Prueba

Carbohidratos I
Fermentacin
de
carbohidratos

Medio de
Cultivo

Base de Rojo
Fenol y el
carbohidrato:
Lactosa
Sacarosa
Dextrosa
Manitol

Propsito

Triple Sugar
Iron Agar
(TSIA)

Tratamiento
PostIncubacin

loop
Determinar si la
bacteria puede
utilizar ese
carbohidrato en
especfico.

*Tubo
Durham

Carbohidratos
II
Prueba de las
tres azcares y
hierro

Inoculacin e
Incubacin

Ninguno

24-48 hrs. / 37C

1. Ver el patrn
de fermentacin
de la bacteria.
2. Ver la
produccin de
gases.
3. Observar la
produccin de
H2S.

Primero estriado
con el loop y
luego una
estocada hasta el
fondo con la
aguja recta.

Protenas,
Aminocidos y
Enzimas

Rojo de Metilo
y VogesProskauer

Utilizacin de
Citrato

SIM
(SulfideIndoleMotility)

Caldo MRVP

Simmons
Citrate

1. Rojo de
Metilo:
Determinar la
habilidad de las
bacterias para
producir y
mantener
sustancias
cidas.
2. VogesProskauer:
Determinar la
capacidad de
transformar
sustancias
acdicas a no
acdicas.

Determinar si la
bacteria utiliza
citrato como
nica fuente de
carbono.

Positivo
El medio se ve
amarillo =
produccin de
cidos a partir de
la fermentacin =
utilizacin del
carbohidrato.
*Puede haber
produccin de
gases
(acumulacin de
gases en el tubo
Durham)
Utilizacin de
glucosa:

Ninguno

amarillo

Estocada hasta el
fondo con aguja
recta.
1. 2-3 gotas
del reactivo de
Kovac
37C
24 hrs.:
Motilidad y H2S
48 hrs.: Indol
loop

A las 48 horas,
se divide el
cultivo en dos:

37C

1. Rojo de
metilo:
Incubadora
hasta los 7
das. Luego se
aaden 5 gotas
de rojo de
metilo.

2. VogesProskauer: 48
horas

2. VogesProskauer: se
aaden 10
gotas de naphtol y 5
gotas de KOH
40%. Esperar
30 min.

Estriado
con loop
Ninguno
24-48 hrs. / 37C

El medio se ve
rojo (pH se
qued igual o
aument). Se
producen
sustancias
alcalinas. La
bacteria utiliz
peptonas.
Utilizacin de
peptonas (no
fermenta azcar)

amarillo
Utilizacin de
lactosa y/o
sacarosa
amarillo

1. Rojo de
metilo: 7 das

Negativo

rojo

24 hrs. / 37C
1. Determinar si
la bacteria puede
degradar
triptfano a indol
a travs de
triptofanasa.
2. Determinar
produccin de
H2S.
3. Determinar si
la bacteria es
mvil.

Resultados

Fondo oscuro:
produccin de
H2S

1. Rojo: presencia
de indol (el
triptfano fue
degradado)
2. Color negro
(Presencia de H2S)
3. Difuminacin
del crecimiento de
la bacteria hacia
los lados
(Movilidad)

1. Amarillo (la
bacteria no
puede degradar
el triptfano)
2. El medio se
queda igual.
3. La bacteria
slo crece en la
lnea de
inoculacin (no
mvil).

1. Rojo =
presencia de cido
(pH 4)

1. Amarillo = el
cido fue
transformado a
sustancias no
acdicas (pH 6)

2. Color rosa

2. Marrn claro

Azul = indica
condiciones
alcalinas = cuando
el cido ctrico se
metaboliza, se
produce amonio y
Na+

Permanece color
verde

Prueba

Hidrlisis de
gelatina

Medio de
Cultivo

Propsito

Agar
nutritivo con
gelatina
(Nutrient
Gelatine)

Determinar la
produccin de la
exoenzima
gelatinasa.

Agar
nutritivo
(Nutrient
Agar)

Determinar si la
bacteria posee la
enzima catalasa.

Inoculacin e
Incubacin

Tratamiento
PostIncubacin

Estocada hasta el
fondo.

Resultados
Positivo

Negativo

Colocar en
nevera (30
min.)

La gelatina se
mantiene lquida
al sacarla de la
nevera.

La gelatina se
solidifica

2 3 gotas de
H2O2 a una
colonia

Efervescencia

Se queda igual

Azul / prpura (El

cambio es notable
en menos de 15
segundos)

Se queda igual

Rosa intenso

El medio se
queda igual

24-48 hrs. / 37C

Catalasa

Oxidasa

24-48 hrs. / 37C

(H2O2 H2O + O2)

Agar
nutritivo
(Nutrient
Agar)

Determinar la
presencia de la
enzima oxidasa.

Caldo de
urea

Determinar si la
bacteria degrada
urea.

24-48 hrs. / 37C

Se toma
muestra del
cultivo con un
swab estril.
Se aade 1
gota del
reactivo de
oxidasa al
swab

loop
Ureasa

Ninguno
24-48 hrs. / 37C

Reduccin de
Nitratos a
Nitritos

Fermentacin
de Manitol

Gram negativas
y Fermentacin
de lactosa

Agar de
Nitrato
(Nitrate
Agar)

Mannitol Salt
Agar (MSA)

Mc Conkey
Agar

Determinar si la
bacteria tiene la
capacidad de
reducir los
nitratos a nitritos

Determinar si la
bacteria puede
crecer en altas
concentraciones
de sales.
Determinar si
puede fermentar
el manitol.

Determinar si la
bacteria es Gram
negativo y
fermentadora de
lactosa.

Estriado en agar
inclinado

24-48 hrs. / 37C

Estriado

1 gota de cido
sulfanlico
1 gota de naphtilamina
En caso que d
negativo, se
aade una
pizca de polvo
de zinc.

Mc Conkey

Ninguno
MSA

Almidn

Rojo al aadir los

primeros dos
reactivos.

El medio se torna
color amarillo =
Fermentacin del
manitol.
(Posiblemente es
S. aureus)

24-48 hrs./ 37C

Estriado
Mc Conkey

Ninguno
MSA

Almidn

1. Presencia de
colonias =
crecimiento de
Gram negativas

El medio se
queda igual.
Luego del polvo
de zinc, cambia a
rojo.

El medio se
queda igual
(rojo).

1. No hubo
crecimiento (No
es Gram
negativa)

2. Colonias rojas o
rosadas =
Fermenta lactosa

2. Colonia
blanca o incolora
= No fermenta
lactosa.

rea clara
alrededor del
cultivo

Color negro
alrededor del
cultivo

24-48 hrs./ 37C

Aguja recta
Mc Conkey

Hidrlisis de
almidn

Agar de
almidn
(Starch
Agar)

Produccin de la
exoenzima
-amilasa
MSA

Almidn

2 a 3 gotas de
Yodo, que
cubran todo el
cultivo

24-48 h/37C
lco