Bioqumica heptica

(VII) Metabolismo heptico de xenobiticos.

Las reacciones hepticas de detoxificacin

Prof. J.V. Castell

Al ingerir alimentos, absorbemos muchos

compuestos que no tienen valor nutritivo
para nuestro organismo...

INGREDIENTES: Harina de trigo, Agua, Aceite

Vegetal, Levadura, Azcar, Sal, Suero Lcteo,
Emulgentes (E(E-471 y EE-481), Conservantes (E(E-281
y E 202), Vinagre y Estabilizador (E412).
(E

INGREDIENTES:
FLAN:AZUCAR, FECULA,
ESTABILIZANTES Y
ESPESANTES (E
E-410 EE-407),
407
SAL, VAINILLA Y COLORANTES
ARTIFICIALES AUTORIZADOS
(E(E-102 EE-110).
CARAMELO LIQUIDO:
GLUCOSA LIQUIDA, AZUCAR Y
CONSERVANTE (E(E-211)

Algunos de los compuestos ingeridos, podran

llegar a ser txicos si el organismo no los
eliminase y se acumulasen en l...
Lo mismo cabe decir de compuestos
endgenos y exgenos administrados con
fines teraputicos...

Algunos de los compuestos ingeridos, podran llegar a ser

txicos si el organismo no los eliminase y se acumulasen en l...

ENDOBIOTICOS
TOXICOS
ATOXICOS

XENOBIOTICOS

TERAPEUTICOS

NUTRIENTES

Biotransformacinpor qu
RESPIRACI
RESPIRACIN
Voltiles

LipoLipo-soluble
soluble?

XENOBIOTICOS
BIOTRANSFORMACION

Hidro-soluble
ORINA

HECES
SUDOR

Cmo se biotransforman los

xenobiticos...

FASE I

XENOBIOTICOS

ELIMINACIN

FASE II

El metabolismo de xenobiticos por el hgado...

Xenobi
Xenobitico (RH)
Fase I

ROH

Fase II

R-O-Conj

Finalidad:
Finalidad: aumentar la
polaridad de las
mol
molculas,
introduciendo nuevos
grupos funcionales

Finalidad:
Finalidad: aumentar
su solubilidad en
agua, inactivaci
inactivacin de
su actividad biol
biolgica

Eliminaci
Eliminacin por la sangre / bilis

Reacci
Reaccin de Fase I:
I reacciones en las que se introducen nuevos grupos
funcionales en la molcula aumentando su polaridad y reactividad

Reacci
Reaccin de Fase II:
II Conjugacin con molculas endgenas de la clula,
por ej. cido glucornico, aumentando notablemente su solubilidad

Biotransformaci
Biotransformacin de xenobi
xenobiticos

Fase I

Hidroxilacin
Epoxidacin
Desalquilacin
Desaminacin
S- y N-oxidacin

Fase II

no
sti
e
t
In Piel

Hgado

Pulmones
Rin

Glucuronidacin
Glucosidacin
Sulfatacin
Metilacin
Acetilacin
Conjug. con GSH
Conjug. con aminocidos
Vas de eliminacin de los metabolitos
Metabolitos

Eliminaci
Eliminacin
(detoxificacin)

Canalculo biliar
Sinusoide

Ret
Retculo
endopl
endoplsmico

Frmaco

Por qu enzimas?
3. Enzimas microsomales extrahep
extrahepticos
(P450, FMN monooxigenasas

1. Enzimas hep
hepticos microsomales
(P450, FMN monooxigenasas)

2. Enzimas hep
hepticos nono-microsomales:
Alcohol/ aldeh
aldehdo deshidrogenasa hidrolasas,
reductasas (Fase
(Fase I)
I)
Acetil transferasas, sulfato transferasas, GSH
transferasas, glucoronil transferasas (Fase
(Fase II)
II)

Reacciones de biotransformacin de Fase I

P450
monooxigenasas

Peroxidasas
Deshidrogenasas
NADPH reductasas
Esterasas

FMN oxigenasas

Tipos de reacciones catalizadas por el citocromo P450

Hidroxilacin
aromtica

Hidroxilacin
aliftica

N-Dealquilacin

O-Dealquilacin
Deaminacin
N-Oxidacin
Sulfoxidacin

El citocromo P450
Hemoprotena. Absorbancia a 450 nm (forma Fe++)
Una cadena de 35-45 KDa y grupo prosttico heme
Asociado a otros componentes en la membrana del
retculo endoplsmico
Actividad monooxigenasa
Baja especificidad de substrato

Hemoprotenas implicadas en reacciones de oxidacin

Oxigenasas
O2
R + O2 RO
OH + H2 O + D
RH + O2 +DH2 R-O

Dioxigenasas
Monooxigenasas

Oxidasas
RH2 + O2 R + H2O2 (2 )
2 RH2 + O2 2 R + H2O (4 )

Peroxidasas
ROOH +2DH2 R-OH + 2 DH + H2O

Estequiometra de la actividad
monooxigenasa del Citocromo P450

RH + NADPH + H+ + O2 R-OH + NADP+ + H2O

Origen de los electrones en la reacciones

de oxidacin catalizadas por P450
dadores de

O2

NAD(P)H

Xenobitico
(reducido)

P450 Reductasa

P450

FADH
FMNH

Redoxina Fe/S

Xenobitico
(oxidado)
oxidado)

H2O

Reacciones catalizadas por el citocromo P450

O2

dadores de
NAD(P)H

Xenobitico
(reducido)

P450 Reductasa

P450

FADH
FMNH

Xenobitico
(oxididado)
oxididado)

H2O

Redoxina Fe/S

RH + NADPH + H+ + O2 R-OH + NADP+ + H2O

OH

Producto

Substrato
Fe3+

s
OH

Substrato

P450

Fe3+

Fe3+

Substrato

P450

P450

e-

r
H

Substrato

Mecanismo de la
catlisis
por el citocromo P450

3+O)
(Fe
(FeO)

P450
P450

CitP450
Reductasa

Substrato

Fe2+

P450

H2O
H

q
H+

Substrato
Fe2+OOH

Substrato

H+

e-

P450

O2

Fe2+ O2
P450

Cit-b5

10

Componentes del sistema P450

Citoplasma
NADPH

e-

H2O

O2

Citocromo
P450
reductasa
FMN

e-

Fe2+/Fe3+

FAD

Citocromo b5

P450

Retculo endoplsmico

R-OH

Citoplasma

Nomenclatura del P450

Superfamilia de genes constituida por familias y
subfamilias
FAMILIA:
FAMILIA: homolog
homologa del
40% aa

CYP 1 A 2

NUMERO del gen

SUBFAMILIA:
SUBFAMILIA: homolog
homologa
del 5555-60 % aa

11

Isoenzimas del Citocromo P450

Familias
1

3A3
3A4
3A5 4A9 4B1 4F2
4F3
3A7 4A11

Subfamilias
1A1

1B1

1A2

11

17

19

21

24

27

21A2
11A1

11B1
11B2

2A6 2B6 2C8 2D6 2E1 2F1

2A7
2C9
2C10
2C18
2C19

Abundancia relativa y variabilidad de los CYPs implicados

en el metabolismo humanos de frmacos y xenobiticos
CYP
1A2
1B1
2A6
2B6
2C
2D6
2E1
3A4

Abundancia

Grado de variabilidad

(% total)

~ 13
<1
~4
<1
~18
Hasta 2.5
Hasta 7
Hasta 28

~40-x
~30 - 100-x
~50-x
25-100-x
>1000-x
~20-x
~20-x

2E

S. Rendic & F.J. DiCarlo, Drug Metab Rev 29:413-80, 1997

12

Los CYPs tambin se expresan en tejido extraheptico

CYP
1A1

Tejido
Pulmn, rin, intestino, piel, placenta

1B1
2A6
2B6
2C
2D6
2E1
3A

Piel, rin, prstata, glndula mamaria

Pulmn, epitelio nasal
Intestino, pulmn
Intestino delgado, laringe, pulmn
Intestino
Pulmn, placenta
Intestino, pulmn, placenta, feto, utero, rin

S. Rendic & F.J. DiCarlo, Drug Metab Rev 29:413-80, 1997

Enzimas de Conjugacin
Glucoronidacin (UDP-GT)
1-naphtol
morphine

Conjugacin con GSH (GSH-T)

GSH-T (subunidades 1 and 2)
GSH-T (subunidades 3 and 4)
GSH-T (subunidad 7)

Sulfotransferasas
Phenol ST (ST1A1)
N-hydroxy acetaminofluorene (ST1C1), estrogen sulfotransferase (ST1E2)
hydroxyesteroid sulfotransferases (ST 20-21, ST 40-41, ST 60)

13

Reacciones de formaci
formacin y conjugaci
conjugacin del cido glucor
glucornico

G1P + UTP UDP-G

UDP-G UDP-GA
COOH

Enzima: UGT 1A1

R-OH
OH + UDP-GA R-O
O-GA
R-COOH
COOH + UDP-GA R-CO-O
O-GA

COOH

COOH

-R

-COCO-R

Conjugaci
Conjugacin con GSH y formaci
formacin de derivados del cido mercapt
mercaptrico

1. Glutation S-transferasa

2. -glutamiltranspeptidasa

3. cisteinil glicinase:

4. N-acetil transferasa

14

Conjugacin con sulfato

Fosfoadenosil fosfosulfato
(PAPS)

Diferencias en la expresin de genes CYP no polimrficos

CYP2B6

22 20 18 19 21 16 11 7 17 1

5 12 8

4 13 6 10 9

2 14

BROD ACTIVITY
(pmol/mg x min)

MROD ACTIVITY
(pmol/mg x min)

CYP1A2
70
60
50
40
30
20
10
0

25
20
15
10
5
0
4

1 17 7 12 16 14 2 11 8

TEST ACTIVITY
(pmol/mg x min)

CLZX ACTIVITY
(pmol/mg x min)

40000
30000
20000
10000
0
2 13 3 14 1

8 17 7

Liver N

9 19 13 18 5 10 22 20 21

CYP3A4

CYP2E1

4 10 11 9

Liver N

Patient N

6 16 5 19 20 18 21 22

5000
4000
3000
2000
1000
0
1 17 8

7 11 5 10 6

2 12 16 21 22 19 18 3 20 14

Liver N

La variabilidad es mas bien la norma, antes que la excepci

excepcin...!

15

Variabilidad del Citocromo P450

GENOTIPO + Factores ambientales = FENOTIPO

Polimorfismos gen
genticos

Variabilidad en

Edad

los niveles de
enzimas

Sexo
Raza

Diferencias en el

Dieta, estado
nutricional

metabolismo

Diferencias en la

Estados
patolgicos

farmacocin
farmacocintica

Inductores
enzimticos

Un ejemplo: el polimorfismo del CYP2D6

Metabolismo de la debrisoquina
- El 7% de la poblacin muestra una metabolizacin deficiente
- Herencia autosomal recesiva
- Afecta al metabolismo de 25 frmacos de uso comn

% Poblacin

Debrisoquina

CYP2D6

4-Hydroxydebrisoquina

Metabolizadores
Rpidos
Metabolizadores
Lentos

Significantes diferencias en
el metabolismo del frmaco

Debrisoquina 4-hidroxylasa

16

Polimorfismos del P450

Causa del polimorfismo

Consecuencia

No se expresa el gen
Defecto parcial
Alteracin funcional
Varias copias del gen

Ausencia de metabolizacin
Descenso de la metabolizacin
Alteracin de la especificidad
Aumento de la metabolizacin

Otros
polimorfismos
frecuentes

Isoenzima P450
Frecuencia de la mutaci
mutacin
CYP2A6
5%
CYP2C9
20%
CYP2C19
10%
CYP2D6
23%
CYP2E1
2% (*)
Enzimas de Fase II
NAT-1/2
35%
GST(M1/T1/M3/P1/A2)
5-50%
UDP-GT
?

Factores ambientales que influencian la actividad de los CYPs

Nutricin

1A1;1A2;2E1; 3A3; 3A4,5

Tabaco

1A1;1A2

Alcohol

2E1

1A1,1A2; 2A6; 2B6; 2C;

2D6; 3A3, 3A4,5
1A1,1A2; 2A6; 1B; 2E1;
Medioambientales
3A3, 3A4,5
Frmacos

Rojo enzimas relevantes en el metabolismo de frmacos

S. Rendic & F. J. Di Carlo Drug Metab Rev 29: 413-580, 1997

17

Las diferencias en el fenotipo de los enzimas

metabolizantes de frmacos y sus consecuencias
Toxicidad debida a
una dosis excesiva

CYP

Metabolizador lento

Eficacia
terap
teraputica

CYP

Normal

Ineficacia
terap
teraputica

CYP

Metabolizador r
rpido

Consecuencias del polimorfismo del CYP

1. Diferencias en la farmacocintica: biodisponibilidad,
vida media
2. Farmacodinmicas: respuesta exagerada, ineficacia
teraputica
3. Interacciones medicamentosas
4. Produccin anormal de metabolitos txicos

18

Interaccin frmaco-frmaco

?+
A

A1 + A2

Frmaco B

Frmaco A

El metabolismo de uno de
los f
frmacos puede verse
sensiblemente afectado
por la presencia de otro
que comparta el mimo
enzima o grupo de enzimas
para su metabolizaci
metabolizacin

B1 + B2

B1 + B2

A1 + A2

B1 + B2

A1 + A2

CONCENTRACIN de A

Interaccin frmaco-frmaco
A+B
Toxicidad

Ventana terap
teraputica

Ineficacia

TIEMPO
La concentracin plasmtica del frmaco A puede elevarse en presencia del frmaco B
causando efectos txicos

19

Efecto de flavonoides presentes en el zumo de pomelo sobre

el metabolismo de frmacos

5mg + zumo

control

Cl

CH 3 O 2 C
CH 3

N
H

Cl

Cl
CO 2 CH 3

3A4

Cl
CO 2 CH 3

CH 3 O 2 C

CH 3

CH 3

CH 3

D.G. Bailey, et al.; Br J Clin Pharmacol 1998, 46:101-110

Inhibidores de CYP3A4

HN

H
N

S
N

H
N
Cim etidine

N
N

Cl
N

Clotrim azole

Cl
Cl

O
O
O

Ketoconazole

20

El fenmeno de la induccin enzimtica

Qu es...?
Qu trascendencia tiene...?

20
18
16
14
12
10
8
6
4
2
0

M C 2uM
P b 2m M

5
3A

3A

1
2

6
2D

19
2C

9
2C

6
2A

2
1A

on

tr

ol

R if 5 0 u M

Times Induction over control

Induction of MC, Pb, Rif

(Human hepatocytes; incubation 48h)

21

B (Cyp 4A)
x

PXR

AhR

PPAR

CAR

Hsp90
AhR

Sp1

C/EBP

Arnt

RXR

PXR

RXR

CAR

RXR

PPAR
PPAR

(Cyp 1A)

CAR

AhR

C (Cyp 3A)

Hsp90

A (Cyp 2B)

Cytosol

HNF-1

C/EBP

Nucleus

TATAA
HNF-3 C/EBP
(LAP)

CYP-promoter

SXR=PXR=PAR=PRR

El fenmeno de la induccin
enzimtica: por qu es relevante?
Si un compuesto acta como inductor enzimtico, la
expresin de ciertos enzimas de biotransformacin
aumentar tras la administracin repetida del compuesto.
Cambios en la expresin de enzimas de biotransformacin
influyen la farmacocintica de los frmacos
Un frmaco cuya farmacocintica cambia el el curso de su
administracin a un paciente es un frmaco de ms dificil
manejo clnico

22

Induccin del P450 - Importancia

Frmacos que inducen su propio metabolismo la
biotransformacin de otros frmacos en el hombre
Grupo farmacol
farmacolgico

Ejemplos

Analgsicos, antipirticos y
antiinflamatorios
Antibiticos
Anticonvulsivantes
Antifngicos
Antilipidmicos
Antimalricos
Diurticos
Psicotropos
Sedantes e hipnticos
Esteroides
Vitaminas

Antipirina
Fenilbutazona
Rifampicina
Carbamazepina, Fenitoina
Griseofulvina
Halofenato
Quinina
Espironolactona
Clorimipramina
Barbitricos
Testosterona
Vitamina C

Biotransformacin =
Detoxificacin?

23

Toxicidad como consecuencia del metabolismo...

Xenobi
Xenobitico (RH)
Phase I

Radicales & ROS

Metabolitos
electrof
electroflicos

ROH

Metabolitos t
txicos

Cell toxicity
Phase II

Conjugados
reactivos

R-O-Conj

Metabolitos t
txicos

Toxicidad para las c

clulas proximales

Xenobitico
Bioactivacin

Detoxificacin
Biotransformaci
Biotransformacin

Metabolito
nono-reactivo,
menos t
txico

Conjugaci
Conjugacin

Lpidos

Metabolito
reactivo

Prote
Protenas

DNA

Eliminaci
Eliminacin
Peroxidaci
Peroxidacin
de l
lpidos

Desnaturalizaci
Desnaturalizacin Genotoxicidad
Uni
Mutaciones
Unin covalente

24

Paracetamol

NHCOCH3

NHCOCH3
1. Conjugaci
Conjugacin
sulfato

2. Conjugaci
Conjugacin
Glucor
Glucornico

NHCOCH3

OH
3. Citocromo P450

OSO3H

NCOCH3

OC6H9O6

NHCOCH3
GSH

NHCOCH3

Uni
Unin Covalente a
prote
protenas hep
hepticas

SCH2 CHCOOH
O
OH
Acido Mercapt
Mercaptrico

N-Acetil-p-benzoquinona imina

Necrosis

Toxicidad hep
heptica del paracetamol
El paracetamol (acetaminofeno) es una analgsico muy bien tolerado, y de
toxicidad baja, que sin embargo puede ser fatal tras una sobredosis
El metabolismo del paracetamol es primariamente a travs de su conjugacin con
sulfato (1), pero dado que la capacidad del organismo es limitada, si se aumenta la
dosis de frmaco (1-2 g) se formarn tambin conjugados glucurnicos (2)
Si hay una sobredosis (>6g), cabe la posibilidad de que el frmaco de oxide (3) por
el CYP2E1, formndose el intermedio reactivo N-Acetil-p-benzoquinona imina
Este intermedio, ms reactivo y txico es conjugado con GSH y posteriormente
eliminado como un derivado del cido mercaptrico
En el caso de una sobredosis mayor (>10g), y dado que la capacidad de produccin
y conjugacin con GSH es limitada, el intermedio reactivo puede reaccionar con
grupos SH de protenas crticas, modificndolas (inactivndolas) y formando
aductos covalentes
Ello lleva a una necrosis del hepatocito que se manifiesta como una insuficiencia
heptica fatal
La administracin de precursores de GSH (N-acetilcistena) previene la toxicidad

25