Centrifugacin

La centrifugacin es operacin unitaria de separacin de partculas que se basa

en la distinta velocidad de desplazamiento de las partculas en un medio
lquido al ser sometidas a un campo centrfugo. Cuando se centrifuga una
solucin, se rompe la homogeneidad y se produce la separacin del soluto y
del disolvente. Las primeras partculas en sedimentar son las de mayor masa
partculas son muy pequeas, entonces existe el movimiento Browniano, y por
tanto la sedimentacin se vuelve lenta; para ello es necesario el uso de otra
fuerza denominada fuerza centrifuga para partculas menores de 0.1 um.
Los componentes ms densos de la mezcla se desplazan fuera del eje de
rotacin de la centrfuga, mientras que los componentes menos densos de la
mezcla se desplazan hacia el eje de rotacin. De esta manera los qumicos y
bilogos pueden aumentar la fuerza de gravedad efectiva en un tubo de
ensayo para producir una precipitacin del sedimento en la base del tubo de
ensayo de manera ms rpida y completa.
El objetivo de la centrifugacin es separar slidos insolubles (de partculas muy
pequeas difciles de sedimentar) de un lquido. Para ello, se aplica un fuerte
campo centrfugo, con lo cual las partculas tendern a desplazarse a travs del
medio en el que se encuentren con la aceleracin = velocidad angular2 x radio
Figura 1 esquema bsico del resultado de la centrifugacin

Fuerzas que se desarrollan en la Separacin por centrifugacin

Los separadores centrfugos se basan en el principio comn de que la rotacin
de un objeto en torno a un eje o punto central, a una distancia radial constante
desde dicho punto, produce una fuerza que acta sobre dicho objeto. El objeto
que gira en torno al eje cambia de direccin constantemente, con lo cual se
produce una aceleracin aun cuando la velocidad rotacional sea constante.
Esta fuerza centrpeta esta dirigida hacia el centro de la rotacin
Si el objeto que se hace girar es un recipiente cilndrico, el contenido de fluidos
y slidos desarrolla una fuerza igual y opuesta, llamada fuerza centrifuga,
hacia las paredes del recipiente. Esta causa la sedimentacin o precipitacin de
las partculas a travs de una capa de liquido, o la filtracin de un liquido a
travs de un lecho o torta de filtrado en el interior de una cmara de rotacin
perforada

Tipos de centrifugacin

Centrifugacin diferencial: Se basa en la diferencia en la densidad de las

molculas. Esta diferencia debe ser grande para que sea observada al
centrifugar. Las partculas que posean densidades similares
sedimentarn juntas. Este mtodo es inespecfico, por lo que se usa
como centrifugacin preparativa para separar componentes en la mezcla
(por ejemplo, para separar mitocondrias de ncleos y membrana) pero
no es til para separar molculas.

Centrifugacin isopcnica: Partculas con el mismo coeficiente de

sedimentacin se separan al usar medios de diferente densidad. Se usa
para la separacin de ADN con mucha frecuencia.

Centrifugacin zonal: Las partculas se separan por la diferencia en la

velocidad de sedimentacin a causa de la diferencia de masa de cada
una. La muestra se coloca encima de un gradiente de densidad
preformado. Por la fuerza centrfuga las partculas sedimentan a distinta
velocidad a travs del gradiente de densidad segn su masa. Se debe
tener en cuenta el tiempo de centrifugacin ya que si se excede, todas
las molculas podran sedimentar en el fondo del tubo de ensayo.

Ultracentrifugacin:
Permite
estudiar
las
caractersticas
de
sedimentacin
de
estructuras
subcelulares
(lisosomas, ribosomas y microsomas) y biomolculas. Utiliza rotores
(fijos o de columpio) y sistemas de monitoreo. Existen diferentes
maneras de monitorear la sedimentacin de las partculas en la
ultracentrifugacin,
el
ms
comn
de
ellos
mediante
luz ultravioleta o interferones.

Equipos para centrifugacin

Centrifugacin Diferencial o Fraccionada

Centrifugacin en gradiente de densidad

A Centrifugacin de equilibrio en gradiente o isopicnica

B) Centrifugacin Zonal