
0,2
Kanamicina
0,4
Cicloserina
0,15
Tobramicina
11
0,25
Netilmicina
11
0,03
11
0,4
Novobiocina
Gentmicina, Sisomicina
Neomicina
11
Paromomicina
Gramicidina
780. VOLUMETRIA
Titulacin directa Se emplea para la
determinacin de sustancias en solucin, con un
titulante apropiado. El punto final se determina
instrumentalmente o visualmente con un indicador
apropiado.
El titulante se agrega desde una bureta de
capacidad apropiada elegida de acuerdo a l a
concentracin del titulante (normalidad), de modo
tal que el volumen consumido sea entre 30 y 100 %
de su capacidad nominal. La aproximacin al punto
final se hace en forma directa agregando gota a gota
el titulante con la precaucin de que la ltima gota
agregada no sobrepase el punto final.
La cantidad de muestra titulada se calcula a
partir del volumen consumido, la normalidad o
factor de molaridad del titulante y el factor de
equivalencia especificado en la monografa
correspondiente.
Titulacin residual o Titulacin por retorno En algunas titulaciones se agrega un volumen
medido de un titulante, mayor al necesario para
reaccionar con la muestra. El exceso de esta
solucin es titulado posteriormente con un segundo
titulante. La cantidad de muestra titulada se calcula
a partir de la diferencia entre el volumen de
titulante originalmente agregado y el volumen
consumido por el segundo titulante en la titulacin
por retorno, las normalidades o los factores de
molaridad y el factor de equivalencia especificado
en la monografa correspondiente.
Titulacin complejomtrica Algunos
cationes polivalentes se pueden titular directamente
mediante el empleo de reactivos con los cuales
forman complejos o q uelatos. La obtencin de un
resultado satisfactorio en una complejometra
depende del indicador elegido.
Titulacin por xido-reduccin Estas
titulaciones se realizan cuando entre la sustancia
activa del titulante y la muestra se produce una
reaccin por intermedio de un intercambio
electrnico, en la que una de ellas acta como
reductora (cede electrones) mientras que la otra se
comporta como oxidante (adquiere electrones).
Estas titulaciones se clasifican en: mtodos por
oxidacin, cuando la sustancia activa del titulante
tiene tendencia a dar formas reducidas, adquiriendo
electrones (oxidantes), y mtodos por reduccin,
cuando la sustancia activa del titulante puede dar
formas oxidadas cediendo electrones (reductor).
Titulacin en medio no acuoso - Muchas
sustancias adquieren mejores propiedades cidas o
De carcter cido
(para titulacin de bases y sus
sales)
Relativamente neutro
(para titulacin diferencial de
bases)
De carcter bsico
(para titulacin de cidos)
Relativamente neutro
(para titulacin diferencial de
cidos)
Solvente 1
Acetonitrilo
Alcoholes
Cloroformo
Benceno
Tolueno
Clorobenceno
Acetato de etilo
Dioxano
Dimetilformamida
n-butilamina
Piridina
Etilendiamina
Morfolina
Acetona
Acetonitrilo
Metil etil cetona
Metil isobutil cetona
Alcohol ter-butlico
Indicador
Cristal violeta
Rojo de quinaldina
p-Naftolbencena
Alfazurina 2-G
Verde de malaquita
Rojo de metilo
Naranja de metilo
p-Naftolbencena
Azul de timol
Timolftalena
Azo violeta
o-Nitroanilina
p-Hidroxiazobenceno
Azo violeta
Azul de bromotimol
p-Hidroxiazobenceno
Azul de timol
Electrodos
Vidrio/Calomel
Vidrio/Plata/Cloruro de plata
Mercurio/Acetato mercrico
Vidrio/Calomel
Calomel/Plata/Cloruro de
plata
Antimonio/Calomel
Antimonio/Vidrio
Antimonio/Antimonio2
Platino/Calomel
Vidrio/Calomel
Antimonio/Calomel
Vidrio/Calomel
Vidrio/Platino
1
Los solventes relativamente neutros de baja constante dielctrica como benceno, tolueno, cloroformo o dioxano pueden emplearse con cualquier solvente cido o bsico para aumentar la sensibilidad
del punto final.
2
En la solucin titulante.
Electrodo indicador
Ecuacin 1
Electrodo de referencia
cido-base
Vidrio
E = k + 0,0591 pH
Precipitimetra
(plata)
Plata
E = E + 0,0591 log Ag +
Complejometra
Mercurio-mercurio (II)
E = E + 0,0296 (log k pM )
xido-reduccin
Platino
Aplicaciones 2
Calomel
Plata/cloruro de plata
Calomel
Titulacin de diversos
metales con EDTA, Mg+2,
Ca+2, Al+3, Bi+3
Plata/Cloruro de plata
Forma apropiada de la ecuacin de Nernst que describe el sistema de electrodos indicado: k = constante del electrodo de vidrio; k = constante derivada del
equilibrio Hg-Hg (II)-EDTA; M = cualquier metal titulable con EDTA; [ox] y [red] de la ecuacin, ox + ne- red.
2
La lista es representativa pero no es completa.
Producto
No estril
No estril
Iniciales de lavado
Final de lavado
Estril
Estril no parenteral
Final de lavado
Estril parenteral
modificaciones en el envase primario como prdida del contenido del envase, deterioro de
su aspecto, adulteraciones de fecha de vencimiento,
lote, partida o rtulos.
de
CAPITULO 2 - PERSONAL
Principio
Consideraciones Generales
Personal Responsable
Capacitacin
Higiene del Personal
CAPITULO 3 LOCALES Y EQUIPAMIENTO
Principio
Locales
Equipamiento
CAPITULO 4 DOCUMENTACIN
Principio
Consideraciones Generales
Documentos Necesarios
Formula Maestra de Elaboracin
Instrucciones de Fabricacin
Instrucciones de Acondicionamiento
Registro de Lote
Registros de Acondicionamiento de Lote
Procedimientos y Registros
Operaciones de Acondicionamiento
Productos Terminados
Materiales Rechazados, Recuperados
Devueltos
CAPITULO 5 PRODUCCIN
Principio
Consideraciones Generales
Prevencin de la Contaminacin Cruzada en
la Produccin
Validacin
Materiales de Partida
Operaciones de Fabricacin Productos
Intermedios y a Granel
Materiales de Acondicionamiento
ANEXO
1
ELABORACIN
MEDICAMENTOS ESTRILES
DE
PRCTICAS DE
PREPARACIONES
ANEXO
4
APLICACIN
DE
LA
METODOLOGA DE ANLISIS DE PELIGROS
Y PUNTOS CRTICOS DE CONTROL EN LA
PRODUCCIN DE MEDICAMENTOS
ANEXO 5 - RECOMENDACIONES PARA LA
REALIZACIN
DE
ESTUDIOS
DE
BIODISPONIBILIDAD BIOEQUIVALENCIA.
ETAPA ANALTICA
ANEXO 7 - BUENAS
FABRICACIN
DE
FITOTERPICOS
12. VALIDACIN
PRCTICAS DE
PRODUCTOS
b)
c)
e)
f)
g)
h)
i)
j)
Control de calidad
1.3. El Control de Calidad constituye la parte de
las Buenas Prcticas de Fabricacin relacionada con
el muestreo, especificaciones y ensayos, y con, la
organizacin, documentacin y procedimientos de
liberacin que aseguran que los anlisis necesarios y
pertinentes son realmente llevados a cabo y que los
materiales no se liberen para su uso, ni los
productos se liberen para la venta o la distribucin,
hasta que su calidad sea juzgada como satisfactoria.
Los requisitos bsicos del Control de Calidad
son:
a) Que se disponga de instalaciones
adecuadas,
personal
capacitado
y
procedimientos
aprobados
para
el
muestreo, inspeccin y control de materia
prima, materiales de acondicionamiento,
productos intermedios, a granel y
terminados y, donde corresponda, para el
monitoreo de las condiciones ambientales
en lo que al cumplimiento de las BPF se
refiere.
b) Que las materias primas, materiales de
acondicionamiento, productos intermedios,
a granel y terminados sean muestreados por
personal y mtodos aprobados por Control
de Calidad;
c) Que los mtodos analticos estn validados;
d) Que se lleven registros, en forma manual
y/o a travs de otros medios, que
demuestren que realmente se han llevado a
cabo los procedimientos requeridos de
muestreo, inspeccin y control. Cualquier
desviacin significativa debe registrarse e
investigarse completamente.
e) Que los productos terminados contengan
ingredientes activos que cumplan con la
composicin cualitativa y cuantitativa de la
Autorizacin de Comercializacin, que
sean de la pureza requerida, se encuentren
en el envase correspondiente y estn
correctamente rotulados;
f)
f)
registros de elaboracin
comercializacin.
autorizacin
de
d)
e)
f)
INSTRUCCIONES DE ACONDICIONAMIENTO
4.16.
Debe haber Instrucciones de
Acondicionamiento autorizadas por la Autoridad
Sanitaria para cada producto, tamao y tipo de
envase. Generalmente, deben incluir, o tener una
referencia a lo siguiente:
a)
b)
c)
d)
e)
f)
c)
g)
h)
REGISTRO DE LOTE
e)
f)
g)
h)
i)
4.22.
Debe disponerse de procedimientos
escritos de muestreo que incluyan el personal
autorizado para tomar muestras, los mtodos y el
equipamiento que debe utilizarse, las cantidades que
deben tomarse y cualquier precaucin que deba
tenerse en cuenta para evitar la contaminacin del
material o cualquier deterioro en su calidad (ver
Captulo 6, punto 13).
ANLISIS
4.23.
Debe disponerse de procedimientos
escritos para los ensayos a aplicar en el anlisis de
los materiales y productos en las diferentes etapas
de elaboracin, que describan los mtodos y
equipamientos a utilizarse. Deben registrarse las
pruebas realizadas (ver Captulo 6, punto 17).
OTROS
4.24.
Debe disponerse de procedimientos
escritos de aprobacin/liberacin y rechazo de
materiales y productos y, en particular, de la
liberacin para la venta del producto terminado por
parte de la(s) persona(s) autorizada(s) designada(s)
para tal fin.
4.25.
Se deben mantener registros de la
distribucin de cada lote de un producto a fin de
facilitar el retiro del lote del mercado, de ser
necesario (ver Captulo 8).
4.26.
Debe disponerse de procedimientos
escritos y registros asociados de las actividades
realizadas o de las conclusiones alcanzadas, cuando
corresponda, para:
a) Validacin;
b) Ensamblaje
y
calibracin
del
equipamiento;
c) Mantenimiento, limpieza y sanitizacin;
d) Cuestiones relacionadas con el personal
incluyendo
la
capacitacin,
la
vestimenta, la higiene;
e) Control de las condiciones ambientales;
f) Control de plagas;
g) Reclamos;
h) Retiros del mercado;
i) Devoluciones.
4.27. Debe disponerse de instrucciones claras de
funcionamiento del equipo principal de fabricacin
y de control.
4.28. Los equipos ms importantes o crticos,
deben tener un libro para el registro, segn
corresponda, de validaciones, calibraciones y
operaciones de mantenimiento, de limpieza o
reparacin, incluyendo las fechas y la identidad de
las personas que desarrollaron estas operaciones.
4.29. Los libros de registro tambin deben
asentar, en orden cronolgico, el uso de
equipamiento importante o crtico y las reas donde
los productos se hayan procesado.
CAPTULO 5
PRODUCCIN
PRINCIPIO - Las operaciones de produccin
deben seguir procedimientos claramente definidos;
deben cumplir con los principios de las Buenas
Prcticas de Fabricacin a los efectos de obtener
productos de la calidad requerida y ser concordantes
con las habilitaciones de elaboracin y
autorizaciones de comercializacin.
Consideraciones generales
5.8. Deben
realizarse comprobaciones de
rendimiento y balance de cantidades en la medida
necesaria para garantizar que no existen
discrepancias que excedan los lmites aceptables.
a) Produccin
en
reas
separadas
(necesaria para productos como
penicilinas, vacunas o preparaciones de
microorganismos viables y algunos
otros productos biolgicos), o en
campaa (separacin en tiempo) seguida
de una limpieza adecuada;
b) Existencia de esclusas y sistemas de
extraccin de aire adecuados;
c) Minimizando
el
riesgo
de
contaminacin
causada
por
la
recirculacin o reingreso de aire no
tratado o tratado insuficientemente;
d) Usando la vestimenta de proteccin
dentro de las reas donde se procesan
productos con especial riesgo de
contaminacin cruzada;
e) Utilizando procedimientos de limpieza y
descontaminacin
de
conocida
efectividad, ya que la limpieza
deficiente del equipamiento constituye
una fuente comn de contaminacin
cruzada;
f) Empleando sistemas cerrados de
produccin;
g) Realizando pruebas para detectar
residuos y utilizando rtulos que
indiquen el estado de limpieza del
equipamiento.
Validacin
5.21. Los estudios de validacin deben reforzar
las Buenas Prcticas de Fabricacin y se deben
realizar de acuerdo con procedimientos definidos.
Deben registrarse sus resultados y conclusiones.
5.22. Cuando se adopte una nueva frmula o
mtodo de elaboracin, se deben tomar medidas
para demostrar su aptitud para la elaboracin de
rutina. Se debe mostrar que el proceso definido,
empleando los materiales y el equipamiento
especificados, origina un producto de la calidad
requerida de manera consistente.
5.23. Se deben validar las modificaciones
significativas en el proceso de produccin,
Materiales de partida
5.25. La adquisicin de materiales de partida
constituye una operacin importante en la que debe
participar el personal que tenga conocimiento
particular y profundo de los proveedores.
5.26. Las materiales de partida slo deben
adquirirse a proveedores aprobados mencionados en
la especificacin correspondiente y, cuando sea
posible, directamente del productor. Se recomienda
que se converse con el proveedor sobre las
especificaciones establecidas por el elaborador para
el material de partida. Es beneficioso que todos los
aspectos de la produccin y control, del material de
partida en cuestin, incluyendo manipuleo, rotulado
y envasado, como as tambin, los procedimientos
de reclamo y rechazo, sean discutidos con el
fabricante y el proveedor de los mismos.
5.27. En cada entrega, se deben comprobar la
integridad de los envases y sus cierres, como as
tambin la correspondencia entre el remito de
entrega y los rtulos del proveedor.
de
PARTE II
BUENAS PRCTICAS DE FABRICACIN
DE INGREDIENTES
FARMACUTICOS ACTIVOS
1 INTRODUCCIN
Objetivo
Esta normativa define los lineamientos
generales para la aplicacin de Buenas Prcticas de
Fabricacin (BPF) de ingredientes farmacuticos
activos (IFAs), bajo un sistema apropiado de
manejo de la calidad. Se intenta asegurar que los
IFAs satisfagan los requerimientos de calidad y
pureza que deben poseer.
Fabricacin, incluye todas las operaciones de
recepcin de materiales, produccin, envasado, reenvasado, rotulado, re-rotulado, control de calidad,
liberacin, almacenamiento y distribucin de IFAs
y los controles relacionados en cada etapa.
La presente normativa, no cubre aspectos de
seguridad para el personal comprometido en la
fabricacin ni aspectos de proteccin para el medio
ambiente. Estos controles son responsabilidad
inherente al elaborador y estn regidos por
normativas especficas.
1.1 Aplicacin Regulatoria
Dentro de la comunidad mundial, los materiales
pueden variar en su clasificacin legal como IFA.
Cuando un material es clasificado como un IFA en
la regin o pas en el cual es elaborado y/o utilizado
en un medicamento, debe fabricarse acorde a es ta
normativa.
1.2 Alcances
Esta normativa se aplica a la fabricacin de
IFAs para uso en medicina humana (productos
medicinales de uso humano) y abarca la fabricacin
de IFAs estriles slo hasta la etapa
inmediatamente anterior a su transformacin en un
producto estril; si bien los procesos de
esterilizacin y procesamiento asptico no estn
cubiertos en la gua, los mismos deben ser
realizados de acuerdo con los principios de BPF
que fija la legislacin para la fabricacin de
productos estriles. Se excluye la sangre total y el
plasma dado que la gua para establecimientos que
manipulan sangre fija requerimientos detallados
sobre recoleccin y controles aplicados a la sangre.
Sin embargo incluye IFAs que son producidos
usando sangre y plasma como materia prima.
Finalmente, no aplica a p roductos medicinales a
Partida IFA.
Aislacin y
purificacin
Procesamiento fsico y
envasado
Introduccin del
material de
partida del IFA
en el proceso
Aislacin y
purificacin
Procesamiento fsico y
envasado
Recoleccin de la
planta
Introduccin del
material de
Corte y extraccin inicial
partida del IFA
en el proceso
Aislacin y
purificacin
Procesamiento fsico y
envasado
Extractos
herbarios
Recoleccin de la
planta
Extraccin
posterior
Procesamiento fsico y
envasado
IFAs
provenientes
de hierbas
molidas o en
polvo
Recoleccin de
plantas y/o
cultivo y cosecha
Corte y molienda
Biotecnologa
Fermentacin/
cultivo de
clulas
Establecimiento
de banco maestro
de clulas y de
un banco de
trabajo de clulas
Aislacin y
purificacin
Procesamiento fsico y
envasado
Fermentacin
Clsica para
producir un
IFA
Establecimiento
de un banco de
clulas
Introduccin de
Mantenimiento del banco
las clulas en la
de clulas
fermentacin
Aislacin y
purificacin
Procesamiento fsico y
envasado
Elaboracin
qumica
Produccin del
material de
partida del IFA
IFA de origen
animal
Recoleccin de
rganos, fluidos
y tejidos
IFA de origen
vegetal
Procesamiento fsico y
envasado
2. GERENCIA DE CALIDAD
Principio
2.1 - La calidad debe ser responsabilidad de
todas las personas involucradas en la fabricacin.
2.2 Cada elaborador debe establecer,
documentar e implementar un sistema efectivo para
procurar calidad que involucre la participacin
activa de la alta gerencia y el personal de
fabricacinapropiado.
2.3 - El sistema de manejo de la calidad debe
abarcar
la
estructura
de
organizacin,
procedimientos, procesos y recursos, as como
actividades
necesarias
para
asegurar
confidencialidad, para que los IFAs satisfagan las
especificaciones propuestas de calidad y pureza.
Todas las actividades relacionadas con la calidad
deben estar definidas y documentadas.
2.4 - Debe existir una/s unidad/es de calidad
independiente de produccin y que satisfaga las
responsabilidades de aseguramiento de la calidad
(AC) as como las responsabilidades de control de
calidad (CC). Pueden presentarse como unidades
separadas de AC y CC o como una nica unidad,
dependiendo del tamao y estructura de la
organizacin.
2.5 Deben especificarse las personas
autorizadas para liberar intermediarios e IFAs.
2.6 - Todas las actividades relacionadas con
calidad deben registrarse en el momento en que se
realizan.
2.7 Cualquier desviacin de los
procedimientos establecidos debe documentarse y
explicarse. Las desviaciones crticas deben ser
investigadas y la investigacin y sus conclusiones
deben documentarse.
2.8 - Ningn material debe liberarse o utilizarse
antes de haberse completado satisfactoriamente la
evaluacin por las unidades de calidad, a menos que
en el lugar existan sistemas apropiados que
permitan su uso (por ejemplo, liberar en cuarentena
como se describe en la seccin Procedimientos de
distribucin, o el uso de materiales de partida o
intermediarios pendientes de evaluacin completa).
2.9 Deben existir procedimientos para
notificar oportunamente a la alta gerencia sobre las
inspecciones regulatorias, serias deficiencias de
BPF, productos con defectos y acciones
relacionadas (por ejemplo, quejas relacionadas con
calidad, retiros del mercado, acciones regulatorias,
etc.).
Responsabilidades de Unidad(es) de Calidad
2.10 La(s) unidad(es) de calidad debe
involucrarse en todos los temas relacionados con la
calidad.
2.11 - La(s) unidad(es) de calidad debe revisar
y aprobar todos los documentos relacionados con la
calidad.
2.12 Las responsabilidades de mayor
importancia de la(s) unidad(es) de calidad no deben
delegarse. Estas responsabilidades deben estar
descriptas por escrito y deben incluir, pero no
necesariamente estar limitadas a:
a) Liberar o rechazar todos los IFAs.
Liberacin o rechazo de intermediarios
para uso fuera de la compaa
elaboradora;
b) Establecer un sistema de liberacin o
rechazo de materiales de partida,
intermediarios
y
materiales
de
acondicionamiento y rotulado;
c) Revisar en forma completa los registros
del lote de produccin y de los
controles del laboratorio de las etapas
crticas del proceso antes de la
liberacin del IFA para su distribucin;
d) Asegurar que las desviaciones crticas
sean investigadas y resueltas;
e) 5 Aprobar todas las especificaciones e
instrucciones de la Orden Maestra de
Produccin;
f) Aprobar todos los procedimientos que
impactan la calidad de intermediarios o
IFAs;
g) Asegurar que se realicen auditoras
internas (autoinspecciones);
h) Aprobar
intermediarios
o I FAs
elaborados por contrato;
i) Aprobar cambios que potencialmente
impacten
en
la
calidad
de
intermediarios o IFAs;
j) Revisar y aprobar protocolos de
validacin e informes;
k) Asegurar que las quejas relacionadas
con la calidad sean investigadas y
resueltas;
l) Asegurar que existen sistemas efectivos
para el mantenimiento y calibracin del
equipamiento crtico;
Consultores
3.9 - Los consultores asesores de fabricacin y
control de intermediarios e IFAs deben tener
suficiente educacin, entrenamiento y experiencia o
una combinacin de todo ello, para asesorar en la
materia para la cual son contratados.
3.10 - Deben llevarse registros indicando
nombre, direccin y calificaciones del consultor, y
tipo de servicio provisto por ste.
4.
EDIFICIOS
E
INSTALACIONES
(SERVICIOS DE SOPORTE)
Diseo y Construccin
4.1 - Los edificios e instalaciones usados en la
fabricacin de intermediarios e I FAs deben
de
materiales
Operaciones de produccin;
g) Acondicionamiento y etiquetado;
h) Operaciones de laboratorio.
4.6 - Debe proveerse al personal de los
sanitarios adecuados, provistos de agua fra y
caliente, as como de jabn o detergente apropiados,
secadores de aire o servicio de toallas individuales.
Deben estar separados de reas de elaboracin, pero
con fcil acceso desde las mismas. Cuando sea
necesario debe proveerse de adecuadas reas de
duchas o cambio de ropa.
4.7 - Las reas de laboratorio deben estar
separadas del rea de produccin. Aquellas usadas
f)
6. DOCUMENTACIN Y REGISTRO
Sistema de Documentacin y Especificaciones
6.1 - Todos los documentos relacionados con la
elaboracin de intermediarios o IFAs deben
prepararse, revisarse, aprobarse y distribuirse de
acuerdo a procedimientos escritos. Tales
documentos pueden estar en papel o en forma
electrnica.
6.2 - La emisin, revisin, reemplazo y retiro
de todos los documentos debe ser controlada con
mantenimiento de revisiones histricas.
6.3- Debe ser establecido un procedimiento
para mantener disponibles todos los involucrados en
las operaciones (por ejemplo, informes de
desarrollos histricos, de scale-up, de transferencia
tcnica y de procesos de validacin; registros de
entrenamiento, de produccin, de control y de
distribucin). Los perodos de retencin de estos
documentos deben especificarse.
6.4 - Todos los registros de control, de
produccin y distribucin deben ser retenidos por lo
menos durante un ao posterior a la fecha de
vencimiento del lote. En el caso de IFAs con fecha
de re-anlisis los registros deben mantenerse por lo
menos durante tres aos posteriores a l a
distribucin completa del lote.
6.5 - Las entradas en los registros deben ser
realizadas en forma indeleble en los espacios
provistos para tal fin, inmediatamente despus de
realizada la actividad e i dentificando a l a persona
que la realiza. Las correcciones a dichas entradas
deben poseer fecha y firma y permitir la lectura del
original.
6.6 - Durante el perodo de retencin los
registros originales o sus copias deben estar
disponibles en el establecimiento donde se
desarrollan las actividades descriptas. Los registros
pueden trasladarse a otro sitio por medios
electrnicos u otros.
6.7 Las especificaciones, instrucciones,
procedimientos y registros pueden retenerse como
originales o copias certificadas tales como
fotocopias, microfilms, microfichas u otros. Cuando
se utilizan tcnicas de reduccin tales como
microfilm o registro electrnico, debe disponerse
del equipamiento adecuado para obtener una copia
segura.
6.8 Se deben establecer y documentar
especificaciones para materiales d e partida,
intermediarios cuando fuera necesario, IFAs,
l)
de
Materiales
de
Y
DE
ROTULADO
IFAS
E
Generalidades
9.1 - Debern escribirse procedimientos que
describan la recepcin, identificacin, cuarentena,
muestreo, evaluacin, liberacin y manipuleo de los
materiales de envasado y rotulado.
9.2 - Dichos materiales debern cumplir con
especificaciones establecidas. Los materiales que no
las cumplan debern ser rechazados a f in de evitar
su utilizacin accidental.
9.3 - Debern llevarse registros del movimiento
de dichos materiales sean estos aceptados o
rechazados, especificando su recepcin y
evaluacin.
Materiales de Envasado
9.4 - El envase debe proveer proteccin
adecuada del IFA o intermediario contra deterioro
o contaminaciones que pudieran darse durante su
transporte o almacenamiento.
9.5 - El envase debe ser limpio y, cuando el
producto lo requiera, sanitizado en forma adecuada
para el uso pretendido. No debe ser reactivo, aditivo
o absortivo como para alterar la calidad del
producto dentro de los lmites especificados.
9.6 - Si el envase es reutilizable, deber ser
limpiado segn procedimientos escritos.
Emisin y Control de Rtulos
9.7 - El acceso a las reas de rotulado estar
restringido a personal autorizado.
9.8 - Deben usarse procedimientos para
conciliar las cantidades de materiales emitidos,
utilizados y devueltos. Toda discrepancia deber ser
investigada, y dicha investigacin deber ser
aprobada por el Departamento de Calidad.
9.9 - Todo exceso de materiales ya impresos con
un nmero de lote, deber ser destruido. Los
materiales destinados a devolucin debern
almacenarse apropiadamente de forma de evitar
confusiones.
Procedimientos de Almacenamiento
10.1 - Las instalaciones deben ser adecuadas
para el depsito de todos los materiales en
condiciones apropiadas (por ejemplo, temperatura y
humedad controladas cuando esto sea necesario).
Deben llevarse registros de dichas condiciones
cuando estas sean crticas para el mantenimiento de
las caractersticas del producto.
10.2 - A menos que exista un sistema alternativo
para prevenir el uso no autorizado o accidental de
los productos correspondientes a cuarentena,
rechazo, devolucin o recuperacin, debern
asignarse reas separadas de almacenamiento
temporario para dichos productos hasta que se tome
la decisin sobre el destino que se les dar.
Procedimientos de Distribucin
10.3 - Los I FAs e intermediarios slo podrn
ser liberados para su distribucin a terceros cuando
el Departamento de Calidad los haya liberado. Los
IFAs e intermediarios en cuarentena podrn ser
transferidos a h acia otros Departamentos bajo el
control de la empresa cuando el Departamento de
Calidad as lo autorice, y si los controles y
documentacin estn en regla.
10.4 - Los IFAs e intermediarios deben
transportarse de forma de no afectar su calidad.
10.5 - Las condiciones especiales de transporte
o almacenamiento deben constar en el rtulo de los
IFAs e intermediarios que as lo requieran.
10.6 - El elaborador debe asegurar que el
contratista de transporte para los IFAs e
intermediarios conozca y cumpla las condiciones de
almacenamiento y transporte adecuadas.
10.7 - Debe existir un sistema de registros de
distribucin que permita la recuperacin de cada
lote de IFAs y/o intermediarios.
Debe
disearse
un P
rograma
vencimiento.
11.29 - Pueden obtenerse datos preliminares de
la fecha de re-evaluacin o vencimiento a partir de
lotes a escala piloto si: (1).
El mtodo y
procedimiento de fabricacin de l lote piloto
simulan el proceso final a u tilizarse en la
fabricacin a escala comercial; y (2). La calidad
del producto obtenido es representativa de aquel
que se obtendr a escala comercial.
11.30 - Deber retenerse una muestra
representativa de los lotes, que permita desarrollar
la re-evaluacin cuando corresponda.
Muestras de Retencin o Reserva
11.31 - La finalidad de la toma de Muestras de
Retencin es permitir potenciales evaluaciones
futuras de la calidad de los lotes de IFAs o
intermediarios.
No se utilizarn para futuras
evaluaciones de estabilidad.
11.32 - Las Muestras de Retencin se
mantendrn, debidamente identificadas, hasta un
ao posterior a la fecha de vencimiento establecida
por el elaborador, o hasta tres aos posteriores a la
fecha de distribucin (entre ambos, se tomar el
plazo ms largo). Para IFAs con fecha de reevaluacin, se tomarn Muestras de Retencin
similares, las cuales se guardarn por tres aos tras
la completa distribucin por parte del elaborador.
11.33 - Las Muestras de Retencin deben
almacenarse con el mismo sistema de envasado con
el que se almacenen los IFAs a comercializar, o de
alguna forma que lo proteja an mejor. La cantidad
de producto tomado como Muestras de Retencin
deber ser suficiente como para permitir realizar al
menos dos anlisis completos segn se describan en
la monografa de la Farmacopea, o, de no hallarse
descriptos, dos anlisis completos segn las
especificaciones.
12. VALIDACIN
Poltica en Validacin
12.1 - La poltica general de validaciones, su
enfoque, criterios y formas de encarar el tema por la
empresa en relacin con Validacin (incluyendo
validacin
de
procesos
de
produccin,
procedimientos de limpieza, mtodos analticos,
controles
durante
los
procesos,
sistemas
informticos y personal responsable del diseo,
revisin, aprobacin y documentacin de cada etapa
de Validacin), deber estar documentada.
12.2 - Los parmetros crticos debern estar
(Calificacin
del
Diseo):
de
perfiles
RETIRO
DEL
Biotecnolgicos).
PARA
USO
EN
ENSAYOS
Generalidades
19.1 - No todos los controles de las secciones
previas de esta gua son adecuados para la
fabricacin de un nuevo IFA que se usar en
investigacin durante su desarrollo.
19.2 - Los controles usados en la fabricacin de
IFAs para usar en ensayos clnicos debern ser
consistentes con la etapa de desarrollo del producto
droga que incorporar al IFA. Los procedimientos
de proceso y testeo debern ser flexibles para
facilitar cambios a medida que aumenta el
conocimiento del proceso y del testeo clnico de un
producto droga progresando desde las etapas preclnicas hasta las etapas clnicas. C uando el
desarrollo de la droga alcanza la etapa en la que el
IFA es producido para usarlo en productos drogas
destinado a ensayos clnicos, los fabricantes
debern asegurar que los IFAs son fabricados en
instalaciones aptas, utilizando procedimientos
apropiados de produccin y de control para
asegurar la calidad del IFA.
Calidad
19.3 - Se debern aplicar conceptos apropiados
de BPF en la fabricacin de IFAs para uso en
ensayos clnicos con un mecanismo adecuado de
aprobacin para cada lote.
19.4 - Una unidad de calidad independiente de
la produccin deber establecerse para la
aprobacin o rechazo de cada lote de IFAs para usar
observaciones cientficas.
19.14 - Los rendimientos esperados pueden ser
ms variables y menos definidos que los
rendimientos esperados utilizados en los procesos
comerciales. No se prevn investigaciones sobre las
variaciones de rendimiento.
Validacin
19.15 - Un proceso de validacin para la
produccin de IFAs a ser utilizados en ensayos
clnicos es normalmente inapropiado cuando se
produce un solo lote de IFAs o cuando el cambio
del proceso d urante el desarrollo del IFAs hace
difcil o inexacta la replicacin de un lote. La
combinacin de controles, calibracin, y donde sea
apropiado, un equipo calificado, aseguran la calidad
del IFAs durante esta fase del desarrollo
19.16 - Los procesos de validacin debern ser
conducidos de acuerdo con la Seccin 12 c omo
cuando los lotes son producidos para uso comercial,
aun cuando tales lotes sean producidos en pequea
escala o escala piloto.
Cambios
19.17 - Son previsibles los cambios durante el
desarrollo, en la medida en que se gana
conocimiento y la escala de produccin aumenta.
Cada cambio en la produccin, especificaciones o
procedimientos de ensayo deber ser registrado
adecuadamente.
Controles de Laboratorio
19.18 - En tanto los mtodos analticos
destinados a evaluar un lote de IFA para ensayos
clnicos no puedan aun ser validados, debern ser
cientficamente aptos.
19.19 - Debe establecerse un sistema para
guardar muestras de retencin de todos los lotes.
Este sistema debe asegurar que una cantidad
suficiente de cada muestra de retencin queda
durante un perodo de tiempo apropiado despus de
la aprobacin, terminacin o discontinuacin de un
producto.
19.20 - La fecha de vencimiento y re-evaluacin
tal como se define en la seccin Fechas de reevaluacin y vencimiento es pertinente para los
IFAs ya existentes utilizados en ensayos clnicos.
Para IFAs nuevos, la Seccin Fechas de reevaluacin y vencimiento normalmente no se
aplicar en las etapas iniciales de los ensayos
clnicos.
Documentacin
elaborador original
Especificacin - Una lista de pruebas referidas
a los procedimientos analticos, y de criterios
adecuados de aceptacin que son lmites numricos,
rangos, u otro criterio para el test que se describe.
Establece un conjunto de criterios con los cuales el
material debe cumplir para ser considerado
aceptable para su uso propuesto.
Conforme a la especificacin significa que el
material, al ser t esteado de acuerdo con los
procedimientos analticos listados, concuerda con
los criterios establecidos de aceptacin.
Estndar de referencia primario - Sustancia
que ha sido probada como material autntico por un
extenso juego de ensayos analticos, siendo en
consecuencia de alta pureza.
Este Estndar puede ser: 1) obtenido de una
fuente oficialmente reconocida, 2) preparado por
sntesis independiente, 3) obtenido de material de
produccin de alta calidad, existente, o 4) preparado
por purificacin adicional de material de
produccin existente.
Estndar de referencia secundario - Sustancia
de calidad y pureza establecidas, demostradas por
comparacin de un Estndar de referencia primario,
utilizada como Estndar de referencia para anlisis
de laboratorio de rutina.
Fecha de vencimiento - La fecha colocada en el
contenedor/etiqueta de un IFA, designando el
tiempo durante el cual el IFAs es supuesto que el
producto
permanecer
dentro
de
las
especificaciones de su vida til, si es almacenado en
las condiciones requeridas, y despus de la cual no
debera ser usada.
Fecha de re-evaluacin - La fecha en la que el
material debera ser reexaminado para asegurar que
permanece apto para su uso.
Firma (firmado) - Ver definicin posterior de
firmado
Firmado - El registro del individuo que llev a
cabo una accin particular o revisin. Este registro
puede ser con iniciales, firma completa a mano,
sello personal, o firma electrnica asegurada y
autenticada.
Garanta de calidad (QA) - La suma total de las
disposiciones organizadas hechas con el objeto de
asegurar que todos los IFAs son de la calidad
requerida para el uso que estn destinados y que los
sistemas de calidad son constantes y mantenidos.
Impureza - Todo componente presente en el
ANEXO 1
ELABORACIN DE MEDICAMENTOS
ESTRILES
PRINCIPIO - La elaboracin de medicamentos
estriles est sujeta a requisitos especiales para
minimizar los riesgos de contaminacin microbiana,
de partculas y de piretgenos. Depende en gran
parte de la habilidad, formacin y actitud del
personal implicado. La garanta de calidad reviste
una importancia especial y esta elaboracin debe
seguir estrictamente mtodos de preparacin y
procedimientos
establecidos
y
validados
cuidadosamente. La esterilidad u otros aspectos de
la calidad no debe depender nicamente de un
proceso final o de los ensayos sobre producto
terminado.
NOTA: esta normativa no establece mtodos
detallados para la determinacin de limpieza
microbiolgica y de partculas del aire, superficies,
entre otras. Con esta finalidad deben consultarse
otros documentos como ser las normas ISO.
Consideraciones generales
1 - La elaboracin de medicamentos estriles
debe realizarse en reas limpias en las que se
acceda a travs de esclusas independientes para el
personal y/o para equipos y materiales. Las zonas
limpias debern mantenerse con un grado adecuado
de limpieza y estarn dotadas de aire que haya
pasado a travs de filtros de eficacia apropiada.
2 - Las diversas operaciones de preparacin de
los materiales y accesorios, preparacin del
producto y llenado debern realizarse en zonas
separadas dentro de la zona limpia. Las operaciones
de fabricacin se clasifican en dos categoras: en
primer lugar, aquellas en que el producto se
esteriliza al final y, en segundo lugar, aquellas que
se realizan aspticamente en todas o algunas de sus
etapas.
3 - Las reas limpias para la fabricacin de
medicamentos estriles se clasifican segn las
caractersticas requeridas del ambiente.
Cada
operacin de elaboracin exige un adecuado grado
de limpieza del entorno en operacin para
minimizar los riesgos de contaminacin microbiana
o de partculas en el producto o los materiales que
se estn manipulando.
A - fin de cumplir las condiciones en
operacin, estas reas zonas deben disearse de
forma que alcancen ciertos niveles especificados de
limpieza del aire en situacin de en reposo. La
situacin en reposo es aquella en que la
En reposo
0,5 m
3.520
3.520
352.000
3.520.000
5,0 m
20
29
2.900
29.000
En operacin
0,5 m
3.520
352.000
3.520.000
No definido
5,0 m
20
2.900
29.000
No definido
Grado
A
C
D
Grado
A
B
C
D
de
para
la
Esterilizacin
83 - Se deben validar todos los procesos de
esterilizacin. Se debe prestar especial atencin
cuando el mtodo de esterilizacin adoptado no se
encuentra descripto en la edicin vigente de la
Farmacopea Argentina o cuando se utiliza para un
producto que no es una simple solucin acuosa u
oleosa. Siempre que sea posible, la esterilizacin
trmica debe ser el mtodo de eleccin. En todos
los casos el proceso de esterilizacin debe
corresponderse con la habilitacin de elaboracin y
la Autorizacin de Comercializacin.
84 - Antes de que se adopte un proceso de
esterilizacin, deber demostrarse su idoneidad para
el producto y su eficacia para lograr las condiciones
deseadas de esterilizacin en todas las partes de
cada tipo de carga que deba someterse a dicho
proceso, mediante mediciones fsicas e indicadores
ANEXO 2
ELABORACION DE PRODUCTOS
FARMACEUTICOS BIOLGICOS DE USO
HUMANO
ALCANCE
Los mtodos empleados en la elaboracin de
productos farmacuticos biolgicos constituyen un
factor crtico para el diseo de un control
regulatorio apropiado. Por lo tanto, en rasgos
generales, los productos farmacuticos biolgicos
pueden definirse segn su mtodo de elaboracin.
Los productos farmacuticos biolgicos preparados
por los siguientes mtodos de elaboracin sern
comprendidos por el alcance de este anexo1.
1
Material de partida
25 - Se debe definir claramente la fuente, el
origen y la aptitud de los materiales de partida. En
los casos en que los ensayos necesarios llevan un
tiempo prolongado, se puede permitir el
procesamiento de las materias primas antes de
disponer de los resultados de los ensayos. En dichos
casos, la liberacin del producto final debe estar
sujeta a los resultados satisfactorios de los ensayos.
26 - En los casos en que se requiera
esterilizacin de los materiales de partida, la misma
debe ser trmica, en lo posible. De ser necesario,
pueden utilizarse otros mtodos apropiados para la
inactivacin de materiales biolgicos (por ej.
irradiacin).
Sistema de lotes semilla y de banco de clulas
27. La elaboracin de medicamentos de origen
biolgico obtenidos de cultivos microbianos,
cultivos celulares de propagacin en embriones y
animales debe basarse en un sistema de banco
celular madre y banco celular de trabajo, a fin de
evitar la cambios indeseada de las propiedades
bioqumicas, que pueda provenir de los subcultivos
repetidos o generaciones mltiples.
28. El nmero de generaciones (duplicaciones,
pasajes) entre el banco celular y el producto
terminado
debe
corresponderse
con
la
documentacin de registro del producto. El
escalado de los procesos no debe cambiar esta
relacin fundamental.
29. Los lotes semilla y los bancos de clulas
deben ser adecuadamente caracterizados y
analizados para detectar contaminantes. Su aptitud
para el uso se debe demostrar mediante la
consistencia de las caractersticas y la calidad de los
sucesivos lotes del producto. Los lotes semilla y los
bancos de clulas deben ser establecidos,
almacenados y utilizados de forma tal que se
minimicen los riesgos de contaminacin o
alteracin.
30. El establecimiento del banco celular madre y
del banco celular de trabajo debe realizarse en un
entorno adecuadamente controlado para proteger
ambas preparaciones de cualquier tipo de
contaminacin y, de corresponder, al personal que
los manipule. Durante el establecimiento de un
banco celular madre y un banco celular de trabajo
no deben manipular simultneamente en la misma
rea o por las mismas personas, microorganismos
viables o material infeccioso (por ej., virus, lneas
celulares, o cepas celulares).
ANEXO 3
BUENAS PRCTICAS DE FABRICACION DE
PREPARACIONES
RADIOFARMACEUTICAS
1. Alcances
Los presentes lineamientos se encuentran
destinados a complementar aquellos establecidos en
las Buenas Prcticas de Fabricacin aplicables a
medicamentos y medicamentos estriles.
La regulacin aplicable al control de
preparaciones o productos radiofarmacuticos se
encuentra determinada en gran medida, por la
naturaleza de estos productos y los mtodos de
fabricacin.
A los fines de la presente norma, las
preparaciones o productos radiofarmacuticas se
clasifican en:
a) productos radiactivos listos para su uso
b) generadores de radionucledos
c) componentes no radiactivos (kits fros o
juegos de reactivos) utilizados en la preparacin
de compuestos marcados con un componente
radiactivo (generalmente el eludo de un generador
de radionucledos)
d) precursores utilizados en la radiomarcacin
de otras sustancias previo a su administracin (por
ejemplo muestras de pacientes)
2. Generalidades
La fabricacin y manipulacin de medicamentos
radiofarmacuticos constituyen operaciones que
implican riesgos potenciales inherentes a la
naturaleza de estos productos asociados al tipo de
radiacin emitida y a la vida media de los istopos
radiactivos utilizados.
La
elaboracin
de
preparaciones
radiofarmacuticas debe ser realizada de
conformidad con los principios bsicos de Buenas
Prcticas de Fabricacin. En particular la
elaboracin y control de estos medicamentos deben
contemplar las precauciones relacionadas con la
radioproteccin, prevencin de contaminacin
cruzada y diseminacin de contaminantes
radiactivos y la eliminacin de deshechos
radiactivos, establecidas en reglamentaciones
nacionales e internacionales.
Las consideraciones contempladas en el
presente Anexo deben ser entendidas como
suplementarias a los requerimientos generales de
BPF y especficas para estos productos.
Debido
a
que
algunas
preparaciones
radiofarmacuticas son liberadas y administradas al
paciente a poco de su elaboracin, el control de
calidad resulta en ciertos casos retrospectivo. Por lo
expuesto, el cumplimiento estricto de BPF resulta
imprescindible as como tambin una evaluacin
continua de la eficacia del Sistema de Calidad.
3. Personal
3.1 Las actividades de elaboracin e
importacin de productos radiofarmacuticos debe
ser realizada bajo la responsabilidad de un
profesional con formacin acadmica y experiencia
demostrada en radiofarmacia y radioproteccin. El
mismo deber contar con la autorizacin de la
Autoridad Nuclear Competente.
3.2. El personal afectado a las operaciones de
fabricacin y manipulacin de productos
radiactivos debe poseer formacin complementaria
ya sea de post grado o mediante entrenamiento
tcnico, y experiencia apropiada para dichas
funciones. Asimismo deber recibir informacin y
formacin sobre los aspectos relacionados con la
radioproteccin.
3.3. El personal afectado al manipuleo de
productos radiactivos o a tareas que deban
realizarse en reas Limpias o aspticas debe ser
cuidadosamente seleccionado. A tal fin deber
considerarse su capacidad para seguir estrictamente
los principios de BPF y su estado de salud de
manera tal que la integridad de los productos no se
encuentre comprometida.
3.4 La evaluacin del estado de salud deber
realizarse antes del empleo del personal y
peridicamente luego de su ingreso. Ante cualquier
alteracin del mismo el personal deber ser
separado de actividades que impliquen su
exposicin a radiaciones.
3.5. En las reas limpias o aspticas slo deber
estar presente el personal mnimo necesario para la
ejecucin del trabajo.
3.6. Durante la elaboracin de radiofrmacos,
juegos de reactivos o productos estriles, el acceso
a estas reas estar restringido. Los procedimientos
de inspeccin y control debern ser realizados,
dentro de lo posible, fuera de estas reas.
3.7. La movilizacin del personal entre reas
radiactivas y no radiactivas slo podr realizarse si
son respetadas estrictamente normas de seguridad
de radioproteccin.
3.8. Deber establecerse un sistema de
capacitacin continua del personal que contemple
envasado
en
reas
e) utilizacin
elaboracin.
de
sistemas
cerrados
de
primas,
material
de
ANEXO 4
APLICACIN DE LA METODOLOGA DE
ANLISIS DE PELIGROS Y PUNTOS
CRTICOS DE CONTROL EN LA
PRODUCCIN DE MEDICAMENTOS
1. Introduccin
Esta metodologa apunta a prevenir peligros
conocidos y a reducir los riesgos de su ocurrencia
en puntos especficos. Este texto proporciona
lineamientos generales para el uso del sistema
HACCP en el aseguramiento de la calidad de
medicamentos, an cuando detalles de su aplicacin
puedan variar segn las circunstancias. Este anexo
no provee informacin detallada de los peligros
principales.
Los procedimientos (entre los que se incluyen
las BPF), atienden las condiciones de operacin y
proveen las bases para el sistema HACCP. El
HACCP es un mtodo sistemtico para la
identificacin, valoracin y control de peligros que
afecten la seguridad.
Adems el HACCP puede extender este
concepto, incluyendo un anlisis de las variables
crticas de la calidad al igual que una valoracin de
los peligros que afectan la seguridad de los
trabajadores y peligros de contaminacin del medio
ambiente directamente relacionado a los procesos
concernientes (en particular en sistemas abiertos).
Las BPF para medicamentos requieren, tanto la
validacin de los procesos crticos, como de los
cambios en los procesos de manufactura que pueden
afectar la calidad del producto final. La experiencia
muestra que muchos procesos de manufactura
contienen etapas que son crticas desde el punto de
vista de la variacin en la calidad final.
El HACCP es una herramienta para valorar
peligros y establecer sistemas de control centrados
en la prevencin, en lugar de confiar en acciones
correctivas basadas en el control final del producto.
Todo sistema HACCP es capaz de adaptarse a
cambios, tales como avances en diseo de equipos y
procesos productivos u otros desarrollos
tecnolgicos.
2. Principios
El sistema HACCP se basa en siete principios.
Para la aplicacin de estos principios, se
recomienda desarrollarlos en 14 etapas, las cuales
son propuestas en la seccin 5.
Algunas etapas estn relacionadas con
principios especficos, mientras que otras sirven
como una introduccin a los conceptos.
materiales e ingredientes
2)
caractersticas
fsicas
composicin del producto
3)
procedimientos productivos
4)
instalaciones
5)
equipamiento
6)
acondicionamiento
7)
sanitizacin e higiene
8)
personal
9)
riesgos de explosin
10) confusin
5.9 - Determinar los Puntos Crticos de Control.
(Principio 2). Se deben determinar los Puntos de
Control que sean Crticos para cada etapa, proceso o
segmento de la lnea productiva considerada. Un
PCC en el sistema HACCP puede ser mas
fcilmente determinado mediante el uso de un rbol
de decisiones, que facilita un abordaje lgico. El
modo que un rbol de decisiones es usado podra
depender de la operacin involucrada, por ejemplo,
produccin, acondicionamiento, almacenamiento o
distribucin. Se debe dar entrenamiento en el uso
del rbol de decisiones.
Si un peligro fue
identificado en una etapa donde el control es
necesario para la seguridad, y la medida de control
no existe en esta etapa, o en alguna otra, el producto
o el proceso debe ser modificado en esta etapa, o en
una etapa anterior o posterior, incluyendo una
medida de control.
5.10 - Establecer los parmetros y lmites
crticos para cada PCC. (Principio 3). Los lmites
crticos deben ser especificados y verificados para
cada punto crtico de control. Ms de un lmite
crtico puede, algunas veces, ser establecido para
una etapa en particular. Con frecuencia el criterio
utilizado incluye mediciones de temperatura,
tiempo, nivel de humedad, pH, y parmetros
Anlisis de Riesgos;
Determinacin de los PCC;
Plan HACCP;
Determinacin de los lmites
crticos;
b) Se debe registrar, como mnimo, las
siguientes actividades:
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
procedimientos y listados de
verificacin;
desviaciones;
acciones correctivas asociadas;
modificaciones
al
sistema
HACCP;
PCCs
la
son
ANEXO 5
RECOMENDACIONES PARA LA
REALIZACIN DE ESTUDIOS DE
BIODISPONIBILIDAD
BIOEQUIVALENCIA
ETAPA ANALTICA
Introduccin
La calidad y la confiabilidad de los resultados
analticos de las muestras obtenidas en los estudios
farmacocinticos de bioequivalencia constituye uno
de los factores ms crticos en el desarrollo de los
mismos ya que requiere de la determinacin de
bajas concentraciones de drogas y/ o metabolitos en
matrices complejas.
Los laboratorios que participen en estos estudios
deberan adecuarse a las Buenas Prcticas de
Laboratorio (GLP) de manera de generar resultados
tcnicamente vlidos.
El aseguramiento integral de la calidad de los
estudios de bioequivalencia constituye un elemento
crucial para acreditar la confianza en la exactitud,
validez y credibilidad de los resultados obtenidos.
La implementacin de procedimientos de
inspeccin y auditora que controlen el
cumplimiento de los protocolos, la seleccin de los
sujetos, la verificacin del cumplimiento del diseo
del estudio, as como la recoleccin, manipulacin
y almacenamiento de las muestras biolgicas y la
validacin de los mtodos analticos, junto con los
procedimientos estadsticos, constituye la mejor
manera de lograr el nivel de confianza requerido.
Estndares
1. El uso de sustancias qumicas de alto grado
de pureza es fundamental para asegurar la calidad
de los datos analticos en la cuantificacin de los
frmacos y/o de sus metabolitos.
2. Para tal fin y de acuerdo a las Buenas
Prcticas de Laboratorio (GLP), se debe trabajar
con estndares desarrollados por USP, BP, INAME
o de otros organismos internacionales reconocidos.
De igual manera, se pueden utilizar estndares
secundarios o de trabajo siempre y cuando estn
bien caracterizados de acuerdo a las BPF vigentes.
3. En el caso de los estndares de metabolitos
(los que usualmente no se encuentran
comercialmente disponibles) el centro debe
demostrar, a travs de certificados de anlisis del
proveedor o por ensayos realizados en el propio
centro o laboratorios terceros, que ste presenta un
Agua
13 El agua utilizada en los ensayos debe ser de
una calidad adecuada para el uso analtico, por lo
que se deber controlar mediante ensayos
previamente protocolizados.
14. Esta podr ser: deionizada, destilada,
bidestilada, ultrapura.
15. En el caso que el centro cuente con un
equipo productor de agua, debe redactar un
procedimiento de manejo, mantenimiento y
limpieza del mismo como as tambin de los
ensayos a ser realizados en el agua y la frecuencia
de realizacin de los ensayos.
Pipetas
16. El centro debe contar con procedimientos
escritos para utilizacin, limpieza y conservacin de
las pipetas automticas y toda verificacin de la
performance y calibraciones externas deben ser
registradas y archivadas.
17. Los ensayos para determinar exactitud y
precisin de las pipetas mecnicas de volumen fijo
se deben realizar con masa de agua cada tres meses.
Dicha operacin debe registrarse.
18. En el caso de pipetas de volumen variable
tambin se debe verificar y registrar la exactitud y
la precisin usando una masa de agua por lo menos
cada tres meses, en por lo menos tres puntos
distintos (bajo, medio y alto).
Material de vidrio
19. La medida precisa del volumen es tan
importante en muchos mtodos analticos como la
medida de la masa. Por ello, es preciso considerar
algunos puntos para la medicin exacta de un
determinado volumen, tales como verificacin,
calidad, correcto uso y mantenimiento de dichos
materiales.
20. Se podr verificar los volmenes
dispensados por estos materiales utilizados una
masa de agua, y estos controles debern ser
documentados y archivados.
De ser necesario, el centro puede contar con
materiales Clase A.
21. En todos los materiales de vidrio se debe
mantener un grado de limpieza tal, que permitan el
desplazamiento uniforme del lquido. Para ello, el
centro debe contar con un procedimiento operativo
escrito para la limpieza de estos materiales de
vidrio.
Balanzas
22. Las balanzas analticas deben ser instaladas
en un local adecuado, niveladas, libre de corriente
de aire, en mesadas exclusivas para las mismas y
estables. Siempre que se pueda, deben estar
dispuestas en ambientes con temperatura
controlada.
23. Las balanzas deben ser acondicionadas
despus de su uso. Debe haber un programa que
incluya el mantenimiento y la calibracin peridica
(como mnimo, anualmente) con toda la
informacin registrada y archivada.
24. En el caso de balanzas electrnicas que no
posean sistema de auto-calibracin, la verificacin
debe ser hecha diariamente, antes de su utilizacin,
con pesas certificadas.
25. El registro de verificacin de las balanzas
debe figurar como mnimo: fecha, datos de la
verificacin diaria (en el caso de que la balanza no
cuente con auto-calibracin), nombre del operador
y datos de la pesada.
26. Todos los registros deben ser archivados y
las pesas utilizadas en las verificaciones deben
certificarse anualmente.
27. El centro debe contar con un procedimiento
operativo con la informacin bsica sobre el uso y
funcionamiento
de
la
balanza,
limpieza,
mantenimiento y calibracin de la misma.
Freezers y refrigeradores
28. Las muestras biolgicas de los estudios de
bioequivalencia deben ser conservadas y
almacenadas en freezers o refrigeradores destinados
exclusivamente a tal fin y de acceso restringido.
29. Se debe controlar y registrar diariamente la
temperatura de los freezers y refrigeradores. Se
recomienda el uso de dispositivos de registro
continuo de temperatura. El lugar ms adecuado
para colocar el termmetro es la parte central
interna del equipo. Los instrumentos de medicin
deben ser calibrados en forma peridica.
30. En el caso de equipamientos que tengan
registro automtico de temperatura, estos deben
permitir una verificacin diaria de la temperatura y
los datos, impresos o anotados, debern ser
archivados.
31. El centro debe contar con procedimientos
escritos que describa la operatoria y frecuencia de
limpieza y registro de temperatura.
pHmetro
32. El procedimiento para la utilizacin del
aparato debe contener informacin bsica sobre el
uso, cuidados de mantenimiento, limpieza y
almacenamiento de los electrodos.
33. La eficiencia de los electrodos debe ser
verificada peridicamente. En cuanto a la
calibracin sta debe ser realizada antes del uso
usando al menos dos soluciones buffer, una con un
pH por encima y otra debajo del valor que se
pretende medir. Se debe registrar dichas
calibraciones en el manual o planilla de uso del
equipo.
Centrfugas
34. El centro debe contar con un procedimiento
operativo para el correcto uso, limpieza y
decontaminacin de las centrifugas (balanceo,
capacidad mxima).
35. Se debe registrar todo mantenimiento
realizado en la centrfuga sea de rutina o no.
Cromatgrafo lquido y
destinados a la cuantificacin
otros
equipos
ANEXO 6
BUENAS PRCTICAS DE FABRICACIN
DE GASES MEDICINALES
PRINCIPIO - El presente anexo aborda la
manufactura de gases medicinales, que es un
tratamiento industrial especializado que no suelen
realizar las empresas farmacuticas. No cubre la
fabricacin y manipulacin de los gases
medicinales en hospitales. No obstante, las partes
pertinentes de este anexo se podrn emplear como
base para dichas actividades.
La fabricacin de gases medicinales suele
realizarse en equipo cerrado. Por consiguiente, la
contaminacin del producto por el entorno es
mnima. Sin embargo, puede haber riesgo de
contaminacin cruzada con otros gases.
La fabricacin de gases medicinales debe
respetar las exigencias de las Buenas Prcticas de
Fabricacin para Elaboradores, Importadores /
Exportadores de Medicamentos, junto con los
Anexos aplicables, las normas de Farmacopeas y las
siguientes directrices detalladas.
PERSONAL
1. El Responsable Tcnico responsable de la
liberacin de los gases medicinales debe tener un
conocimiento minucioso de la produccin y el
control de dichos gases.
2. Todo el personal que participe en la
fabricacin de los gases medicinales debe
comprender las exigencias de las Buenas Prcticas
de Fabricacin aplicables a los Gases Medicinales y
ser consciente de los aspectos de importancia crtica
y de los riesgos potenciales para los pacientes que
se derivan de los medicamentos en forma de gas.
INSTALACIONES Y EQUIPO
3 Instalaciones
3.1. Los gases medicinales se deben llenar en
zonas separadas de los gases no medicinales y los
recipientes de uso industrial no deben ser utilizados
en el proceso de llenado de gases medicinales. No
se debe producir ningn intercambio de recipientes
entre ambas zonas.
No se permite usar los mismos recursos en la
cadena de llenado de cilindros de gases medicinales
y no medicinales. No obstante, en casos
excepcionales, puede aceptarse el llenado de
cilindros de gases medicinales y no medicinales, al
mismo tiempo en la misma lnea, aunque en zonas
diferentes, siempre que el gas utilizado para fines
no medicinales:
conexiones
conectores.
flexibles,
las
mangueras
los
despus
de
la
el
ANEXO 7
BUENAS PRCTICAS DE FABRICACIN DE
PRODUCTOS FITOTERPICOS
1. Consideraciones generales
1.1. Los lineamientos expuestos en este anexo
estn dirigidas a su aplicacin en Productos
Fitoterpicos.
1.2. Los elaboradores de Productos Fitoterpicos
debern ajustarse a estas prcticas y a las expuestas
en el cuerpo principal de las Buenas Prcticas de
Fabricacin para Elaboradores, Importadores y
Exportadores de Medicamentos.
1.3.
Contrariamente
a
los
productos
farmacuticos convencionales, que estn fabricados
generalmente a partir de materias primas sintticas
por medio de tcnicas y procedimientos
reproducibles de fabricacin, los productos
fitoterpicos estn preparados a partir de material
de origen vegetal que puede estar sujeto a
contaminacin y deterioro, de modo que estos
pueden variar en su composicin y caractersticas.
1.4. El control de las materias primas, el
almacenamiento y el proceso de manufactura asume
particular importancia debido a la naturaleza a
menudo compleja y variable de muchos productos
fitoterpicos, al nmero de principios activos y a la
poca cantidad de ellos que se encuentran definidos.
A tal efecto, debe aplicarse un adecuado sistema de
aseguramiento de la calidad en la elaboracin y el
control de calidad de los productos fitoterpicos.
2. Calificacin y validacin
2.1. La calificacin de equipamiento crtico, la
validacin de procesos y el control de cambios son
particularmente importantes en la produccin de
medicamentos fitoterpicos, de los cuales a menudo
no se conocen los constituyentes responsables de la
actividad teraputica. En este caso, la
homogeneidad del proceso de produccin asegura
constancia de calidad, eficacia y seguridad lote a
lote. Ver Anexo 15 Validacin y Calificacin.
3. Sanitizacin e higiene
3.1. Durante el cultivo, cosecha, recoleccin y
procesado las materias primas son expuestas a un
gran nmero de contaminantes, en especial
microbiolgicos. En relacin a reducir esta
exposicin, es requisito que el personal encargado
del manipuleo del material vegetal y productos
fitoterpicos, tenga un alto grado de higiene
personal as como tambin que haya recibido un
productos
de
componentes
activos
Impurezas
provenientes
de
degradacin
(identificadas o no, si es apropiado).
8.9 Las instrucciones de proceso deben
enumerar las operaciones que se realizarn sobre las
materias primas, tales como secado, molienda,
tamizado, etc. incluyendo el control de parmetros
crticos como pueden ser temperatura, y mtodos
Medicamentos
Fitoterpicos
Los
medicamentos definidos de acuerdo con el Artculo
1 inciso a) del Decreto N 150/92, pero que no
renen los requisitos establecidos para las
especialidades medicinales o farmacuticas
definidas en el inciso d) del Artculo 1 de dicha
norma, y que contengan como principio activo
drogas vegetales puras y/o mezclas definidas de
stas y/o preparados de drogas vegetales,
tradicionalmente usadas con fines medicinales y
que no contengan sustancias activas qumicamente
definidas o sus mezclas aun cuando fuesen
constituyentes aislados de plantas, salvo en los
casos que as se justifiquen.
Nombre Cientfico Nombre en latn
actualizado de una droga vegetal que permite
ubicarla
taxonomicamente
segn
normas
internacionales reconocidas. Debe incluir Gnero,
especie y autor. Cuando corresponda debe incluir
Familia y taxa menores.
Preparados de Drogas Vegetales - Productos
obtenidos a partir de drogas vegetales (tinturas,
extractos, digeridos, pulverizados u otros) donde se
involucren procedimientos tales como extraccin,
destilacin, purificacin, secado, etc. Cada
preparado se considerar en su totalidad como un
principio activo. Los jugos, resinas, gomas, ltex,
aceites esenciales o fijos sern considerados como
drogas vegetales de acuerdo al la definicin (Art. 2
de la Resolucin 144/98). Se excluyen de esta
definicin
a
los
constituyentes
aislados
qumicamente definidos.
ANEXO 8
MUESTREO DE MATERIALES DE PARTIDA
Y DE ACONDICIONAMIENTO
PRINCIPIO - El muestreo es una operacin
importante en la que slo se toma una pequea
fraccin de un lote. No pueden obtenerse
conclusiones vlidas basndose nicamente en
ensayos que se han realizado en muestras no
representativas. Por lo tanto, el muestreo constituye
una parte esencial del sistema de Aseguramiento de
la Calidad.
NOTA: el muestreo se trata en el Captulo 6 de
la Norma de BPF (tem 6.11 a 6.14). Este Anexo
complementario
proporciona
indicaciones
adicionales a la Norma sobre el muestreo de los
materiales de partida y los de acondicionamiento.
PERSONAL
1. El personal que toma muestras debe recibir
capacitacin inicial y continua en las disciplinas
pertinentes a la correcta toma de muestras. Dicha
capacitacin debe incluir:
a) planes de muestreo,
b) procedimientos escritos de muestreo,
c) tcnicas y equipamiento para el muestreo,
d) los riesgos de contaminacin cruzada,
e) las precauciones a tomarse con respecto a
sustancias inestables y/o estriles,
f) la importancia de la evaluacin del aspecto
visual de los materiales, envases y rtulos,
g) la importancia de registrar
circunstancia inesperada o inusual.
cualquier
MATERIALES DE PARTIDA
2. Normalmente, slo puede asegurarse la
identidad de un lote completo de material de partida
si se toman muestras individuales de todos los
envases y se realiza un ensayo de identidad en cada
muestra. Se permite tomar muestras slo de una
proporcin de los envases en los casos en que se
haya establecido un procedimiento validado para
asegurar que ningn envase aislado de material de
partida sea identificado incorrectamente en su
rtulo.
3. Dicha validacin debe tener en cuenta al
menos los siguientes aspectos:
a) naturaleza y calificacin del elaborador, del
proveedor y del transporte y su conocimiento de los
requerimientos de BPF de la industria farmacutica;
ANEXO 9
ELABORACIN DE LQUIDOS Y
SEMISLIDOS
LOCALES Y EQUIPAMIENTO
1. Se recomienda el uso de sistemas cerrados
de procesamiento y de transferencia a fin de
proteger el producto de la contaminacin. Las
reas de produccin en las que se encuentran
expuestos los productos o envases limpios
abiertos deben ser efectivamente ventiladas con
aire filtrado.
2. Los tanques, contenedores, tuberas y
bombas deben disearse e instalarse de manera tal
que puedan limpiarse fcilmente y de ser
necesario, sanitizarse. El diseo del equipamiento
debe minimizar, en particular, la cantidad de
puntos muertos o sitios en donde puedan
acumularse residuos y permitir el desarrollo
microbiano.
3. De ser posible, el uso de equipos de vidrio
debe evitarse. El acero inoxidable de alta calidad
debe ser el material de preferentemente elegido
para aquellas partes que estn en contacto con el
producto, en la medida que el producto no se vea
afectado.
PRODUCCIN
4.
Debe
especificarse
y
controlarse/monitorearse la calidad qumica y
microbiolgica del agua utilizada en produccin.
Se debe tener cuidado en el mantenimiento de los
sistemas de agua a los efectos de evitar el riesgo
de desarrollo microbiano. Despus de una
sanitizacin qumica de los sistemas de agua, debe
implementarse un procedimiento de enjuague
validado a fin de asegurar que el agente
sanitizante ha sido eliminado de manera efectiva.
ANEXO 10
ELABORACION DE MEDICAMENTOS
PARA
INHALACIN
EN
AEROSOL
PRESURIZADO CON DOSIFICADOR
PRINCIPIO
La
elaboracin
de
medicamentos para inhalacin en aerosoles
presurizados con vlvulas dosificadoras requiere
de ciertos recaudos especiales dada la particular
naturaleza de esta forma farmacutica. Debe
desarrollarse bajo condiciones que minimicen la
contaminacin microbiana y por partculas. Es de
vital importancia asegurar la calidad de los
componentes de las vlvulas y en el caso de
suspensiones tambin es esencial la uniformidad.
NOTA: la elaboracin de aerosoles debe
realizarse de acuerdo con la Norma de BPF
descripta y cuando corresponda con las otras
normativas complementarias. El presente Anexo
slo enfatiza puntos especficos para la
elaboracin de este tipo de formas farmacuticas.
CONSIDERACIONES GENERALES
1. En la actualidad existen dos mtodos
comunes de elaboracin y llenado, a saber:
a)
sistema de dos disparos (llenado
a presin): el ingrediente activo es
suspendido en un propelente de alto punto
de ebullicin, la dosis se llena en el envase,
se engrampa la vlvula y a travs del
vstago de la vlvula se inyecta el
propelente de punto de ebullicin ms bajo
para conformar el producto terminado. La
suspensin del ingrediente activo en el
propelente se mantiene fra para reducir la
prdida por evaporacin.
b)
proceso de un disparo (llenado
en fro): el principio activo se suspende en
una mezcla de propelentes y se mantiene a
alta presin y/o a baja temperatura. Luego,
se llena el envase directamente con la
suspensin en un disparo.
LOCALES Y EQUIPAMIENTO
2. La elaboracin y el llenado deben realizarse,
en la medida de lo posible, en un sistema cerrado.
3. En los casos en donde haya exposicin de
productos o envases y sus accesorios limpios, el
rea debe contar con aire filtrado, cumpliendo con
los requisitos de un ambiente de al menos Grado
D e ingreso a travs de esclusas.
PRODUCCIN Y CONTROL DE CALIDAD
ANEXO 11
SISTEMAS INFORMTICOS
PRINCIPIO - La incorporacin de sistemas
informticos dentro de los sistemas de
elaboracin, incluyendo el almacenamiento, la
distribucin y el control de calidad no altera la
necesidad
de
observar
los
principios
fundamentales establecidos en otras partes de la
normativa. En los casos en que un sistema
informtico reemplaza una operacin manual,
no se debe producir una disminucin en la
calidad del producto o en el aseguramiento de la
calidad. Se debe tener en cuenta el riesgo de
perder aspectos del sistema anterior al reducir la
participacin humana.
PERSONAL
1. Es esencial que exista una estrecha
cooperacin entre el personal responsable y el
personal relacionado con los sistemas
informticos. Las personas que ocupen puestos
de responsabilidad deben contar con la
capacitacin adecuada para gestionar y usar
sistemas que utilizan computadoras, dentro de
su campo de responsabilidad. Esto debe incluir
la garanta de que se dispone de una experiencia
adecuada y de que se utiliza esta experiencia
para aconsejar en aspectos de diseo,
validacin, instalacin y operacin del sistema
informtico.
VALIDACIN
2. El alcance de la validacin necesaria
depender de cierto nmero de factores entre los
que se puede sealar el uso al que vaya a
destinarse el sistema, si la validacin es
prospectiva o retrospectiva, y si se incorporan o
no nuevos elementos. Se debe considerar la
validacin como parte del ciclo completo de
vida de un sistema informtico. Este ciclo
comprende las etapas de planificacin,
especificacin, programacin, ensayo, puesta en
marcha, documentacin, operacin, monitoreo y
cambios.
SISTEMA
3. Se debe prestar atencin a la ubicacin del
equipamiento en condiciones adecuadas, en las
que no puedan interferir con el sistema factores
extraos.
4. Se debe elaborar y mantener actualizada
una descripcin por escrito detallada del sistema
(incluyendo diagramas segn corresponda). Se
deben describir los principios, objetivos,
ANEXO 12
USO DE LA RADIACIN IONIZANTE EN
LA ELABORACIN DE
MEDICAMENTOS
PRINCIPIO - La radiacin ionizante puede
utilizarse en el proceso de elaboracin con
diferentes finalidades, incluyendo la reduccin
de la carga microbiolgica y esterilizacin de
materiales de partida, de acondicionamiento o
productos y el tratamiento de hemoderivados.
Si la Autoridad Sanitaria no ha aprobado,
para el producto terminado, el tratamiento de
radiacin ionizante, el mismo no puede
utilizarse para subsanar deficiencias de BPF en
las etapas de produccin.
Existen dos tipos de procesos de irradiacin:
irradiacin Gamma mediante una fuente
radiactiva e irradiacin con Electrones de alta
energa (radiacin Beta) mediante un acelerador.
Irradiacin Gamma - Se pueden emplear
dos modos de procesamiento diferentes:
(i) Modo por lote: se disponen los
productos en puntos fijos alrededor de la fuente
de radiacin. Mientras se los expone no se
pueden realizar actividades de carga o descarga.
(ii) Modo continuo: un sistema automtico
transporta los productos a la celda de radiacin,
los hace atravesar la fuente de radiacin
expuesta con una trayectoria definida y a una
velocidad adecuada y luego los extrae de la
celda.
Irradiacin de electrones - Los productos
son transportados pasando por un haz, continuo
o por pulsos de electrones de alta energa
(radiacin Beta). El haz, con movimientos
oscilantes hacia delante y atrs, impacta sobre el
material a su paso.
RESPONSABILIDADES
1. El tratamiento mediante irradiacin lo
puede llevar a cabo el elaborador farmacutico o
un operador de una instalacin de radiacin
contratada (elaborador contratado), para lo
que ambos deben poseer la habilitacin de
elaboracin correspondiente.
2. El elaborador farmacutico tiene la
responsabilidad de la calidad del producto
incluyendo el logro del objetivo de la
irradiacin. El operador contratado de la
instalacin
de
irradiacin
tiene
la
responsabilidad de asegurar que la dosis de
radiacin, requerida por el elaborador, sea
c) documentacin,
d) requerimiento de verificacin de la puesta a
punto.
Irradiadores Gamma
Diseo
14. La dosis recibida por una parte en particular
de un contenedor de irradiacin, desde cualquier
punto especfico de la fuente o irradiador depende
principalmente de los siguientes factores:
a)
b)
c) la
producto;
composicin
densidad
PROCESAMIENTO
del
ANEXO 13
ELABORACION DE PRODUCTOS
FARMACEUTICOS DE INVESTIGACION
PRINCIPIO - Los productos farmacuticos
de investigacin deben elaborarse en
cumplimiento con los principios y directivas
detalladas en la Norma de Buenas Prcticas de
Fabricacin
de
Medicamentos.
Cuando
corresponda, deben tenerse en cuenta adems,
otras normativas vigentes, aplicables a la etapa
de desarrollo del producto. Los procedimientos
deben ser flexibles a fin de adecuarse a los
cambios a medida que avanza el conocimiento
del proceso y deben ser apropiados para cada
etapa de desarrollo del producto.
En los ensayos clnicos puede existir un
riesgo adicional para los sujetos participantes,
en comparacin con los pacientes tratados con
productos comercializados. La aplicacin de la
Norma de BPF en la elaboracin de productos
farmacuticos en investigacin tiene la finalidad
de asegurar que los sujetos del ensayo no sean
expuestos a ningn riesgo y que los resultados
de los ensayos clnicos no se vean afectados por
una seguridad, calidad o eficacia insuficientes,
derivadas de una elaboracin inadecuada. De la
misma manera, se pretende asegurar que exista
consistencia entre lotes del mismo producto
farmacutico en investigacin utilizado en el
mismo o en diferentes ensayos clnicos y que
los cambios durante el desarrollo de un producto
farmacutico en investigacin se registren y
justifiquen adecuadamente
La elaboracin de productos farmacuticos
en investigacin conlleva una mayor
complejidad en comparacin con los productos
comercializados, debido a: la inexistencia de
procedimientos sistemticos, la variedad de
diseos de ensayos clnicos y, en consecuencia,
los diferentes diseos de acondicionamiento, la
necesidad, con frecuencia, de ensayos aleatorios
y ciegos y el mayor riesgo de contaminacin
cruzada, confusin de productos y mezcla.
Adems, puede existir un conocimiento parcial
sobre la actividad y toxicidad del producto y
puede no disponerse de la completa validacin
del proceso o, bien pueden utilizarse productos
comercializados
que
hayan
sido
reacondicionados o modificados de alguna
manera.
Estos desafos requieren personal con un
amplio conocimiento y formacin en la
aplicacin de las normas de BPF en productos
farmacuticos en investigacin. Asimismo, se
utilizado
como
mtodos de elaboracin.
c)
d)
datos de estabilidad.
h)
Maestra
Instrucciones
de
control
aplicables
al
producto
Operaciones de enmascaramiento
21. En los casos en los que se enmascaran
los productos se deben implementar sistemas
que aseguren que el enmascaramiento se ha
logreado y mantenido, al tiempo que permita
cuando sea necesario, la identificacin de
productos enmascarados, incluyendo los
nmeros de lotes de los productos antes de la
operacin de enmascaramiento. Asimismo, debe
ser posible la rpida identificacin de los
productos en caso de emergencia.
Cdigo de randomizacin
22. Los procedimientos deben describir la
generacin,
seguridad,
distribucin,
manipulacin y conservacin de los cdigos de
randomizacin
utilizados
en
el
acondicionamiento de los productos de
investigacin, como as
tambin, los
mecanismos de decodificacin. Se deben llevar
los registros adecuados correspondientes.
Acondicionamiento
23. Durante el acondicionamiento de
productos farmacuticos de investigacin, puede
ser necesario manipular diferentes productos en
la misma lnea de acondicionamiento al mismo
tiempo. Se debe minimizar el riesgo de mezcla y
confusin de productos mediante el uso de
procedimientos adecuados y/o equipamiento
especializado segn corresponda, como as
tambin, mediante la capacitacin especfica del
personal.
24. Probablemente, el acondicionamiento y
el rotulado de los productos farmacuticos de
investigacin sean ms complejos y propensos a
errores (tambin ms difciles de detectar) que
los de productos comercializados, en especial,
cuando se utilizan productos enmascarados de
aspecto similar. Se deben intensificar los
recaudos para evitar el rotulado errneo, como
por ej. la conciliacin de rtulos, la liberacin
de la lnea, controles en proceso realizado por
personal adecuadamente capacitado.
25. El acondicionamiento debe garantizar
que el producto farmacutico de investigacin
permanezca en buena condicin durante el
transporte y almacenamiento en destinos
intermedios. Cualquier apertura o alteracin en
el empaque externo durante el transporte debe
ser fcilmente detectable.
Rotulado
26. La tabla 1 resume el contenido de los
puntos 26 a 30 que se describen a continuacin. La
siguiente informacin se debe incluir en los rtulos,
a menos que su ausencia sea debidamente
justificada, por ej. si se utiliza un sistema de
randomizacin electrnico centralizado:
a) nombre, domicilio y nmero de telfono del
patrocinador, organizacin de investigacin
contratada o investigador (el contacto principal
para dar informacin sobre el producto, ensayo
clnico y desenmascaramiento de emergencia);
b) forma farmacutica, va de administracin,
cantidad de unidades de dosis y en el caso de
ensayos abiertos, nombre / identificador y
concentracin / potencia;
c) el nmero de lote o cdigo para identificar
el contenido y la operacin de acondicionamiento;
d) cdigo de referencia del ensayo que permita
la identificacin del ensayo, sitio de ensayo,
investigador y patrocinador, si no figura en otro
lugar;
e) nmero de identificacin / tratamiento del
sujeto participante del ensayo y, de corresponder,
nmero de visita;
f) nombre del investigador (si no est incluido
en a) d));
g) instrucciones de uso (se puede hacer
referencia al prospecto u otro documento
explicativo destinado al sujeto participante del
ensayo o a la persona que administre el producto);
h) la frase Para ensayo clnico nicamente o
similar;
i) condiciones de almacenamiento;
j) perodo de uso (fecha lmite de uso, de
vencimiento o de reanlisis segn corresponda), en
formato mes / ao y de manera tal que evite la
ambigedad.
k) frase mantener fuera del alcance de los
nios excepto cuando el producto se utilice en
ensayos en los que los sujetos participantes no lo
llevan a su casa.
27. No es necesario que el domicilio y el
nmero de telfono del contacto principal de
informacin sobre el producto, el ensayo clnico y
desenmascaramiento de emergencia se exhiban en
el rtulo, siempre y cuando el sujeto participante
haya recibido un prospecto o tarjeta que
proporcione estos datos y se lo haya
que
lo
b) forma
farmacutica,
va
de
administracin (puede excluirse para las formas
farmacuticas slidas orales), cantidad de
unidades de dosis y en el caso de ensayos
abiertos, el nombre / identificador y
concentracin / potencia;
CONTROL DE CALIDAD
d)
condiciones de produccin;
c) el estado de validacin
instalaciones, procesos y mtodos;
de
las
informes de estabilidad
RETIROS
DE
DEVOLUCIONES
PRODUCTO
Retiros de productos
49. El patrocinador y el elaborador o
importador (en caso de diferir) deben acordar los
procedimientos para recuperar los productos
farmacuticos de investigacin y deben registrar
dicha recuperacin. El investigador y el monitor
deben comprender sus obligaciones en el
procedimiento de recuperacin.
50. El patrocinador debe asegurar que el
proveedor de cualquier comparador o medicacin a
ser utilizada en el ensayo clnico posea un sistema
para comunicar al patrocinador la necesidad de
retirar cualquier producto suministrado.
Devoluciones
51.
Los
productos
farmacuticos
de
investigacin se deben devolver de acuerdo con las
condiciones acordadas y definidas por el
patrocinador, especificadas en procedimientos
escritos aprobados.
52.
Los
productos
farmacuticos
de
investigacin devueltos deben identificarse
claramente y se deben almacenar en un rea
exclusiva debidamente controlada. Se deben llevar
registros de los medicamentos devueltos.
DESTRUCCIN
53. El patrocinador es responsable de la
destruccin de los productos farmacuticos de
investigacin no utilizados y/o devueltos. Por lo
tanto, los productos farmacuticos de investigacin
no se deben destruir sin la previa autorizacin
escrita del patrocinador.
54. En cada sitio y perodo de ensayo, el
patrocinador o alguien en su representacin debe
registrar, conciliar y verificar las cantidades de
producto entregadas, utilizadas y recuperadas. La
destruccin de los productos farmacuticos de
investigacin no utilizados se debe realizar en
funcin de un sitio o perodo de ensayo
determinados, solamente despus de haber
investigado
y explicado
satisfactoriamente
cualquier discrepancia y de haber aceptado adems
la conciliacin. Se debe desarrollar el registro de
las operaciones de destruccin de manera tal que se
d) cdigo de referencia del ensayo que permita la identificacin del ensayo, sitio, investigador y
patrocinador, de no encontrarse en otro lugar;
e) nmero de identificacin/tratamiento del sujeto participante del ensayo y, de corresponder,
nmero de visita;
f)
g) instrucciones de uso (se puede hacer referencia a un prospecto u otro documento destinado al
sujeto del ensayo o a la persona que administre el producto);
h)
i)
condiciones de almacenamiento;
j)
perodo de uso (fecha lmite de uso, de vencimiento o de re anlisis segn corresponda), en
formato mes/ao y de manera tal que evite la ambigedad.
k) La frase mantener fuera del alcance de los nios excepto cuando el producto se utilice en
ensayos en los que los sujetos no lo llevan a su casa.
El domicilio y nmero de telfono del contacto principal para informacin sobre el producto, ensayo
clnico y desemascaramiento de emergencia no necesita aparecer en la etiqueta cuando se ha dado un
prospecto o una tarjeta que proporcionan estos detalles y se han dado instrucciones para mantenerlos
siempre.
2
El domicilio y nmero de telfono del contacto principal para informacin sobre el producto, ensayo
clnico y desemascaramiento no necesita estar incluido
3
ANEXO 14
GLOSARIO
ELABORACION DE PRODUCTOS
DERIVADOS DE SANGRE Y PLASMA
HUMANO
LOCALES Y EQUIPAMIENTO
6. Los locales utilizados para la extraccin
de sangre o plasma deben poseer dimensiones,
construccin y ubicacin adecuadas a fin de
facilitar su correcto funcionamiento, limpieza y
mantenimiento. La extraccin, el procesamiento
y el anlisis de la sangre y el plasma no deben
realizarse en la misma rea. Deben existir
instalaciones
apropiadas
para
realizar
entrevistas a los donantes en privado.
7. El equipamiento de elaboracin,
extraccin y anlisis se debe disear, calificar y
mantener para cumplir con su fin pretendido y
no deben presentar ningn riesgo. Se debe
efectuar y registrar el mantenimiento y
calibracin de acuerdo con procedimientos
establecidos.
8. En la preparacin de hemoderivados se
deben utilizar procedimientos de inactivacin o
remocin viral y se deben tomar las medidas
necesarias para evitar la contaminacin cruzada
de los productos tratados con los no tratados; los
locales y el material utilizado para los productos
tratados deben ser especficos y distintos de los
utilizados para los productos no tratados.
RECOLECCIN
PLASMA
DE
SANGRE
CONTROL
DE
ANEXO 15
CALIFICACIN Y VALIDACIN
PRINCIPIO
1.- El presente anexo describe los principios
de calificacin y validacin aplicables a la
fabricacin de medicamentos. Las Buenas
Prcticas de Fabricacin proponen que los
fabricantes identifiquen las tareas de validacin
que son necesarias para demostrar el control de
los aspectos crticos de sus operaciones en
particular. Se debe validar/calificar todo cambio
significativo en las instalaciones, equipos y
procesos que pueda influir en la calidad del
producto. Se debe emplear un enfoque de
anlisis de riesgo para determinar el alcance y la
duracin de la validacin.
PLANIFICACIN DE LA VALIDACIN
2.- Todas las actividades de validacin
deben estar planificadas. Los elementos claves
del programa de validacin deben estar
claramente definidos y documentados en un
plan maestro de validacin (PMV) o
documentos equivalentes.
3.- El PMV de validacin debe ser un
documento resumido, es decir, breve, conciso y
claro.
4.- El PMV debe contener como mnimo
datos sobre los siguientes aspectos:
(a) poltica de validacin;
(b) estructura organizativa de las actividades
de validacin;
(c) resumen de instalaciones, sistemas,
equipos y procesos a ser validados;
(d) formato de la documentacin: el formato
a ser usado para los protocolos e informes;
(e) planificacin y cronograma;
(f) control de cambio;
(g) referencia a documentos anteriores;
5.- Cuando se trate de proyectos grandes
puede ser necesario disear planes maestros de
validacin independientes.
DOCUMENTACIN
6.- Se debe elaborar un protocolo escrito en
el que se especifique como se llevar a cabo la
calificacin y la validacin. Este protocolo debe
ser revisado y aprobado. Adems, debe
de
los
materiales
de
Calificacin en Operacin
13.- La calificacin en operacin (CO) debe
realizarse posteriormente a la calificacin de la
instalacin.
14.- La calificacin en operacin debe incluir,
pero no limitarse, lo siguiente:
b)
resumen de los pasos crticos del proceso
a ser investigado;
c)
listado de instalaciones y equipos a ser
utilizados (incluyendo el equipamiento de medicin
/ control / registro) junto con el estado de
calibracin;
d) especificaciones
producto terminado;
de
liberacin
del
VALIDACIN DE PROCESOS
Consideraciones Generales
20.- Los requerimientos y principios
descriptos en este captulo son aplicables a la
elaboracin
de
formas
farmacuticas.
Comprenden la validacin inicial de los nuevos
plan de muestreo;
i)
mtodos de registro y evaluacin de
resultados;
j)
funciones y responsabilidades;
k)
cronograma propuesto.
ANEXO 16
NORMAS PARA LA IDENTIFICACIN
POR COLORES DE ENVASES DE LAS
DROGAS DE USO ANESTESIOLGICO Y
DE LAS SOLUCIONES PARENTERALES
1. Introduccin
PRINCIPIO
1.1 Considerando que la falta de identificacin
por color de envases de drogas de uso
anestesiolgico
y
soluciones
parenterales
constituyen un potencial peligro para la vida del
paciente, es indispensable establecer un sistema
que contribuya a la correcta identificacin de las
drogas de uso anestesiolgico por grupo de
accin.
1.2 El objetivo del presente anexo es disminuir
el riesgo durante los procedimientos de anestesia y
de aplicacin de soluciones parenterales mediante
la identificacin inequvoca de los productos
farmacuticos utilizados en anestesiloga.
1.3 Todos los envases deben contener la
informacin requerida segn lo indicado en las
BPF y cumplir con la Normativa Nacional vigente
al respecto.
2. Identificacin
anestesiolgico
de
envases
de
uso
ANEXO 17
LIBERACIN PARAMTRICA
PRINCIPIO
1. Es un sistema de liberacin que ofrece la
garanta de que el producto liberado es de la
calidad deseada basndose en la informacin
recogida durante el proceso de fabricacin y en
el cumplimiento de exigencias especficas de las
Buenas Prcticas de Fabricacin relacionadas
con la liberacin paramtrica
2. La liberacin paramtrica se debe cumplir
con las exigencias bsicas de las Buenas
Prcticas de Fabricacin, un sistema de Anlisis
de Riesgo y Puntos Crticos de Control
(HACCP) implementado, los anexos aplicables
y las directrices incluidas en el presente anexo.
Las empresas deben ser autorizadas por la
ANMAT para tal fin.
LIBERACIN PARAMTRICA
4. La autorizacin de la liberacin
paramtrica debe ser concedida, denegada o
retirada por la Autoridad Sanitaria Nacional
para cada Lote de producto
2.
3.
4.
5.
6.
3.
4.
5.
Mantenimiento
producto.
6.
El proceso de esterilizacin.
7.
de
la
integridad
del
ANEXO 18
MUESTRAS DE RETENCIN
1. MBITO DE APLICACIN
1.1 El presente anexo de las Buenas
Prcticas de Fabricacin de Medicamentos,
sirve de orientacin sobre la toma y
conservacin de muestras de retencin de
materiales
de
partida,
materiales
de
acondicionamiento y de productos terminados.
1.2 Los requisitos especficos para
medicamentos de investigacin, figuran en el
Anexo 13 de la presente Normativa.
1.3 Este anexo tambin se aplica para la
toma de muestras de retencin de medicamentos
importados.
2. PRINCIPIO
2.1 Las muestras son conservadas con la
finalidad de cumplir dos propsitos: en primer
lugar para tener muestras para pruebas analticas
y en segundo lugar proporcionar muestras del
producto totalmente terminado.
Muestra de retencin: es una muestra de un
lote de material de partida, material de
acondicionamiento o de producto terminado que
se conserva con el propsito de ser analizada/o,
si es necesario, o servir de referencia con fines
de identificacin, por ejemplo: presentacin,
acondicionamiento,
etiquetado,
prospecto,
nmero de lote, fecha de vencimiento, entre
otros.
2.2 Es necesario que el titular de una
autorizacin de comercializacin o el
importador, mantengan las muestras de
retencin de cada lote de producto terminado,
as como de los materiales de partida.
2.3 Las muestras de retencin sirven como
un modelo del lote de producto terminado o de
los materiales de partida y pueden ser evaluadas
en el caso de, por ejemplo, un reclamo en
relacin a la calidad de la forma farmacutica,
una consulta en relacin con el cumplimiento de
autorizacin de comercializacin, consulta sobre
el etiquetado /acondicionamiento o un reporte
de farmacovigilancia.
2.4 Se deben conservar registros de
trazabilidad de las muestras y estar disponibles
para revisin por las autoridades competentes.
3. TIEMPO DEL ALMACENAMIENTO
3.1 Las muestras de retencin de cada lote
de producto terminado deben ser conservada
GLOSARIO
Agentes quimioterpicos antineoplsicos: son
activos capaces de daar clulas malignas afectando
tambin a las clulas normales del organismo por lo
que se los denomina agentes citotxicos y dado que
poseen la propiedad de inhibir el crecimiento de
tumores malignos, por analoga se los llama citostticos.
Carcinognico: es toda aquella sustancia que
pueda producir cncer .
Citotxico: es todo aquel agente que tenga capacidad de producir genotoxicidad, oncogenicidad y
mutagenicidad.
Desinfeccin: este trmino suele usarse para designar los resultados de la aplicacin de agentes
qumicos sobre objetos inanimados con el fin de
eliminar los microorganismos incluyendo formas
esporuladas.
Dispensacin: es el acto farmacutico asociado
a la entrega y distribucin de los medicamentos con
las consecuentes prestaciones especficas, como
son: el anlisis de la orden mdica, informacin
para su correcta utilizacin y preparacin de las
dosis que se deben administrar.
En este acto, el farmacutico informa y orienta
al paciente, enfermera o mdico, sobre el uso adecuado de dicho medicamento. Son elementos importantes de esta orientacin, entre otros, el nfasis
en el cumplimiento del rgimen de dosificacin, la
influencia de los alimentos, la interaccin con otros
medicamentos, el reconocimiento de reacciones
adversas potenciales y las condiciones de conservacin del producto.
Distribucin: es el sistema implementado para
la entrega intrahospitalaria de los medicamentos
requeridos por las unidades de internacin u otros
servicios del hospital para su posterior administracin al paciente.
Dispositivos mdicos (material descartable):
instrumento, aparato, implemento, mquina, artefacto, implante u otro artculo similar o relacionado,
incluidos los componentes, partes o accesorios de
stos.
Dosificacin / posologa: describe la dosis de un
medicamento, los intervalos entre las administraciones y la duracin del tratamiento. No debe confundirse con el trmino dosis.
Cofactores
Tales como hbitos alimentarios o hbitos de
vida, como el fumar, pueden alterar la susceptibilidad del individuo a los efectos de estos frmacos.
Nmero de exposiciones
Tiene que ver con la magnitud de la exposicin o la suma acumulada de las mismas.
sar irritacin local en caso de citotxicos irritantes y ulceracin con posterior necrosis de la zona en el caso de activos vesicantes, como por
ejemplo, antraciclinas.
Sistmicos
Son los que se producen tras un largo
perodo de tiempo por repetidas exposiciones a
bajas dosis. En este caso es ms difcil demostrar la relacin causa-efecto por las dificultades
que plantea su estudio.
El servicio de Higiene y Medicina Laboral deber ser informado de todos los accidentes debidos
a manipulacin de agentes citotxicos.
El riesgo demostrado de estos agentes de producir los efectos previamente mencionados, unido al
hecho de que estas sustancias pueden ser absorbidas
como consecuencia de exposiciones profesionales,
justifica la adopcin de controles peridicos de
salud sugirindose su realizacin por lo menos una
vez al ao.
Deben existir registros de los resultados de los
exmenes de salud a los que es sometido el personal
en el mbito del sector.
INSTALACIONES
Es recomendable que el servicio de reconstitucin y formulacin de citostticos est compuesto
por los siguientes sectores:
Depsito de medicamentos.
Depsito de materiales.
Controles de partculas
Se deber efectuar un control de la cantidad de
partculas inertes y tamao de las mismas por medio
de instrumental electrnico. Dicho control debe
efectuarse, al menos, una vez al ao y toda vez que
dentro del rea se produzcan modificaciones significativas.
Controles microbiolgicos
Los controles ambientales se realizarn por captacin espontnea mediante placas de Petri o captacin forzada para determinar la biocarga del rea.
Los controles de superficies planas se harn mediante placas de impresin y los de superficies
irregulares (manijas de puertas y aberturas) mediante hisopado de las mismas.
Estos controles debern ser efectuados como
mnimo cada seis meses o inmediatamente despus
SANEAMIENTO
La limpieza del rea y equipos debe ser realizada por personal calificado perteneciente a la unidad,
con una frecuencia diaria, previo al inicio de las
actividades y al finalizar la jornada de trabajo o
cuando se requiera de acuerdo a las manipulaciones
realizadas.
Dada la ndole de trabajo realizado en la zona de
cabinas de flujo laminar de la Unidad de Reconstitucin de Citostticos y el riesgo que puede implicar para los pacientes la acumulacin de partculas,
la limpieza de dicha zona se har de acuerdo a
Normas que se establezcan en el sector para dar
cumplimiento a los indicadores de calidad preestablecidos verificando que la misma sea efectiva. Se
deber contar con los registros correspondientes.
PROCEDIMIENTOS DE MANIPULACIN
Se entiende como manejo de citostticos al conjunto de operaciones que incluyen desde la recepcin del medicamento hasta la eliminacin de los
residuos. La manipulacin debe realizarse de modo
de asegurar la proteccin al paciente, al ambiente y
al personal de salud encargado de la preparacin de
estos frmacos.
Comprende las siguientes operaciones
Dispensacin y distribucin
CONTROL DE CALIDAD
Se deber establecer un programa de control peridico referente a la identificacin del principio
activo y las dosis.
La reconstitucin de frmacos citostticos puede
ocasionar errores de medicacin que impliquen
graves consecuencias para los pacientes debido a su
estrecho margen teraputico. En el proceso global
de tratamiento con quimioterapia existen distintos
pasos en los cuales se puede producir un error potencial. Por este motivo, es necesario establecer
estrategias para reducir la probabilidad de que esto
ltimo ocurra. La preparacin es uno de los puntos
ms crticos de todo el proceso, y por tanto resulta
imprescindible la implementacin de controles de
calidad para reducir la probabilidad de que se produzca un error. Se han establecido diferentes sistemas para controlar la calidad de los preparados:
control de volmenes, control de viales utilizados,
control de pesada y controles de rtulo. No obstante, no existe hasta el momento ningn mtodo infalible para detectar errores de dosificacin.
Inspeccin visual
Se deber inspeccionar cambio de coloracin,
presencia de partculas visibles, turbidez, formacin
de gas, integridad del envase y del cierre.
Control de rtulo
En el proceso de preparacin, adems de establecer medidas para disminuir errores de dosificacin con el rotulado de los viales previo a su preparacin, tambin es importante establecer un control
de etiquetado previo a la dispensacin por comparacin del rtulo con la prescripcin y la orden de
preparacin.
DISTRIBUCIN Y DISPENSACIN
ADMINISTRACIN
La administracin estar a cargo del personal de
enfermera calificado.
El farmacutico especializado en oncologa, trabajar en forma conjunta con el equipo de salud
para lograr la administracin ptima del medicamento al paciente.
Se enumerarn a continuacin algunas recomendaciones generales para la administracin por
parte del personal de enfermera y sobre el manejo
de las excretas.
Recomendaciones para la administracin de
citostticos
BIOSEGURIDAD
Exposicin accidental
Despus de una exposicin sin contacto con la
piel, se deben quitar los guantes y prendas contaminadas, lavar las manos y colocar guantes nuevos. Si
el citosttico tomara contacto directo con la piel del
manipulador se recomienda seguir las indicaciones
descriptas en la Tabla . Si el rea afectada est
lacerada o irritada es conveniente consultar inme-
Desechos
Los desechos deben colocarse en recipientes de
paredes rgidas para su posterior incineracin.
Nunca debern arrojarse medicamentos ni desechos citostticos a la red cloacal o desages.
Composicin:
Tabla - Recomendaciones a seguir en caso de
exposicin accidental con contacto directo con la piel.
[NOTA: en todos los casos de contacto con citostticos se recomienda consultar rpidamente al servicio de Medicina Laboral.]
Farmaco
Accin en la piel
Norma de actuacin en caso de contacto con la Piel
Sumergir 10 en buffer fosfato , luego lavar con agua y
Actinomicina - D
Vesicante
jabn
Amsacrina
Vesicante
Lavar con agua y jabn
Bleomicina
Txico local , Aleggeno
Lavar enrgicamente con agua y jabn
Carboplatino
No Irritante
Lavar con agua
Carmustina
Vesicante
Ciclofosfamida
Cisplatino
Citarabina
Dacarbazina
Daunorubicina
Doxorubicina
Epirubicina
Etopsido
Fluorouracilo
Idarubicina
Ifosfamida
Irinotecan
L - Asparaginasa
Mecloretamina
Irritante
Potencial alergnico
Irritante
Irritante
Irritante - Vesicante
Irritante - Vesicante
Irritante - Vesicante
Irritante
Inflamacin en la piel
Irritante - Vesicante
Irritante
No Irritante
No Irritante
Vesicante
Melfaln
Metotrexato
Vesicante
No Vesicante
Mitomicina
Vesicante
Mitoxantrona
Oxaliplatino
Paclitaxel
Tenipsido
Thiotepa
Vinblastina
Vincristina
Vindesina
Irritante
No Irritante
Irritante
Irritante
No Irritante
Irritante - Vesicante
Irritante - Vesicante
Irritante - Vesicante
en la
Definiciones
Alternativa farmacutica
Los productos son alternativas farmacuticas si
ellos contienen la misma cantidad molar de principio activo, pero difieren en la forma farmacutica
(por ejemplo comprimidos, cpsulas) o en la forma
qumica (por ejemplo sal, ster). Las alternativas
farmacuticas proveen la misma cantidad de porcin activa por la misma va de administracin,
pero no son equivalentes farmacuticos. Ellos pueden o no ser equivalentes teraputicos.
Alto riesgo sanitario
Es la probabilidad de aparicin de complicaciones amenazantes de la enfermedad para la vida o
para la integridad psicofsica de la persona y/o de
reacciones adversas graves (muerte, hospitalizacin
del paciente, prolongacin de la hospitalizacin,
discapacidad significativa o persistente, incapacidad
o amenaza de muerte), cuando la concentracin
sangunea del principio activo no se encuentra dentro de la ventana teraputica.
Biodisponibilidad
En sentido amplio, velocidad y cantidad con la
cual el principio activo es absorbido desde la forma
farmacutica y se encuentra disponible en forma
inalterada en el/los sitio/s de accin. En la mayora
de los casos no es posible medir la concentracin de
principio activo en el/los sitio/s de accin. No obstante, se considera que la concentracin del principio activo en la circulacin general se encuentran en
equilibrio con la concentracin en el/los sitio/s de
accin. La Biodisponibilidad puede, entonces, ser
definida como la velocidad y cantidad (tasa y grado
de disponibilidad) con la cual el principio activo es
absorbido desde la forma farmacutica y se encuentra disponible en forma inalterada en la circulacin
general. Se asume, en consecuencia, que en un
mismo individuo, una concentracin plasmtica
esencialmente similar en el curso del tiempo, resultar en una concentracin esencialmente similar en
el sitio de accin.
Bioequivalencia
Dos productos farmacuticos son bioequivalentes si son equivalentes farmacuticos o alternativas
farmacuticas y su biodisponibilidad (tasa y grado
de disponibilidad), despus de su administracin en
la misma dosis molar, es semejante a tal punto que
cabe prever que sus efectos sern esencialmente los
mismos. La Bioequivalencia se focaliza sobre la
equivalencia de la liberacin de principio activo
TEMPERATURA
HUMEDAD
TIEMPOS MNIMOS
25 2 C
60 5 %
12 meses
Estudios acelerados
40 2 C
75 5 %
6 meses
Actualizacin total
pio activo se produzca durante un perodo prolongado de tiempo despus de la administracin. Las
expresiones como liberacin extendida, accin
prolongada, accin repetida y liberacin sostenida
tambin se emplean para describir tales formas
farmacuticas. Sin embargo, el trmino liberacin
prolongada se emplea para los fines farmacopeicos
y los requisitos para la liberacin de principios
activos se especifican en las monografas correspondientes.
CREMAS
Son formas farmacuticas semislidas emulsionadas que contienen uno o varios principios activos
y hasta un 80 % de agua. Este trmino se ha aplicado tradicionalmente a los semislidos que poseen
una consistencia relativamente fluida formulados ya
sea como una emulsin agua en aceite o aceite en
agua. Sin embargo, ms recientemente el trmino
ha estado restringido a los productos que consisten
en emulsiones aceite en agua o dispersiones acuosas
microcristalinas de cidos grasos o alcoholes de
cadena larga que son fcilmente lavables, cosmtica
y estticamente ms aceptables.
ELIXIRES
Ver Soluciones.
EMULSIONES
Son sistemas de al menos dos fases en los cuales
un lquido se dispersa en otro lquido en la forma de
glbulos o gotitas pequeas. Cuando el aceite es la
fase dispersa y la fase continua es la acuosa, el
sistema se designa como una emulsin aceite en
agua. Por el contrario, cuando el agua o una solucin acuosa es la fase dispersa y un aceite o material oleoso es la fase continua, el sistema se designa
como una emulsin agua en aceite. Las emulsiones
se estabilizan mediante agentes que impiden la
coalescencia.
En las emulsiones aceite en agua, se agregan
polmeros hidroflicos naturales o sintticos junto
con los agentes tensioactivos. Estas sustancias se
acumulan en la interfase y aumentan la viscosidad
de la fase acuosa por lo cual disminuyen la velocidad de la formacin de agregados.
Todas las emulsiones requieren un agente antimicrobiano porque la fase acuosa es favorable al
crecimiento de los microorganismos.
EXTRACTOS
Son formas farmacuticas lquidas, semislidas
y plsticas o slidas y pulverulentas, obtenidas por
agotamiento de drogas vegetales o animales con
solventes apropiados, que luego se evaporan parcial
% de desviacin
15
10
7,5
UNGENTOS
Son preparaciones semislidas destinadas para
la aplicacin externa sobre la piel o mucosas y que
emplean como vehculo grasas y/o resinas.
Existen diversos tipos de bases para ungentos.
La eleccin de la base depende de muchos factores,
como la accin deseada, la naturaleza del principio
activo a incorporar, su biodisponibilidad, la estabilidad y el perodo mximo de vida til requerido
para el producto terminado. Los principios activos
que se hidrolizan rpidamente, son ms estables en
bases constituidas por hidrocarburos que en bases
que contengan agua, aunque pueden ser ms efectivas
en
estas
ltimas.
ej.:
Manejo teraputico:
1.
Tratamiento de la causa.
2.
3.
Tratamiento farmacolgico:
La OMS propone una escalera para el
tratamiento farmacolgico adecuado:
1.
3.1.
Primera
Opcin:
Baclofeno,
Butilbromuro de Hioscina, Diazepam, Haloperidol
c)
adyuvantes
(ej.:
antidepresivos,
anticonvulsivantes,
corticosteroides;
laxantes,
antiemticos, psicoestimulantes)
3.2. Segunda
Levomepromazina
Opcin:
Midazolam,
1. Analgsicos Primarios
Primera
Opcin:
Paracetamol,
Codena,
1.2.1.2.
Oxicodona
Morfina,
Fuertes:
Opcin:
Dexametasona,
Amitriptilina,
Clonazepam,
FORMULACIONES
MORFINA 2 %
SOLUCIN ORAL
Morfina Clorhidrato........................2,00 g
Metilparabeno.................................0,10 g
Sorbitol 70%.................25,0 ml
Agua Destilada c.s.p.........100,0 ml
CLORPROMAZINA E HIDROCORTISONA
CREMA
Simeticona Lquida................................15,0 ml
Hidrxido de Aluminio............................1,5 g
Carboximetilcelulosa...........0,8 g
Tween 20.....................0,1 ml
Glicerina......................5,0 ml
Sorbitol 70% .....................20,0 ml
Esencia de Frambuesa......................0,1 ml
Metilparabeno......0,1 g
Rojo Punz......................0,5 mg
Sacarina Sdica...............0,2 g
Agua Destilada c.s.p....100,0 ml
Clorpromazina..................................0,20 g
Acetato de Hidrocortisona........................0,25 g
Cera Lanette sx...............10,00 g
Vaselina Lquida.........4,0 ml
Metilparabeno....................................0,10 g
Propilenglicol........................................12,0 ml
la impureza, si la hubiera.
Las impurezas
indicadoras pueden incluir algunas impurezas o
productos de degradacin vinculados con el proceso
y suministran informacin clave acerca del mismo,
como por ej., sustancias diazotables en tiazidas. El
elaborador tiene la responsabilidad de suministrar
datos que apoyen la clasificacin de tales impurezas
como impurezas indicadoras en lugar de impurezas
comunes.
Impurezas comunes - Las impurezas comunes
son aquellas especies, presentes en materias primas
empleadas en la preparacin de medicamentos, que
son inocuas por no tener significativa actividad
biolgica indeseable en las cantidades en que se
presentan. Estas impurezas pueden surgir de la
sntesis, la preparacin o degradacin de productos
farmacopeicos.
Los ensayos y va loraciones
seleccionadas admiten cantidades de impurezas que
no son objetables para el uso normal del producto.
La presencia de impurezas comunes se controla en
las monografas correspondientes de esta
Farmacopea por medio del ensayo para Impurezas
comunes <510>.
Los ensayos para detectar
sustancias relacionadas o pureza cromatogrfica
tambin pueden controlar la presencia de impurezas
comunes.
A menos que se especifique de otro modo en la
monografa correspondiente, la estimacin de la
cantidad y nmero de impurezas comunes se hace
por mtodos relativos en vez de la comparacin
directa contra Sustancias de referencia especficas.
Se ha seleccionado el valor de 2,0 % como
lmite general en impurezas comunes en las
monografas correspondientes donde los datos
disponibles no permitieron la adopcin de otros
valores. Este valor representa el mximo impacto
permitido para esta fuente de variacin.
Cuando una monografa fija los lmites sobre
componentes concomitantes, impurezas indicadoras
y/o impurezas txicas, estas especies no se incluirn
en la estimacin de impurezas comunes, a menos
que as se especifique en la monografa
correspondiente.
100 ml
Acido sulfrico
1.500 ml
Disolver el dicromato de sodio en agua y
lentamente agregar, con agitacin, el cido
sulfrico. Preparar esta mezcla en un vaso de
precipitados de vidrio al borosilicato de 2 litros,
1095. POLIMORFISMO
Consideraciones generales
Se entiende por Polimorfismo a la capacidad de
un compuesto en estado slido de existir en dos o
ms formas cristalinas que tienen la misma
composicin qumica. Las sustancias que existen
en estado slido no-cristalino, son llamadas
amorfas.
Cuando este fenmeno es observado para un
elemento qumico (por ejemplo azu fre),
corresponde usar el trmino alotropa en lugar de
polimorfismo.
El trmino pseudopolimorfismo se suele utilizar
para describir solvatos (incluyendo hidratos)
cuando un solvente se halla presente en la matriz
cristalina en proporciones estequiomtricas; el
mbito puede tambin extenderse incluyendo
compuestos en los cuales el solvente est atrapado
en la matriz en proporciones variables. Dado que el
trmino pseudopolimorfismo es ambiguo debido a
su uso en diferentes circunstancias, adems de las
precedentemente mencionadas, es preferible usar
los vocablos solvatos e hidratos.
Cuando se indique que la sustancia Presenta
polimorfismo, convencionalmente se involucra a
cualquiera de las siguientes posibilidades:
polimorfismo cristalino, solvatos, hidratos, formas
amorfas o alotropa.
Aspectos Termodinmicos
Cuando un compuesto exibe polimorfismo, la
forma termodinmicamente ms estable a una
determinada temperatura y presin es la que
presenta menor energa libre. Las otras formas son
estados metaestables. A temperatura y presin
normales, una forma metaestable puede permanecer
inalterada
o
transformarse
en
otra
termodinmicamente ms estable. Este proceso
puede ser lento o veloz, en funcin de la cintica
del mismo.
La relacin de transformacin entre un par de
polimorfos de una sustancia en un determinado
intervalo de temperatura puede ser enantiotrpica o
monotrpica:
a) Es enantiotrpica cuando puede
dividirse
dicho
intervalo
de
temperatura
en
dos
zonas
consecutivas, separadas por la
temperatura de transicin, siendo una
de las formas polimrficas estable y la
otra metaestable en la primera zona,
mientras que en la segunda zona esa
relacin de estabilidad se invierte (las
formas estable y metaestable en la
ndice de refraccin
Diagramas de fase
Densidad
Dureza
Resistencia mecnica
Conductividad electroltica
Dilatabilidad
Propiedades
superficiales
(tensin
superficial, adsortibilidad, humectabilidad,
cargas elctricas superficiales, etc.)
Solubilidad aparente*
Reactividad qumica al estado slido
Estabilidad a los estmulos mecnicos
(humedad, radiacin, calor, etc.)
Estabilidad
Caractersticas inherentes al polvo y/o
granulado
(densidad,
reologa,
compactacin, etc.)
Caractersticas inherentes a las formas
farmacuticas
(dureza,
plasticidad,
porosidad, craqueabilidad, elasticidad,
etc.)
Formulacin;
Diseo del proceso de fabricacin;
Adecuacin de los anlisis
Estabilidad
(condiciones
de
almacenamiento,
vencimiento,
envasado y otros).
Anlisis
Microcalorimetra
Espectrofotometra
de
Absorcin
Infrarroja <460>
Espectrometra Raman
Medicin de densidad
Estas tcnicas son a menudo complementarias y
es indispensable usar varias de ellas para una
tipificacin.
Para hidratos y solvatos, son recomendables las
tcnicas de Calorimetra Diferencial de Barrido,
Termomicroscopa
y
Termogravimetra,
combinadas con mediciones de Solubilidad,
Velocidad de Disolucin Intrnseca y Difraccin de
Rayos
X.
e)
f)
de
alta
Categora I
Categora II
Categora III
Categora IV
Cuantitativo
Ensayo lmite
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+