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Morfognesis bacteriana
Miguel ngel de Pedro Montalbn
B 8
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Ingeniera de Virus
Mauricio Garca Mateu
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Estamos investigando mecanismos de evasin inmune utilizados por virus DNA de gran
tamao, poxvirus y herpesvirus. En concreto, estamos caracterizando una estrategia inmunomoduladora nica que consiste en la secrecin de protenas virales que unen citoquinas y quimioquinas, mediadores importantes de las respuestas inflamatoria e inmune.
Trababamos en dos sistemas virales: (1) Herpesvirus como el virus herpes simplex y el
citomegalovirus humano, que son patgenos humanos con relevancia clnica; y (2) Poxvirus como el virus vaccinia, la vacuna de la viruela, y el virus de la viruela, que caus la
nica enfermedad viral erradicada como resultado de una campaa global de vacunacin. Los receptores de citoquinas secretados probablemente contribuyen a la patognesis del virus de la viruela, que fue uno de los virus ms virulentos que ha conocido la
humanidad. La actividad inmunomoduladora de los receptores virales de citoquinas y su
contribucin a la patologa se estn estudiando en el modelo de mousepox. Esta es una
enfermedad parecida a la viruela humana que est causada por el virus ectromelia, un
patgeno natural del ratn, y es un modelo clsico de patognesis viral.
Los virus han optimizado durante millones de aos de evolucin su capacidad de manipular la respuesta inmune del hospedador. Los virus ofrecen una oportunidad nica para
desarrollar sus estrategias de evasin inmune como nuevas aproximaciones teraputicas para bloquear el dao causado por una respuesta inflamatoria descontrolada. En
colaboracin con compaas biotecnolgicas estamos trabajando en el desarrollo de protenas inmunomoduladoras virales como potenciales medicamentos para tratar alergias
y enfermedades autoinmunes causadas por reacciones inmunopatolgicas.
Los virus son las entidades biolgicas ms abundantes y diversas en la Tierra. Estamos
interesados en la caracterizacin molecular de comunidades virales complejas utilizando nuevas metodologas de secuenciacin masiva (Roche-454 Life Sciences). Hemos
descrito por primera vez la comunidad de virus en un lago de la Antrtida y estamos extendiendo estos estudios a otros lagos en la Pennsula Antrtica y en el rtico. Estamos
tambin interesados en utilizar las nuevas tecnologas de secuenciacin para identificar
virus asociados con patologas humanas, como la esclerosis mltiple.
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Antonio Alcami Pertejo
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Postdoctorales:
Ali Alejo Herberg
Abel Viejo Borbolla
Alberto Lpez Bueno
Daniel Rubio Muoz
Elena Merino Rodrguez
Soledad Blanco Chapinal
Imma Montanuy Sellart
Juan Alonso Lobo
Becarios Predoctorales:
Marcos Palomo Otero
Sergio Martn Pontejo
Nadia Martnez Martn
Carla Mavin
Haleh Heidarieh
Tcnicos de Investigacin:
Roco Martn Hernndez
Carolina Snchez Fernndez
Cientficos visitantes:
Joanne Devlin (University of
Melbourne, Australia)
Julia Fahel (Trinity College,
Dublin, Ireland)
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Waibler, Z., Anzaghe, M., Frenz, T., Schwantes, A., Phlmann, C., Ludwig, H., Palomo-Otero, M., Alcami, A., Sutter, G. and Kalinke,
U. (2009) Vaccinia virus-mediated inhibition of type I interferon responses is a multi-factorial process involving the soluble type I
interferon receptor B18 and intracellular components. J. Virol. 83, 1563-1570.
Carson, C., Antoniou, M., Ruiz-Argello, M. B., Alcami, A., Christodoulou, V., Messaritakis, I., Blackwell, J. M. and Courtenay, O.
(2009) A prime/boost DNA/Modified vaccinia virus Ankara vaccine expressing recombinant Leishmania DNA encoding TRYP is safe
and immunogenic in outbred dogs, the reservoir of zoonotic visceral leishmaniasis. Vaccine 27, 1080-1086.
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Alcami, A. and Saraiva, M. (2009) Chemokine binding proteins encoded by pathogens. Adv. Exp. Med. Biol. 666, 167-179.
Poole, E., Groves, I., Ho, Y., Benedict, C., Alcami, A. and Sinclair, J. (2009) Identification of TRIM23 as a co-factor involved in the
regulation of NFkB by the human cytomegalovirus gene product UL144. J. Virol. 83, 3581-3590.
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Alejo, A., Ruiz-Argello, M. B., Viejo, A., Saraiva, M., Fernndez de Marco, M. M., Salguero, J. and Alcami, A. (2009) Adaptation of
a transient dominant selection method to the generation of ectromelia virus recombinants: in vivo analysis of ectromelia virus CD30
deletion mutants. PLoS ONE 4(4):e5175.
Alcami, A. and Viejo-Borbolla, A (2009) Identification and characterization of virus-encoded chemokine binding proteins. Methods
Enzymol. 460, 173-191.
Shang, L., Thirunarayanan, N., Viejo-Borbolla, A., Martin, A. P., Bogunovic, M., Marchesi, F., Unkeless, J. C., Ho, Y., Furtado, G. C.,
Alcami, A., Merad, M., Mayer, L. and Lira, S. A. (2009) Expression of the chemokine binding protein M3 promotes marked changes in
the accumulation of specific leukocytes subsets within the intestine. Gastroenterology 137, 1006-1018.
Lpez-Bueno, A., Tamames, J., Velzquez, D., Moya, A., Quesada, A. and Alcami, A. (2009) High diversity of the viral community from
an Antarctic lake. Science 326, 858-861.
Alejo, A. and Alcami, A. (2010) Chemokine binding proteins as therapeutics. In: Leurs, R., Smit, M. and Lira, S. (eds) Chemokine
Receptors as Drug Targets. Wiley-VCH, Weinheim, Germany, pp.359-374.
Rubio, N., Palomo, M. and Alcami, A. (2010) Interferon a/b genes are upregulated in murine brain astrocytes after Theilers murine
encephalomyelitis virus infection. J. Interf. Cyt. Res. 30, 253-262.
Viejo-Borbolla, A., Muoz, A., Tabares, E. and Alcami, A. (2010) Glycoprotein G from pseudorabies virus binds to chemokines with
high affinity and inhibits their function. J. Gen. Virol. 91, 23-31.
Fernandez de Marco, M. M., Alejo, A., Hudson, P., Damon, I. K. and Alcami, A. (2010) The highly virulent variola and monkeypox
viruses express secreted inhibitors of type I interferon. FASEB J. 24, 1479-1488.
Alcami, A. and Lira, S. A. (2010) Modulation of chemokine activity by viruses. Curr. Opin. Immunol. 22, 482-487.
Alcami A. (2010) The interaction of viruses with host immune defenses. Curr. Opin. Microbiol. 13, 501-502.
Viejo-Borbolla, A., Martin, A. P., Muniz, L. R., Shang, L., Marchesi, F., Thirunarayanan, N., Harpaz, N., Garcia, R. A., Apostolaki, M.,
Furtado, G. C., Mayer, L., Kollias, G., Alcami, A. and Lira, S. A. (2010) Attenuation of TNF-driven murine ileitis by intestinal expression
of the viral immunomodulator CrmD. Mucosal Immunol. 3, 633-644.
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Devlin, J. M., Viejo-Borbolla, A., Browning, G. F., Noormohammadi, A. H., Gilkerson, J. R., Alcami, A. and Hartley, C. A. (2010)
Evaluation of immunological responses to a glycoprotein G deficient candidate vaccine strain of infectious laryngotracheitis virus.
Vaccine 28, 1325-1332.
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Consejero del World Health Organization Advisory Committee on Variola Virus Research
Editor de un nmero especial de Curr. Opin. Microbiol. sobre Interacciones microbiohospedador: Virus, vol. 13, agosto 2010
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Tesis Doctorales
La investigacin del laboratorio se centra principalmente en los mecanismos moleculares que operan en las enfermedades causadas por virus, as como en el diseo de virus
como posibles herramientas biolgicas anti-cncer. Empleamos como modelos experimentales el parvovirus diminuto del ratn (MVM) y el alfavirus Sindbis (SV). Entre los
temas que se han abordado recientemente, o son objeto de nuestro inters actual, destacan los dos siguientes: (i) La regulacin del ensamblaje de la cpsida del MVM en clulas
de cncer humano. Hemos encontrado que VP2, la protena principal de la cpsida del
MVM, se fosforila especficamente por Raf-1 (Figura 1), una quinasa que juega un papel
central en el desarrollo de varios tipos de tumores frecuentes humanos. La fosforilacin
por Raf-1 activada por mutacin facilita el transporte nuclear de trmeros de VP2 (Figura
1B), un proceso necesario para la maduracin viral. Esta regulacin del ensamblaje de
MVM (Figura 1C) puede explicar gran parte del tropismo natural de los parvovirus por
clulas cancerosas humanas, e identifica una diana relevante para posibles viroterapias
oncolticas; (ii) Traduccin de ARNm virales. Intentamos entender hasta qu punto la
traducibilidad de los ARNm virales determina el rango de husped y la evolucin viral,
el tropismo por tipos celulares y tejidos especficos y la patognesis. Nuestro objetivo
fundamental es comprender cmo la quinasa celular PKR, a travs de la fosforilacin del
factor de iniciacin 2 (eIF2), es capaz de modular la replicacin de los virus SV (Figura 2)
y del parvovirus MVM. Empleando biologa integrativa estamos caracterizando los mecanismos que el SV emplea para contrarrestar el efecto antiviral de la PKR, lo que implica
el uso de estructuras especficas presentes en los ARNm virales y factores de iniciacin
alternativos de la clula.
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El grupo de B. Aguado (*) se centra en el estudio del Splicing Alternativo como un factor
que contribuye a la complejidad y diversidad entre primates y otros mamferos, mediante
la produccin de diferentes transcritos, incluyendo quimricos y no-codificantes. Adems
buscamos alteraciones en el splicing alternativo que puedan ser causantes de enfermedades, como de la Artritis Reumatoide y de la Distrofia Miotnica. Usamos nuevas tecnologas como nano Q-PCRq, microarrays y Secuenciacin Masiva.
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Tesis Doctorales
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Figura 2. El fenmeno
de shut-off en tejido cerebral de ratn infectado
por el virus Sindbis. La
traduccin del mRNA celular, pero no la del viral,
se inhibi debido a la fosforilacin del factor eIF2.
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Jefe de Lnea:
Jos M. Almendral del Ro
Personal Cientfico:
Begoa Aguado Orea (*)
Antonio Talavera Dez
Ivn Ventoso Bande
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Investigador Posdoctoral:
Elena Domingo Gil
Esther Grueso Hierro
Francisco Hernndez-Torres (*)
Estudiante de posgrado:
Noelia Blanco Menndez
Maria Elizalde Arbilla
Ren Toribio Lpez
Olatz Villate Bejarano (*)
Alberto Rastrojo Lastras (*)
Raquel Lpez-Dez (*)
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Estudiante:
Marian Fernandez Estevez
Julia Wienke (*)
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Sanz MA, Castell A, Ventoso I, Berlanga JJ, Carrasco L. (2009). Dual mechanism for the translation of
subgenomic mRNA from Sindbis virus in infected and uninfected cells. PLoS One. 4(3):4772.
Blanco, AM, L Rausell, B Aguado, M Perez-Alonso, R Artero. (2009). A FRET-based assay for characterization
of alternative splicing events using peptide nucleic acid fluorescence in situ hybridization. Nucleic Acids
Research 37 e116.
Exit
Riolobos, L., Valle, N., Hernando, E., Maroto, B., Kann, M., and J. M. Almendral. (2010). Viral oncolysis that
targets Raf-1 signaling control of nuclear transport. J. Virol., 84, 2090-2099.
Lnea Investigacin
Ventoso, I., Berlanga, J.J., and J. M. Almendral. (2010). Translational control by the Protein Kinase R
restricts Minute Virus of Mice infection: role in parvovirus oncolysis. J. Virol., 84, 5043-5051.
Personal
Toribio R, Ventoso I. Inhibition of host translation by virus infection in vivo. (2010). Proc Natl Acad Sci
USA. 107(21):9837-42.
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Olatz Villate. Splicing en el MHC de clase III: caracterizacin y expresin de las isoformas del gen NFkBIL1. Estudio de su relacin con artritis reumatoide. Directora,
Begoa Aguado.
Exit
Ren Toribio Lpez. Cambios traduccionales que regula la interaccin virus hospedador. Implicacin en el desarrollo de virus oncolticos. Director, Ivn Ventoso
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Tesis Doctorales
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Personal cientfico:
Aldo Gonzlez Becerra
Posdoctorales:
Moustafa Malki
Monika Oggerin de Orube
Lourdes Rufo Nieto
Javier Ruiz Prez
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Tesis Doctorales
Becarios predoctorales:
Patxi San Martn Uriz
Enrique Marn Palma
Carlotta Vizioli
Irene Snchez Andrea
Tcnicos:
Nuria Rodrguez Gonzlez
Catalina del Moral Juarez
CBMSO 2009-2010
Cientficos visitantes:
Linda Amaral (MBL, Woods Hole, USA)
Jim Field (Arizona State University, USA)
Alberto Gonzlez Fiaren (NASA-Ames, USA)
Eric Zettler (MBL, Woods Hole, USA)
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Fairen, A.G., Dvila, A.F., Duport, L.G., Amils, R., McKay, C.P. (2009) Nature, 459: 398-400.
Fairen, A.G., Schulze-Makuch, D., Rodrguez, A.P., Fink, W., Dvila, A., Uceda, E.R., Furfaro, R., Amils, R.,
McKay, C.P. (2009) Planet. Space Sci., 57: 276-287.
Daz-Garretas, B., Asensi, A., Rufo, L., Rodrguez, N., Snchez-Mata, D., Amils, R., de la Fuente, V. (2009)
Northeastearn Naturalist, 16 : 56-64.
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Carnicero, D., Daz, E., Escolano, O., Rubinos, D., Ballesteros, O., Barral, M.T., Amils, R., Garca Frutos,
F.J. (2009) Adv. Materials Research, 71-73: 677-680.
Lnea Investigacin
Personal
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Patentes
Tesis Doctorales
Eugenio, M.E., Carbajo, J.M., Martn, J.A., Gonzlez, and A.E. Villar, J.C. (2009) J. Basic Microbiol.
49(5): 433-440.
Gonzlez-Toril, E., Aguilera, A., Souza-Egipsy, V., Diez, M., Lpez-Pamo, E., Snchez-Espaa, J., Amils, R.
(2009) Adv. Materials Research, 71-73: 113-116.
Amils, R., Gonzlez-Toril, E., Aguilera, A., Rodrguez, N., Fernndez-Remolar, D., Daz, E., GarcaMoyano, A., Sanz, J.L. (2009) Adv. Materials Research, 71-73: 13-19.
Garca-Moyano, A., Gonzlez-Toril, E., Amils, R. (2009) Adv. Materials Research, 71-73: 109-112.
Gonzlez-Toril, E; Amils, R; Delmas, RJ, et al. 2009. Biogeosciences, 6(1): 33-44.
de la Fuente, V., Rufo, L., Rodrguez, N., Amils, R., Zuluaga, J. (2009) Biol Trace Elem Res, DOI
10.1007/s12011-009-8471-1.
Aguilera, A., Souza-Egipsy, V., Gonzlez-Toril, E., Rendueles, O., Amils, R. (2010). Internat. Microbiol., 13:
29-40. DOI: 10.2436/20,1501.01.109.
Gonzlez-Toril, E., Aguilera, A., Rodrguez, N., Fernndez-Remolar, D., Gmez, F., Daz, E., GarcaMoyano, A., Sanz, J.L., Amils, R. (2010) Hydrometallurgy, 104: 329-333.
Souza-Egipsy, V., Aguilera, A., Mateo-Mart, E, Martn-Gago, J.A., Amils, R. (2010). Geomicrobiol. J., 27:
692-706.
CBMSO 2009-2010
Cid, C., Garcia-Descalzo, L., Casado-Lafuente, V., Amils, R., Aguilera, A. (2010) Proteomics, 10: 20262036 DOI 10.1002/pmic.200900592.
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Lalueza, J., Rius, A., Puig, R., Mart, E., Mart, J.F., Rodrguez, N., Amils, R. (2010). Journal of American
Leather Chemists Association, 105: 210-221.
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Amaral-Zettler, L., Zettler, E.R., Theroux, S.M., Palacios, C., Aguilera, A., Amils, R. (20010) ISME J.
doi:10.1038/ismej.2010.101.
Arana-Cuenca, A., Tllez Jurado A., Yage, S., Fermian, E., Carbajo, J.M., Gonzlez, T., Domnguez, A.,
Villar, J.C., and Gonzlez, A.(2010) Forest Systems 19 (2): 234-240.
Exit
Eugenio, M.E., Santos, S.M., Carbajo, J.M., Martn, J.A., Martn-Sampedro, R., Gonzlez, A.E., and Villar,
J.C. (2010) Bioresources Technology 101(6): 1866-1870.
Fairn, A.G., Chevier, V., Abramov, O., Marzo, G.A., Gavin, P., Davila, A.F., Tornabene, L.L. , Bishop, J.L.,
Roush, T.L., Gross, C., Kneissl, T., Uceda, E.R., Dohm, J.M., Schulze-Makuch, D., Rodrguez, J.A.P., Amils,
R., McKay, C.P. (2010) PNAS (USA), doi/10.1073/pnas.1002889107.
Lnea Investigacin
Fairen, A. G., Dvila, A.F., Lim, D., Bramall, N., Bonaccorsi, R., Zavaleta, J., Uceda, E.R., Stoker, C.,,
Wierzchos, J., Amils, R., Dohm, J.M., Andersen, D., McKay, C. (2010) Astrobiology, 821- 843. DOI:10.1089/
ast. 2009.0440.
Personal
Publicaciones
Gmez; F., Mateo-Mart, E., Prieto.Ballesteros, O., Martn-Gago, J., Amils, R. (2010) Icarus, doi:10.1016/j.
icarus.2010.05.027.
Patentes
Tesis Doctorales
Carbajosa, S., Malki, M., Caillard, R., Lpez, M.F., Palomares, F.J., Martn-Gago, J.A., Rodrguez, N.,
Amils, R., Fernndez, V.M., De Lacey, A.L. (2010) Biosensors and Bioelectronics, 26: 877-880.
Fernndez-Remolar, D., Prieto-Ballesteros, O., Gmez-Ortiz, D., Fernndez-Sampedro, M., Sarrazin, P.,
Gailhanou, M., Amils, R. (2010) Icarus, 211: 114-138.
Menor-Salvn, C., Tornos, F., Fernndez-Remolar, D., Amils, R. (2010) Earth Planet. Sci. Lett., doi:
10.1016/j.epsl.2010.09.020.
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Amils, R. Malki, M., Fernndez, V., de Lacey, A.L.
Ttulo: Electrodo bacteriano aerbico para nodo de una pila de combustible sin mediadores redox ni membrana intercambiadora de protones. N de solicitud: 200701534.
Fecha de concesin: 23/12/2009
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Eric Zettler, enero 2009, The relationship between environment and the microbial community
in a patchwork of geochemical islands, Ricardo Amils, Universidad Autnoma de Madrid.
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Los objetivos de nuestro grupo son el estudio desde un punto de vista molecular del proceso de crecimiento y divisin bacteriana y de los diversos mecanismos de resistencia
a los antibiticos b-lactmicos, que se han desarrollado por los microorganismos patgenos de origen clnico. Dentro de este esquema general, hemos desarrollado varios
aspectos, por un lado la caracterizacin molecular de b-lactamasas de la familia CTX-M,
su mecanismo de movilizacin y el origen ltimo de la subfamilia CTX-M-1. As como la
identificacin de las PBPs y el estudio de su implicacin en los mecanismos de resistencia en estirpes anaerobias y en bacterias entricas Gram-negativas. Una nueva familia
de PBPs, perteneciente al COG1680, que presenta homologa a b-lactamasas de clase
C y puede estar implicada en la morfognesis bacteriana est siendo estudiada en un
nuevo proyecto.
Basado en el anlisis de la estructura del peptidoglicano en mutantes de PBP4 en Aeromonas hemos propuesto un modelo de induccin de la expresin de b-lactamasa mediado por un sistema de dos componentes (ver figura adjunta).
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Figura 2. Actividad DD-endopeptidasa de AmpH identificada por HPLC. Los picos corresponden a M4.NAcGlc-NAcMur-tetrapptido, M5.- NAcGlc-NAcMurpentapptido, D45.- Disacrido-tetra-pentapptido, y
C.- cefmetazol.
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Jefe de Lnea:
Juan Alfonso Ayala Serrano
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Otras Actividades
Postdoctoral:
Silvia Marina Gonzlez Leiza
Becarios Predoctorales:
Cristian Gustavo Aguilera Rossi
Alaa Ropy Mahmoud Sayed
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Estudiantes:
Godofrey Cherry
Yasemin Ezgi Ertrk
Andrs Caballero
Laura Vuolo
Jose Roberto Angeles Vzquez
Nicolas Cordeiro
Ana Fernndez Gonzlez
Sorelis Urdaneta Fernndez
Lucia Lozano
Paula Andrea Espinal
Mara Margarita Bernal
Cientficos visitantes:
Ayelen Patricia Porto (Universidad de Buenos Aires, Buenos Aires, Argentina)
Ana Catarina Souza Lopes (Universidade
Federal de Pernambuco, Brasil)
Bartolome Moya (Universidad Islas Baleares, Mallorca)
Judith J. Velasco (Universidad de los Andes, Mrida, Venezuela)
-Jzsef Ski University of Szeged,
-Elizabeth Nagy University of Szeged,
-Gabriella Terhes
(University of Szeged, Szeged, Hungary)
Sergei Borchsenius (Institute of Cytology,
RAS, Saint-Petersburg, Russia)
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Otras Actividades
D. Korsak, Z. Markiewicz, G. O. Gutkind, and J. A. Ayala. (2010) Identification of the full set of Listeria
monocytogenes penicillin-binding proteins and characterization of PBPD2 (Lmo2812). BMC Microbiology,
10:239-251
Ins Bado, Nicols F. Cordeiro, Luciana Robino, Virginia Garca-Fulgueiras, Vernica Seija, Cristina Bazet,
Gabriel Gutkind, Juan A. Ayala, and Rafael Vignoli. (2010). Detection of class 1 and 2 integrons, extendedspectrum -lactamases and qnr alleles in enterobacterial isolates from the digestive tract of Intensive Care
Unit inpatients. Intern. J. Antimicrob. Agents, 36(5):453-458
A.C.S. Lopes, D. Leal Veras, A.M.S. Lima, R.C. Andrade Melo, and J.A. Ayala. (2010). bla(CTX-M-2) and
bla(CTX-M-28) extended-spectrum beta-lactamase genes and class 1 integrons in clinical isolates of
Klebsiella pneumoniae from Brazil.. MIOC. 105(2):163-167.
Amy E. Tayler, Juan A. Ayala, Pannika Niumsup, Katrin Westphal, Timothy R. Walsh, Bernd Wiedemann,
Peter M. Bennett, and Matthew B. Avison. (2010). Induction of beta-lactamase production in Aeromonas
hydrophila is responsive to beta-lactam-mediated changes in peptidoglycan composition. Microbiology.
156(Pt 8):2327-35.
Porto, Ayeln; Ayala, Juan; Gutkind, Gabriel; and Di Conza, Jos. (2010). A novel OXA-10-like -lactamase
is present in different Enterobacteriaceae. Diagnostic Microbiology and Infectious Disease. 66:228-229.
M. Macedo-Vias, N. F. Cordeiro, I. Bado, S. Herrera-Leon, M. Vola, L. Robino, R. Gonzalez-Sanz, S.
Mateos, F. Schelotto, G. Algorta, J. A. Ayala, A. Echeita and R. Vignoli. (2009). Surveillance of antibiotic
resistance evolution and detection of class 1 and 2 integrons in human isolates of multiple resistant
Salmonella Typhimurium obtained in Uruguay from 1976 to 2000. International Journal of Infectious
Diseases, 13:342-348.
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Profesor Ad Honorem, Facultad de Medicina, Universidad de la Republica, Uruguay
Julio, 2009.
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Figura 2. Evolucionando
una esterasa. (R)-1-fenil-2propil acetate encajado en
el sitio activo de un mutante
cuadruple (mutante Q) de
la esterasa I de Pseudomonas fluorescens.
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Jefe de Lnea:
Jos Berenguer Carlos
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Personal Cientfico:
Aurelio Hidalgo Huertas
Estudiantes:
Alba M Sanchez Nio,
Akbar Espaillat Fernndez
ngel Cantero Camacho
Daan Swarts
Postdoctorales:
Daniel Vega
Leticia Torres
Tcnico de Investigacin:
Esther Snchez Freire
Maria Jos de Soto Lpez
Becarios Predoctorales:
Federico Acosta
Eloy Ferreras Puente
Zahra Chahlafi
Marcos Almendros Gimenez
Laura lvarez
Muoz
Carlos Bricio Garber
No Rigoberto Rivera
Yamal Al-Ramahi Gonzlez
Martin Hesseler
Cientficos visitantes:
Estariette van Heerden
Koos Albertin
Derek Litthauer
Godfrey Tlou
Philip Armand Bester
Mariana Erasmus
Novalanda Betty Mabizela
Susana Alarico
Hernn Costa
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Larsen,M., Zielinska, D.F., Martinelle, M., Hidalgo, A., Jensen, L., Bornscheuer, U.T. and Hult, K. (2010)
Suppression of water as a nucleophile in Candida antarctica lipase B catalysis. ChemBioChem 11,796-801.
Cava, F, Hidalgo, A., and Berenguer, J. (2009) Thermus thermophilus as biological model. Extremophiles,
13, 213-231.
Exit
Schliemann, A., Hidalgo, A., Berenguer, J. and Bornscheuer, U.T (2009). Increased Enantioselectivity by
Engineering Bottleneck Mutants in an Esterase from Pseudomonas fluorescens. ChemBioChem 10,29202923 (cover feature).
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Rocha-Martin, J., Vega D., Cabrera Z, Bolivar JM. Fernandez-Lafuente R., Berenguer J. and Guisan, J.M.
(2009) Purification, immobilization and stabilization of a highly enantioselective alcohol dehydrogenase
from Thermus thermophilus HB27 cloned in E. coli. Proccess in Biochemistry, 44,1004-1012.
Bolivar J.M., Rocha-Martin J., Mateo C., Cava F., Berenguer, J, Vega D. , Fernandez-Lafuente R., Guisan
J.M. (2009) Purification and stabilization of a glutamate dehygrogenase from Thermus thermophilus via
oriented multisubunit plus multipoint covalent immobilization. Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic
58, 158-163.
Publicaciones
Almendros M., Sinisterra JV, and Berenguer J. (2009) Thermus thermophilus Strains Active in Purine
Nucleoside Synthesis. Molecules 2009, 14, 1279-1287.
Patentes
Bolivar J.M, Rocha-Martin J. Mateo C., Cava F., Berenguer J., Fernandez-Lafuente R., Guisan J. M.
(2009) Coating of soluble and immobilized enzymes with ionic polymers: full stabilization of the quaternary
structure of multimeric enzymes. Biomacromolecules 10, 742-747
Cava, F., Chahlafi, Z., Alavare, L., and Berenguer, J. (2009) Respiracin y desnitrificacin en Thermus
thermophilus. In: Bonete, M. J., and Martnez-Espinosa R. M. (ed) Avances en el metabolismo del nitrgeno.
Editorial Club Universitario, Alicante. pp. 173-186.
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Bolivar J., Mateo, C., Rocha-Martin, Cava F., Berenguer J., Fernandez-Lafuente R., Guisan J. M. 2009.
The adsortion of multimeric enzymes on very lowly activated supports involves more enzyme subunits:
stabilization of glutamate dehydrogenase from Thermus thermophilus by immobilization on heterofunctional
supports. Enzyme Microb. Technol. 44, 139-144.
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Procedimiento de inmovilizacin de una glutamato deshidrogenasa.
PCT/ES2008/070166.
Nuevo marcador termoestable para la seleccin gentica de Thermus spp P200603279.
(Concesin 28-05-2010).
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Durante los ltimos aos hemos investigado sobre lneas celulares susceptibles al Virus
de la Peste Porcina Africana (VPPA) para la produccin y titulacin de aislados virales
tanto de campo como de laboratorio, as como para la generacin de virus recombinantes con genes especficos delecionados. Estos mutantes de delecin se utilizan para
profundizar el estudio del papel de una serie de genes relacionados con la evasin de la
respuesta antiviral celular en el proceso infectivo, y pueden servir como modelos virales
atenuados en la generacin de posibles vacunas que induzcan inmunidad protectiva
contra la PPA. En este sentido hemos confirmado el papel de la lectina del VPPA (gen
EP153R) en la modulacin de la expresin de los antgenos MHC-I en la membrana de
la clula infectada y estamos inactivando diversos genes virales en un aislado (NHV)
parcialmente atenuado, que ha sido capaz de generar proteccin cruzada contra otro
aislado virulento (L60), pero que mantiene una virulencia residual demasiado elevada
para ser aceptado como vacuna.
Las lneas celulares de origen porcino susceptibles al VPPA se estn utilizando tambin
para determinar los niveles de diversas citoquinas inducidos por aislados virales con distintos grados de virulencia, en la bsqueda de un perfil de virulencia/atenuacin, cuya
consecucin supondra en la prctica la reduccin sustancial de las infecciones in vivo
para la determinacin del grado de virulencia de los aislados virales.
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Otro objetivo de nuestro Grupo es la optimizacin del uso de antivirales no convencionales tipo lauril galato en la prevencin y/o tratamiento de enfermedades virales de inters
clnico y veterinario. Hemos determinado su baja citotoxicidad y su eficacia en la inhibicin de la produccin de diversos virus (VPPA, influenza, herpes,) en clulas infectadas en el laboratorio, y pretendemos ampliar el estudio sobre el grado de proteccin que
pueden conferir estos antivirales en infecciones in vivo.
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Jefe de Lnea:
ngel L. Lpez Carrascosa
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Postdoctoral:
Patricia de Len Valds
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Estudiantes:
Alba Martnez Flrez
Tcnico de Investigacin:
Maria Jos Bustos Snchez
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Hurtado, C., Bustos, M. J. and Carrascosa, A. L. (2010). The use of COS-1 cells for studies of field and laboratory African swine fever virus samples. J. Virol. Methods 164, 131-134.
Hurtado, C., Bustos, M. J., Granja, A. G., de Len, P., Sabina, P., Lopez-Vias, E., Gomez-Puertas, P., Revilla, Y., and Carrascosa, A. L. (2010). The African swine fever virus lectin EP153R modulates the surface
membrane expression of MHC class I antigens. Arch. Virol. DOI: 10.1007/s00705-010-0846-2.
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Morfognesis bacteriana
Resumen de Investigacin
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Nuestro tema central es la investigacin, a nivel estructural y molecular, de la pared
bacteriana (sculo o capa de peptidoglicano) como elemento morfogentico primario
de la clula procaritica. En la actualidad nos centramos en el estudio de los procesos
de diferenciacin celular, adaptacin y generacin de distintos apndices (prostecas,
flagelos, pili tipo IV y hold-fast) en alfa-proteobacterias, principalmente Asticcacaulis
biprosthecium, y otras bacterias de morfologa compleja.
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Jefe de Lnea:
Miguel ngel de Pedro Montalbn
Becarios Predoctorales:
Said Taimani
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Estudiantes:
Marisela Domnguez Domnguez
Mara Hidalgo Garca
Irene Cartas
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Morfognesis bacteriana
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Lam, H, Oh, D.C., Cava, F., Takacs, C.N., Clardy, J., de Pedro, M.A. and Waldor, (2009) D-amino acids
govern stationary phase cell wall remodeling in bacteria. Science 325:1552-1555.
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El inters principal del grupo es entender las bases moleculares de la extincin de virus
RNA por mutagnesis letal y explorar protocolos antivricos empleando agentes mutagnicos e inhibidores. Hemos documentado una doble accin mutagnica e inhibidora del
5-fluorouracilo durante la replicacin del virus de la fiebre aftosa (VFA) y caracterizado
mutantes del VFA resistentes al anlogo mutagnico de purinas ribavirina. En particular,
hemos descrito un cambio de aminocido en la polimerasa del VFA capaz de evitar la
accin detrimental de la ribavirina mediante la modulacin del tipo de mutaciones producidas por la droga. La supervivencia del virus por modulacin de tipos de mutaciones,
sin alterar la fidelidad de la polimerasa, constituye un nuevo mecanismo de resistencia
a un agente mutagnico. A pesar de la presencia de mutaciones de resistencia a agentes mutagnicos, la extincin de virus puede lograrse con tratamientos mutagnicos alternativos. Contrariamente a lo establecido para tratamientos antivirales clsicos, una
administracin secuencial primero de un inhibidor y despus de un agente mutagnico
puede ser ms ventajosa que la administracin simultnea de ambos para la extincin
de virus.
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Como paso importante para entender implicaciones del comportamiento de virus como
cuasiespecies, se ha caracterizado una dinmica de competicin y colonizacin entre
subpoblaciones de VFA surgidas en clulas en cultivo por diversificacin de un clon biolgico del virus. Nuestro laboratorio ha participado en colaboraciones con otros grupos
de virologa terica y experimental acerca de aspectos estructurales de la polimerasa
de VFA y sobre implicaciones biolgicas de cuasiespecies, incluyendo nuevos diseos
vacunales. Las colaboraciones se pueden identificar por los autores de las publicaciones
incluidas en este resumen.
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Jefe de Lnea:
Esteban Domingo Solans
Postdoctorales:
Celia Perales Viejo
Vernica Martn Garca
Armando Arias Esteban
Julie Sheldon
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Becarios Predoctorales:
Rubn Agudo Torres
Marta Sanz-Ramos Rojo
Samuel Ojosnegros Martos
Hctor Moreno Borrego
Hctor Tejero Franco
Ignacio de la Higuera
Ana M Ortega Prieto
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Tcnicos de Investigacin:
Ana Isabel de vila Lucas
Eva Garca Cueto
Isabel Gallego Jimnez
M Eugenia Soria Benito
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Agudo, R. Arias, A. and Domingo, E. (2009). 5-Fluorouracil in lethal mutagenesis of foot-and-mouth disease virus. Future Medicinal
Chemistry, 1(3), 529-539.
Domingo, E. and Wain-Hobson, S. (2009). The 30th anniversary of quasispecies. Meeting on quasispecies: past, present and future.
EMBO Reports, 10, 444-448.
Emonet, S.F., de la Torre, J.C., Domingo, E. and Sevilla, N. (2009). Phylogeny/molecular taxonomy and evolution or Arenaviruses. Infection Genetics
and Evolution, 9, 417-429.
Perales, C., Agudo, R. and Domingo, E. (2009). Counteracting quasispecies adaptability: extinction of a ribavirin resistant virus mutant by an
alternative mutagenic treatment. PLoS One, 4(5): e5554.doi: 10.1371/journal.pone.0005554.
Escarms, C., Perales, C. and Domingo, E. (2009). Biological effect of Mullers ratchet. Distant capsid site can affect picornavirus
protein processing. J. Virol. 83, 6748-6756.
Domingo, E. (2009). Nueva gripe humana de origen porcino. Cunto de nuevo? Investigacin y Ciencia. 393, 10-12.
Ferrer-Orta, C., Agudo, R., Domingo, E. and Verdaguer, N. (2009). Structural insights into replication and elongation processes by the FMDV
RNA-dependent RNA polymerase. Curr. Op. in Structural Biol. 19 (6), 752-8.
Perales, C., Agudo, R., Tejero, H., Manrubia, S.C. and Domingo, E. (2009). Potential benefits of sequential inhibitor-mutagen treatments of RNA virus
infections. PLoS Pathogens. 5 (11), e1000658.
Domingo, E. (2009). Quasispecies. From molecular Darwinism to viral diseases. Contributions to Science. 5(2), 161-168.
Ojosnegros, S., Beerenwinkel, N., Antal, T., Nowak, M.A., Escarms, C. and Domingo, E. (2010). Competition-colonization dynamics in an RNA virus.
Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 107(5), 2108-12.
Domingo, E. (2010). The great evolutionary potential of viruses. The 1918 flu as a paradigm of disease emergence. In: M.I. Porras and R. Davies,
ed. Emerging Infection, Emergent Meanings: The Spanish Influenza Pandemic of 1918-1919. University of Rochester Press, Rochester, New York.
107, 2108-2112.
Domingo, E. (2010). Mechanisms of viral emergence. Veterinary Research, 41(6): 38.
Martn, V. Abia, D., Domingo, E. and Grande-Prez, A. (2010). An interfering activity of LCMV associated with enhanced mutagenesis. J. Gen. Virol.,
91, 990-1003.
Ojosnegros, S., Beerenwinkel, N. and Domingo, E. (2010). Competition-colonization dynamics: an ecology approach to quasispecies dynamics and
virulence evolution in RNA viruses. Communicative & Integrative Biology, 3 (4), 333-6.
Domingo, E., Perales, C., Agudo, R., Arias, R., Escarms, C., Ferrer-Orta, C. and Verdaguer, N. (2010). Mutation, quasispecies and lethal mutagenesis.
In: E. Ehrenfeld, E. Domingo and R.P. Roos, eds. The Picornaviruses. ASM Press, Washington, D.C., pp.197-211.
Manrubia, S.C, Domingo, E. and Lzaro, E. (2010). Pathways to extinction: beyond the error threshold. Phil. Trans. R. Soc. B., 365(1548), 1943-52.
Ferrer-Orta, C., Sierra, M., Agudo, R., de la Higuera, I., Arias, A., Prez-Luque, R., Escarms, C., Domingo, E. and Verdaguer, N. (2010). Structure of
foot-and-mouth disease virus mutant polymerases with reduced sensitivity to ribavirin. J. Virol., 84(12), 6188-99.
Bordera, A.V., Lorenzo-Redondo, R., Pernas, M., Casado, C., lvaro, T., Domingo, E. and Lpez-Galndez, C. (2010). Initial fitness recovery of HIV-1
is associated with quasispecies heterogeneity and can occur without modifications in the consensus sequence. PLoS One, 5(4), e10319.
Martn-Acebes, M.A., Herrera, M., Armas-Portela, R., Domingo, E. and Sobrino, F. (2010). Cell density-dependent expression of viral antigens during
persistence of foot-and-mouth disease virus in cell culture. Virology, 403, 47-55.
Rodrguez-Calvo, T., Ojosnegros, S, Sanz-Ramos, M., Garca-Arriaza, J., Escarms, C., Domingo, E. and Sevilla, N. (2010). New vaccine design
based on defective genomes that combines features of attenuated and inactivated vaccines. PLoS One, 5(4), e10414.
Arias, A., Perales, C., Escarms, C. and Domingo, E. (2010). Deletion mutants of VPg reveal new cytopathology determinants in a picornavirus.
PLoS One, 5(5), e10735.
Agudo, R., Ferrer-Orta, C., Arias, A., de la Higuera, I., Perales, C., Prez-Luque, R., Verdaguer, N. and Domingo, E. (2010). A multi-step process of
viral adaptation to a mutagenic nucleoside analogue by modulation of transition types leads to extinction-escape. PLoS Pathog. 6(8) pii: e1001072.
Perales, C., Lorenzo-Redondo, R., Lpez-Galndez, C., Martnez, M. A., and Domingo, E. 2010. Mutant spectra in virus behavior. Future
Virology 5(6), 679-698.
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N. Sevilla, E. Domingo, C. Escarms, S. Ojosnegros, J. Garca-Arriaza, M. Sanz-Rojo, T.
Rodrguez (2009) Vacuna atenuada para la fiebre aftosa. PCT1641.49. Entidades titulares: CSIC (70%), Instituto Nacional de Investigaciones Agrarias (30%).
E. Domingo, R. Agudo, H. Tejero, S.C. Manrubia, C. Perales (2009) Tratamiento antiviral.
P200930482. Entidades titulares: CSIC (41%), Instituto Nacional de Tcnica Aeroespacial (18%), Universidad Complutense de Madrid (18%), Centro de Investigaciones Biomdicas en Red de Enfermedades Hepticas y Digestivas (CIBERehd) (23%).
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Samuel Ojosnegros Martos (2009) Dinmica evolutiva de virus RNA. Universidad Autnoma de Madrid. Director: Esteban Domingo Solans.
Rubn Agudo Torres (2009) Caracterizacin de las protenas del virus de la fiebre aftosa implicadas en respuesta a mutagnesis letal por anlogos de nucletido. Universidad
Autnoma de Madrid. Director: Esteban Domingo Solans.
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Marta Sanz-Ramos Rojo (2009) Dinmica de cuasiespecies del virus de la fiebre aftosa
in vivo. Universidad Autnoma de Madrid. Director: Esteban Domingo Solans.
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Streptomyces y levaduras son microorganismos productores de un gran nmero de molculas de inters biotecnolgico. El grupo est interesado en conocer el mecanismo de
regulacin de la expresin de protenas implicadas en algunos de estos procesos biosintticos y en la obtencin de nuevas molculas de posible utilidad industrial. Durante los
ltimos dos aos hemos continuado el estudio del cluster ata de Streptomyces capreolus
responsable de la sntesis del antibitico nucleosdico A201A, y de distintas protenas
con actividad glicosiltransferasa de levaduras que puedan ser empleadas en la obtencin
de distintas molculas con propiedades prebiticas.
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Figura 1. (A) Vista del centro activo de la Ffasa de Schwanniomyces occidentalis acomplejado
con fructosa, 1-kestosa (verde;
izquierda) y 6-kestosa (amarillo;
derecha). El centro activo de la
Ffasa (azul) est delimitado por
la subunidad adyacente (naranja). (B) Fructan 1-exohidrolasa
IIa de Cichorium intybus (CiFEH)
acomplejada con 1-kestosa y (C)
invertase de Thermotoga maritima
acomplejada con rafinosa.
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Figura 2. Patrn de
oligomerizacin
de
la Ftasa de Schwanniomyces occidentalis sobre un cultivo de
esta misma levadura.
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Jefe de Lnea:
Antonio Jimnez / Mara Fernndez Lobato
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Becarios Predoctorales:
Miguel de Abreu Felipe
Miguel lvaro Benito
Dolores Linde Lpez
Patricia Gutirrez Alonso
Brian Molloy Galiana
Estudiantes:
David Gonzlez Prez
Marta Estvez Canales
Hugo Muoz
Tcnico de Investigacin:
Asuncin Martn Redondo
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Cientficos Visitantes:
Vctor Cifuentes (Chile)
Marcelo Baeza (Chile)
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Linde, D., Macias, I., Fernndez-Arrojo, L., Plou, F.J., Jimnez, A. and Fernndez-Lobato, M. (2009)
Molecular and biochemical characterization of an fructofuranosidase from Xanthophyllomyces dendrorhous.
App Env Microbiol. 75(4), 1065-1073.
Gutirrez-Alonso, P., Fernndez-Arrojo, L., Plou, F.J. and Fernndez-Lobato, M. (2009) Biochemical
characterization of a b-fructofuranosidase from Rhodotorula gracilis with transfructosylating activity. FEMS
Yeast Research. 9, 768-773.
Exit
Polo, A., lvaro-Benito, M., Fernndez-Lobato, M. and Sanz-Aparicio, J. (2009) Crystallization and
preliminary X-ray diffraction analysis of thefructofuranosidase from Schwanniomyces occidentalis. Acta
Cryst. 65, 1162-1165.
Lnea Investigacin
Baeza, M., Retamales, P., Sepulveda D., Lobato P., Jimenez A. and Cifuentes V. (2009) Isolation,
characterization and long term preservation of mutant strains of Xanthophyllomyces dendrorhous. J. Basic
Microbiol. 49, 135-141.
Personal
Alvaro-Benito, M., Polo, A., Gonzlez, B., Fernndez-Lobato, M. and Sanz-Aparicio, J. (2010) Structural
and kinetic analysis of Schwanniomyces occidentalis invertase reveals a new oligomerization pattern and
the role of its supplementary domain in substrate binding. J. Biol. Chem. 285 (18), 13930-14941.
Publicaciones
Patentes
Tesis Doctorales
Polo, A., Linde, D., Estvez, M., Fernndez-Lobato, M. Julia Sanz-Aparicio, J.. (2010). Crystallization and
preliminary X-ray diffraction analysis of the fructofuranosidase from Xanthophyllomyces dendrorhous. Acta
Cryst. 66, 1441-1444.
lvaro-Benito, M., de Abreu, M., Portillo, F., Snz-Aparicio, J. and Fernndez-Lobato, M. (2010). New
insights into the fructosyltransferase activity of Schwanniomyces occidentalis -fructofuranosidase emerges
from a non-conventional codon usage and directed mutation. App. Env. Microbiol. 76 (22), 7491-7499.
CBMSO 2009-2010
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L. Fernndez Arrojo, F. Plou, A. Ballesteros, M. Alcalde, P. Gutierrez Alonso, M. Fernndez-Lobato (2009). Biocatalizador inmovilizado basado en alginato para la biotransformacin de carbohidratos. N P200930001. PCT-ES2010/070104 (24 -2- 2010). Titular:
CSIC-UAM.
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M. Fernndez-Lobato, M. Alvaro Benito (2009). Fructofuranosidasa mejorada genticamente para la obtencin del prebitico 6-kestosa. N P0200930929 (29-12-2009). Titular: UAM.
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Brian Molloy Galiana (2010). Expresin heterloga del cluster biosinttico del antibitico A201A y estudio de las posibles glicosiltransferasas implicadas en su biosntesis.
Universidad Autnoma de Madrid. Director: Mara Fernndez-Lobato.
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Utilizamos tcnicas de ingeniera de protenas para el estudio de relaciones entre estructura y funcin en virus y sus cpsidas, y para el diseo y anlisis de partculas vricas
modificadas con posibles aplicaciones en nanobiotecnologa (Mateu (2011). Prot.Eng.
Des.Sel. 24, 53-63).
Relevancia cientfica e implicaciones tecnolgicas: Conocimiento en profundidad de ciertas etapas del ciclo vrico, incluyendo ensamblaje, dinmica conformacional y desensamblaje de virus; diseo de vacunas, antivirales y nanopartculas para la liberacin dirigida
de frmacos.
Algunos resultados recientes: i) Mediante ingeniera de protenas hemos aumentado la
estabilidad trmica del virus de la fiebre aftosa (FMDV) frente a su disociacin en subunidades. Estamos investigando las bases moleculares de esta termoestabilizacin y las
posibilidades vacunales de estos virus modificados. ii) Hemos realizado un estudio extensivo de mutaciones compensatorias en la cpsida de FMDV, y estamos investigando
los mecanismos moleculares por los que ocurre la compensacin. iii) En colaboracin
con P.J. de Pablo y J. Gmez (Depto. Fsica Materia Condensada, UAM), hemos investigado en el virus diminuto del ratn (MVM) el papel de la estructura de poros y cavidades
en las propiedades mecnicas de la partcula vrica, mediante microscopa de fuerzas
atmicas (tcnica que utilizamos en nuestro laboratorio). Hemos encontrado evidencia
de que las propiedades mecnicas encontradas pueden haber sido evolutivamente seleccionadas para optimizar la resistencia del virus a agentes fsicos, pero permitiendo
los cambios conformacionales necesarios para su infectividad. iv) En colaboracin con
J.L.Neira (CBMC) y M.A.Martnez (IRSI-Caixa) estamos investigando la capacidad de
diferentes pptidos sintticos y otras molculas para inhibir el ensamblaje de la cpsida
del virus de la inmunodeficiencia humana (HIV) y la infectividad del virin, con vistas al
diseo de agentes anti-HIV. v) En colaboracin con G.Rivas (CIB) hemos demostrado en
dos sistemas vricos modelo que, en condiciones fisiolgicas de aglomeracin molecular,
antivirales de pequeo tamao reducen su actividad.
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Mauricio Garca Mateu
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Rebeca Prez Fernndez
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Rebeca Bocanegra Rojo
Milagros Castellanos Molina
Inmaculada Lpez Prez
Pablo Jos Prez Carrillo
Vernica Rincn Forero
Tcnicos de Investigacin:
Miguel ngel Fuertes Villadangos
Alicia Rodriguez Huete
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Carrasco, C., Douas, M., Miranda, R., Castellanos, M., Carrascosa, J.L., Mateu, M.G., Marqus, M. and
de Pablo, P.J. (2009). Action of capillary forces of water confined at the nanoscale during dessication of
viruses. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 106, 5475-5480. (A)
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Serena, P.A., Douas, M., Marqus, M.I., Carrasco, C., de Pablo, P.J., Miranda, R., Carrascosa, J.L.,
Castellanos, M. and Mateu, M.G. (2009). MC simulations of water meniscus in nanocontainers: explaining
the collapse of viral particles due to capillary forces. Phys. Status Solidi C 6, 2128-2132.
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Luna, E., Rodriguez-Huete, A., Rincn, V., Mateo, R. and Mateu, M.G. (2009). A systematic study of the
genetic response of a variable virus to the introduction of deleterious mutations in a functional capsid
region. J.Virol. 83, 10140-10151.
Martn-Acebes, M., Rincn, V, Mateu, M.G. and Sobrino, F. (2010). A single amino acid substitution in the
structural protein VP3 of foot-and-mouth disease virus can increase acid-lability and confer resistance to
acid-dependent uncoating inhibition. J.Virol. 84, 2902-2912.
Domenech, R., Abin, O., Bocanegra, R., Correa, J., Sousa-Herves, A., Riguera, R., Mateu, M.G.,
Fernndez-Mega, E., Velzquez-Campoy, A. and Neira, J.L. (2010) Dendrimers bind the homodimerization
interface of the capsid protein of HIV-1. Biomacromolecules 11, 2069-2078.
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Mateu, M.G. (2009). Capsid protein interactions in human immunodeficiency virus type 1 assembly. FEBS
J. 276, 6098-6109.
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Patente OEPM n 2 323 929 (Vacuna frente a la fiebre aftosa). Concedida junio 2010.
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Los llamados elementos genticos mviles (MGE), por ejemplo, fagos, plsmidos, transposones e ICEs, se pueden transferir horizontalmente entre las clulas afectando la composicin gentica y por lo tanto el comportamiento de las bacterias. En consecuencia, la
transferencia horizontal de genes (HGT) tiene un papel crucial en la evolucin microbiana, as como implicaciones importantes en una mirada de problemas de salud ambiental
y pblica. Por ejemplo, HGT es el principal responsable de la aparicin y rpida dispersin de la resistencia a los antibiticos.
Especialmente en las bacterias Gram positivas se sabe poco sobre los mecanismos por
los cuales MGE ejercen sus efectos sobre el comportamiento de su hospedador en la
regulacin de su movilidad. Una mejor comprensin de estas cuestiones es crucial para
hacer frente a amenazas importantes como por ejemplo la diseminacin de las resistencias a antibiticos. En nuestro laboratorio estudiamos estos temas utilizando como
hospedador Bacillus subtilis y limitando los MGEs a plsmidos y fagos.
Utilizamos B. subtilis porque, (i) es probablemente la bacteria Gram-positiva mejor estudiada, (ii) no es patgena, (iii) es susceptible a la manipulacin gentica debido a su
capacidad para desarrollar competencia natural, y (iv) B. subtilis est relacionado con
bacterias patgenas/fastidiosas como Bacillus anthracis, B. cereus y, aunque ms distante, Listeria monocytogenes.
Se ha descrito para algunos fagos que su infeccin altera el comportamiento de B. subtilis. Sin embargo, no se dispone ni de informacin de la secuencia, ni del mecanismo por
el que estos fagos afectan el comportamiento de su hospedador infectado. Para analizar
estos temas centramos nuestros estudios en dos fagos. Alrededor del 20% de los aislamientos naturales de B. subtilis contienen un plsmido endgeno. La mayora de los
plsmidos grandes (> 10 kb) se pueden transferir a otras clulas a travs del proceso de
conjugacin. Somos los primeros que han secuenciado dos plsmidos Bacillus grandes e
identificado los genes involucrados en su conjugacin, as como otras que probablemente afectan a los procesos de comportamiento del hospedador. En la actualidad estamos
analizando stos para desentraar la regulacin del proceso de conjugacin y profundizar
en la forma en que los genes plasmdicos alteran el comportamiento de su hospedador.
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Figura 1. Microscopa
de contraste de fase
de la esporulacin de
clulas de B. subtilis
portadoras del plsmido pLS20.
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Wilfried J.J. Meijer
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Becarios Predoctorales:
Praveen K. Singh
Gayetri Ramachandran
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Estudiantes:
Esther Serrano
Sandra Ballestero Beltrn
Tcnico de Investigacin:
Adriana Marulanda Aguirre
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Singh, P. K., Ballestero-Beltrn, S., Ramachandran, G. and Meijer, W.J.J. (2010) Complete nucleotide
sequence and determination of the replication region of the sporulation inhibiting plasmid p576 of Bacillus
pumilus NRS576. Res. Microbiol. 161, 772-782.
Muoz-Espn, D., Daniel, R., Kawai, Y., Carballido-Lpez, R., Castilla-Llorente, V., Errington, J.*, Meijer,
W.J.J.*, and Salas, M.* *: contributed equally. (2009) The actin-like MreB cytoskeleton organizes viral DNA
replication in bacteria. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. July 27 Epub ahead of print.
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Castilla-Llorente, V., Meijer, W.J.J., and Salas, M. Differential Spo0A-mediated effects on transcription and
replication of the related Bacillus subtilis phages Nf and f29 explain their different behaviours in vivo.
(2009) Nucleic Acids Res. 37: 4955-4964.
Castilla-Llorente, V., Salas, M., and Meijer, W.J.J. (2009) Different responses to Spo0A-mediated suppression
of the related Bacillus subtilis phages Nf and f29. Environ. Microbiol. 11: 1137-49.
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El virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) es un retrovirus que infecta preferentemente a clulas del sistema inmune y provoca el sndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA). Actualmente, el tratamiento de la infeccin por el VIH se basa en la utilizacin
de inhibidores de enzimas del virus como la retrotranscriptasa (RT), la proteasa y la
integrasa, adems de frmacos que actan bloqueando la entrada del VIH en la clula
hospedadora. Las terapias combinadas que incluyen dos o tres inhibidores de la RT han
demostrado una gran eficacia clnica. Sin embargo, la aparicin de virus resistentes, la
existencia de reacciones cruzadas entre distintos frmacos, adems de sus efectos secundarios son factores que hipotecan su utilidad a largo plazo.
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Figura 1. Estructura cristalogrfica de la retrotranscriptasa del VIH-1 unida a un complejo moldeiniciador de ARN/ADN, en la que se muestran (en
morado) residuos del subdominio thumb que modulan resistencia a anlogos a nuclesido
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Jefe de Lnea:
Luis Menndez Arias
Postdoctoral:
Mar lvarez Garca
Tania Matamoros Grande
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Becarios Predoctorales:
Vernica Barrioluengo Fernndez
Gilberto J. Betancor Quintana
Mnica Kisic Aguirre
Estudiantes:
Raquel N. Afonso Lehmann
Daniela Barbieri
Yasemin Ezgi Ertrk
Luis Goslbez Cisneros-Miret
Cristina Jimnez Snchez
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lvarez, M., Matamoros, T. and Menndez-Arias, L. (2009) Increased thermostability and fidelity of DNA
synthesis of wild-type and mutant HIV-1 group O reverse transcriptases. J. Mol. Biol. 392, 872-884.
De Mendoza, C., Anta, L., Garca, F., Prez-Elas, M.J., Gutirrez, F., Llibre, J.M., Menndez-Arias, L.,
Dalmau, D., Soriano, V., on behalf of Platform for Drug Resistance of the Spanish AIDS Research Network
(2009) HIV-1 genotypic drug resistance interpretation rules 2009 Spanish guidelines. AIDS Rev., 11, 39-51.
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Garriga, C., Prez-Elas, M.J., Delgado, R., Ruiz, L., Prez-lvarez, L., Pumarola, T., Lpez-Lirola, A.,
Gonzlez-Garca, J. and Menndez-Arias, L., on behalf of the Spanish Group for the Study of Antiretroviral
Drug Resistance (2009) HIV-1 reverse transcriptase thumb subdomain polymorphisms associated with
virological failure to nucleoside drug combinations. J. Antimicrob. Chemother. 64, 251-258.
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Matamoros, T., Nevot, M., Martnez, M.A. and Menndez-Arias, L. (2009) Thymidine analogue resistance
suppression by V75I of HIV-1 reverse transcriptase: Effects of substituting Valine 75 on stavudine excision
and discrimination. J. Biol. Chem. 284, 32792-32802.
Personal
Menndez-Arias, L. (2009) Mutation rates and intrinsic fidelity of retroviral reverse transcriptases. Viruses
1, 1137-1165; doi:10.3390/v1031137
Publicaciones
Puertas, M.C., Buzn, M.J., Artese, A., Alcaro, S., Menndez-Arias, L., Perno, C.F., Clotet, B., CeccheriniSilberstein, F. and Martinez-Picado, J. (2009) Effect of the human immunodeficiency virus type 1 reverse
transcriptase polymorphism Leu-214 on replication capacity and drug susceptibility. J. Virol. 83, 7434-7439.
Otras Actividades
Patentes
Clotet, B., Menndez-Arias, L., Schapiro, J. M., Kuritzkes, D., Burger, D., Telenti, A., Brun-Vezinet, F., Geretti,
A. M., Boucher, C. A. and Richman, D. D. (eds.) (2010) Guide to management of HIV drug resistance,
antiretrovirals pharmacokinetics and viral hepatitis in HIV infected subjects, 10th Edition, Fundaci de Lluita
contra la SIDA, Barcelona, Spain, 422 pp.
Menndez-Arias, L. (2010) Special issue: Retroviral enzymes. Viruses 2, 1181-1184 (editorial).
Menndez-Arias, L. (2010) Molecular basis of human immunodeficiency virus drug resistance: An update.
Antiviral Res. 85, 210-231.
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Betancor, G., Puertas, M.C., Nevot, M., Garriga, C., Martnez, M.A., Martinez-Picado, J. and MenndezArias, L. (2010) Mechanisms involved in the selection of HIV-1 reverse transcriptase thumb subdomain
polymorphisms associated with nucleoside analogue therapy failure. Antimicrob. Agents Chemother.
54, 4799-4811.
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Luis Menndez Arias es miembro de los Comits Editoriales de Antiviral Therapy, Viruses y Timely Topics in Medicine: AIDS Cyber Journal
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Miembro del comit de formacin de la Red de Investigacin en SIDA (RIS) y co-organizador de la Tercera Reunin Docente de la Red (San Lorenzo de El Escorial, 7-9 de
octubre de 2009)
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Mnica Kisic Aguirre (2010). Mecanismos moleculares de resistencia e hipersensibilidad a frmacos antirretrovirales mediados por deleciones en la horquilla 3-4 de la retrotranscriptasa del virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1. Universidad Autnoma
de Madrid. Director: Luis Menndez Arias.
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Actualmente, nuestro objetivo es estudiar la funcin biolgica de la DNA polimerasa reparativa, pol X, del VPPA, que participa, junto con la endonucleasa AP y la DNA ligasa
viral, en un sistema de reparacin por escisin de bases (BER). Nuestros estudios muestran que la pol X se requiere para la replicacin del virus en su clula blanco, el macrfago porcino, y protege a la clula infectada frente a agentes genotxicos oxidantes. Ms
an, la pol X del VPPA es necesaria para mantener la estabilidad del genoma, reparando
mutaciones introducidas en el DNA del virus durante la infeccin, lo que subraya la importancia de su funcin in vivo.
Morfognesis del VPPA.
La biognesis de las membranas del VPPA es uno de los temas de mayor inters y
ms controvertidos en el estudio de la morfognesis del virus. Con el fin de abordar estos estudios estamos utilizando recombinantes del VPPA que expresan induciblemente
protenas estructurales de membrana que se localizan en la envuelta interna del virus.
Recientemente, hemos identificado un nuevo intermedio morfogentico, constituido por
estructuras helicoidales de membrana que son precursoras de las partculas virales icosadricas. Para conocer mejor la estructura de estos intermedios helicoidales, estamos
utilizando actualmente tcnicas de tomografa electrnica y otras tcnicas avanzadas de
microscopa electrnica para la resolucin de estructuras tridimensionales.
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Figura 1. Anlisis de cortes seriados de una factora viral mostrando una estructura helicoidal de membrana con una partcula icosadrica asociada. Panel a la derecha, reconstruccin de la estructura helicoidal. Los componentes de cada banda en las diferentes
secciones estn coloreadas idnticamente.
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Jefe de Lnea:
Maria Luisa Salas Falgueras
Postdoctorales:
Modesto Redrejo Rodrguez
Cristina Surez Garca
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Becarios Predoctorales:
Cristina Surez Garca
Marina del Rosal Macas
Tcnico de Investigacin:
Mara Luisa Nogal Pars
Mara Jos Bustos Snchez
Esther Martn Forero
CientficosVisitantes:
Mara Ballester Devis
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Redrejo-Rodrguez, M., Ishchenko, A. A., Saparbaev, M. K., Salas, M. L. and Salas, J. (2009) African swine
fever virus AP endonuclease is a redox-sensitive enzyme that repairs alkylating and oxidative damage to
DNA. Virology 390, 102-109.
Exit
Rodrguez, I., Nogal, M. L.,Redrejo-Rodrguez, M., Bustos, M. J.and Salas, M. L. (2009) The African swine
fever virus virion membrane protein pE248R is required for virus infectivity and an early postentry event. J.
Virol. 83, 12290-12300.
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Publicaciones
Surez, C., Salas, M. L. and Rodrguez, J. M. (2010) African swine fever virus polyprotein pp62 is essential
for viral core development. J. Virol. 84, 176-187.
Surez, C., Gutirrez-Berzal, J., Andrs, G., Salas, M. L. and Rodrguez, J. M. (2010) The African swine
fever virus protein p17 is essential for the progression of the viral membrane precursors towards icosahedral
intermediates. J. Virol. 84, 7484-7499.
Ballester, M., Galindo-Cardiel, I., Gallardo, C., Argilaguet, J. M., Segals, J., Rodrguez, J. M. and Rodrguez,
F. (2010) Intranuclear detection of African swine fever virus DNA in several cell types from formalin-fixed and
paraffin-embedded tissues using a new in situ hybridization protocol. J. Virol. Methods 168, 38-43.
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Jefe de Lnea:
Francisco Sobrino
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Personal Cientfico:
Margarita Siz
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Postdoctoral:
Maria Flora Rosas
Becarios Predoctorales:
Ral Postigo
Miguel ngel Martn
Mara Teresa Snchez
Miguel Rodrguez
Yuri A. Vieira
ngela Vzquez
Flavia Caridi
Estudiantes:
Susan Realgen
Abraham Arrizon
Maria Rodolis
Jackob Zimmermann
Tcnicos de Investigacin:
Mnica Gonzlez
Cientfico Visitante:
Beln Borrego (CISA-INIA)
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Rodrguez-Pulido, M., Sobrino, F., Borrego, B., Siz, M. (2009) RNA. Attenuated foot-and-mouth disease virus
RNA carrying a deletion in the 3 non-coding region can elicit immunity in swine J. Virol.. 83, 3475-3485.
Martn-Acebes, M.A., Gonzlez-Magaldi, M., Vzquez-Calvo, A., Armas-Portela, R. and Sobrino, F. (2009)
Internalization of swine vesicular disease virus into cultured cells: a comparative study with foot-and-mouth
disease virus. J. Virol. 83, 4216-4266
Exit
Lnea Investigacin
Sanchez-Aparicio, M.T., Rosas,M-F., Ferraz, R.M., Delgui, L., Veloso, J.J., Blanco, E, Villaverde, A. and
Sobrino, F. (2009) Discriminating foot-and-mouth disease virus-infected and vaccinated animals by use of
-galactosidase allosteric biosensors. Clin. Vaccine Immunol.16, 1228-1235
Personal
Martn-Acebes, MA., Rincn, V., Armas-Portela, R., Mateu, M.G. and Sobrino, F. (2010). A single amino acid
substitution in the capsid of foot-and-mouth disease virus can increase acid-lability and confer resistance
to acid-dependent uncoating inhibition. J. Virol. 84, 2902-2912
Publicaciones
Rodrguez-Pulido, M., Sobrino, F., Borrego, B. and Siz, M. (2010). RNA immunization can protect mice
against foot-and-mouth disease virus. Antiviral Res. 85, 556558.
Patentes
Martn-Acebes, M.A., Herrera, M., Domingo, E. and Sobrino, F. (2010). Cell density-dependent expression
of viral antigens during persistence of foot-and-mouth disease virus in cell culture. Virology 403, 4755.
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Construccin peptdica dendrimrica para la prevencin de la fiebre aftosa en animales Inventores: C. Cubillo, E. Blanco, J. Brcena, F. Sobrino y D. Andreu. N de solicitud: P 200602142. Fecha de prioridad: 2-08-2006. Solicitud PCT (08/2007) N PCT ES
2007/070146.
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Uso del cido valproico como antiviral contra virus con envoltura. A. Vazquez, F. Sobrino,
M.A. Martn y J.C. Siz. No Solicitud: P 200602142 (29 marzo 2010).
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Virologa y Microbiologa
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Tesis Doctorales
Miguel ngel Martn Acebes (2009). Mecanismos de entrada y de organizacin del
complejo de replicacin del virus de la fiebre aftosa: estudio comparativo con el virus de
la enfermedad vesicular del cerdo y el virus de la estomatitis vesicular. Universidad Autnoma de Madrid. Co-dirigida por F. Sobrino y R. Armas.
Exit
Lnea Investigacin
Miguel Ramn Rodrguez Pulido. Julio 2009. Estructura y funcin de la regin 3 no codificante del virus de la fiebre aftosa. Aplicacin a nuevas estrategias vacunales basadas
en RNA. Universidad Autnoma de Madrid. Director: M. Siz.
Personal
Ral Postigo Fernndez. Octubre 2009. Anlisis funcional de la protena 3A del virus de
la fiebre aftosa. Universidad Autnoma de Madrid. Co-dirigida por F. Sobrino y M.F. Rosas.
Publicaciones
Patentes
Mara Teresa Snchez Aparicio. Abril 2010. Estudio de protenas no estructurales del
virus de la fiebre aftosa: anlisis funcionales y aplicacin al diagnstico viral. Co-dirigida
por F. Sobrino y M.F. Rosas. Universidad Autnoma de Madrid.
Tesis Doctorales
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